Tiokarbamido dariniai

Remiantis atitinkamais tyrimais,cistancheyra įprasta žolė, žinoma kaip „stebuklingas augalas, prailginantis gyvenimą“. Jo pagrindinis komponentas yracistanozidas, kuris turi įvairų poveikį, pavyzdžiui, antioksidacinį, priešuždegiminį ir imuninės sistemos aktyvumą. Mechanizmas tarp cistanche irodabalinimasslypiantioksidantascistanche poveikisglikozidai. Melaninas žmogaus odoje susidaro oksiduojantis tirozinui, katalizuojamam tirozinazės, o oksidacijos reakcijai reikalingas deguonies dalyvavimas, todėl deguonies neturintys radikalai organizme tampa svarbiu veiksniu, turinčiu įtakos melanino gamybai.Cistanchesudėtyje yra cistanozido, kuris yra antioksidantas ir gali sumažinti laisvųjų radikalų susidarymą organizme, taip slopindamas melanino gamybą.

Norėdami balinti, spustelėkite Cistanche Tubulosa

Daugiau informacijos:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Feniltiokarbamidas (PTU) yra vienas iš labiausiai žinomų tirozinazės inhibitorių, tirtų literatūroje89–91. PTU sieros atomas jungiasi prie abiejų vario jonų aktyvioje tirozinazės vietoje ir blokuoja fermento aktyvumą. Profesorius Jung ir kt. neseniai ištyrė grybų tirozinazės PTU darinių SAR92,93. Nors PTU darinių poveikis pirmiausia buvo vertinamas dėl jų melanogenezės slopinimo B16 melanomos ląstelėse, vėliau buvo patvirtinta, kad tai buvo dėl tirozinazės aktyvumo slopinimo. SAR tyrimai išryškino svarbius struktūrinius reikalavimus tiek melanogenezei, tiek tirozinazės slopinimui (9 pav. a)): (i) tiesioginis p-plokštumos struktūros ryšys su tiokarbamidu (24a–24b), (ii) hidrofobinis pakaitas para- arba buvo priimta fenilo žiedo meta padėtis (24c–24d), pakaitas orto padėtyje buvo netoleruojamas (24e), teigiama, kad C2-pakeistas fenilas gali trukdyti kompleksiniam tiokarbamido susidarymui su vario jonais. aktyvioji tirozinazės vieta. Be to, (iii) laisvieji 3-aminovandeniliai buvo svarbūs tirozinazės slopinimui, bet ne melanogenezės slopinimui B16 ląstelėse, 1,3-pakeisti dariniai parodė didesnį melanogenezės slopinimo stiprumą (24f). Šie radiniai rodo, kad 1,3-pakeisti dariniai veikia kitaip nei tirozinazės katalizinis aktyvumas, kad užkirstų kelią melanogenezei. 1-feniltiokarbamido ir 1,3,-difeniltiokarbamido molekulinė prijungimo analizė atskleidė, kad tiesioginis plokščiojo fenilo ryšys su tiokarbamido vienetu ir laisvuoju 3-NH2 buvo būtina tirozinazės aktyvumo sąlyga (10 pav.).

Kita vertus, Crinton ir kt. pranešė apie daugybę N-hidroksi-N0 -fenilkarbamido darinių, pakeičiančių sierą deguonimi ir 3-NH2 N-hidroksilaminu PTU91. Rezultatai parodė, kad pateikti dariniai buvo stipresni, ypač N-hidroksi-N0 -fenilkarbamidas (25a) buvo 6 kartus stipresnis nei PTU. Priešingai, N-hidroksi-N0 -feniltiokarbamido (25b) dariniai neslopino, o tai rodo, kad N-hidroksikarbamido chelatinis gebėjimas yra svarbus tirozinazės slopinimui (9 pav. a)).

