Imituota mikrogravitacija įtakoja su imunitetu susijusius biologinius žymenis sergant plaučių vėžiu

Abstraktus: Mikrogravitacija yra nauja strategija, kuri gali būti papildoma priemonė kuriant ateities vėžio gydymo būdus. Sergant plaučių vėžiu, gerai išnagrinėta mikrogravitacijos įtaka ląstelių procesams ir ląstelių migracijos gebėjimui. Tačiau jo poveikis mechanizmams, skatinantiems plaučių vėžio progresavimą, tebėra ankstyvoje stadijoje. Šiame tyrime buvo įrodyta, kad 13 skirtingai išreikštų genų yra susiję su plaučių vėžio prognoze pagal imituojamą mikrogravitaciją (SMG). Naudojant genų rinkinio praturtinimo analizę, šie genai yra praturtinti humoralinio imuniteto keliais. Vietoj to, alveolių bazinio epitelio (A549) ląstelės buvo paveiktos SMG per 2D klinostato sistemą in vitro. Be morfologijos pokyčių ir proliferacijos greičio sumažėjimo, SMG sugrąžino A549 perėjimo iš epitelio į mezenchiminį (EMT) fenotipą, pagrindinį vėžio progresavimo mechanizmą. Tai įrodė padidėjusi epitelio E-kadherino ekspresija ir sumažėjusi mezenchiminė N-kadherino ekspresija, todėl pasireiškė mažiau metastazavusia būsena. Įdomu tai, kad stebėjome padidėjusią FCGBP, BPIFB, F5, CST1 ir CFB ekspresiją ir jų koreliaciją su EMT pagal SMG, todėl jie tapo potencialiais naviko slopinimo biomarkeriais. Kartu šios išvados atskleidžia naujas galimybes sukurti naujas terapines plaučių vėžio gydymo strategijas.

Raktiniai žodžiai: imituota mikrogravitacija; EMT; plaučių vėžys; metastazės; naviko slopintuvas; biomarkeris

Cistanche žolės priešnavikinis poveikis

1. Įvadas

Žinoma, kad erdvėje trūksta gravitacijos vektoriaus, kuris veikia kūną organų, audinių ir ląstelių lygiu. Mikrogravitacija, tariamo nesvarumo būklė, yra reikšmingas erdvės stresorius, kuris, kaip žinoma, daro didelę įtaką žmonių sveikatai, pavyzdžiui, kaulų retėjimas, raumenų atrofija ir širdies būklės sutrikimas [1,2]. Mikrogravitacijos įtaka vėžio ląstelėms taip pat tapo vis didesniu kosmoso ir vėžio tyrimų centru. Nustatyta, kad mikrogravitacija slopina imuninių ląstelių aktyvumą ir sutrikdo daugelio organizmų sistemas, o tai gali padidinti vėžio išsivystymo riziką [2–4]. Dėl šių akivaizdžių sveikatos problemų mikrogravitacinė aplinka leido tyrėjams ištirti biofizinius mechanizmus, kuriuos veikia mikrogravitacija, ir padėjo atrasti neurodegeneracinių sutrikimų gydymo priemones, imunoterapiją ir galbūt geresnę bei tikslingesnę priešvėžinę terapiją [4–6]. Daugybė tyrimų gerai dokumentavo ir apžvelgė didelę įtaką, kurią mikrogravitacija turi ląstelių progresavimui, proliferacijai ir apoptozei daugybėje naviko ląstelių linijų, įskaitant plaučių vėžį [7–12]. Tačiau įrodyta, kad daugelis kitų tyrimų, susijusių su mikrogravitacija, sukelia genų ekspresijos pokyčius, kurie yra susiję su vėžio ląstelių proliferacija, metastazėmis ir išgyvenimu, perkeldami ląsteles į mažiau agresyvų fenotipą [13, 14]. Tai gali atskleisti naujus supratimus apie naviko biologiją ir diagnozę, todėl mikrogravitacija pabrėžiama kaip novatoriška priemonė atrasti naujus tikslus, tikintis sukurti naujus tyrimų metodus ir pagerinti gydymo strategijas. Plaučių vėžys, kurio ryškiausias tipas yra nesmulkialąstelinis plaučių vėžys (NSLPV), yra pagrindinė mirties priežastis, sudaro 12 % visų vėžio atvejų ir yra dažniausiai diagnozuojamas vėžys [15]. Atliekant tyrimus, susijusius su mikrogravitacija, kuri gali padėti mums geriau suprasti kancerogeninį procesą, buvo įrodyta, kad plaučių vėžio ląstelės prarado savo kamieną po mikrogravitacijos poveikio, taip paveikdamos vėžio ląstelių augimą ir funkciją [11]. Ahn ir kt. atliktas tyrimas. parodė, kad plaučių vėžio ląstelių (A549) veikimas mikrogravitacija sukėlė greitą migraciją ir proliferaciją. Tai paaiškinama padidėjusiu matricos metaloproteazių (MMP-2 ir MMP-9) lygiu, veikiant mikrogravitacijai, todėl vaidina lemiamą vaidmenį vėžio invazijoje ir migracijoje [10]. Kitame tyrime Chung ir kt. nustatė, kad imituota mikrogravitacija neturėjo reikšmingos įtakos plaučių vėžio ląstelių proliferacijai, o padidino migraciją, palyginti su kontroline grupe esant normaliai gravitacijai [16]. Priešingai, Chang ir kt. parodė migracijos sumažėjimą A549 plaučių vėžio ląstelių linijoje po 24 valandų mikrogravitacijos sąlygų [17]. Nepaisant reikšmingo mikrogravitacijos poveikio ląstelių elgesiui, kuris apima apoptozę, migraciją ir invaziškumą, jos poveikis plaučių vėžiui dar nėra visiškai išaiškintas. Gerai žinoma, kad epitelio ląstelės patiria keletą biocheminių pokyčių, kad būtų sukurtas mezenchiminis fenotipas, kuris padidina atsparumą apoptozei, invaziškumą ir migracijos galimybes. Toks biologinis procesas žinomas kaip perėjimas iš epitelio į mezenchiminį (EMT), kuris yra vėžio progresavimo požymis [18]. EMT ryšys su vėžio progresavimu buvo gerai aptartas. Yra žinoma, kad navikai aktyvuoja EMT, padidindami transkripcijos faktorių reguliavimą, ekspresuodami ląstelės paviršiaus baltymus ir gamindami ECM skaidančius fermentus. Suaktyvinus EMT, naviko ląstelės praranda ląstelių ir ląstelių adheziją ir įgyja migracinių bei invazinių savybių [19]. Tik du tyrimai parodė, kad imituota mikrogravitacija keratinocituose sukelia trumpalaikį epitelio-mezenchiminį perėjimą (EMT) [9]. Be to, tokie reiškiniai buvo paryškinti MCF-7 ląstelėse ir HUVEC [20]; tačiau jokie tyrimai nebuvo skirti mikrogravitacijos poveikiui EMT sergant plaučių vėžiu. Nepaisant daugybės esminių atradimų, susijusių su mikrogravitacijos gebėjimu moduliuoti navikinius ir metastazavusius vėžio procesus, tikslūs mikrogravitacijos miesto veikiami mechanizmai lieka gana nežinomi, todėl kyla atvirų klausimų dėl adaptacinių pokyčių, vykstančių molekuliniame lygmenyje. Šiame tyrime mes nustatėme su imunitetu susijusių genų (FCGBP, BPIFB1, F5, CFB ir CST1), kurie žymiai padidino mRNR ekspresiją A549 ląstelėse, veikiant imituotai mikrogravitacijai (SMG). Be to, mes įvertinome SMG indėlį į A549 vėžio progresavimą per EMT reguliavimą. FCGBP, BPIFB1, F5, CFB ir CST1 ir jų koreliacija su pagrindiniais EMT žymenimis parodė potencialiai mažiau metastazavusį plaučių vėžio fenotipą, kai yra SMG. Šio tyrimo išvados sudaro pagrindą būsimiems tyrimams, kurių reikia norint nustatyti pagrindinius mechanizmus, kurie padės mums geriau suprasti ir padėti kurti naujas terapines plaučių vėžio gydymo strategijas.

