Tradicinės kinų žolelės Cistanche antidepresantų ir pažinimo gerinimo veikla Ⅰ
Jun 23, 2022
Abstraktus
Daugiau nei dešimt procentų žmonių per gyvenimą patiria bent vieną depresijos ir su ja susijusių psichikos sutrikimų epizodą, o depresija ir su ja susiję psichikos sutrikimai yra viena didžiausių visuomenės sveikatos problemų pasaulyje. Daugelio sistemų teorija teigia, kad kelių sistemų reguliavimo sutrikimas yra depresijos ir susijusių psichikos sutrikimų patogenezės pagrindas, todėl skubiai reikia naujų gydymo būdų, pagrįstų kelių sistemų disreguliacijos teorija. Šiame tyrime antidepresinis žolelių nuoviro poveikisCistanche deserticolaYCMa irCistanche tubulosabuvo apžiūrėtas. ŽolėCistanchenuoviras žymiai sumažino nejudrumo laikotarpį atliekant pelės uodegos pakabos testą. Morriso vandens labirinto teste pelėms, gydomoms žolelių nuoviru, pagerėjo erdvinio mokymosi ir atminties gebėjimas. Grupės gydytų žolelių nuoviru parodė sumažintą monoaminooksidazės (MAO) aktyvumą; dopamino (DA) koncentracija smegenyse buvo padidinta, o tai rodo, kad augalasCistanchenuoviras pagerino nervų jaudrumą; kortikosterono (CORT) koncentracija serume buvo sumažinta, o tai rodo, kad pelėms buvo naudingas sumažėjęs streso lygis. Taigi, antidepresantų veiksmingumas ir mechanizmastradicinė kinų žolelėCistanchebuvo ištirti šiame tyrime. ŽolėCistancheparodė, kad gali būti sukurta kaip papildoma ir alternatyvi depresijos terapija.
1. Įvadas
Depresija ir su ja susiję nuotaikos sutrikimai, kurių apytikriai 12–17 procentų gyventojų per gyvenimą patiria bent vieną epizodą, yra viena iš pagrindinių psichikos negalios priežasčių ir laikomi viena didžiausių visuomenės sveikatos problemų visame pasaulyje. Ypač svarbu tai, kad nemaža dalis pacientų, sergančių depresija, kenčia nuo atminties praradimo, koncentracijos problemų, sumažėjusios energijos ar nuovargio, praranda susidomėjimą ar malonumą pomėgiais ir veikla, taip pat sunku užmigti, pabusti anksti ryte ar užmigti. Nors depresijos ir susijusių sindromų anomalijų nerviniai substratai yra neaiškūs, visuotinai pripažįstama, kad neuroplastiškumo ir ląstelių atsparumo pažeidimas sukelia depresijos patofiziologiją, o sėkmingas gydymas gali priklausyti nuo neuromediatoriaus lygio įsikišimo. Metodas į vaistus nuo depresijos iš esmės grindžiamas klasikine monoamino sistemos hipoteze, kuri teigia, kad monoaminų, ypač serotonino (5-HT) ir norepinefrino (NE), reguliavimas prisideda prie depresijos patogenezės ir neurotransmiterių sistemos įsikišimo su dopaminu. agonistai ir dopamino-noradrenerginiai moduliatoriai palengvintų didžiosios depresijos sutrikimo simptomus. Nors antidepresantai yra plačiai skiriami, jų gydomasis veiksmingumas yra abejotinas ir negalima ignoruoti šalutinio poveikio, nes nemaža dalis pacientų nereaguoja į manipuliavimą monoamino sistema. Pastaruoju metu naujos depresijos patogenezės teorijos rodo, kad daugybė sistemų, įskaitant uždegiminius kelius, oksidacinio streso kelią, pagumburio-hipofizės-antinksčių (HPA) ašį, metabolinę ir bioenergetinę sistemą, neurotrofinius kelius, glutamato sistemą, opioidų sistemą ir cholinerginė sistema, yra glaudžiai susiję su depresijos atsiradimu. Įrodymai rodo, kad kelios tikslinės intervencijos buvo veiksmingesnės nei viena tikslinė intervencija. Skubiai reikia naujų terapijų, pagrįstų kelių sistemų disreguliacijos teorija.