Be sintetinių ar natūralių šaltinių, atranka yra dar viena alternatyvi strategija ieškant naujų inhibitorių. Daugiausia kliniškai patvirtintų vaistų atranka išaugo daugeliui biologinių taikinių. Duomenys, susiję su esamu vaistu, sumažins laiką ir išlaidas, susijusias su intelektinėmis teisėmis kuriant naujus vaistus. Šis metodas turi keletą privalumų; įskaitant prieinamumą, mažesnę kainą ir saugumą / toleravimą. Feniltiokarbamidas jau seniai žinomas kaip tirozinazės inhibitorius89–91,94. Cheminio panašumo analizė, atlikta naudojant virtualų arba HTS atranką ligandais, nustatė, kad etionamidas (26a) ir jo analogai (26c–26e), įskaitant protionamidą (26b), yra tirozinazės inhibitoriai95 (9 (a) pav.). Etionamidas yra patvirtintas antros eilės vaistas nuo tuberkuliozės, naudojamas daugeliui vaistų atsparios tuberkuliozės gydymui. Priešingai, izoniazidas, struktūrinis analogas ir pirmosios eilės vaistas nuo tuberkuliozės, buvo prastas tirozinazės inhibitorius. B16 ląstelėse inhibitoriai piridino-2-karbotioamidas ir tiobenzamidas žymiai sumažino melanino kiekį atitinkamai 44 proc. ir 37 proc. Atlikus išsamią struktūrinę analizę, SAR duomenys rodo, kad karbotioamidas buvo pagrindinė dalis kuriant naujus ir stiprius tirozinazės inhibitorius.

Neseniai atliktame tyrime mokslininkai ištyrė iš tiokarbamido gautus vaistus, naudojamus klinikoje, ir ištyrė jų poveikį tirozinazės aktyvumui, naudodami fermentų ir ląstelių tyrimus96. Pastebėta, kad antitiroidiniai vaistai metimazolas 27a, 97 karbimazolas 27b, 97 tiouracilai 27c, 97 metiltiouracilas 27d97 ir propiltiouracilas 27e97 slopino grybų tirozinazę (9 pav. b). Be to, kinetinių tyrimų metu tiokarbamido turintys vaistai buvo priskirti nekonkurenciniams inhibitoriams. SAR tyrimai paaiškino, kad pats tiokarbamidas slopina fermento tirozinazės aktyvumą priklausomai nuo koncentracijos. Tai rodo, kad tiokarbamido analogų slopinamasis aktyvumas turi kilti iš sieros ir azoto atomų.

Kitame tyrime naujų N-aril-N0 - pakeistų feniltiokarbamido darinių klasė buvo įvertinta pagal grybų tirozinazės98 difenolazės aktyvumą. Rezultatai parodė keletą 4,5,6,7-tetrahidro- 2-[[(fenilamino)tioksometil]amino]-benzo[b]tiofeno-3-karboksirūgšties darinių (28a–28d, ( 9 paveikslas (b))) parodė vidutinį tirozinazės difenolazės aktyvumo slopinamąjį poveikį. Kai 4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tiofeno-3-karboksirūgšties karkasas buvo pakeistas 2–(1,3,4-tiadiazol-2-il) tio acto rūgštis, pagerėjo junginių (pvz., 29a–29d, 9(b) pav.) 98 slopinamasis aktyvumas prieš tirozinazę. Ypač 29d (IC50=6.13 lM) buvo stipresnis slopinamasis aktyvumas nei kojo rūgštis (IC50=33.3 lM).

Nuo 1885 m. sacharinas, 1,2-benzisotiazolo-3-one-1,1-dioksidas yra gerai žinomas heterociklinis junginys, naudojamas kaip saldiklis natrio druskos pavidalu. . Be to, pranešama, kad tai daugeliui biologinių taikinių ir todėl gali būti vertinama kaip privilegijuotas pastolis. Neseniai buvo įvertinta nauja serija 6- (fenilurenilo/tionilo) konjuguotų sacharino darinių dėl slopinamojo poveikio bananų tirozinazės fermento difenolazės aktyvumui99. Rezultatai parodė, kad visi junginiai slopina tirozinazės aktyvumą. Tarp jų – 6–(3-chlorfenilurenilo) sacharinas 30a (Ki= 5,85 lM) ir 6–(3-jodfeniltiourenil) sacharinas 30b (Ki=3,95 lM) buvo nustatyta, kad tai yra patys aktyviausi junginiai. SAR tyrimai parodė, kad 6-(feniltiourenil) sacharino dariniai pasižymi didesniu slopinamuoju aktyvumu nei 6-(fenilurenilo) sacharino dariniai. Elektronus sutraukiančios grupės, esančios 3-fenilurenilo/tiourenilo žiedo padėtyje, aktyvumas padidėjo, ypač halogenų serijos parodė didesnį slopinamąjį aktyvumą.

