RNA M6 A skaitytuvas YTHDF2 kontroliuoja NK ląstelių priešnavikinį ir antivirusinį imunitetą, 2 dalis

YTHDF2 reikalingas NK ląstelių antivirusinei funkcijai

Norėdami nustatyti, ar Ythdf2 trūkumas turi įtakos NK ląstelių antivirusiniam aktyvumui, į Ythdf2WT peles ir Ythdf2ΔNK peles suleidome 2, 5 × 104 PFU MCMV.

Antivirusinis aktyvumas ir imunitetas yra neatsiejami ir yra glaudžiai susiję. Virusai yra labai maži mikroorganizmai, tačiau sunkiais atvejais gali sukelti daugybę ligų ir net mirtį.

Antivirusinis aktyvumas reiškia organizmo gebėjimą kovoti su virusais. Žmonės, turintys didelį antivirusinį aktyvumą, gali greičiau išvalyti virusus ir efektyviau atsispirti ligos atsiradimui. Imunitetas – tai po adaptacinio laikotarpio organizmo gaminamos gynybinės medžiagos, kurios gali pašalinti iš organizmo kenksmingas medžiagas.

Pakankamai miegas, sveika mityba ir mankšta yra labai svarbūs norint išlaikyti gerą sveikatą. Šie veiksniai gali pagerinti žmogaus imunitetą ir taip sustiprinti organizmo antivirusinį aktyvumą. Ypač šiuo COVID{0}} pandemijos laikotarpiu svarbu išlikti sveikiems.

Be to, imunitetui didelę įtaką turi ir stabili nuotaika. Optimistiškas požiūris gali padėti žmonėms jaustis fiziškai ir protiškai patogiai, taip pagerindamas imunitetą ir antivirusinį aktyvumą. Priešingai – pesimistinės emocijos sumažins organizmo imunitetą ir padarys organizmą labiau pažeidžiamą virusų atakų.

Trumpai tariant, antivirusinis aktyvumas ir imunitetas yra tarpusavyje susiję, todėl reikėtų atkreipti dėmesį į organizmo imuniteto ir antivirusinio aktyvumo gerinimą įvairiais būdais, siekiant užtikrinti fizinę sveikatą ir sveiką gyvenimo būdą. Matyti, kad turime gerinti atmintį, o Cistanche deserticola gali žymiai pagerinti atmintį, nes Cistanche deserticola turi antioksidacinį, priešuždegiminį ir senėjimą stabdantį poveikį, kuris gali padėti sumažinti oksidaciją ir uždegimines reakcijas smegenyse ir taip apsaugoti nervų sistemos sveikata. Be to, Cistanche deserticola taip pat gali skatinti nervų ląstelių augimą ir taisymą, taip pagerindama neuroninių tinklų ryšį ir funkciją. Šis poveikis gali padėti pagerinti atmintį, mokymąsi ir mąstymo greitį, taip pat gali užkirsti kelią pažinimo sutrikimų ir neurodegeneracinių ligų vystymuisi.

Norėdami pagerinti atmintį, spustelėkite žinokite papildus

Rezultatai parodė, kad Ythdf2ΔNK pelės buvo jautresnės MCMV infekcijai, kaip rodo reikšmingas svorio kritimas ir padidėjęs viruso titras kraujyje, blužnyje ir kepenyse, palyginti su Ythdf2WT pelėmis (3 pav., A ir B; ir S2, A ir B pav.). .

Mes taip pat pastebėjome reikšmingą bendro NK-ląstelių procentinio ir absoliutaus skaičiaus sumažėjimą Ythdf2ΔNK pelių blužnyje ir kraujyje, palyginti su Ythdf2WT pelių po infekcijos (3 pav., C ir D; ir Fig. S2, C ir D). Tolesnė analizė parodė, kad Ythdf2ΔNK pelių NK ląstelės turėjo žymiai mažesnę Ki67 ekspresiją nei Ythdf2WT pelės (3 pav., E-G).

Tačiau NK ląstelių gyvybingumas buvo panašus tarp Ythdf2WT pelių ir Ythdf2ΔNK pelių, kaip parodyta aneksino V dažymu (S2 pav. E). Šie duomenys rodo, kad YTHDF2 trūkumas NK ląstelėse sukelia ląstelių proliferacijos defektą, o ne ląstelių išgyvenimą virusinės infekcijos metu.

