Terapinis Cistanche Deserticola poveikis tuštinimosi senatvinės vidurių užkietėjimo žiurkės modeliui

Kontaktas:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Xia Zhang, Fa-Juan Zheng, Zhen Zhang

Abstraktus

FONAS

Vidurių užkietėjimas yra viena iš lėtinių virškinimo trakto funkcinių ligų. Tai rimtai paveikia gyvenimo kokybę. Cistanche deserticola (C. deserticola) gali gydyti vidurių užkietėjimą, tačiau jo mechanizmas nebuvo išaiškintas. Mes manėme, kad jo mechanizmas pagerino žarnyno judrumą, stimuliuodamas intersticines Cajalcells (ICC). C-kit receptoriaus aktyvavimas ICC paviršiuje yra glaudžiai susijęs su ICC funkcija, o kamieninių ląstelių faktoriaus (SCF)/C-kit signalizacijos keliai vaidina svarbų vaidmenį. Siekiant ištirti mechanizmą, kaip C. deserticola gydo vidurių užkietėjimą, šiuo tyrimu buvo siekiama sukurti žiurkių vidurių užkietėjimo modelį ir ištirti SCF/C-kit signalizacijos kelio vaidmenį gydant.

TIKSLAS

Ištirti SCF/C-kit signalizacijos kelius C. deserticola gydant vidurių užkietėjimą, naudojant vidurių užkietėjimo žiurkės modelį.

METODAI

Keturiasdešimt aštuonios 8-momento Sprague–Dawley žiurkės atsitiktinio svorio metodu buvo suskirstytos į 4 grupes: normalią grupę (n=12), modelių grupę (n=12), C. deserticola grupę. (n=12) ir blokatorių grupę (n=12). Normali grupė gavo įprastą fiziologinį tirpalą; modelių grupė gavo loperamidą per zondą; blokatorių grupė gavo loperamidą ir C. deserticola per zondą, o STI571 buvo švirkščiamas į pilvaplėvės ertmę. Gydymo metu svoris, išmatų granulės ir išmatų kokybė buvo registruojami kas 10 d. 20 dieną po modelio indukcijos kiekvienos grupės gaubtinės žarnos audiniai buvo pašalinti. Patologiniams pokyčiams stebėti buvo naudojamas dažymas hematoksilinu ir eozinu. SCF, C-kit ir Aquaporin genų ekspresijos lygiai buvo nustatyti imunohistochemijos, Western blot ir realaus laiko kiekybinės polimerazės grandininės reakcijos būdu. Storosios žarnos epitelio mitochondrijos ir taurės ląstelės buvo stebimos transmisijos elektronų mikroskopu.

REZULTATAI

Palyginti su įprasta grupe, gydymo eigoje žiurkių svoris modelio ir blokatorių grupėse žymiai sumažėjo, išmatų svoris sumažėjo, o išmatų kokybė buvo sausa (P < {0}}.{{6}="" }5).="" c.="" deserticola="" sumažino="" kūno="" svorio="" ir="" išmatų="" svorio="" sumažėjimą="" ir="" pagerino="" išmatų="" kokybę.="" histopatologinė="" analizė="" parodė,="" kad="" gaubtinės="" žarnos="" gleivinės="" epitelis="" modelių="" grupėje="" buvo="" neišsamus,="" o="" liaukų="" išsidėstymas="" netaisyklingas="" arba="" pažeistas.="" gydymas="" c.="" deserticola="" pagerino="" epitelio="" ląstelių="" vientisumą="" ir="" tęstinumą="" bei="" reguliarų="" liaukų="" išsidėstymą.="" blokuojantys="" agentai="" slopino="" c.="" deserticola="" poveikį="" imunohistochemija="" ir="" realaus="" laiko="" kiekybinė="" polimerazės="" grandininė="" reakcija="" parodė,="" kad="" scf="" ir="" c-kitproteino="" arba="" genų="" ekspresija="" modelio="" grupės="" gaubtinės="" žarnos="" audinyje="" sumažėjo="" (p="">< 0,05),="" gydant="" c.="" deserticola="" padidino="" baltymų="" ar="" genų="" ekspresiją="" (p="">< 0,05).="" western="" blot="" tyrimas="" parodė,="" kad="" akvaporino="" apq3="" ekspresija="" padidėjo,="" o="" cx43="" ekspresija="" sumažėjo="" modelių="" grupėje.="" gydymas="" c.="" deserticolain="" slopino="" apq3="" ekspresiją="" ir="" skatino="" cx43="" ekspresiją.="" transmisijos="" elektronų="" mikroskopija="" parodė,="" kad="" gaubtinės="" žarnos="" epitelio="" mitochondrijos="" modelių="" grupėje="" buvo="" patinusios="" ir="" išsidėsčiusios="" netvarkingai,="" o="" mikrovileliai="" buvo="" reti.="" c.="" deserticola="" grupėje="" būklė="" buvo="" geresnė.="" pelės,="" gydytos="" sti571="" blokatoriumi,="" patvirtino,="" kad="" scf/c-kit="" kelio="" blokavimas="" slopino="" c.="" deserticola="" sukeliamo="" vidurių="" užkietėjimo="">

