RNA M6 A skaitytuvas YTHDF2 kontroliuoja NK ląstelių priešnavikinį ir antivirusinį imunitetą, 4 dalis

Gerai žinoma, kad YTHDF2 veikia kaip m6A skaitytuvas, kuris atpažįsta ir suriša m6A turinčias RNR ir reguliuoja m6A transkriptų skaidymą.
Tada atlikome RNR imunoprecipitaciją (RIP) – seką, naudodami YTHDF2 antikūną, kad sužymėtume YTHDF2 surištus tikslinius transkriptus NK ląstelėse. YTHDF2-surišimo vietos buvo praturtintos baltymus koduojančios sekos regione ir 39UTR (S5, E ir F pav.).

Ryšys tarp skaitytojų ir atminties yra labai glaudus. Skaitymas yra vienas geriausių būdų pagerinti mūsų atminties įgūdžius.

Kai skaitome, mūsų smegenys patiria sudėtingą procesą. Kai nuskaitome žodžius ir paverčiame juos reikšme, mūsų smegenys nuolat kuria naujus neuronų ryšius. Šios neuronų jungtys sudaro mūsų atminties sistemą ir padeda saugoti informaciją ilgalaikėje atmintyje.

Be to, skaitymas skatina mūsų vaizduotę ir kūrybiškumą, o tai taip pat padeda pagerinti atmintį. Kai mintyse konstruojame vaizdus ir scenas, mūsų smegenys aktyviai įsijungia, todėl susidaro daugiau neuronų jungčių, o tai sustiprina mūsų atminties gebėjimus.

Galiausiai skaitymas taip pat pagerina mūsų dėmesį ir koncentraciją. Kai sutelkiame dėmesį į skaitymą, mūsų smegenys nuolat mankštinasi vėl ir vėl, todėl mūsų atmintis stiprėja.

Apskritai skaitymas gali labai teigiamai paveikti mūsų atmintį. Lavindami skaitymo įprotį ir skaitydami stimuliuodami savo smegenis, galime pagerinti savo atminties įgūdžius ir mėgautis turtingesniu bei įdomesniu gyvenimu. Matyti, kad turime gerinti atmintį, o Cistanche deserticola gali žymiai pagerinti atmintį, nes Cistanche deserticola yra tradicinė kinų vaistinė medžiaga, turinti daug unikalių poveikių, vienas iš jų – gerinti atmintį. Cistanche deserticola veiksmingumą lemia daugybė jame esančių veikliųjų medžiagų, įskaitant tanino rūgštį, polisacharidus, flavonoidinius glikozidus ir kt. Šie ingredientai įvairiais būdais gali skatinti smegenų sveikatą.

Spustelėkite žinoti 10 būdų, kaip pagerinti atmintį

Mes nustatėme 3 951 potencialų YTHDF2 surišimo smailę iš 1 290 nuorašų, iš kurių 426 (33 %) buvo aptikti su reikšmingu m6A praturtėjimu. GO sodrinimo analizė parodė, kad 1290 YTHDF2 tiksliniai nuorašai buvo praturtinti baltymų vertimu, RNR surišimu ir RNR sujungimu (S5 pav. G).

Tada mes nustatėme galimus tikslinius transkriptus iš persidengiančių transkriptų per RNR-seq, m6A-seq ir RIP-seq ir nustatėme, kad 29 transkriptų rinkinys, surištas YTHDF2 ir pažymėtas m6A (tiek Ythdf2WT, tiek Ythdf2ANK NK ląstelėse), buvo skirtingai išreikštas tarp NK ląstelių. iš Ythdf2WTir Ythdf2ΔNK pelių (7 G pav.). Tarp jų 12 transkriptų buvo sureguliuoti ir 17 nuorašų buvo sumažintas Ythdf2ANK pelių NK ląstelėse, palyginti su Ythdf2WT NKląstelėmis (7 pav. G).