Tiosemikarbazono tipo inhibitoriai

Tiosemikarbazonai yra viena iš pagrindinių tirozinazės inhibitorių klasių dėl savo klasikinio struktūrinio vieneto ir gebėjimo sudaryti chelatinius vario jonus aktyvioje tirozinazės fermento vietoje. Pastaruoju metu įvairiose tyrimų grupėse buvo pranešta apie daugybę tiosemikarbazonų99–101, kurie yra stiprūs tirozinazės inhibitoriai.

SAR tyrimai atskleidė, kad tiosemikarbazido karkasai buvo pagrindinis tirozinazės slopinimo aktyvumo nustatymo vienetas, nes jis galėjo veiksmingai sujungti du vario jonus aktyvioje tirozinazės vietoje. Siekiant pagerinti aktyvumą, buvo pranešta apie daugybę 4/3-aminoacetofenonų ir išvestinių tiosemikarbazonų, kurie slopina grybų tirozinazę102. Biologinio įvertinimo rezultatai rodo, kad acilamino junginiai (31a–31g, 11 pav.) rodė stipresnius tirozinazės inhibitorius nei kojinė rūgštis (IC50=28.5 lM), o aminofenolis (31 val. ir 31i) priešingai. tirozinazės aktyvumo suaktyvinimas. Nustatyta, kad 31d junginys yra aktyviausias junginys, kurio IC50 vertė yra 0,291 lM. Tyrimai su SAR analize taip pat atskleidė, kad tiosemikarbazido grupė vaidino labai svarbų vaidmenį slopinant tirozinazę, acilamino fragmentai, itin svarbūs stiprinant tirozinazės slopinamąjį aktyvumą, o acilamido pakaitas fenilo žiedo 4- padėtyje padidino tirozinazės slopinimo potencialą. Be to, slopinimo mechanizmo ir kinetikos tyrimas atskleidė, kad junginys 31a buvo grįžtamas ir nekonkurencinis inhibitorius.

Toliau ieškant stiprių junginių, kaip labai veiksmingų tirozinazės inhibitorių, ir suprantant tiosemikarbazono junginių SAR, buvo sukurta serija naujų {{0}}alkoksi- ir 4-aciloksifeniletilentiosemikarbazono analogų (32a). –32i, 11 pav.) buvo susintetinti ir įvertintas tirozinazę slopinantis aktyvumas103. Rezultatai parodė, kad dauguma inhibitorių pasižymėjo puikiu tirozinazės slopinimu, kai IC50 vertė buvo mažesnė nei 1,0 lM. Visų pirma, junginys 32d pasižymėjo nepaprastu tirozinazės slopinimo potencija, palyginti su kitais šios serijos analogais. SAR tyrimai atskleidė, kad tiosemikarbazono dalis vaidino pagrindinį vaidmenį nustatant tirozinazę slopinantį aktyvumą. Metileno jungties tarp fenilo žiedo ir tiosemikarbazono dalies (32f – g) ilgis neturėjo įtakos tirozinazės slopinamumui. Tiokarbonohidrazido fragmento (32 h–32i) įvedimas buvo nepalankus tirozinazės slopinamajam aktyvumui.

Peptidų tipo inhibitoriai

Norint atrasti naujus tirozinazės inhibitorius, pastaruoju metu buvo atkreiptas dėmesys į peptidų sekų taikymą tirozinazės slopinimui. Buvo ištirti keli tirozinazę slopinantys peptidai, tokie kaip dipeptidai104, cikliniai peptidai105, trumpos sekos oligopeptidai106 ir kojinės rūgšties tripeptidų junginiai107. Ypač buvo įrodyta, kad oligopeptidai yra veiksmingi tirozinazės inhibitoriai. Du oligopeptidai P3, oktapeptidas (Arg-Ala-Asp-ser-Arg-Ala-Asp-Cys) ir dekapeptidas P4 (Tyr-Arg-ser-Arg-Lys-Tyr-Ser-Ser-Trp-Tyr). reikšmingą slopinamąjį poveikį grybų ir žmogaus tirozinazei, kai IC50 vertė yra 123 ir 40 lM, palyginti su hidrochinonu. Šie oligopeptidai neparodė jokio poveikio melanocitų citotoksiškumui108. Sėkmingai suformavus vietinį kremą ir pasiekus palankius klinikinius rezultatus, dekapeptidas P4, taip pat žinomas kaip dekapeptidas{28}}, buvo parduodamas kaip pagrindinė odą šviesinančio produkto veiklioji medžiaga109.