Cistanche tubulosa-Antitumor pranašumai

2. Rezultatai

2.1. Populiariausi skirtingai išreikšti genai, identifikuoti plaučių vėžio ląstelėse, veikiant imituotai mikrogravitacijai (SMG), palyginti su žemės gravitacija (GG)

Norėdami nustatyti genus, susijusius su plaučių vėžiu, veikiant imituotai mikrogravitacijai (SMG), iš pradžių ištyrėme genus, kurie yra skirtingai išreikšti SMG, palyginti su žemės gravitacija (GG) žmogaus plaučių vėžiui, naudojant viešai prieinamą Gene Expression Omnibus (GEO) duomenų bazę. Buvo pasirinkti du duomenų rinkiniai, GSE78210 ir GSE36931, kurie apima dviejų skirtingų žmogaus plaučių vėžio ląstelių linijų – A549 ir ​​Colo699, auginamų 2D ir 3D ląstelių kultūros sąlygomis, genų ekspresiją. SMG ir GG mėginių genetinės ekspresijos profilių skirtumai buvo pateikti ugnikalnių sklypuose (1 pav.). Nustatyti skirtingai išreikšti genai (DEG; 2 pav.) kiekvienam duomenų rinkiniui buvo suskirstyti į tuos, kurie yra sureguliuoti sergant plaučių vėžiu (21 genas GSE78210 duomenų rinkinio A549 ir ​​29 genai Colo699 GSE78210 duomenų rinkinyje ir 47 genai GSE36931 duomenų rinkinio A549). kuriems yra sumažintas I plaučių vėžio reguliavimas (40 genų A549 ir ​​27 genai Colo699 GSE78210 duomenų rinkinyje ir 87 genai A549 GSE36931 duomenų rinkinyje), kaip parodyta 1 lentelėje. Trylika DEG buvo reikšmingai stipriai išreikšti GSE783693 ir GSE783613 duomenų rinkinio A549 ląstelėse. SMG, palyginti su GG būkle. Populiariausi genai buvo nustatyti naudojant „InteractiVienn“ žiniatinklio įrankį (2A pav.). Kandidatų genai yra AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP ir BPIFA1. Norint nustatyti, ar nustatyti DEG dalyvauja bendruose keliuose, kandidatų genai buvo įkelti į „Metascape“ (//metascape.org; pasiekiama 2021 m. lapkričio 11 d.). Įdomu tai, kad šie genai yra praturtinti keliais, apimančiais humoralinį imuninį atsaką ir reguliuojamą egzocitozę (2B pav.).

1 pav. Vulkano diagrama, rodanti skirtingai išreikštus genus (DEG), naudojant GEO Omnibus. (A) Vulkano diagrama, rodanti DEG pagal SMG ir GG efektus A549 ląstelėse, naudojant (A) GSE78210 ir (B) GSE36931 duomenų rinkinius. (C) Vulkano diagrama, rodanti DEG pagal SMG ir GG efektus Colo699 ląstelių linijoje, naudojant GSE78210 duomenų rinkinį. Raudona spalva rodo padidintus genus, o mėlyna - sumažintus genus.

1 lentelė. Bendras genų, kurie yra skirtingai ekspresuojami SMG, lyginant su GG plaučių vėžio ląstelių linijose A549 ir ​​Colo699. Kiekviename duomenų rinkinyje buvo pakoreguoti lenkimo pakeitimai, kad būtų išskirti 5 % didžiausių DEG. GSE36931 kartos pokytis (FC) buvo pakoreguotas, kad būtų įtraukti tik tie genai, kurių FC yra didesnis arba lygus 4 arba mažesnis arba lygus –4. GSE78210 atveju FC buvo pakoreguotas taip, kad būtų įtraukti tik tie genai, kurių FC yra didesnis arba lygus 3 arba mažesnis arba lygus –3.

2 pav. Trylika dažniausiai bendrinamų DEG tarp GSE78210 ir GSE36931 duomenų rinkinių sergant plaučių vėžiu. (A) Venno diagrama, rodanti 134 DEG GSE36931 (A549 ląstelių linija), 61 DEG GSE78210 (A549 ląstelių linija) ir 56 DEG GSE78210 (Colo699 ląstelių linija) SMG sąlygomis, palyginti su GG. Nustatyta, kad iš visų nustatytų 251 genų 13 DEG yra bendri tarp dviejų duomenų rinkinių, GSE78210 ir GSE36931, A549 ląstelių linijoje. Venno diagrama buvo sukurta naudojant InteractiVinn.

2.2. Skirtingai išreikšti genai koreliuoja su plaučių adenokarcinoma sergančių pacientų klinikine prognoze

Skirtingai išreikšti genai, susiję su plaučių adenokarcinoma sergančių pacientų klinikine prognoze Norint įvertinti klinikinę kandidatų genų vertę pacientams, sergantiems plaučių adenokarcinoma, naudojant Kaplan-Meier braižytuvą (http://www.kmplot.com/; pasiekiama lapkričio 2 d. {44}}21) buvo naudojamas siekiant palyginti bendrą išgyvenamumą (OS) sergančių plaučių adenokarcinoma (LUAD) sergančių pacientų, kurių genų kandidatų ekspresija yra didelė / vidutinė ir žema (3 pav.). Aukšti NOX1 mRNR ekspresijos lygiai (rizikos koeficientas (HR), 1,45; 95 % pasikliautinasis intervalas (PI), 1,11–1,9; p=0.0058), GDA (HR) , 1,74; 95 % PI, 1,33–2,26; p=3,2e-05), TCN1 (HR, 1,62; 95 % PI, 1,26–2,08; p=0,00014), ir BPIFA1 (HR, 1,44; 95 % PI, 1,12–1,84; p=0,0026) buvo reikšmingai susiję su prasta prognoze (3A–D pav.). Kita vertus, aukšti FCGBP mRNR ekspresijos lygiai (HR, 0,63; 95 % PI, 0,46–0,85; p=0,0026) buvo susiję su geresne LUAD pacientų prognoze ir didesniu bendru išgyvenamumu (3E pav.). Tarp mRNR reikšmingos koreliacijos nebuvo

