Inkstų transplantacijos funkcijos stebėjimo ir įvertinimo metodas: (paviršiaus patobulinta Ramano spektroskopija)
Mar 26, 2022
Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com
Ⅰ DALIS: Inksto transplantacijos recipiento šlapimo paviršiuje patobulintų Ramano spektroskopinių pirštų atspaudų koreliacija su inkstų funkcijos parametrais
Zhongli Huang, Shijian Feng ir kt.
Įprastas stebėjimasinkstų persodinimasfunkcija reikalinga standartinei priežiūrai po transplantacijos, įskaitant dažnus kreatinino kiekio serume matavimus su inkstų biopsija arba be jos. Tačiau dėl šių metodų invaziškumo, galinčio sukelti kliniškai reikšmingų komplikacijų, jie nėra idealūs. Šio tyrimo tikslas buvo sukurti neinvazinį stebėjimo įrankįinkstų persodinimasfunkcija naudojantPatobulintas paviršius Ramano spektroskopija(SERS). Šlapimo ir kraujo mėginiai buvo paimti išinkstų persodinimasrecipientai po operacijos. Sidabro nanodalelių pagrindu pagamintas SERS(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija) šlapimo spektrai buvo išmatuoti ir įvertinti naudojant dalinių mažiausių kvadratų (PLS) analizę. SERS(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)spektrai buvo lyginami su įprastais cheminiais žymenimisinkstastransplantacijaįvertinti jos gebėjimą numatyti. Iš viso 110inkstų persodinimasrecipientai buvo įtraukti į šį tyrimą. PLS rezultatai parodė reikšmingą koreliaciją su šlapimo baltymu (R2=0.4660, p.<><0.01), and="" urea(r2=""><0.01).furthermore, the="" prediction="" of="" the="" blood="" markers="" of="">inkstų persodinimasfunkcija naudojant šlapimo SERS(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)spektrai buvo nurodyti R2=0.7628 (p<0.01)for serum="" creatinine="" and="" r2="0.6539" for=""><0.01)for blood="" urea="" nitrogen.="" this="" preliminary="" study="" suggested="" that="" the="" urine="">(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)Spektrinė analizė galėtų būti naudojama kaip patogus greito įvertinimo metodasinkstų persodinimasfunkcija.
cistanche tubolosa nauda: inkstų ligų gydymas
Inkstų transplantacijayra auksinis standartinis gydymas pacientams, sergantiems paskutinės stadijos inkstų liga (ESRD)!. Donoro ir recipiento veiksniai, chirurginiai ir imunologiniai veiksniai gali turėti įtakos arba sukelti susilpnėjusią transplantato funkciją iškart po transplantacijos operacijos, vadinamos uždelsta transplantato funkcija, arba kitais laiko momentais po transplantacijos, alotransplantato disfunkcija paprastai atskleidžiama atliekant serijinius laboratorinius tyrimus. rodo kreatinino (SCr) padidėjimą serume ir kitus galimus radinius, įskaitant sumažėjusį šlapimo kiekį ir kraujospūdžio padidėjimą, piurijos ir proteinurijos laipsnį, ūminį atmetimą (AR), ūmią kanalėlių nekrozę (ATN) ir ciklosporino/takrolimuzo toksiškumą. dažnesnės etiologijosinkstastransplantacijadisfunkcija7-9. Jei šios problemos nebus tinkamai nustatytos ir nesprendžiamos, jos gali visam laikui pablogėtiinkstastransplantacijafunkcija. Taigi pacientai, turintysinkstastransplantacijosreikia reguliariai stebėti jų būklęinkstastransplantacijaveikia kaip valdymo po transplantacijos dalis10-1.
Įprasti transplantuotų inkstų funkcinės būklės vertinimo metodai apima klinikinį pacientų įvertinimą, pagrįstą tūrio būkle ir šlapimo išsiskyrimu, serijinius SCr matavimus su apskaičiuotu glomerulų filtracijos greičiu (eGFR) ir net izotopų tyrimus retomis aplinkybėmis2,13. Jei įtariama AR, dažnai atliekami inkstų transplantacijos ultragarsiniai tyrimai, po kurių atliekama transplantacijos biopsija, kad būtų patvirtinta patologinė diagnozė, kad būtų galima nuspręsti dėl gydymo plano. Biopsijos procedūra gali būti nepatogi pacientams ir gali sukelti kliniškai reikšmingų komplikacijų, tokių kaip kraujavimas arba alotransplantato praradimas pačiais kraštutiniais atvejais. Todėl neinvazinis klinikinis įrankis, tiksliai nustatantis kidnėjaus transplantacijafunkcija tikrai pageidautina tiek paciento, tiek gydytojo požiūriu.