Ieškote daugiau informacijos apie „Cistanche“ privalumus
Pranešama, kad augaliniai produktai suvartojo daugiau nei pusę JAV gyventojų; Visame pasaulyje auga susidomėjimas ir paklausa žolelių ar vaistažolių produktų, kaip papildomo depresijos gydymo būdo. Nustatyta, kad keli vaistiniai augalai turi teigiamą depresiją mažinantį poveikį. Žolelės, kurios, kaip pranešama, gali slopinti depresiją ir gerinti pažinimo funkciją, yra šaltalankiai,Ginkgo biloba,Piper nigrum,Hypericum perforatum,Griffonia simplicifolia. Kombinuotas ferulo rūgšties ir piperino vartojimas pelėms parodė sinerginį antidepresantą panašų poveikį, manipuliuojant monoaminergine sistema. Albiflorinui buvo būdingas didelis selektyvus afinitetas neurotransmiterių receptoriams ir transporteriams ir žymiai padidinta tarpląstelinė 5-HT ir NE koncentracija laisvai judančių žiurkių pagumburyje. Medicininė žolėMelissa officinalisL. sumažino pelių depresinį elgesį, darydamas įtaką serotonerginio neurotransmiterio lygiui. Šios žolelės ar nuovirai, sukurti kaip alternatyvūs vaistai nuo depresijos, padeda palengvinti depresijos simptomus ir yra naujas šaltinis antidepresantų vystymuisi. ŽolėCistancherūšys, paplitusios sausringose žemėse ir dykumose šiaurinėje Kinijos dalyje, yra tradicinės kinų medicinos žolelės ir Kinijoje daugiau nei 1,{1}} metus plačiai naudojamos įvairioms ligoms gydyti. Daugialypis žolelių veiksmingumasCistanchenuoviras svyruoja tarp afrodiziako [14], imunitetą stiprinantis [15], antioksidacinis [16] ir hepatoprotekcinis [17] savybės.C. deserticolanuovirai skatina sėklidžių steroidogeninius fermentus [18], skatina varpos erekcijos atsaką ir sutrumpina kastruotų žiurkių erekcijos reakcijos latentinį laikotarpį [19]. ŽolėCistanchebuvo pranešta, kad jis slopina dopaminerginių neuronų veiklą, reguliuodamas slopinančius apoptozės genus ir neurotrofinius veiksnius.20].C. tubulosanuovirai pakeitė pažinimo disfunkciją, kurią sukėlė A 1-42 blokuodamas amiloido nusėdimą ir atgaivino cholinerginę bei hipokampo dopaminerginę neuronų funkciją [21]. Neuroprotekcinė žolelių savybėCistanchereiškia terapinį potencialą sergant pažintinėmis ligomis. Depresija yra dažnas mišrus emocijų reakcijų būdas, kurio simptomai yra užmaršumas ir pažinimo nuosmukis.22]. ŽolėCistanchebuvo dažniausiai naudojamas kaip tradicinė kinų medicina užmaršumui gydyti; be to, neseniai paskelbta ataskaita rodo, kad anksti suaugusiems pradėjus vartoti kukurūzų miltus, papildytaC. tubulosayra naudingas nestuburinių gyvūnų ilgaamžiškumo skatinimui ir su uosle susijusiam mokymuisi bei atminties gerinimuiDrosophilamodelis [23]. Šie faktai rodo pažinimą gerinančią žolelės savybęCistanche; Šiame tyrime pirmą kartą apibūdinome antidepresantų savybę ir jos ryšį su pažinimo gerinimo veikla žinduolių modelyje, reguliuojant monoamino sistemą ir HPA ašį. Apšviečiamas antidepresantas ir preliminarus žolės mechanizmasCistanchegalėtų išplėsti žolelių panaudojimo spektrąCistanche, kuri galėtų būti sukurta kaip alternatyvi priemonė nuo depresijos.