3 pav. FCGBP, CST1, F5, CFB ir BPIFB1 koreliavo su plaučių adenokarcinoma sergančių pacientų klinikine prognoze. Kandidatų genų mRNR ekspresijos lygių Kaplan-Meier išgyvenamumo kreivės: (A)NOX1; (B) GDA; (C) TCN1; (D) PLUNC; (E) FCGBP; (F) AZGP1; (G) H2Bf; (H) B7X; (I) AGR3; (J) CEACAM6; (K) F5; (L) BPIFB1; ir (M) CST1 pacientams, sergantiems plaučių adenokarcinoma. HR: pavojaus santykis.

cistanche papildo privalumai-Antitumor

Spustelėkite čia norėdami pamatyti Cistanche produktus

【Klauskite daugiau】 El. paštas:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.3. FCGBP, BPIFB1, F5, CFB ir CST1 ekspresija A549 ląstelėse po imituotos mikrogravitacijos

Siekiant patvirtinti in silico nustatytų genų (AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP ir BPIFA1) ekspresiją, buvo atliktas in vitro taikymas naudojant qRT-PCR. Įdomu tai, kad naudojant qRT-PCR, mūsų duomenys parodė reikšmingą FCGBP mRNR ekspresijos padidėjimą, ypač po 48 ir 72 valandų A549 ląstelėse, po SMG, palyginti su GG (4A pav.). Be to, CFB, F5 ir BPIFB1 mRNR ekspresija buvo žymiai padidinta praėjus 72 valandoms po SMG ir, palyginti su GG, A549 ląstelėse (4B, C, E paveikslai). Nedidelis, nors ir nereikšmingas, mRNR ekspresijos padidėjimas buvo aptiktas CTS1 SMG sąlygomis, palyginti su GG (4D pav.). AZGP1, AGR3, GDA, VTCN1, BPIFA1, NOX1, CEACAM5 ir TCN1 išraiškos nebuvo nustatytos tiek SMG, tiek GG (duomenys nerodomi).

4 pav. FCGBP, CST1, F5, CFB ir BPIFB1 reguliavimas SMG sąlygomis in vitro. (A) FCGBP, (B) CFB, (C) F5, (D) CTS1 ir (E) BPIFB1 mRNR ekspresijos lygiai, kiekybiškai įvertinti qRT-PCR ir normalizuoti iki GAPDH A549 ląstelėse, veikiamose GG ir SMG sąlygomis 24 metus , 48 ir 72 val. Juostinės diagramos rodo 3 nepriklausomų eksperimentų (n=3) rezultatus. * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0,001 ir **** p < 0,0001.

Apskritai šie duomenys rodo, kad skirtingai išreikšti FCGBP, F5, CFB ir BPIFB1 sergant plaučių vėžiu gali atlikti svarbų vaidmenį progresuojant plaučių vėžiui.

2.4. Imituota mikrogravitacija sumažina ląstelių gyvybingumą ir pakeičia epitelio-mezenchiminį perėjimą A549 plaučių vėžio ląstelių linijoje

Norint ištirti, ar SMG veikia A549 ląstelių proliferacijos potencialą, buvo atliktas ląstelių gyvybingumo tyrimas naudojant tripano mėlynojo išskyrimo testą. Mūsų duomenys atskleidė, kad SMG reikšmingai sukėlė nuo laiko priklausomą ląstelių proliferacijos sumažėjimą (5B pav.). Ląstelių proliferacijos sumažėjimas buvo reikšmingas daugiausia po 48 ir 72 valandų po SMG, palyginti su GG, kuris parodė A549 ląstelių proliferacijos padidėjimą. Tuo pačiu metu A549 ląstelėse, naudojant SMG, buvo aptiktas ląstelių morfologijos pokytis. Norint įvertinti šiuos pokyčius, ląstelės buvo pašalintos iš SMG būklės, pasėtos į 24-šulinėlių plokšteles ir stebimos šviesos mikroskopu po 1 valandos SMG panaudojimo. Įdomu tai, kad ląstelės, paveiktos SMG, atskleidė granuliuotą, sulipusią morfologiją po SMG. (5A pav.).

5 pav. Imituota mikrogravitacija sumažina ląstelių gyvybingumą ir sukelia morfologinius pokyčius A549 ląstelėse priklausomai nuo laiko. (A) Reprezentatyvios tėvų A549 ląstelių (GG) ir A549 ląstelių, kurios buvo paveiktos SMG 24, 48 ir 72 valandas, prieš sėjant atgal 1 valandai pagal GG, mikrografijos. Nuotraukos darytos 10X padidinimu. (B) A549 ląstelių gyvybingumas buvo įvertintas naudojant tripano mėlynojo dažų išskyrimo testą. 3 nepriklausomų eksperimentų vidutinis ląstelių gyvybingumas rodomas kaip kontrolė procentais. **** p < 0.0001. 5 pav. Imituota mikrogravitacija sumažina ląstelių gyvybingumą ir sukelia morfologinius pokyčius A549 ląstelėse priklausomai nuo laiko. (A) Reprezentatyvios tėvų A549 ląstelių (GG) ir A549 ląstelių, kurios buvo paveiktos SMG 24, 48 ir 72 valandas, prieš sėjant atgal 1 valandai pagal GG, mikrografijos. Nuotraukos darytos 10 kartų padidinus. (B) A549 ląstelių gyvybingumas buvo įvertintas naudojant tripano mėlynojo dažų išskyrimo testą. 3 nepriklausomų eksperimentų vidutinis ląstelių gyvybingumas rodomas kaip kontrolė procentais. **** p < 0,0001.

Kinijos žolė cistanche augalas-Antitumor

Norėdami suprasti gautus duomenis apie sumažėjusį ląstelių proliferaciją A549, įvertinome SMG indėlį į epitelio-mezenchiminio perėjimo (EMT) mechanizmą. EMT yra skiriamasis požymis ir svarbus mechanizmas, skatinantis vėžio progresavimą ir metastazes, taip pagerinantis jo ląstelių judrumą ir invazines savybes [19]. Pagrindiniai EMT žymenys (E-kadherinas, N-kadherinas, ZO-1 ir sraigė) ir metaloproteinazių MMP-2 ir MMP-9 mRNR ekspresijos lygiai buvo išmatuoti qRT-PCR A549, pagal tiek GG, tiek SMG (6 pav.). Taikant SMG, buvo pastebėtas reikšmingas E-kadherino mRNR ekspresijos padidėjimas, lygiagretus su reikšmingu N-kadherino mRNR ekspresijos sumažėjimu, praėjus 48 ir 72 valandoms po SMG (6A, B pav.). SMG buvo aptiktas nereikšmingas ZO-1 ir MMP-9 padidėjimas bei sraigės transkripcijos faktoriaus sumažėjimas (6C–E pav.). MMP-2 reikšmingai sumažėjo A549 praėjus 48 valandoms po SMG (6F pav.), o tai rodo mažiau invazinę formą. Visi šie duomenys patvirtina mezenchiminio-epitelinio perėjimo (MET) fenotipą, kurį A549 sukėlė SMG.