kam vartojamas cistanche: inkstų funkcijai gerinti
Ramano spektroskopija(RS) yra specializuotas ir neinvazinis įrankis, skleidžiantis krintančią lazerio šviesą per skysčio mėginį, todėl susidaro išsklaidyti fotonai, kurie sukelia bangos ilgio poslinkį, priklausantį nuo cheminės skysčio sudėties'4-17. Ramano sklaidos intensyvumas yra proporcingas molekulinės poliarizacijos pokyčio dydžiui. Anksčiau RS taikymas(Ramano spektroskopija)buvo ribotas dėl mažo jautrumo, didelių sąnaudų ir prieinamos analizės vietoje trūkumo8. Dėl pastarojo meto RS technologijų pažangos atsirado lengvai prieinamas, nešiojamas ir santykinai pigus RS (Ramano spektroskopija) įrenginys9.Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija(SERS) yra RS potipis. sukurtas specialiai padidinti mažos koncentracijos analičių jautrumą, kai mėginio apdorojimas sustiprinančia medžiaga žymiai sustiprina adsorbato molekulių elektromagnetinius laukus, kurie susidaro sužadinant lokalizuotus paviršiaus plazmonus (LSP)20. Keletas SERS(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija) buvo aprašytos pagerinimo medžiagos (pvz., koloidiniai metalai ir grubinti metalai, įskaitant auksą, sidabrą ir varį). Šie metalo stiprikliai gali padidinti Ramano signalo intensyvumą iki 10–10 laipsnių kartų2. Mūsų ankstesnis tyrimas parodė, kad mūsų naminės koloidinės sidabro nanodalelės (Ag NP) yra patikima ir atkuriama SERS pagerinimo medžiaga.(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija). Šio tyrimo tikslas buvo įvertinti galimybę naudoti Ag NP pagrįstą SERS(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)pacientų šlapimo mėginių, siekiant nustatytiinkstų persodinimasveikia, palyginti su įprastiniais biocheminiais žymenimis.
cistanche ekstrakto milteliai
METODAS IR GYVŪNAI
Mėginių ir duomenų rinkimas. Ir šlapimo, ir kraujo mėginiai buvo paimti išinkstastransplantacijapacientų Sičuano universiteto Vakarų Kinijos ligoninės Urologijos skyriuje. Šie mėginiai buvo paimti vienu metu per 3 dienas nuoinkstastransplantacijachirurgija. Remiantis standartine operacijos procedūra, kraujo mėginiai buvo išsiųsti į Vakarų Kinijos ligoninės klinikinės biochemijos laboratoriją SCr ir kraujo karbamido azoto (BUN) nustatymui. Šlapimo mėginius paėmė patys pacientai, naudodami 50 ml sterilų mėgintuvėlį. Tada šlapimo mėginiai buvo pristatyti į ligoninės laboratoriją per 8 valandas po paėmimo. Šlapimo mėgintuvėliai buvo centrifuguojami 1500 × g greičiu 10 minučių, kad būtų pašalintos ląstelės ir šiukšlės, ir tik susidarę supernatantai buvo laikomi alikvotose -80 laipsnių šaldytuve prieš naudojimą. Baltymų ir kreatinino kiekis šlapimo mėginiuose buvo nustatytas Vankuverio bendrosios ligoninės Klinikinės chemijos laboratorijoje (Vankuveris, Britų Kolumbija, Kanada).
Sidabro (Ag) nanodalelių ir šlapimo mėginių paruošimas. Ag koloidai buvo paruošti naudojant hidroksilamino hidrochloridą ir Ag nitratą, kaip aprašyta anksčiau 23, 24. Trumpai tariant, stikliniai indai, naudojami atliekant šias procedūras, buvo nuvalyti chromo rūgšties losjonu, o prieš naudojimą kruopščiai nuplauti milili-O vandeniu. Į 5 ml 6× greitai buvo įpilta 4,5 ml 0,1 M NaOH tirpalo. 10-2M hidroksilamino hidrochlorido tirpalas ir mišinys maišomas, kol susidarė vienalytė suspensija. Gautas tirpalas buvo sumaišytas su 90 ml 1,11 × 10-3 M AgNO, vandeninio tirpalo kambario temperatūroje iki pieno pilkos spalvos. Tada ši Ag koloidinė suspensija prieš naudojimą buvo laikoma tamsoje. Siekiant užtikrinti nuoseklią Ag NP formą ir dydį, visi eksperimentiniai žingsniai ir procesai buvo standartizuoti. Paruošti naudoti Ag koloidai buvo susmulkinti centrifuguojant 10, 000 × g 10 min. Ag nanodalelių transmisijos elektronų mikroskopijos (TEM) vaizdas buvo padarytas su susintetintų Ag NP dydžiais pagal normalų pasiskirstymą, kurio vidutinis skersmuo yra 35±5 nm (Papildomas 1 pav.). Tada granuliuotas Ag NP buvo sumaišytas su šlapimo mėginiais santykiu 1:1 stačiakampėje aliuminio plokštelėje (bendras tūris 10 μl). Ta pati Ag NP partija buvo naudojama vienam SERS etapui(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)visų šlapimo mėginių matavimas vienu metu, kad būtų išvengta galimo Ag NP nenuoseklumo. Tų pačių mėginių pakartotiniai matavimai (techniniai pakartojimai) buvo atlikti naudojant tą pačią arba kitą Ag NP partiją. Tada Ag koloidinis / šlapimo mišinys prieš SERS buvo džiovinamas ore kambario temperatūroje 60 minučių(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)matavimas, siekiant palengvinti molekulinę agregaciją. Jei paruoštuose mėginiuose buvo vadinamasis „kavos žiedo efektas“ arba akivaizdus kristalų susidarymas (keletu atvejų), jie buvo gaminami iš naujo, kol šios problemos nebuvo. Pažymėtina, kad manoma, kad agregavimo agentai padidina SERS signalo intensyvumą(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)Tačiau mes nusprendėme atsisakyti tokių agentų naudojimo, tikėdamiesi supaprastinti mėginių paruošimo procesą.