Remiantis mūsų funkciniu YTHDF2 apibūdinimu ir GO analize iš RNR-seq duomenų, Ythdf2 trūkumas veikia NK ląstelių dalijimąsi ir proliferaciją, galbūt palengvindamas ląstelių ciklo kontrolinių taškų arba neigiamų reguliatorių mRNR skaidymą ląstelių dalijimosi metu.

Buvo pranešta, kad iš 12 padidintų nuorašų trys neigiamai reguliuoja ląstelių dalijimąsi arba proliferaciją, įskaitant Mdm2 (pelės dviguba minutė 2 [MDM2]; Frum ir kt., 2009; Giono ir Manfredi, 2007; Giono ir kt., 2017), Tardbp ( TAR DNR surišantis baltymas 43 [TDP43]; Ayala ir kt., 2008; Sanna ir kt., 2020) ir Crebzf (CREB/ATFBZIP transkripcijos faktorius; Hu ir kt., 2020; López-Mateo ir kt., 2012) , o tai rodo, kad jie yra galimi YTHDF2 taikiniai NK ląstelėse.

Pažymėtina, kad m6A smailės gerai dera su YTHDF{1}}rišimo vietomis Mdm2 ir Tardbp 39UTR ir Crebzf genų 59UTR, kaip parodyta Integrative Genomics Viewer (7 pav. H).

RIP naudojant m6A arba YTHDF2 antikūnus po qPCR patvirtino, kad Mdm2, Tardbp ir Crebzf iš tiesų buvo m6Ametilinti ir daugiausia praturtinti YTHDF2 NK ląstelėse (7 pav., I ir J), palaikydami m6A-seq ir RIP-seq duomenis, kurie rodo, kad jie trys genai yra galimi YTHDF2 inNK ląstelių taikiniai.

Norėdami ištirti, ar YTHDF2 reguliuoja Mdm2, Tardbp ir Crebzf ekspresiją moduliuodamas mRNR stabilumą, išmatavome trijų taikinių mRNR skaidymą slopindami transkripciją aktinomicinu D Ythdf2ΔNK ir Ythdf2WT pelių NK ląstelėse.

Rezultatai parodė, kad Mdm2 ir Tardbp, bet ne Crebzf, turėjo ilgesnį pusinės eliminacijos periodą Ythdf2ΔNK pelių NK ląstelėse, palyginti su pelių Ythdf2WT (7 pav., K – M), o tai rodo, kad Mdm2 ir Tardbpare tiesiogiai reguliuoja YTHDF2 NK ląstelėse.

Naudodami imunoblotą patvirtinome, kad Ythdf2ΔNK pelių NK ląstelėse buvo sureguliuotas MDM2 ir TDP43 baltymų kiekis (S5 H pav.). Norėdami dar labiau patvirtinti, kad šie du genai yra funkciniai YTHDF2 taikiniai, panaudojome Mdm2- arba Tardbp. -specifinės siRNR, kad numuštų dviejų genų ekspresiją in vitro (S5 pav., I ir J).

Tada palyginome ląstelių proliferaciją ir Ythdf2ΔNKNK ląstelių išgyvenimą su Mdm2 arba Tardbp nenumušimu, kai yra IL -15. Rezultatai parodė, kad Tardbp numušimas gali bent iš dalies išgelbėti Ythdf2ΔNK pelių NK ląstelių ląstelių proliferacijos ir ląstelių išgyvenimo defektą (7 pav., N ir O).

Tačiau Mdm2 numušimas neturėjo gelbėjimo efektų (S5, K ir L pav.). Šie rezultatai rodo, kad YTHDF2 bent iš dalies reguliuoja NK ląstelių proliferaciją ir dalijimąsi, slopindamas Tardbp mRNR stabilumą.