6 pav

2.5. Perėjimo iš epitelio į mezenchiminį kelias koreliuoja su FCGBP, BPIFB1, F5, CFB ir CST1 išraiška

Norint gauti tolesnę mechaninę įžvalgą apie galimą identifikuotų genų vaidmenį A549 ir ​​jų galimą koreliaciją su EMT SMG sąlygomis, buvo atlikta genų sąveikos analizė naudojant GeneMANIA prieš EMT genų žymenis. 7 paveiksle parodytos genų sąveikos, pavaizduotos atitinkamai tarp EMT genų E-kadherino (CDH1), N-kadherino (CDH2), TJP1, CTNNB1, SNAI1 (Sraigė), ZO-1 ir -katenino. Žinant jų reikšmingą vaidmenį vėžio invazijoje ir migracijoje, metaloproteinazės MMP{12}} ir MMP-9 taip pat buvo įtrauktos į analizę. Mazgai nustato bendros ekspresijos modelius tarp skirtingo stiprumo genų, atsižvelgiant į mazgo storį. Kandidatų genai rodo tam tikrą tarpusavio ekspresijos laipsnį; BPIFB1 yra ekspresuojamas kartu su CFB ir CST1; FCGBP išreiškiamas kartu su F5, CST1 ir CFB; CST1 yra ekspresuojamas kartu su CFB, o F5 - su CFB, CST1 ir BPIFB1. Tarp EMT genų ir kandidatų genų taip pat buvo nustatyti koekspresijos mazgai; CDH1 yra išreikštas kartu su FCGBP ir F5; CDH2 yra išreikštas kartu su F5, CST1, BPIFB1 ir FCGBP; CTNNB1 yra išreikštas kartu su CST1 ir FCGBP; SNAI1 yra išreikštas kartu su CST1, F5 ir BPIFB1; TPJ1 yra išreikštas kartu su CST1, FCGBP ir F5; CTNNB1 yra išreikštas kartu su CST1 ir FCGBP; MMP2 yra ekspresuojamas kartu su BPIFB1 ir CST1; ir MMP9 yra išreikštas kartu su F5, CST1, FCGBP ir CFB. Šie radiniai rodo reikšmingą koreliaciją tarp naujų nustatytų genų ir EMT žymenų SMG sąlygomis, galbūt susijusią su EMT keliais.

7 pav. FCGBP, CST1, F5, CFB ir BPIFB1 koreliuoja su EMT keliu. Atrinktų kandidatų genų sąveikos tinklas genas – genas; FCGBP, CST1, F5, CFB ir BPIFB1 su EMT genais; CDH1, CDH2, TJP1, CTNNB1 ir SNAI1, taip pat su ląstelių migracija susiję genai MMP2 ir MMP9, sukurti GeneMANIA (http://genemania.org/; pasiekiama 2021 m. lapkričio 11 d.), siekiant nustatyti kandidatų genų sąveiką su EMT ir ląstelių migracijos žymenys. Skirtingos tinklo briaunos spalvos nurodo taikomus bioinformatikos metodus: svetainės numatymas (oranžinė), fizinė sąveika (raudona), koekspresija (violetinė), bendri baltymų domenai (ruda), kelias (šviesiai mėlyna), bendroji lokalizacija (tamsi). mėlyna) ir genetinė sąveika (žalia)