Neseniai atliktame tyrime Hsiao ir kt. atrado, kad į dipeptidą panašus junginys (A5) ir tripeptidai RCY ir CRY veiksmingai slopina tirozinazės aktyvumą109. Ypač naujas tripeptidas CRY parodė ryškiausią grybų tirozinazės (IC50=6.16 lM) slopinamąjį poveikį. Šis tripeptidas yra stipresnis už žinomus oligopeptidus ir palyginamas su kojinės rūgšties tripeptidais. CRY ir RCY naudojo cisteino liekanos tiolio grupę, kad koordinuotųsi su Cu jonais aktyvioje tirozinazės vietoje, taip parodydami mažą tirozinazės aktyvumą. Kitame tyrime buvo pranešta, kad cisteino turintys dipeptidai veiksmingai slopina tirozinazės aktyvumą110. Autoriai teigė, kad šie cisteino turintys dipeptidai gali tiesiogiai blokuoti aktyviąją tirozinazės vietą ir taip sukelti stiprų slopinimą. Visų pirma, N-galo cisteino turintys dipeptidai žymiai lenkia C-galą ir cisteino turinčius dipeptidus, CE, CS, CY ir CW pasižymi lyginamuoju biologiniu aktyvumu, o tirozino turintys dipeptidai yra į substratą panašūs inhibitoriai. Be to, šie dipeptidai neparodo reikšmingo citotoksiškumo melanocitams, o CA ir PD atitinkamai susilpnino 5,6 ir 16,5 procento melanino, esant 100 lM (1 lentelė).

Li ir kt. pranešė apie hidroksipiridinono-L-fenilalanino konjugatų rinkinį (33a ir 33b), pradedant nuo kojinės rūgšties (12 pav.) 111 dėl jų slopinamojo poveikio tirozinazei. Tirozinazės aktyvumo įvertinimas parodė, kad vienas iš junginių ((S)-(5-(benziloksi)-1-oktil-4-okso{{10}},{{11) }} dihidropiridino-2-il)metil-2-amino-3- fenilpropionatas, (33b), mikofenolato ir difenolazės aktyvumui IC50 buvo atitinkamai 12,6 ir 4,0 lM. Be to, šie konjugatai buvo mišraus tipo inhibitoriai, o tai rodo, kad jie gali prisijungti prie laisvo fermento ir fermento substrato kompleksų.

Kitame tyrime hidroksipiridinono-L-aminorūgščių konjugatai buvo sukurti ir įvertinti dėl jų slopinamojo poveikio grybų tirozinazei112. Iš tirtų junginių tik du junginiai pasižymėjo ir mikofenolatu (34, IC50=1,95 lM; 35, IC50=2,79 lM), ir difenolazės slopinimu (34, IC50=8,97). lM; 35, IC50=26.20 lM) tirozinazės aktyvumas (12 pav.). Be to, buvo nustatyta, kad 34 ir 35 junginiai yra grįžtami ir mišraus tipo inhibitoriai.

Įvairūs grybų tirozinazės inhibitoriai

Pastaruoju metu ekstraktai ir išskirti junginiai iš natūralių šaltinių sulaukė didelio dėmesio kaip tirozinazės inhibitoriai ir buvo priimti kaip populiarios odos balinimo priemonės113–123. Siekdami rasti saugią ir veiksmingą balinančią medžiagą, Chen ir kt., patikrino keletą natūralių žolinių augalų produktų ir išskyrė 36 ir 37 junginius iš Gastrodia elata šakniastiebių kaip grybų tirozinazės inhibitorius124. Vėlesni SAR tyrimai nustatė analogus 38–40 (13 pav.). Bis(4-hidroksibenzilo) sulfidas 36 pasižymėjo išskirtiniu tirozinazės slopinamuoju poveikiu, kurio IC50 vertė buvo 0,5 lM, o Ki vertė – 58 nM. Junginys 37, sujungtas per eterio jungtį, rodo, kad slopinamasis gebėjimas (IC50=378.11 lM) sumažėja 713-kartą, o tai rodo, kad sieros atomas yra labai svarbus chelatų sudarymui su vario jonais ir prisideda prie didesnio slopina tirozinazės aktyvumą. Kita vertus, sutrumpinant anglies jungiklį, jungiantį sierą su benzeno žiedais, vidutinis tirozinazės slopinimas 38. Pašalinus hidroksilo grupę 39, tirozinazės slopinimas yra silpnas, o tai rodo, kad svarbios dvi hidroksilo grupės. Metoksi pakeitimas, 36 analogas, sumažina stiprumą iki IC50 vertės 40,02 lM, o tai rodo, kad vandenilio jungties sąveika buvo palankesnė nei hidrofobinė sąveika, kurią užtikrina metoksido grupės.