cistanche ekstrakto nauda: užkerta kelią inkstų ligoms
SERS(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)matavimas. Ag koloidinio / šlapimo mišinio SERS spektrai buvo išmatuoti komerciniu Ramano spektrometru (AURA, Verisante Technology, Vankuveris, BC, Kanada), aprūpintu 785 nm diodiniu lazeriu Ramano sužadinimui, panašų į prototipą, apie kurį anksčiau pranešė Zhao ir kt. 25,26. Lazerio spindulys buvo tiekiamas į mėginį per vieną pluoštą, kurio šerdies skersmuo 200 μm. Neapdoroti signalai buvo surinkti zondu, sudarytu iš centrinio sužadinimo pluošto, apsupto šimto dešimties 100- um šerdies skersmens surinkimo skaidulų, ir tada pateikti į spektrometrą. Kiekvienas SERS(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)spektras buvo gautas naudojant 150 mW sužadinimo lazerio galią ir vienos sekundės integravimo laiką su 8 cm-lin spektrine skiriamąja geba 500-1800 cm-1 bangų skaičių diapazone. Kiekvienam išdžiovintam lašeliui ar mėginiui buvo išmatuoti trys spektrai, apimant visą mėginio plotą ant aliuminio stiklelio, o vidurkis buvo naudojamas tolesnėje duomenų analizėje. Monitorius taip pat buvo naudojamas siekiant sumažinti kiekvieno to paties mėginio bandymo nevienalytiškumą, matuojant spektrą vienu metu matuojant. Jei vizualizuotas spektras labai skyrėsi vienas nuo kito, tada buvo gauti kiti 3-6 spektrai, kol buvo pasiektas nuoseklumas.
Duomenų analizė. Gautas SERS(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)šlapimo mėginių spektras 500-1800-1 cm bangos ilgio diapazone buvo išskirtas atėmus fluorescencinį foną, naudojant penktos eilės polinomo pritaikymo algoritmą27. Dalinės mažiausių kvadratų (PLS) regresija su kryžminiu visų spektrų patvirtinimu (LOO-CV) buvo naudojama kiekybiniams biocheminiams parametrams nustatyti.inkstastransplantacijafunkcija, įskaitant šlapimo baltymą, šlapimo kreatininą (UCR), šlapimo karbamidą, SCr ir BUN. Šių parametrų koncentracijos, gautos iš kraujo / šlapimo biocheminės analizės, buvo naudojamos kaip auksinis standartas lyginant SERS.(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)šlapimo analizė. PLS regresijos analizei buvo naudojama TIBCO STATISTICA programinė įranga (10 versija, TIBCO SOFTWARE Inc., Palo Alto, CA, JAV).
Etinis patvirtinimas. Šį tyrimą (patvirtinimo numeris: 2019 (748)) patvirtino Sičuano universiteto Vakarų Kinijos ligoninės etikos komitetas, o visi dalyviai prieš imdami mėginius pasirašė informuotą sutikimą. Sičuano universiteto ir Vakarų Kinijos ligoninės etikos komitetas patvirtino, kad visa tyrimų veikla buvo atlikta laikantis atitinkamų gairių ir taisyklių.
cistanche stiebai
REZULTATAS
Iš viso 110inkstastransplantacijarecipientai (80 vyrai ir 30 moterų; vidutinis kohortos amžius 41,5 metų) dalyvavo šiame tyrime. Šlapimo biochemijos rezultatai atskleidė, kad šlapimo baltymo diapazonas buvo 0.05-6.83 g/L, UCR 1.03-22.49 mmol/L, o šlapime šlapalo 29.6-535. 8 mmol/L, biocheminiai kraujo tyrimų rezultatai parodė, kad SCr diapazonas buvo 39-1461 umol/L ir BUN 3.2-25,1 mmol/L. Demografinės pacientų charakteristikos ir jų šlapimo bei kraujo tyrimų rezultatai apibendrinti 1 lentelėje.