3. Diskusija

Cistanche arbata

Diskusija Plaučių vėžys, viena iš reikšmingų ir visame pasaulyje pavojingų ligų, pastaruoju metu susilaukė didelio dėmesio „Kosmoso tyrimuose“. Tačiau, nepaisant pažangos šioje srityje, plaučių vėžio progresavimas ir jo atsakas į gydymą tebėra prieštaringi, nes nėra galutinių vertinimo strategijų, kurios padėtų užkirsti kelią vėžiui ar jį gydyti [21]. Mūsų žiniomis, tai yra pirmoji ataskaita, kurioje nustatytas genų rinkinys kaip plaučių vėžio progresavimo parašas mechaninėje aplinkoje, kurią sukelia imituota mikrogravitacija (SMG). Mes pabrėžiame padidėjusią su imuniniu atsaku susijusių genų FCGBP, BPIFB, F5, CST1 ir CFB ekspresiją ir jų ryšį su epitelio-mezenchiminiu perėjimu (EMT) pagal SMG, todėl jie yra potencialūs plaučių vėžio progresavimo biomarkeriai. Čia taip pat pabrėžiame sukeltos SMG poveikį EMT reguliavimui, kuris yra vėžio progresavimo požymis [18, 22], palaikant mezenchiminio perėjimo į epitelį (MET) fenotipą. Apskritai šis tyrimas suteikia pagrindą nustatytiems genams susieti su EMT; tačiau reikalingi tolesni tyrimai, siekiant išsiaiškinti tikslius mechanizmus, padedančius sukurti naują tikslinę plaučių vėžio terapiją. Šiame tyrime mes parodėme trylika genų (AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP ir BPIFA1), kurie yra reikšmingai išreikšti plaučių vėžiu, veikiant imituotai mikrogravitacijai (SMG). palyginti su žemės gravitacija in silico. Mūsų duomenys parodė, kad šie skirtingai išreikšti genai yra praturtinti keliais, daugiausia susijusiais su humoraliniu imunitetu ir reguliuojama egzocitoze. Susidomėjimas lygiagrečiai su mūsų išvadomis, nors pagrindinė FCGBP funkcija vis dar neaiški [23]. Tai iš dalies gali būti dėl prieštaringų vaidmenų, kuriuos jis atlieka įvairiuose navikuose [25]. Pavyzdžiui, įrodyta, kad FCGBP yra reikšmingai susijęs su geresne bendra prognoze ir specifiniu išgyvenamumu sergant galvos ir kaklo vėžiu, gaubtinės žarnos vėžiu ir osteosarkoma [25–27], o kiaušidžių ir prostatos vėžio atveju didelė FCGBP buvo susijęs su prastesniu bendru išgyvenimu [28]. Pažymėtina, kad FCGBP vaidmens vaidmuo buvo priskirtas imuninės gynybos mechanizmams, priešuždegiminiams atsakams, taip pat ląstelių apsaugai [29, 30], todėl jis yra esminis prognostinis žymeklis [31]. Naudodami in vitro programas, įvertinome nustatytų genų ekspresiją sergant plaučių vėžiu ir SMG sąlygomis per 2D klinostatą. Yra sukurtas platus klinostatų tipų ir kitų mikrogravitacijos platformų pasirinkimas. Tai apima 1/2/3 D klinostatų sistemas, atsitiktinės padėties nustatymo mašinas su stiklinėmis kolbomis (daugiausia skydliaukės vėžio ląstelėms) ir NASA sukurtus besisukančius indus. Kiekvienas iš jų yra skirtas tam tikram tyrimo tikslui, kai kai kurie yra skirti auginti prilipusias arba suspensijos ląsteles, o kiti yra naudojami internetiniam kinetinių atsakų matavimui. Pažymėtina, kad klinostatas yra viena iš paprasčiausių ir labiausiai pritaikomų platformų, naudojamų įvairiose eksperimentinėse programose. Iš esmės 2D klinostatas pasižymi sukimosi ašimi, kuri nuolat sukasi reguliuojamu pastoviu greičiu ir kryptimi, kuri yra statmena Žemės gravitacijos vektoriaus krypčiai, todėl sukuria išcentrines jėgas, imituojančias tikrąją mikrogravitaciją [14,32,33 ]. Įdomu tai, kad iš trylikos genų FCGBP, BPIFB, F5, CST1 ir CFB ekspresijos žymiai padidėjo reaguojant į 2D klinostato sukeltą SMG A549 ląstelėse. Labiausiai paveiktos FCGBP ir BPIFB išraiškos, rodančios reikšmingą padidėjimą visais vertinamais laiko momentais: 24, 48 ir 72 val. po SMG. Kaip ir FCGBP, žinoma, kad BPIFB1 prisideda prie įgimto imuniteto atsako [34]. Įrodyta, kad BPI raukšlė, kurioje yra B šeimos 1 nario baltymas (BPIFB1), kurį daugiausia gamina kvėpavimo takų epitelis, dalyvauja šeimininko gynybos mechanizmuose, taip pat turi baktericidinį ir priešuždegiminį poveikį [35]. Įrodyta, kad sergant kvėpavimo takų ligomis BPIFB1 turi priešnavikinį ir antimetastazinį poveikį; tačiau tikslūs mechanizmai lieka neaiškūs, todėl reikia tolesnio tyrimo [34,36]. Vienas tyrimas, kurį atliko Wei ir kt. nustatė, kad BPIFB1 slopina nosiaryklės karcinomos migraciją ir invaziją [37]. Atsižvelgiant į tai, buvo nustatyta, kad BPIFB1 atsirandančios mutacijos padidina plaučių vėžio riziką, o jos sumažėjęs reguliavimas sukelia prastą plaučių vėžiu sergančių pacientų prognozę [38, 39]. Be FCGBP ir BPIFB vaidmens, komplemento faktorius B (CFB) ir chimerinis naviko slopintuvas 1 (CST1) atlieka apsauginį vaidmenį sergant vėžiu. Pavyzdžiui, buvo pranešta, kad didelė CFB ekspresija buvo susijusi su padidėjusiu pacientų išgyvenimu ir be ligos plaučių vėžiu sergantiems pacientams [40]. Be to, komplemento sistema yra pirmoji gynybos linija nuo patogenų ir yra pagrindinė tiek įgimtos, tiek įgytos imuninės sistemos sudedamoji dalis [41]. Kalbant apie CST1, įvairūs tyrimai išryškino jo įdomias savybes, tokias kaip gebėjimas slopinti ląstelių augimą, sukelti apoptozę ir atsparumas onkogeninių p53 formų inaktyvacijai, todėl jis yra patrauklus, tačiau alternatyvus laukinio tipo p{ terapinis taikinys. {74}}atsparūs žmogaus navikai [42]. Be padidėjusios FCGBP, BPIFB1, F5, CFB ir CST1 ekspresijos, mūsų duomenys įdomiai parodė du su ląstelėmis susijusius A549 ląstelių fenotipus pagal SMG - morfologijos pasikeitimą į agregatus ir gumulėlių formos ląsteles ir reikšmingą proliferacijos sumažėjimą. norma po SMG. Tai vyksta lygiagrečiai su kai kuriais kitais tyrimais, kai ląstelėse, kurios buvo veikiamos SMG, buvo mažų gumulėlių arba daugiasluoksnių ląstelių agregatų [43, 44]. Šiuos morfologinius skirtumus atspindi kartu vykstantys dramatiški funkciniai ląstelių procesų pokyčiai, kurių dalis yra EMT. EMT yra metastazavusio proceso požymis, susijęs su imuninės priežiūros pabėgimu ir kraujagyslių invazija, todėl ląstelėms leidžiama plisti į antrinius organus [19, 22]. Iš esmės piktybinės epitelio ląstelės patiria EMT mechanizmą pirminėse naviko vystymosi stadijose, kur šios ląstelės linkusios išreikšti mezenchimines savybes, padidindamos judrumą, kuris palengvina jų pabėgimą iš pirminės nišos, o metastazavusios ląstelės susiformavo antrinėje pusėje. mažiau dediferencijuotų savybių, palyginti su atitinkamais pirminiais navikais. Čia MET (mezenchiminio-epitelio) procesas yra tokio metastazavusio naviko formavimosi progresavimo dalis. Tačiau tai nepaiso EMT dalyvavimo skirtinguose vėžio progresavimo etapuose, nes vėžio ląstelės antrinėse vietose arba toliau augs ir dauginsis, arba bus ramybės būsenoje [45, 46]. Toks daugialypis genų koordinavimas ir specifinių migracijos žymenų, reguliuojančių metastazavusią vėžio ląstelių progresavimą, atsiradimas gali sukelti skirtingus SMG poveikio rezultatus [47]. Pavyzdžiui, mikrogravitacijos sąlygomis skirtingos krūties vėžio ląstelės pasižymėjo skirtinga morfologija, ląstelių sukibimu ir migracinėmis savybėmis veikiant mikrogravitacijai [5]. Pažymėtina, kad pagrindinė EMT savybė yra ląstelių adhezijos molekulės E-kadherino praradimas, taip paveikiantis ląstelių vientisumo ramybę. Kita vertus, nervinio kadherino, N-kadherino, padidėjimas sukelia ląstelių adhezijos pokyčius. Tai daugiausia sukelia transformuojantis augimo faktorius (TGF-), kuris aktyvuoja pleiotropiškai išreikštus transkripcijos faktorius, tokius kaip Sraigės, Twist ir Zeb baltymai bei kiti signalizacijos keliai, įgyvendinami metastazavusiuose keliuose [18, 48, 49]. Čia pranešame apie epitelio žymens E-kadherino (CDH1) padidėjimą ir mezenchiminio N-kadherino (CDH2) mRNR lygio, pagrindinių EMT žymenų, reguliavimą [49]. Tai reiškia, kad kartu su mūsų duomenimis apie sumažėjusį A549 proliferacijos greitį ląstelės turi mažiau metastazavusios būsenos. Įdomu tai, kad pakitusią pagrindinių EMT žymenų išraišką lydėjo reikšmingas matricos metaloproteinazės MMP{105}}, kuri yra pagrindinė bazinės membranos sudedamoji dalis, kuri paprastai atskiria epitelio sluoksnį nuo aplinkinio mezenchimo, reguliavimas. bazinės membranos praradimas [50]. Tai vyksta lygiagrečiai su Chang ir kt. atliktu tyrimu, kuriame jie pranešė apie savo išvadas apie žmogaus plaučių adenokarcinomos ląstelių metastazavimo potencialo sumažinimą, pakeitus MMP2 ekspresiją [17]. Apskritai MMP vaidmuo yra gerai susijęs su piktybinių navikų, įskaitant metastazes, progresavimu, kai sumažėjusi MMP (MMP-2 ir MMP-9) ekspresija ir fermentinis aktyvumas yra mažiau metastazavusio fenotipo savybė [ 50–52]. Turėdami reikšmingą EMT vaidmenį metastazėse, mūsų duomenys rodo reikšmingą FCGBP, BPIFB, F5, CST1 ir CFB koreliaciją su EMT genų žymenimis, taip pat su ląstelių migracija susijusiais genais MMP2 ir MMP9. Įdomu tai, kad Xiong ir kt. parodė, kad FCGBP yra pagrindinis EMT reguliatorius tulžies pūslėje [53]. Tai reiškia, kad nustatyti genai gali būti potencialūs biomarkeriai būsimiems tyrimams, kurie gali numatyti ir toliau suprasti plaučių vėžio progresavimą. Bendrai mūsų išvadose nustatyti genai klasifikuojami kaip pagrindiniai EMT reguliatoriai, skatinantys galimą mažiau metastazavusio fenotipo stiprinimą per plaučių vėžio ląstelių mezenchiminį-epitelinį perėjimą (MET).