36 junginys, apdorotas 50 lM, sumažino 20 procentų melanino kiekį žmogaus melanocitų sistemoje be reikšmingo citotoksiškumo. Be to, zebrafish in vivo tyrimas atskleidžia, kad 36 veiksmingai sumažina melanogenezę be neigiamo poveikio. Be to, ūmaus oralinio toksiškumo tyrimas patvirtino, kad junginys 36 neturėjo pastebimo citotoksiškumo pelėms. Taigi junginys 36 yra potencialus kandidatas kuriant saugų ir veiksmingą farmakologinį agentą odos balinimui. Neseniai Ai ir kt., naudodami virtualų atrankos metodą, patikrino cheminę biblioteką ir nustatė, kad junginys 41 yra stiprus grybų tirozinazės inhibitorius125, kurio IC50 vertė yra 8 lM, ir 29 proc. ±17,64 proc. blokavo melanino biosintezę B16 ląstelėse. esant 0,002 proc. koncentracijai, kuri buvo lygi 27,5 tekinimo staklėms.

SAR tyrimai, ištirti aplink 41 struktūrą, parodė, kad 41 junginio žiedo B aromatiškumas yra būtinas aktyvumui, nes žiedą B pakeitus cikloheksilo žiedu (42b junginys) prarandamas slopinantis melanino sintezės aktyvumas B16 ląstelėse. Kita vertus, pakeitimas A žiedo 4- padėtyje turėjo nereikšmingą poveikį slopinamajam aktyvumui (42a–42d). Šie junginiai priklausė nuo dozės ir slopino melanino sintezę B16 ląstelėse. Tačiau tolesnis 41 junginio tobulinimas sukelia galimą formulavimo problemą ir yra pašalinamas kaip kandidatas kosmetikos tikslams. Tolesnė substruktūrinė analizė nustatė, kad junginys 43 79 proc. ± 5,34 proc. slopino B16 ląstelių melanino biosintezę, kai koncentracija buvo 0,001 proc. (33,6 lM). Šie du junginiai 41 ir 43 pasižymi geromis biocheminėmis savybėmis ir atitinka Lipinskio „penkių taisyklę“ ir pasižymi dideliu slopinamuoju poveikiu melanino sintezei B16 ląstelėse. Įrodyta, kad šis melanino sintezės slopinimas neturi įtakos ląstelių gyvybingumui, o tai dar labiau pabrėžia galimą šių junginių komercinį naudingumą.

Buvo pranešta, kad vanilinas ir vanilinė rūgštis, išskirta iš Origanum vulgare, gali būti antimelanogenezės agentai126. Remiantis šiais duomenimis, buvo pranešta apie keletą vanilino esterių, kuriuose yra benzenkarboksirūgšties, cinamono rūgšties ir piperazino, slopinančių tirozinazę127. Rezultatai parodė, kad 44a–44d junginiai gerai ar puikiai slopina grybų tirozinazės aktyvumą (14 pav.). Visų pirma, 44b pasižymėjo stipriausiu slopinamuoju aktyvumu, kurio IC50 vertė buvo 16,13 lM. Struktūriniu požiūriu pakeisti cinamono rūgšties esteriai ir hidroksilo pakaitalai vaidino svarbų vaidmenį slopinant tirozinazę. Kinetiniai tyrimai atskleidė, kad junginys 44b buvo mišraus tipo tirozinazės inhibitorius, kurio Ki 13 lM ir Ki 0 53 lM, ir sudarė grįžtamą fermento inhibitorių kompleksą.