Diskusija

Šiame tyrime pranešame apie įvairiapusį YTHDF{0}}tarpininkaujamo m6A metilinimo vaidmenį NK ląstelių imunitete. Mes nustatėme, kad YTHDF2, vienas iš svarbiausių m6A modifikacijų skaitytojų, yra labai svarbus palaikant NK ląstelių homeostazę, brendimą, IL-15 sukeltą išgyvenimą ir priešnavikinį bei antivirusinį aktyvumą.

Taip pat nustatėme naują teigiamą grįžtamąjį ryšį tarp STAT5 ir YTHDF2, pasroviui nuo IL-15, kuris prisideda prie efektoriaus funkcijų ir išlikimo pelės NK ląstelėse. Mūsų tyrimas išaiškina YTHDF2 arba m6A metilinimo biologinius vaidmenis apskritai NK ląstelių įgimtame imunitete. Jis užpildo spragą žinių apie tai, kaip YTHDF2 reguliuoja įgimtą imuninį atsaką į piktybinę transformaciją ir virusinę infekciją.

Mūsų išvados suteikia naują kryptį, kaip panaudoti NK ląstelių priešnavikinį imunitetą ir kartu gerina mūsų supratimą apie m6A modifikacijas formuojant įgimtą imunitetą. M6A skaitytuvo baltymas YTHDF2 reguliuoja tikslinių mRNR stabilumą (Du ir kt., 2016; Wang ir kt., 2014). Daugybė tyrimų patvirtino platų YTHDF2 poveikį įvairiems biologiniams procesams.

YTHDF2 slopina normalų kraujodaros kamieninių ląstelių plėtimąsi ir savaiminį atsinaujinimą, bet taip pat reikalingas ilgalaikiam kraujodaros kamieninių ląstelių palaikymui (Li ir kt., 2018; Mapperley ir kt., 2021 Paris ir kt., 2019; Wang ir kt., 2018a). Pastaruoju metu šis genas dalyvauja slopinant uždegimą bakterinės infekcijos metu (Wu ir kt., 2020a). YTHDF2 vaidmuo ir mechanizmas naviko vystymuisi buvo gerai ištirtas.

YTHDF2 skatina leukemijos kamieninių ląstelių vystymąsi ir ūminės mieloidinės leukemijos inicijavimą (Paris ir kt., 2019). Įrodyta, kad, be leukemijos, YTHDF2 skatina solidinių navikų, įskaitant prostatos vėžį (Liet al., 2020), glioblastomą (Dixit ir kt., 2021) ir hepatoceliulinę karcinomą (Chen ir kt., 2018; Hou ir kt., 2019 m.; Zhang ir kt., 2020), taikydami įvairius m6A modifikuotus nuorašus, tokius kaip takumo slopintuvai LHPP ir NKX3-1 (Li ir kt., 2020), IGFBP3 (Dixit ir kt., 2021), OCT4 ( Zhang ir kt., 2020) ir SOCS2 (Chenet al., 2018).

Nors YTHDF2 vaidina skatinantį vaidmenį auglio progresavime, mūsų tyrimas atskleidžia teigiamą YTHDF2 vaidmenį imuniniame atsake į naviko ląsteles, ypač NK ląsteles, kurios yra pagrindinė įgimto imuniteto nuo virusinių infekcijų ir piktybinių transformacijų sudedamoji dalis.

Todėl ateityje YTHDF2 inhibitorių, skirtų vėžio gydymui nukreipti į naviko ląsteles, kūrimas turėtų būti vykdomas atsargiai, nes YTHDF2 slopinimas gali pabloginti NK ląstelių šeimininko priešnavikinį atsaką. Kita vertus, naudojant YTHDF2 priešnavikinį aktyvumą NK ląstelėse arba kitose imuninėse ląstelėse, reikėtų atsižvelgti į galimą jo poveikį, tiesiogiai veikiantį naviko ląsteles. Skirtingas YTHDF2 nukreipimas į naviko ląsteles ir imunines ląsteles turėtų maksimaliai padidinti priešnavikinį aktyvumą.

For more information:1950477648nn@gmail.com