4. Medžiagos ir metodai

4.1. Duomenų rinkiniai, skirti identifikuoti įprastus skirtingai išreikštus genus (DEG) plaučių vėžio ląstelių linijose, veikiamose imituojamos mikrogravitacijos

Pirminei analizei buvo išgauti atitinkami duomenų rinkiniai iš viešai prieinamos Gene Expression Omnibus (GEO) duomenų bazės. Ši duomenų bazė naudojama kaip viešai prieinama didelio našumo genų ekspresijos duomenų ir mikromasyvų funkcinė genomikos analizė. Atrinkti duomenų rinkiniai atitiko šiuos kriterijus: duomenų rinkiniai, kuriuose naudojamos tik žmogaus plaučių vėžio ląstelių linijos, tyrimai, apimantys atitinkamas žemės gravitacijos (GG) sąlygas, duomenų rinkiniai su apibrėžta plaučių vėžio ląstelių linijų klasifikacija ir duomenų rinkiniai su žmogaus plaučių vėžio ląstelių genų ekspresija. naudojant mikromasyvą. Du duomenų rinkiniai atitinka šį kriterijų: GSE78210 ir GSE36931. Iš viso į tyrimus buvo įtraukti 25 mėginiai, o 14 plaučių vėžio ląstelių linijos mėginių imituotoje mikrogravitacijoje (SMG) buvo lyginami su 11 GG kontrolinių mėginių, kaip parodyta 2 lentelėje (https://www.ncbi.nlm.nih.gov). /geo/; žiūrėta 2021 m. lapkričio 11 d.).

2 lentelė. Išsami informacija apie duomenų rinkinius, išskirtus iš genų ekspresijos omnibuso (GEO), naudojamo pirminiam DEG identifikavimui tarp imituojamos mikrogravitacijos (SMG) ir žemės gravitacijos (GG) plaučių vėžio ląstelių.

4.2. GEO2R genų rinkinio sodrinimo analizė, kad būtų generuojami DEG kiekvienoje duomenų bazėje

GEO2R (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/geo2r; pasiekiama lapkričio 11 d. 2{5}}21), interaktyvus internetinis įrankis, naudojamas GEO serijoms palyginti, buvo naudojamas kiekviename duomenų rinkinyje sugrupuoti ir nustatyti padidintus ir sumažintus genus SMG sąlygomis, palyginti su GG sąlygomis. Genai, kurių p reikšmės yra mažesnės nei 0, 05, o kartotinis pokytis didesnis nei 2, buvo atrinkti kaip skirtingai išreikšti genai DEG SMG sąlygomis. Todėl kiekvieno duomenų rinkinio DEG susikirto vienas su kitu ir buvo nustatyti bendri genai

4.3. Klinikinio patologinio identifikuotų genų dalyvavimo kiekybinis įvertinimas

Tada gauti genai buvo patvirtinti naudojant Kaplan–Meier Plotter (http://www.kmplot.com/; pasiekiama 2021 m. lapkričio 11 d.) – internetinę viešą duomenų bazę, įvertinančią pasirinktų genų poveikį paciento klinikiniams rezultatams. Bendras išgyvenamumas (OS) buvo apibrėžtas kaip trukmė nuo diagnozės nustatymo (mėnesiais) iki mirties. Genų ekspresijos duomenys ir informacija apie išgyvenimą gaunami iš Gene Expression Omnibus (GEO), vėžio genomo atlaso (TCGA) ir Europos genomo fenomeno atlaso (EGA). Pacientai buvo suskirstyti į dvi grupes: (1) aukšta ekspresija (su TPM reikšmėmis virš viršutinio kvartilio) ir (2) žema / vidutinė ekspresija (su TPM reikšmėmis žemiau viršutinio kvartilio). Kaplan-Meier diagramos buvo naudojamos siekiant palyginti plaučių adenokarcinoma (LUAD) sergančių pacientų OS, kurių genų kandidatų ekspresija yra didelė / vidutinė ir žema.

4.4. Praturtintas ontologijos grupavimas identifikuotiems genams

Norint ištirti, ar nustatyti genai turi bendrų būdų, buvo atlikta genų ontologijos (GO) praturtinimo identifikuotų genų analizė naudojant Metascape žiniatinklio įrankį (https://metascape.org/; pasiekiama 2021 m. lapkričio 11 d.), kad būtų galima pateikti išsamią genų sąrašo anotaciją. ir analizės šaltinis kartu su GEO2R

4.5. Ląstelių linija ir ląstelių kultūra

Žmogaus adenokarcinomos alveolių bazinio epitelio (A549) ląstelių linija, plačiai naudojama kaip plaučių adenokarcinomos modelis, buvo auginama Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI){1}} terpėje, papildytoje 10% galvijų vaisiaus serumo. (FBS; Sigma, Sent Luisas, MO, JAV) ir 100 vienetų/ml penicilino/streptomicino (P/S; Sigma, St. Louis, MO, JAV). Ląstelių linija buvo kultivuojama 37 ◦C drėgname inkubatoriuje 5% CO2 atmosferoje. Kai ląstelės pasiekė susiliejimą, jos buvo surinktos naudojant 0, 5% tripsino, centrifuguojamos 100 × g 5 minutes ir naudojamos, kai reikia.

4.6. Mikrogravitacija

Plaučių vėžio ląstelės (A549) buvo kultivuojamos 2D klinostato sistemoje, imituojančioje beveik nulinę gravitacijos aplinką (mikrogravitaciją). Šis Rotary Culture Max (RCMW™; Synthecon® Inc – Hiustonas, Teksasas, JAV) yra bioreaktorius, turintis ląstelių kultūros indą su mikroporinga perfuzijos šerdimi ir įtaisyta deguonies tiekimo sistema, užtikrinančia maistinių medžiagų ir išorinių terpės dujų išleidimą. taigi užtikrinamas tinkamas dujų mainas ir mažo šlyties poveikio ląstelių kultūros aplinka. Kameroje buvo supakuota auginimo terpė, kurioje yra ląstelės. Ši kamera horizontaliai sukosi aplink vieną ašį, statmeną gravitacijos jėgai, 10 aps./min. greičiu. 2D klinostatas buvo patalpintas į 37 ◦C drėgną inkubatorių 5% CO2 atmosferoje. A549 ląstelės buvo surinktos po imituotos mikrogravitacijos (SMG) 24, 48 ir 72 val. Norint sukurti panašią plaučių vėžio aplinką, A549 ląstelės buvo kultivuojamos kultivavimo plokštelėse GG, nepasuktoje arba statinėje būsenoje, ir buvo laikomos šalia prietaiso drėgname inkubatoriuje (37 ◦C). Šios ląstelės vadinamos kontroline grupe ir taip pat buvo surinktos 24, 48 ir 72 val.