Kitame tyrime nustatyta, kad {{0}}hidroksitirozolis 45 (2-HT)128 slopina grybų tirozinazę, kurios IC50 vertė yra 13,0 lmol/L, kuri buvo tokia pat stipri kaip kojo rūgštis (IC{{). 7}},8 lmol/L). Be to, 2-HT, priklausomai nuo dozės, slopino tirozinazės aktyvumą (IC50=32.5 lmol/L) B16 melanomos ląstelių ekstrakte be ląstelių ir a-MSH stimuliuojamą melanino susidarymą nepažeistose B16 melanomos ląstelėse . Buvo pranešta, kad metimazolo (2-merkapto-1-metilimidazolo) dariniai slopina grybų tirozinazę129. 2-Merkaptoimidazolas (46a), merkapto-1-metilimidazolas (46b) ir tret-butilo 3-metil-2-sulfanilidenas-2,3-dihidro{ {30}}H-imidazolo- 1-karboksilatas (46c) reikšmingai slopino tirozinazės aktyvumą, jo IC50 vertė buvo atitinkamai 4,11 mM ir 1,43 mM ir 1,45 mM (14 pav.). Kinetinė analizė parodė, kad 46a ir 46b junginiai yra konkurencingi tirozinazės inhibitoriai, o 46c buvo nekonkurencinis tirozinazės inhibitorius. Be to, in vitro B16 ląstelių analizė, 46a–46c junginiai darė stiprų slopinamąjį poveikį intracelulinei melanino gamybai, nepaveikdami citotoksiškumo.

Įrodyta, kad keletas triazolo Šifo bazinių darinių slopina grybų tirozinazės aktyvumą130. Biologinio vertinimo rezultatai parodė, kad tik trys 47a–47c junginiai turi stiprų slopinamąjį poveikį, kurių IC50 vertės yra 12,5, 7,0 ir 1,5 lM (14 pav.). Kinetinė analizė parodė, kad inhibitoriai yra grįžtami ir mišraus tipo. Fluorescencijos gesinimo ir vario sąveikos tyrimai patvirtino inhibitorių sąveiką su tirozinaze ir chelatacijos gebėjimą su vario jonais aktyvioje vietoje. Struktūriniu požiūriu pakeitimas benzeno žiedo 2-padėtyje parodė didesnį aktyvumą (47c) nei 3-padėtis (47b). Buvo pranešta apie naują timolio analogų seriją, apimančią hidroksilintas benzenkarboksirūgštis ir cinamono rūgštis, kaip grybų tirozinazės inhibitorius131. Apskritai, iš cinamono rūgšties gauti timolio dariniai labiau slopina tirozinazę nei benzenkarboksirūgšties dariniai, o tai rodo 48a (IC50 15,20 lM) ir 48b (IC50 91,5 lM) palyginimas. .

Neseniai buvo ištirtas pikrionozido A 49, išskirto iš korėjinio ženšenio (P. ginseng CA Mayer) lapų, poveikis132 ir jis slopino grybų tirozinazės aktyvumą, o jo IC50 vertė buvo 9,8 lM, maždaug 6,8–10- karto didesnė nei kojinės rūgšties ir arbutino atitinkamai (14 pav.). Melan-Ab ląstelėse 49 sumažino 17,1 procento melanino kiekį priklausomai nuo dozės, nesukeldami ląstelių gyvybingumo. Be to, pikrionozidu A apdorota zebražuvė turėjo nepaprastą slopinamąjį poveikį kūno pigmentacijai. Visi šie rezultatai rodo, kad pikrionozidas A gali būti veiksminga odos balinimo priemonė133. Atliekant Streptomyces bikiniensis melanogenezės inhibitorių atranką, buvo nustatyta, kad S-(-)-10,11-dihidroksifarnezoinės rūgšties metilo esteris (dhFAME, 50), vabzdžių jauniklių hormonas, kurį gamina Beauveria bassiana. CS1029 134 tiesiogiai slopino tirozinazės aktyvumą. Be to, 50 žymiai sumažina melanino kiekį, slopino ląstelių tirozinazės aktyvumą, taip pat cAMP lygio kaupimąsi ląstelėje melan-a ląstelėse, nesukeliant ląstelių gyvybingumo.

Nauja stiprių tirozinazės inhibitorių klasė buvo nustatyta remiantis struktūra pagrįstu virtualiu atrankos prognozavimu135. Grybų tirozinazės struktūra (PDB ID: 2Y9X) buvo naudojama kaip šablonas molekulinės dinamikos (MD) modeliavimui. Iš pradžių buvo sukurtas 10 000 struktūrų ansamblis, naudojant molekulinės dinamikos modeliavimą. Atliekant vėlesnius patikrinimus, buvo gauta 61 geriausia molekulė, skirta grybų tirozinazės aktyvumui įvertinti, o selektyvūs inhibitoriai (51a–51e) nurodyti 14 paveiksle. Rezultatai rodo, kad tetrazolo ir triazolo dalys galėjo sąveikauti su di-vario kataliziniu centru. tirozinazė. Visų pirma, tetrazolo junginys 51b pasižymi stipriausiu aktyvumu. Autoriai nustatė, kad daugelis junginių gerai sumažino melanino gamybą B16 melanomos ląstelėse be citotoksiškumo. Tiksliau, tiosemikarbazono turintis junginys 51e sumažino melanino kiekį 55 procentais. Rezultatai suteikia vertingos informacijos apie vario fermentų tipo{15}} funkcijų moduliavimą.