NKląstelės slopina MCMV infekciją per aktyvuojančius receptoriusLy49H ir Ly49D, o procesui būdingas perforino arba IFN tarpininkaujantis antivirusinis atsakas (Arase ir kt., 2002; Lee ir kt., 2009; Loh ir kt., 2005; Orr ir kt. al., 2010; Sumaria ir kt., 2009). Mes nustatėme, kad Ythdf2ΔNK pelėms buvo žymiai sumažintas Ly49H+ ir Ly49D+ NK ląstelių skaičius blužnyje ir kraujyje, palyginti su Ythdf2WT pelėmis po užsikrėtimo (3 pav., H – J; ir S2 pav., F – K).

Tolesnė analizė parodė, kad nors procentais, tik Ly49D+Ly49H+ ląstelės parodė Ythdf2ΔNK pelių skirtumą, palyginti su Ythdf2WT pelių, absoliutus Ly49D−Ly49H+ NK ląstelių, Ly49D+Ly49H−NK ląstelių ir Ly49D+Ly49H−NK+ ląstelių skaičius ir Ly49H+ ląstelių skaičius. blužnis ir kraujas buvo visi žymiai sumažėjo Ythdf2ΔNK pelėms, palyginti su Ythdf2WTmice po infekcijos (S2 pav., L-W).

Mūsų duomenys rodo, kad YTHDF2 kontroliuojamą MCMV infekciją daugiausia tarpininkauja Ly49D + Ly49H + NK ląstelės. Granzimo B ir IFN gamyba NK ląstelių Ythdf2ΔNK pelėms buvo panaši į Ythdf2WT pelių (S2 pav., X ir Y).

Mes nustatėme, kad Ythdf2ΔNK pelių perforino gamyba žymiai sumažėjo, palyginti su Ythdf2WT pelėmis, tiek blužnyje, tiek kraujyje praėjus 7 dienoms po užsikrėtimo (3 pav., K–M), o tai rodo, kad YTHDF2 daugiausia veikia perforino sukeltą antivirusinį aktyvumą prieš MCMV NK ląstelėse. Šie duomenys rodo, kad YTHDF2 yra labai svarbus NK ląstelių plėtrai ir efektoriaus funkcijai MCMV infekcijos metu.

YTHDF2 kontroliuoja NK ląstelių homeostazę ir galutinį brendimą esant pastoviai būsenai

Aukščiau pateiktos išvados, kad Ythdf2 trūkumas NK ląstelėse padidino naviko metastazes ir pablogino NK ląstelių gebėjimą kontroliuoti MCMV infekciją, paskatino mus ištirti, ar YTHDF2 reikalingas NK ląstelių palaikymui pastovioje būsenoje.

Kaip parodyta 4 pav., NK ląstelių dažnis ir absoliutus skaičius buvo žymiai sumažintas Ythdf2ΔNK pelių periferiniame kraujyje, blužnyje, kepenyse ir plaučiuose, bet ne kaulų čiulpuose (BM), palyginti su Ythdf2WT pelėmis.

Tačiau tarp Ythdf2WT ir Ythdf2ΔNK pelių KM (Fathman ir kt., 2011) reikšmingų pokyčių tarp bendrų limfoidinių pirmtakų, iki NK ląstelių pirmtakų ir rafinuotų NK ląstelių pirmtakų (NKP) nebuvo (S3 pav. A pav.), o tai rodo, kad YTHDF2 negali turėti įtakos ankstyvam NK ląstelių vystymuisi mūsų modelyje. Norėdami ištirti galimus mechanizmus, atsakingus už NK ląstelių sumažėjimą Ythdf2ΔNK pelėse, ištyrėme ląstelių proliferaciją, gyvybingumą ir NK ląstelių gebėjimą prekiauti po Ythdf2 ištrynimo esant pastoviai būsenai.