4.7. Ląstelių gyvybingumo tyrimas

GG sąlygomis A549 ląstelės buvo pasėtos į 24-šulinėlių ląstelių kultūros plokšteles, kurių tankis buvo 3.0 × 104 ląstelės 500 µl. Ląstelės buvo surinktos tripsinizuojant praėjus 24, 48 ir 72 valandoms po sėjos, tada centrifuguojamos 200 × g 5 minutes. Gautos ląstelių granulės buvo atkurtos auginimo terpėje. SMG sąlygomis A549 ląstelės buvo pasėtos į 2D klinostato besisukančią sistemą, kurios tankis buvo 6, 0 × 104 ląstelės 1 ml. Ląstelės buvo surinktos praėjus 24, 48 ir 72 valandoms po SMG ekspozicijos, tada centrifuguojamos 200 × g 5 minutes. Gautos ląstelių granulės buvo atkurtos auginimo terpėje. Buvo atliktas tripano mėlynojo (Sigma, JAV) dažų išskyrimo tyrimas. Ląstelių skaičius buvo nustatytas naudojant CellDrop™ automatinį ląstelių skaitiklį.

4.8. Kiekybinė realaus laiko polimerazės grandininė reakcija (qRT-PCR)

In silico nustatytų genų (AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP ir BPIFA1) genų ekspresijos lygiai (mRNR lygiai) kartu su EMT geno žymenimis (3 lentelė) taip pat buvo nustatyti A549 ląstelėse naudojant qRT-PCR. Trumpai tariant, visos RNR ekstrahavimas iš ląstelių buvo atliktas naudojant RNEasy Mini Kit (QIAGEN, Hilden, Vokietija) 24, 48 ir 72 valandas GG ir po poveikio SMG, laikantis gamintojo protokolų. Vienas µg visos RNR buvo atvirkštiniu būdu perrašytas į vienos grandinės komplementarią DNR (cDNR) 20 µL reakcijos tūryje, naudojant iScript™ cDNR sintezės rinkinį (Thermo, Waltham, MA, JAV). qRT-PCR buvo atlikta naudojant PowerUp™ Sybr™ Green pagrindinį mišinį (Thermo, JAV) Quant Studio 5 pcr aparate (Thermo, JAV). PGR amplifikacijos etapai buvo tokie: pradinis denatūravimo etapas 95 ◦ C temperatūroje 3 minutes, tikslinio geno atkaitinimo temperatūra 30 s, o po to 72 ◦ C 30 s. Kiekvienam genui buvo gauta fluorescencijos slenksčio ciklo vertė. ∆∆Cq metodas buvo naudojamas santykiniam genų ekspresijos pokyčiui apskaičiuoti normalizavus pagal namų ruošos geną, gliceraldehido 3-fosfato dehidrogenazę (GAPDH).

3 lentelė. Žmogaus pradmenų sąrašas. NOX1, NADPH oksidazė 1; GDA, guanino deaminazė; TCN1, transkobalaminas 1; FCGBP, Fc Gama Binding Protein; BPIFA1, BPI sulankstymas, kuriame yra A šeimos narys 1; AZGP1, alfa-2-glikoproteinas 1; CFB, komplemento faktorius B; VTCN1, V-Set domenas, kuriame yra T ląstelių aktyvinimo inhibitorius 1; AGR3, 3 priekinis gradientas; CTS1, chimerinis naviko slopintuvas 1; F5, V krešėjimo faktorius; CEACAM6, CEA ląstelių sukibimo molekulė 6; BPIFB1, BPI sulankstymas, kuriame yra B šeimos narys 1; ZO-1, Zonula occludens baltymas 1; MMP-9, matricos metaloproteinazė 9; MMP-2, matricos metaloproteinazė 2; ir GAPDH, gliceraldehido 3-fosfato dehidrogenazė

4.9. Genų ir genų sąveikos analizė

Duomenys iš in vitro qRT-PGR buvo įgyvendinti atliekant genų ir genų sąveikos analizę, naudojant in silico žiniatinklio įrankį GeneMANIA (http://genemania.org/; pasiekiama 2021 m. lapkričio 11 d.) – tinklo algoritmą, skirtą nuspėti genų funkcijas naudojant daugybę funkcinių asociacijų duomenys. Tai buvo atlikta siekiant toliau įvertinti sąveiką tarp/tarp pasirinktų kandidatų genų; FCGBP, CST1, F5, CFB ir BPIFB1 su EMT genais; CDH1, CDH2, TJP1, CTNNB1 ir SNAI1, taip pat su ląstelių migracija susiję genai MMP2 ir MMP9.

4.10. Statistinė analizė

Statistinei analizei atlikti buvo naudojama programinė įranga GraphPad Prism. Rezultatai išreiškiami kaip individualūs duomenys arba kaip vidurkis ± standartinis nuokrypis (SD). Įvairioms grupėms palyginti buvo naudojamas Studento t testas. Skirtumai tarp grupių buvo vertinami taikant vienpusę dispersijos ANOVA (ANOVA). buvo nustatytos p reikšmės, o p < 0.05, p < 0,01, p < 0,001 (atitinkamai *, ** ir ***) laikomas reikšmingu. Visi eksperimentai buvo atlikti trimis egzemplioriais (n=3).

Nuorodos

1. Balta, RJ; Averner, MJN Žmonės kosmose. Gamta 2001, 409, 1115–6828. [CrossRef]

2. Bradbury, P.; Wu, H.; Choi, JU; Rowan, AE; Zhang, H.; Poole, K.; Lauko, J.; Chou, J. Mikrogravitacijos poveikio modeliavimas ląstelių lygiu: pasekmės žmogaus ligoms. Priekyje. Cell Dev. Biol. 2020, 8, 96. [CrossRef] [PubMed]

3. Juanas, M.; Liu, H.; Zhou, S.; Džou, X.; Huang, Y.-E.; Hou, F.; Jiang, W. Integracinė reguliavimo modulio analizė atskleidžia mikrogravitacijos sąsajas su kelių kūno sistemų disfunkcijomis ir navikogeneze. Tarpt. J. Mol. Sci. 2020, 21, 7585. [CrossRef] [PubMed]