Kaptoprilis ([2S]-N-[3-merkapto-2-metilpropionil]-L-prolinas) yra angiotenziną konvertuojančio fermento inhibitorius136 137, plačiai naudojamas hipertenzijai ir širdies nepakankamumui gydyti. Siekiant nustatyti naujus ir veiksmingus tirozinazės inhibitorius, buvo eksperimentuojamas su kaptoprilio (52) slopinamuoju poveikiu tirozinazės slopinimui. Rezultatas parodė, kad 52 slopina tirozinazės aktyvumą, kai IC50 vertė yra 590 lg/mL (14 pav.) 138. Be to, atliekant in vitro tyrimus su B16 ląstelėmis, nustatyta, kad 52 slopina tirozinazės aktyvumą139,140 priklausomai nuo dozės, todėl slopina melanino susidarymą be citotoksiškumo.

Žmogaus tirozinazės inhibitoriai

Nors buvo galima įsigyti daug tirozinazės inhibitorių ir kai kurie iš jų, pasižymintys stipriu slopinamuoju poveikiu, buvo aptarti anksčiau, beveik visi inhibitoriai buvo įvertinti prieš grybų tirozinazę. Siekdami rasti naujų inhibitorių prieš žmogaus tirozinazę, Yoshimori ir kt. parodė tujaplicinų (52–54; a, b ir c izomerų, 15 pav.) slopinamąjį poveikį grybų tirozinazei ir žmogaus tirozinazei (Tyr), palygindami 141. Rezultatai parodė, kad prekės ženklo c-tujaplicinai (53 ir 54) veiksmingai slopino žmogaus tirozinazės aktyvumą priklausomai nuo dozės, o IC50 vertės buvo atitinkamai 8,98 ir 1,15 lM. Ypač c-tujaplicinas 54 buvo ypač pranašesnis už kojo rūgštį (IC50=17 lM). SAR tyrimai atskleidė, kad izopropilo padėtis ant tropolono karkaso buvo lemiamas tujaplicinų stiprumo veiksnys. Tujaplicinų stiprumas yra tokia tvarka: c > b > a-tujaplicinas.

To understand the inhibitory mechanism, the binding mode of c-thujaplicin was predicted using a homology model of hTYR. It showed the carbonyl and hydroxyl group of the c-thujaplicin chelate with two copper ions at the active site of hTYR. Tropolone scaffolds of thujaplicin form stacking interaction with the imidazole ring of His367 and hydrophobic interaction with isopropyl of Val377. The isopropyl group of thujaplicin forms hydrophobic interaction with Ile368. In addition, the results from comparative studies on the inhibitory effects of the other thujaplicins (a and b) indicated that van der Waals (VdW) clashes of the isopropyl group of a-thujaplicin with Val377 and S380 might reduce the inhibitory activity against hTYR. The main reason for the higher inhibitory activity of c–thujaplicin against hTYR among thujaplicins is considered to be the hydrophobic interaction of the isopropyl group with Ile368. In contrast, in many, the Val377, and Ser380 are replaced with proline (P257) and alanine (A260), respectively, therefore it can be considered that there are little VdW clashes of the isopropyl group of a-thujaplicin with A260 and P257 (Figure 16). This explains why the inhibitory effect of a-thujaplicin against mTYR (IC50=9.53 lM) is more than two orders of magnitude stronger than hTYR (IC50>1000 lM). Atitinkamai buvo pasiūlyta, kad skirtumas tarp Ala260 mTYR ir Ser380 hTYR smarkiai paveikia a-tujaplicino slopinamąjį profilį.