2. Cistanche antidepresinės funkcijos medžiagos ir metodai
2.1. Cistanche augalinės medžiagos ir nuoviro paruošimas
C. deserticolaYCMa buvo gautas iš Nei Mongolų autonominio regiono, Kinijoje;C. tubulosabuvo gautas iš Sindziango Uigūrų autonominio regiono, Kinijoje. Prieš nuovirą žolė (C. deserticolaYCMa arbaC. tubulosa) buvo patikrintas, siekiant nustatyti echinakozido ir verbaskozido kiekį naudojant HPLC (didelio efektyvumo skysčių chromatografiją) (Milfordas, MA, Waters, JAV), o bandymams su gyvūnais buvo naudojamas tinkamas produktas (pagal Kinijos Liaudies Respublikos farmakopėją). . Nuoviras buvo gautas remiantis Sun Yatsen universiteto Valstybinės švietimo ministerijos Maisto ir sveikatos inžinerijos tyrimų centro sukurtu vandens garinimo metodu. IšdžiovintasCistanche deserticola125 g YCMa buvo susmulkintas ir persijotas 120-tinkleliu, o tada milteliai ištirpinti 3 l itin gryno vandens, kaitinti 100 laipsnių temperatūroje 2 valandas, tada atvėsinti iki kambario temperatūros ir persijoti. ; supernatantas buvo perdirbtas. Po to nuosėdos buvo ištirpintos 2 litrais itin gryno vandens, kaitinamos 1,5 valandos ir atvėsinamos, kaip minėta aukščiau, kad būtų pakartotinai panaudotas supernatantas; po to nuosėdos buvo panaudotos supernatantui perdirbti. Visas supernatantas buvo praturtintas rotaciniais vakuuminiais garintuvais 60 laipsnių kampu; galiausiai neapdoroto vaisto koncentracija buvo nustatyta kaip 0, 5 g / ml, o produktas buvo laikomas -20 laipsnių temperatūroje.
2.2. Echinakozido ir verbaskozido tyrimas naudojant HPLC analizę
Kokybiniam ir kiekybiniam echinakozido ir verbaskozido tyrimui matuoti naudota HPLC (didelio efektyvumo skysčių chromatografija); verbaskozidas (grynumas > 93 procentai) ir echinakozidas (grynumas > 93 procentai) buvo įsigyti iš Nacionalinių maisto ir vaistų kontrolės institutų (Pekinas, Kinija) ir naudojami kaip standartinė kontrolė.
2.3. Gyvūnų priežiūra ir eksperimentinis elgesys Cistanche
Tiriamieji buvo SPF (specifinio patogeno neturintys) Kunmingo pelių patinai, sveriantys 21–25 gramus, tiekiami iš Guangdongo provincijos medicinos eksperimentinių gyvūnų centro. Gyvūnai buvo laikomi plastikiniuose narvuose (po dešimt narve); aplinkos sąlygos buvo nustatytos taip: drėgmė 40–70 procentų, kambario temperatūra 21 ± 1 laipsnis ir 12 h : 12 h šviesos-tamsos periodas. Visi eksperimentai su gyvūnais buvo patvirtinti Sun Yat-sen universiteto Gyvūnų etikos komiteto.
2.4. Uodegos pakabos bandymas ant Cistanche
Uodegos pakabos testas buvo atliktas pagal protokolą, aprašytą Cryan ir kt. [24] su nedideliais pakeitimais. Trumpai tariant, 21 dieną pelės buvo pakabintos už uodegos, naudojant metalines kartuves, pririštas nailono kateteriu, galva buvo 50 mm aukštyje nuo grindų. Pelės buvo pakabintos ant kabliuko ant lipnios juostos 10–20 mm atstumu nuo jos uodegos galo ir buvo izoliuotos akustiškai ir vizualiai išklotinėmis lentomis. Pelės kūno judesiai buvo užfiksuoti, o kvėpavimo judesiai buvo ignoruojami. Prieš eksperimento dieną pelės buvo suspenduotos 8 minutėms adaptacijai.