4. Crucian, BE; Chouker, A.; Simpsonas, RJ; Mehta, S.; Maršalas, G.; Smithas, SM; Zwart, SR; Heer, M.; Ponomarevas, S.; Whitmire, A.; ir kt. Imuninės sistemos disreguliavimas skrydžio į kosmosą metu: galimos atsakomosios priemonės giliųjų kosmoso tyrimų misijoms. Priekyje. Immunol. 2018, 9, 1437. [CrossRef] [PubMed]

5. Nassefas, MZ; Melnikas, D.; Koppas, S.; Sahana, J.; Infangeris, M.; Lützenbergas, R.; Relja, B.; Wehland, M.; Grimmas, D.; Krüger, M. Krūties vėžio ląstelės mikrogravitacijoje: nauji vėžio tyrimų aspektai. Tarpt. J. Mol. Sci. 2020, 21, 7345. [CrossRef]

6. Takamatsu, Y.; Koike, W.; Takenouchi, T.; Sugama, S.; Wei, J.; Waragai, M.; Sekiyama, K.; Hashimoto, M. Apsauga nuo neurodegeneracinių ligų Žemėje ir kosmose. NPJ Microgravity 2016, 2, 16013. [CrossRef]

7. Nassefas, MZ; Koppas, S.; Wehland, M.; Melnikas, D.; Sahana, J.; Krüger, M.; Corydon, TJ; Oltmann, H.; Schmitz, B.; Schütte, A. Tikroji mikrogravitacija daro įtaką citoskeletui ir židinio sukibimui žmogaus krūties vėžio ląstelėse. Tarpt. J. Mol. Sci. 2019, 20, 3156. [CrossRef]

8. Dietz, C.; Infangeris, M.; Romswinkel, A.; Strube, F.; Kraus, A. Apoptozės indukcija ir ląstelių sukibimo keitimas žmogaus plaučių vėžio ląstelėse imituojant mikrogravitaciją. Tarpt. J. Mol. Sci. 2019, 20, 3601. [CrossRef]

9. Ricci, G.; Cucina, A.; Proietti, S.; Dinicola, S.; Ferranti, F.; Cammarota, M.; Filipinas, A.; Bizzarri, M.; Catizone, A. Mikrogravitacija sukelia trumpalaikį EMT žmogaus keratinocituose, anksti sumažindama E-kadherino reguliavimą ir ląstelių adhezijos remodeliavimą. J. Appl. Sci. 2020, 11, 110. [CrossRef]

10. Ahn, CB; Lee, J.-H.; Hanas, GD; Kang, H.-W.; Lee, S.-H.; Lee, J.-I.; Sūnus, KH; Lee, JW Imituota mikrogravitacija su plūduriuojančia aplinka skatina nesmulkialąstelinių plaučių vėžio migraciją. Sci. Rep. 2019, 9, 14553. [CrossRef] [PubMed]

11. Pisanu, ME; Noto, A.; De Vitis, C.; Masiello, MG; Coluccia, P.; Proietti, S.; Giovagnoli, MR; Ricci, A.; Giarnieri, E.; Cucina, A. Plaučių vėžio kamieninės ląstelės po mikrogravitacijos poveikio praranda numatytąją kamieninę būseną. BioMed Res. Tarpt. 2014, 2014, 470253. [CrossRef] [PubMed]

12. Infangeris, M.; Kosmehl, P.; Shakibaei, M.; Baueris, J.; Kossmehl-Zorn, S.; Cogoli, A.; Curcio, F.; Oksche, A.; Wehland, M.; Kreutz, RJC; ir kt. Imituojamas nesvarumas keičia citoskeleto ir ekstraląstelinės matricos baltymus papiliarinėse skydliaukės karcinomos ląstelėse. Cell Tissue Res. 2006, 324, 267–277. [CrossRef] [PubMed]

13. Chen, J.; Mikrogravitacija, L. Naviko ląstelės mikrogravitacijoje. In Into Space: Kelionė, kaip žmonės prisitaiko ir gyvena mikrogravitacijoje; „IntechOpen“: Londonas, JK, 2018 m.; 139 tomas, 259–268 p.

14. Grimmas, D.; Schulz, H.; Krüger, M.; Cortés-Sánchez, JL; Egli, M.; Krausas, A.; Sahana, J.; Corydon, TJ; Hemmersbachas, R.; Wise, PM Kova su vėžiu naudojant mikrogravitaciją: daugialąstelinis sferoidas kaip metastazių modelis. Tarpt. J. Mol. Sci. 2022, 23, 3073. [CrossRef]

15. Šabatas, MB; Cote, ML Vėžio progresas ir prioritetai: plaučių vėžys. Vėžio epidemija. Biomark. Ankstesnis 2019, 28, 1563–1579. [CrossRef] [PubMed]

16. Chung, JH; Ahn, CB; Sūnus, KH; Yi, E.; Sūnus, HS; Kim, H.-S.; Lee, SH Imituotas mikrogravitacijos poveikis nesmulkiųjų ląstelių plaučių vėžio ląstelių proliferacijai ir migracijai. Aerosp. Med. Hum. Atlikti. 2017, 88, 82–89. [CrossRef]

17. Chang, D.; Xu, H.; Guo, Y.; Jiang, X.; Liu, Y.; Li, K.; Pan, C.; Yuan, M.; Wang, J.; Li, T.; ir kt. Imituota mikrogravitacija keičia žmogaus plaučių adenokarcinomos ląstelių linijos metastazavimo potencialą. Vitr. Ląstelė. Dev. Biol. Anim. 2013, 49, 170–177. [CrossRef]

18. Hanahan, D.; Weinberg, R. Vėžio požymiai: kita karta. Cell 2011, 144, 646–674. [CrossRef]

19. Ribatti, D.; Tamma, R.; Annese, T. Epitelio-mezenchiminis perėjimas sergant vėžiu: istorinė apžvalga. Vertimas Oncol. 2020, 13, 100773. [CrossRef]

20. Ši, S.; Li, Q.; Cao, Q.; Diao, Y.; Zhang, Y.; Yue, L.; Wei, L. EMT transkripcijos faktoriai yra susiję su pakitusia ląstelių adhezija imituojant mikrogravitacijos efektą arba perkrovą reguliuojant E-kadheriną. Tarpt. J. Mol. Sci. 2020, 21, 1349. [CrossRef]

21. Topalas, U.; Zamur, C. Mikrogravitacija, kamieninės ląstelės ir vėžys: nauja viltis vėžio gydymui. Stem Cells Int. 2021, 2021, 5566872. [CrossRef]

22. Ksiazkevičius, M.; Markevičius, A.; Zaczek, AJ Epitelio-mezenchiminis perėjimas: metastazių formavimosi požymis, jungiantis cirkuliuojančias naviko ląsteles ir vėžio kamienines ląsteles. Patobiologija 2012, 79, 195–208. [CrossRef] [PubMed]

23. Janas, T.; Tianas, D.; Chen, J.; Tan, Y.; Cheng, Y.; Taip, L.; Dengas, G.; Liu, B.; Yuan, F.; Zhang, S. FCGBP yra prognozinis biomarkeris ir susijęs su imunine infiltracija gliomoje. Priekyje. Oncol. 2021, 11, 769033. [CrossRef] [PubMed]