Dauginančių NK ląstelių procentas buvo panašus tarp Ythdf2WT ir Ythdf2ΔNK pelių, kaip rodo Ki67 dažymas (S3 pav. B). NKcells gyvybingumas taip pat buvo lygiavertis tarp Ythdf2WT ir Ythdf2ΔNK pelių, kaip parodyta aneksino V dažymas (S3 pav. C).

Norint patikrinti, ar YTHDF2 paveikia NK ląstelių patekimą iš BM į periferiją, Ythdf2WT ir Ythdf2ΔNK pelėms buvo sušvirkšta į veną antiCD45 antikūnas, kad būtų pažymėtos imuninės ląstelės, ir po 2 minučių buvo nužudytos, o jų BM ląstelės buvo analizuojamos. Tai leido mums kiekybiškai įvertinti NK ląstelių skaičių sinusoidiniuose ir parenchiminiuose KM regionuose – tai rodiklis, rodantis NK ląstelių judėjimą iš KM į periferinį kraują esant pastoviai būsenai (Leong ir kt., 2015).

Rezultatai parodė reikšmingą CD45+ NK ląstelių dažnio sumažėjimą Ythdf2ΔNK pelėse, palyginti su Ythdf2WT pelėmis sinusoidėse (4 B pav.), o tai rodo, kad Ythdf2 trūkumas sutrikdo NK ląstelių patekimą iš BM į kraujotakos sistemą in vivo .Imuninės ląstelės patiria homeostatinį proliferaciją tam tikrų virusinių infekcijų sukeltos arba chemoterapijos sukeltos limfopenijos metu (Sun ir kt., 2011).

Nors mes nustatėme, kad YTHDF2 yra būtinas NK ląstelių dauginimuisi esant pastoviai būsenai, pastebėjome reikšmingą ląstelių proliferacijos sumažėjimą MCMV infekcijos metu (3 pav., E-G). Todėl mes ištyrėme YTHDF2 vaidmenį reguliuojant NK ląstelių homeostatinę proliferaciją limfopeninėje aplinkoje in vivo . Mes perkėlėme vienodą skaičių blužnies NK ląstelių iš CD45.2 Ythdf2ΔNK pelių arba CD45.1 kongeninių pelių į Rag2−/−Il2rg−/− pelių, kurioms trūksta limfocitų.

Rezultatai parodė, kad didesnė NK ląstelių dalis buvo gauta iš CD45.1WT kontrolinių pelių nei iš CD45.2 Ythdf2ΔNK pelių 3 dieną po ląstelių perkėlimo (S3 pav. D). Tolesnė analizė parodė, kad Ythdf2ΔNK pelių NK ląstelių sumažėjimas buvo dėl sutrikusio ląstelių proliferacijos (S3 pav. E), bet ne ląstelių apoptozės (S3 pav. F), o tai rodo, kad YTHDF2 skatina NK ląstelių homeostatinį proliferaciją in vivo limfopenijos sąlygomis.

Tolesnė pelių NK ląstelių diferenciacija gali būti suskirstyta į nesubrendusias (CD11b-CD27+), tarpines brandžias (CD11b+CD27+) ir galutines brandžias (CD11b+CD27−) stadijas, remiantis CD11b ir CD27 lygiais. Chiossone ir kt., 2009; Geiger ir Sun, 2016).

Mes nustatėme, kad Ythdf2 ekspresija padidėjo bręstant ir kad CD11b-CD27+, CD11b+CD27+ ir CD11b+CD27− atitinkamai rodė žemiausią, vidutinį ir aukščiausią Ythdf2 ekspresijos lygį (S3 pav. G). ), nurodant, kad YTHDF2 gali būti susijęs su NK ląstelių brendimu. Todėl ištyrėme YTHDF2 vaidmenį NK ląstelių brendime, apibrėžtą ląstelių paviršiaus žymenimis CD11b ir CD27.

Mes nustatėme, kad Ythdf2 praradimas NK ląstelėse žymiai sumažino galutinių subrendusių NK ląstelių dažnį ir (arba) padidino nesubrendusių ir tarpinių subrendusių NK ląstelių skaičių blužnyje, kepenyse, plaučiuose ir kraujyje, bet ne KM (4 pav. C ir S3 H pav.), rodantis, kad YTHDF2 teigiamai reguliuoja galinių NK ląstelių brendimą. Remiantis šiais duomenimis, KLRG1, kuris yra atermininis NK ląstelių brendimo žymuo, lygis buvo žymiai mažesnis Ythdf2ΔNK pelių blužnyje, kepenyse ir plaučiuose, bet ne BM, palyginti su Ythdf2WT pelių atitinkamuose organuose arba audinių skyriuose (4 pav. D).