Wang ir bendradarbiai neseniai nustatė, kad natūralūs produktai linderanolidas B (55) ir suboksidas A (56), išskirti iš Cinnamomum stiebų, turi gerus grybų tirozinazės slopinimo gebėjimus in vitro esant mažoms dozėms (15 pav.) 142. Abu junginiai parodė žmogaus keratinocitų, melanocitų ir fibroblastų, apdorotų įvairiomis dviejų junginių koncentracijomis, ląstelių gyvybingumas. Gydymas maža doze (0.01–1,0 lM) reikšmingo citotoksiškumo žmogaus odos ląstelėms neparodė. Tyrimas atskleidė, kad abu junginiai gali sumažinti 50 procentų žmogaus tirozinazės aktyvumą, vartojant 1 lM dozę po 48-val. gydymo, ir veiksmingai slopinti (sumažinti 40 procentų) melanino susidarymą HEMn-MP ląstelėse. Tiek 55, tiek 56 parodė puikų zebrafinių žuvų pigmentacijos in vivo slopinimo potencialą net ir mažomis dozėmis be pastebimo toksiškumo. Todėl šie du junginiai yra veiksmingi nauji tirozinazės inhibitoriai, kurie gali būti laikomi odą balinančiomis medžiagomis. Kitame tyrime Kolbe ir kt. ištyrė kojinės rūgšties, hidrochinono ir arbutino slopinamąjį poveikį su kita gerai žinoma 4-butilo rezorcinolio (57) grupe žmogaus tirozinazei, taip pat MelanoDermTM odos modelio kultūros gamybos slopinimą143. 1995 m. 4-butilo rezorcinolis pristatė rezorcinolio darinį, kuris slopina ir tirozinazę144, ir TRP-1145,146. Rezultatai parodė, kad 4-butilo rezorcinolis pasirodė esąs labai veiksmingas žmogaus tirozinazės inhibitorius, kurio IC50 vertė yra 21 lmol/L ir visiškas slopinimas, kai koncentracija viršija 100 lmol/l. 4-Butilo rezorcinolis pasižymėjo 20 kartų stipresniu slopinamuoju aktyvumu nei kojo rūgštis, kurios IC50 buvo 500 lmol/l, o didžiausias slopinimas (89 proc.) buvo pasiektas esant 5,6 mmol/l koncentracijai. Arbutinas ir hidrochinonas yra silpni žmogaus tirozinazės inhibitoriai, kurių IC50 vertės yra milimoliniame diapazone, ty 6500 lmol/L arbutinui ir 4400 lmol/l hidrochinonui. Tačiau nė vienas iš jų visiškai nesustabdė žmogaus tirozinazės.

MelanoDerm odos modelyje arbutinas parodė tik nedidelį melanino gamybos veiksmingumą, kai IC5{{30}} vertė buvo 500 lmol/L, o kojo rūgštis slopino esant 400 mol/L IC50. Įdomu tai, kad hidrochinonas slopino melanino gamybą, kai IC50 vertė buvo mažesnė nei 40 lmol / l, o tai tikriausiai yra dėl skirtingų tirozinazės slopinimo mechanizmų. 4-Butilo rezorcinolis buvo stipriausias inhibitorius, kurio IC50 buvo 13,5 mol/l. Klinikiniais tyrimais patvirtintas 4-butilo rezorcinolio veiksmingumas in vivo. Pacientai, kurių dilbio buvo amžiaus dėmės, du kartus per dieną buvo gydomi dviem amžiaus dėmėmis formule, kurioje buvo 4-n-butilrezorcinolis (57), 4-heksilrezorcinolis (58) ir 4-feniletilrezorcinolis (59). ). Per 8 savaites 4-butilo rezorcinolis (57) žymiai sumažino amžiaus dėmių atsiradimą, o 4-heksilrezorcinolis ir 4-feniletilrezorcinolis parodė reikšmingą poveikį po 12 savaičių. Antrasis tyrimas parodė, kad 4-butilrezorcinolis buvo veiksmingesnis už 4-heksilrezorcinolį ir 4-fenilmetilsorcinolį. Gauti klinikiniai hiperpigmentacijos rezultatai rodo, kad 4-butilo rezorcinolis gali būti vertingas aktyvus junginys pigmentacijos sutrikimams gydyti. 4-butilo rezorcinolis buvo naudojamas melazmai gydyti. Visoje paskelbtoje literatūroje 4-butilo rezorcinolio 0,1 proc. kremas parodė greitą veiksmingumą, saugumą ir toleravimą, kai jis naudojamas melazmai gydyti147 148. Neseniai atliktas tyrimas parodė, kad 4-0,3 proc. butilo rezorcinolio kremas yra saugus, veiksmingas ir gerai toleruojamas Indijos pacientams, sergantiems melizma149.

Daugiau informacijos: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501