IŠVADA

C. deserticola pagerino tuštinimąsi žiurkėms, sergančioms vidurių užkietėjimu, o SCF/C-kit signalizacijos kelias, kuris yra pagrindinė ICC funkcijos grandis, vaidino svarbų vaidmenį gydant.

Pagrindiniai žodžiai:Cistanche deserticola; Senatvinis vidurių užkietėjimas; Kamieninių ląstelių faktoriai; C komplektas

šviežia cistanche žaliava

ĮVADAS

Senatvinis vidurių užkietėjimas (SC) yra viena iš įprastų senyvo amžiaus pacientų lėtinių virškinimo trakto funkcinių ligų, sukeliančių ar pasunkinančių galvos smegenų kraujotakos reiškinius ir kitas ligas bei rimtai paveikianti vyresnio amžiaus žmonių gyvenimo kokybę[1,2]. Pagal tradicinę kinų mediciną SCare virškinamojo trakto šilumos, Yin ir Jin trūkumo ir žarnyno pašalinimo [3,4] etiologija ir patogenezė, o Cistanche deserticola (C. deserticola) gali sušildyti inkstus ir atpalaiduoti vidurius. Tyrėjai pranešė, kad žarnyno poveikis SC judrumo gerinimas ir gydymas yra aiškus, tačiau jo mechanizmas nebuvo išaiškintas [5,6]. Intersticinės Cajalcells (ICC) yra ypatingas virškinimo trakto mezenchiminių ląstelių tipas. C-kit receptorių aktyvinimas ICC paviršiuje yra glaudžiai susijęs su ląstelių proliferacija, diferenciacija ir funkcija. ICC dalyvauja daugelio virškinimo trakto motorinių sutrikimų patogenezėje [7, 8]. C rinkinio aktyvinimas priklauso nuo jo ligando kamieninių ląstelių faktoriaus (SCF) prisijungimo [9]. Ištirti C poveikį ir veikimo mechanizmą. deserticola ant SC, šio tyrimo tikslas buvo sukurti SC modelį žiurkėms, indukuotoms byloperidoliu, siekiant ištirti SCF/C-kit signalizacijos kelio vaidmenį gydant C. deserticola sukeliamą vidurių užkietėjimą.

MEDŽIAGOS IR METODAI

Eksperimentinės medžiagos

Eksperimentiniai gyvūnai:Eksperimentiniai gyvūnai buvo 48 8-moenų Sprague Dawley žiurkių patinai, sveriantys 500-550 g; visi įsigyti iš Changsha Tianqin BiotechnologyCo. Ltd. Žiurkės buvo auginamos Chongqing Weisiteng BiomedicalTechnology Co. Ltd. gyvūnų laboratorijoje, joms buvo suteikta įprasta dienos ir nakties šviesa, maistas ir gėrimai. Visos procedūros atitiko Čongčingo tradicinės kinų medicinos ligoninės etikos komiteto parengtas valdymo gaires.