2 lentelė. Apibendrinkite anksčiau praneštus SERS(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)piko padėtys ir vibracijos režimo priskyrimai1.
SERS(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)Ag NP/šlapimo mišinių spektrai buvo išmatuoti tomis pačiomis sąlygomis (1 diena po mišinio paruošimo). SERS(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)Mėginių spektrai atskleidė daug dominuojančių vibracijos juostų, o tai reiškia glaudžią Ag koloidų ir šlapimo molekulių sąveiką, dėl kurios sustiprėja signalas. Kaip parodyta 1 pav., pagrindinis SERS(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)šlapimo smailės (vibracijos priskyrimai) buvo priskirtos 1285, 1004, 702 ir 1383 cm-1, o tai atitinkamai biochemiškai atitinka citoziną, karbamidą, cholesterolį ir CH3 juostą8. Kitos SERS biocheminės užduotys(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)1 pav. parodytos smailės yra apibendrintos 2 lentelėje. Norėdami ištirti, ar SERS(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)gali būti naudojama kaip neinvazinė priemonė būklei įvertintiinkstastransplantacijos, PLS sukurti modeliai buvo naudojami koncentracijoms prognozuotiinkstastransplantacijafunkcijos žymenys šlapime ir kraujyje. 2 paveiksle parodyti šlapimo baltymo, UCR ir šlapimo karbamido PLS analizės rezultatai, palyginti su SERS.(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija) spectra, respectively. As a reference for the prediction ability of PLS analysis, R'>{{0}}.67 nurodė didelį nuspėjimo tikslumą, diapazoną 0.33-0.67 vidutinį nuspėjamąjį tikslumą, R' diapazoną 0.19-0.33 mažas nuspėjamasis tikslumas ir R'<0.19 unacceptable="" variables2.="" the="" urine="" results="" revealed="" an="" r²="0.4660（moderate）" for="" urine=""><0.001）, r²="0.8106（high）for"><0.001）, and="" r²="0.7808（high）" for="" urine=""><0.001）. figure="" 3="" showed="" the="" results="" of="" pls="" analysis="" of="" the="" blood="" scr="" and="" bun="" as="" compared="" to="" the="" urinary="">(Patobulintas paviršius Ramano spektroskopija)spektrai, atitinkamai. Kraujo rezultatai parodė, kad SCr (p) R²=0.7628 (didelis)<0.001）and r²="0.6539" （moderate="" to="" high）for=""><0.001）. because="" the="" low="" concentrations="" of="">inkstastransplantacijaFunkcijos biomarkeriai – normali transplantacijos funkcija nekelia susirūpinimo klinikinėje slaugoje, apskaičiavome jų didelių koncentracijų standartinį nuokrypį (SD) pagal ribinį lygį. Dėl šlapimo baltymų<0.3 g/l,="" the="" calculated="" sd="" was="" 0.33="" g/l,="" and="">{{0}}.3 g/l, SD 0,44 g/l. UCr<7 mmol/l,="" the="" calculated="" sd="" was="" 1.69="" mmol/l,="" and="">7 mmol/L, SD 1,64 mmol/L. Šlapimo karbamidui<266 mmol/l,="" the="" sd="" was="" 47.88="" mmol/l,="" and="">266 mmol/L, SD 29,57 mmol/L, serumo biomarkeriai dažniausiai naudojamiinkstastransplantacijafunkcionuoti klinikinėje praktikoje. Dėl SCr<110 mmol/l,="" the="" sd="" was="" 87.98="" mmol/l,and="">110 mmol/L, SD 108,21 mmol/L. BUN<7.7 mmol/l,="" the="" sd="" was="" 2.15,="" and="">7,7 mmol/l, SD 2,32 mmol/l.
| 
|
| 2 pav. PLS analizės sukurti modeliai buvo naudojami molekulių koncentracijai šlapime prognozuoti.Šlapimo baltymų (a), UCR (b) ir šlapimo karbamido (c) PLS analizė. Rezultatai parodė, kad šlapimo baltymo (a) R2=0.4660 (p<0.001), r2="0.8106" for="" ucr="" (b)=""><0.001), r2="0.7808" for="" urine="" urea="" (c)=""><> | 3 pav. PLS analizės sukurti modeliai buvo naudojami kraujo biomarkerių koncentracijoms prognozuoti inkstų transplantacijos funkcijai.Rezultatai parodė, kad SCr (a) R2=0.7628 (p<0.001) and="" r2="0.6539" for="" bun="" (b)=""><0.001),> |