Norėdami nustatyti, ar dėl Ythdf2 trūkumo sumažėjęs subrendusių NK ląstelių skaičius yra būdingas ląstelėms, mes sukūrėme chimeras Rag2−/−Il2rg−/− pelėms, sušvirkštę BM ląsteles iš CD45.1 WT ir CD45.2 Ythdf2ΔNK pelių, sumaišytų santykiu 1:1. santykis.

Kaip rodo srauto citometrija praėjus 8 savaitėms po transplantacijos, mažesnė galutinių subrendusių NK ląstelių dalis buvo gauta iš CD45.2 Ythdf2ΔNK BM ląstelių, nei iš CD45.1 WT kontrolinių ląstelių (4 E pav.), o tai rodo, kad NK ląstelių galinį brendimą kontroliuoja YTHDF2. T-box transkripcijos faktoriai Eomes ir Tbet yra labai svarbūs NKląstelių brendimui (Daussy ir kt., 2014; Gordon ir kt., 2012).

Intraląstelinis dažymas atskleidė reikšmingą Eomes baltymų kiekio sumažėjimą NK ląstelėse iš Ythdf2ΔNK pelių, palyginti su Ythdf2WT pelėmis (S3 pav. I). Be to, mes nustatėme, kad Eomes baltymų ir mRNR lygių sumažinimas konkrečiai įvyko galinėse brandžiose (CD11b + CD27-) NK ląstelėse (S3 pav., J-L).

Tačiau, priešingai nei Eomes, Tbet išraiška buvo lygiavertė NK ląstelėse tarp Ythdf2ΔNK ir Ythdf2WT pelių (S3 pav., I ir K), o tai rodo, kad YTHDF2 galbūt reguliuoja NKcell terminalo brendimą, taikydamas Eomes.

YTHDF2 skatina NK ląstelių efektoriaus funkciją

Mūsų išvada, kad Ythdf2 trūkumas trukdė NK ląstelių homeostazei ir brendimui, paskatino mus nustatyti, ar YTHDF2 taip pat slopino NK ląstelių efektoriaus funkciją. Pagrindinis mechanizmas, reguliuojantis NK ląstelių funkciją, yra santykinis slopinančių ir aktyvinančių receptorių indėlis (Chan ir kt., 2014).

Tada patikrinome molekulių, susijusių su NKląstelių aktyvavimu arba slopinimu, ekspresijos lygius. Mes nustatėme, kad aktyvuojančių receptorių CD226 ir NKG2D, bet ne CD69, ekspresijos lygiai sumažėjo Ythdf2ΔNK pelių blužnies NK ląstelėse, palyginti su Ythdf2WT pelių NK ląstelėse (5 A pav.), o slopinamieji receptoriai NKG2A, TIGIT ir PD{{ 7}} buvo panašūs tarp Ythdf2ΔNK pelių ir Ythdf2WT pelių (5 pav. A ir S3 pav. M).

Be to, Ythdf2ΔNK NK ląstelės gamino žymiai mažiau IFN- nei Ythdf2WT NK ląstelės, kai buvo stimuliuojamos IL-12plius IL-18 arba YAC-1 pelių limfomos ląstelėmis (5, B ir C pav. ).

Tada išbandėme Ythdf2ΔNK NK ląstelių citotoksinį gebėjimą. Mes nustatėme, kad Ythdf2ΔNK NK ląstelės žymiai sumažino citotoksiškumą prieš MHC I klasės pelių limfomos ląstelių linijas RMA-S (5 pav. D), bet parodė panašų citotoksiškumą prieš MHC I klasės pakankamai RMA ląsteles (S3 pav. N), kaip parodyta 51Crassay. . Kartu šie radiniai rodo, kad YTHDF2 yra būtinas NK ląstelių efektoriaus funkcijai.

For more information:1950477648nn@gmail.com