Pirminiai reagentai:Pirminiai reagentai buvo loperamidas (Sigma, Sent Luisas, MO, Jungtinės Valstijos), C. deserticola iš Hubei Jurui Tradicinės kinų medicinos DecoctionCo. Ltd., STI571 iš Chinese Selleck Co. Ltd. ir SCF, C-kit, connexin 43 (Cx43), akvaporino 3 (AQP3) ir aktino antikūnus (Abcam, Cambridge, MA, Jungtinės Valstijos), PrimeScript II 1-osios krypties cDNR Sintezės rinkinys ir Premix Taq™ (Ex Taq™ 2 versija.0) (Takara Co. Ltd., Japonija).

cistanche žolelių ekstrakto papildai

Metodai

SC modelio paruošimas ir grupavimas:Siekiant išvengti klaidinančių veiksnių, tokių kaip kūno svoris, įtakos eksperimento rezultatams, žiurkės buvo atsitiktinai sugrupuotos blokinio atsitiktinio grupavimo metodu. Keturiasdešimt aštuonios žiurkės buvo maitinamos adaptyviai 1 savaitę, o žiurkės buvo sunumeruotos svorio tvarka nuo lengvos iki sunkios. Pagal kūno svorio tvarką žiurkės buvo suskirstytos į 12 zonų (kiekvienoje zonoje žiurkių svoris buvo panašus), kiekvienoje zonoje po 4 žiurkes. 12 zonų buvo suskirstytos į 4 grupes po 12 (normalus, modelis, C. deserticola ir blokatorius). Modelių grupės žiurkėms zondu buvo duodama loperamido (0.0625/100 g, 10 ml/kg). Pirmoji zondų dozė buvo padvigubinta, o vaistas buvo leidžiamas kiekvieną dieną 10:00 kartą per dieną 20 dienų iš eilės. Normalioms grupėms per zondą buvo duodamas toks pat kiekis normalaus fiziologinio tirpalo. Be to, modelio grupė buvo gydoma C. deserticola (0,156 g/100 g, 10 ml/kg) zondu. Blokuotojų grupei buvo duodama C. deserticola (0,156 g/100 g, 10 ml/kg) per zondą ir STI571 (25 mg/ml, 1 ml/kg) intraperitonine injekcija. Eksperimento metu kūno svoris, išmatų svoris ir išmatų būklė buvo registruojami kas 10 d. Nė vienai žiurkei neatsitiktinai mirė. Po dvidešimties dienų žiurkės buvo nužudytos, o gaubtinės žarnos audinys buvo pašalintas ištyrimui ir skysto azoto konservavimui. Likusios dalys buvo fiksuotos ir įdėtos.

Histopatologinė analizė:Per naktį nevalgiusios žiurkės kitą dieną buvo anestezuotos intraperitonine injekcija 7 procentų chloro hidratu (5 ml/kg). Pilvas buvo atidarytas, kad būtų atskirtas gaubtinės žarnos audinys, ir pašalinta 8-10 mm storosios žarnos. Žarnyno turinys buvo pašalintas švelniai kratant iš anksto atšaldytame polibutilenukcinate ir fiksuojamas 24 valandas 4 procentų paraformaldehido fiksavimo tirpale. Buvo atliktas įprastas parafino įterpimas. Audinių pjūviai (5 μm) buvo pašalinti, kad būtų dažyti hematoksilinu ir eozinu, o histopatologinė morfologija buvo stebima mikroskopu.

SCF ir C-kit ekspresijos aptikimas imunohistocheminiu dažymu:Aukščiau histopatologiškai ištirti parafino audiniai buvo supjaustyti, rehidratuoti su perpjautu ksilenu deparafinuotu gradiento etanoliu, antigenas pašalintas šiluma ir 1 valandai uždarytas ožkos serumu kambario temperatūroje. SCF ir C-kit pirminiai antikūnai buvo lašinami, o audiniai buvo laikomi per naktį 4 laipsnių temperatūroje. Nuplovus polibutilenesukcinatu, krienų peroksidazė buvo lašinama antriniam antikūnui pažymėti, 5 min skalaujama polibutileno sukcinatu, lašinama 2,4-diaminosviesto rūgšties chromogeno tirpalu, perdažoma hematoksilinu, atvirkštinio gradiento alkoholio dehidratacija, skaidrinama ksilenu ir dervos sandariklis. Mikroskopiškai branduoliai buvo purpuriškai mėlyni, o teigiamų rezultatų produktai buvo rusvai geltonos arba geltonos dalelės.