2.5. Morriso vandens labirinto testas Cistanche
Vandens labirinto testas buvo atliktas pagal Vorhees ir kt. aprašymą. [25–27] naudojant Kinijos medicinos mokslų akademijos sukurtą įrenginį. Buvo naudojamas apskritas baseinas (150 cm skersmens), pripildytas vandens (26 ± 1 laipsnis; apvado aukštis (atstumas vandens paviršiaus iki sienos apvado): 10 cm), apskrita gelbėjimo platforma (skersmuo: 11 cm; atstumas tarp platformos centro taško ir baseino). sienelė: 27 cm) buvo panardinta 1–1,5 cm žemiau vandens paviršiaus, o bandymo vieta buvo apšviesta netiesioginiu apšvietimu (50 ± 10 liuksų), kad būtų išvengta atspindžių. Buvo naudojamos keturios starto vietos: Š, P, E ir W. Erdvinio mokymosi testui gyvūnai buvo mokomi kasdien 9–11 dienomis fiksuotoje starto vietoje. Pabėgimo latentinis laikotarpis matuojamas, kad būtų parodyta pelių erdvinė atmintis ir mokymosi gebėjimas. Jei pelės negalėtų rasti ar užlipti ant platformos, pelės būtų nuvedamos į platformą ir pasiliktų 10 sekundžių. Pailsėjus 60 s, prasidės kita treniruotė. Duomenys, gauti iš paskutinio erdvinio mokymosi testo, buvo naudojami kaip bazinė formavimo vertė. 23–28 dienomis buvo atliktas vietos navigacijos testas ir erdvinis zondas. Vietos navigacijos testas truko 6 dienas ir buvo atliktas 13 val., gyvūnai buvo pasodinti į vandenį galva atsukta į baseino sienelę pagal laikrodžio rodyklę ir užfiksuotas latentinis laikotarpis (per 2 min.). Atlikus vietos navigacijos testą, platforma buvo pašalinta. Pelės buvo patalpintos į vandenį, galva atsukta į baseino sieną atsitiktinėje vietoje, o per 2 minutes buvo užfiksuotas judėjimo pėdsakas ir dažnis, kuriuo pelės plaukė per platformą. Judesio pėdsakas buvo įrašytas daugiafunkciu autonominiu pelių judėjimo registratoriumi (YLS-1A, Yiyan Technology, Dzinanas, Kinija).
2.6. MAO veiklos aptikimas
MAO aktyvumas buvo matuojamas naudojant MAO aptikimo rinkinį (A034, Nanjing Jiancheng Bioinžinerijos institutas, Nankinas, Kinija), o aptikimas buvo atliktas pagal gamintojo protokolą. Gautas homogenatas iš smegenų audinio; 500μAš buvau sumaišytas su 300μl agento 1 ir 300μl agento 2, inkubuojamas 3 valandas 37 laipsnių temperatūroje ir po to iš eilės pridedamas 300μl, agento 3, 3 ml agento 4 ir maišyti 2 min. Reakcijos mišinys buvo centrifuguojamas 3, 000 aps./min. greičiu 10 min., o supernatanto optinis tankis buvo nustatytas ultravioletiniu ir matomo spektro spektrofotometru (Lambda 25, PerkinElmer, JAV), naudojant 242 nm sužadinimo šviesą.
2.7. Fermentinis imunosorbentinis neurotransmiterių ir AKTH bei CORT tyrimas
Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) dopamino (DA), norepinefrino (NE) ir 5-hidroksitriptamino (5-HT) aptikimo rinkinys buvo nupirktas iš BLUE GENE, Šanchajaus. ELISA aptikimo rinkiniai buvo nupirkti iš Qiyun Biotech, Guangdžou.
Procedūros yra tokios: eksperimentas buvo atliktas kambario temperatūroje. Padenkite PVC mikrotitravimo plokštelės šulinukus fiksuojančiu antikūnu 1–10μg/mL koncentracija karbonato/bikarbonato buferyje (pH 9,6). Uždarykite plokštelę ir inkubuokite per naktį 4 laipsnių temperatūroje; 3 kartus plaukite plokštelę PBS/tween, o nespecifinės surišimo vietos blokuojamos Block Solution; po to plokštelę 3 kartus nuplaukite PBS/tween. Standartai ir mėginiai skiedžiami blokavimo tirpalu ir 100μĮ lėkštelės duobutę įpilama l, plokštelė sandariai uždaroma ir inkubuojama 37 laipsnių temperatūroje 1 val. Pridėti 100μl praskiestas aptikimo antikūnas ir plokštelė inkubuojama 37 laipsnių temperatūroje 1 val.; 3 kartus nuplaukite plokštelę PBS/Tween. Pridėti 50μl spalvos ryškinimo tirpalas ir plokštelę laikykite toliau nuo šviesos bei inkubuokite kambario temperatūroje 15 min.; 50μReakcijai sustabdyti pridedamas l sustabdymo buferis. Išmatuokite kiekvieno šulinėlio optinį tankį (OD) naudodami mikroplokštelių skaitytuvą, nustatytą 405 nm per 30 min.
2.8. Statistinė analizė
Visi duomenys buvo pateikti kaip vidurkis ± SEM (standartinė vidurkio paklaida), reikšmingas skirtumas buvo analizuojamas pagal t-testas arba vienpusis ANOVA, po kurio sekamas Dunkano kelių diapazonų testas naudojant SPSS 16.0, ir skirtumai tarp grupių suP< 0.05 buvo laikomi statistiškai reikšmingais.