C-kit mRNR ekspresijos aptikimas storosios žarnos audinyje, naudojant realaus laiko kiekybinę polimerazės grandininę reakciją (RT-qPCR):Užšaldytas žiurkės storosios žarnos audinys buvo sumaltas homogenizatoriumi ir pridėta 1 ml RNAiso Plus. Bendra storosios žarnos audinio RNR buvo ekstrahuota chloroformo/izopropanolio metodu, o RNR kokybė buvo nustatyta gelio elektroforezės būdu. Nustačius Bio-Rad gelio vaizduoklį, 1 ug RNR buvo atvirkščiai perrašyta į cDNR, naudojant Takara PrimeScript II 1-osios krypties cDNR sintezės rinkinį. Remiantis NCBI duomenų bazės duomenimis Geno ID: 64030, C-kit geno CDS sritis buvo rasta ir sujungta su NCBI Primer-Blast dizainas Pradmenų seka, kurią susintetino Sangon Biotech Co. Ltd, C-kit pradmenų sekos sensorinė grandinė 5'-AGGT GTACCGTTCCTGTCCC-3', antisense grandinė 5'-GGCTGGATTTGCTCTTTGCTGT-3', - aktino sensorinė grandinė 5'-CTTCCTTCCTGGGTATGGAATC-3', antisensinė grandinė 5'-CTGTGTTGGCATAGAGGTCTT-3'. PGR amplifikacija buvo atlikta Bio-RadCFX90 Real-Time PGR prietaisu. PGR tyrimo sąlygos buvo pradinė denatūracija 95 laipsnių kampu 5 min., 30 ciklų 95 laipsnių 30 s, 60 laipsnių 30 s ir 72 laipsnių 1 min., po to galutinis pratęsimas 72 laipsnių kampu 10 min. Santykinei genų ekspresijai analizuoti buvo paimtas 2-ΔΔCt (ΔCt=Ct vertė - -actin Ctvalue).

Cx43 ir AQP3 baltymų ekspresijos lygio aptikimas storosios žarnos audinyje Western blot metodu:Buvo surinkta apie 1 cm šaldyto storosios žarnos audinio ir lizuota RIPA stipriu pirolizės skysčiu (100 μL). Audinys 20 kartų homogenizuotas stiklhomogenizatoriumi ir perkeltas į 1,5 ml centrifugos mėgintuvėlį. Supernatantas buvo ekstrahuotas po centrifugavimo 12000 aps./min 4 laipsnių temperatūroje 5 minutes, o viso baltymo koncentracija supernatante buvo nustatyta BCA metodu. Pašalinome 25 g denatūruoto baltymo, kad atliktume natrio dodecilsulfato-poliakrilamido gelio elektroforezę, o po to gelyje esančius baltymus perkėlėme į polivinilideno fluorido membraną esant pastoviai 200 mA srovei, tada uždarome 5 procentų nugriebto pieno skysčiu 2 valandas kambario temperatūroje. Atitinkami pirminiai antikūnai buvo atskiesti sandarinimo skysčiu, inkubuojami 4 laipsnių temperatūroje per naktį, tada nuplaunami membranos atsparumas ir pridedami antrieji antikūnai. Įpylus ECL skysčio, jie buvo patalpinti po ekspozicijos matuokliu, kad būtų atliktas bandymas, atliekant optinio tankio analizę.

Perdavimo elektronų mikroskopija:Mes paėmėme apie 1 cm proksimalinio storosios žarnos audinio, fiksavome jį 2,5 procento glutaraldehidu 24 valandas, dehidratavome rūšiuotu acetonu, įterpėme į Epon812 ir ultramikrotomu supjaustėme 50 nm itin plonas dalis. Sekcijos buvo nudažytos urano dioksido acetatu ir švino citrato dažymo skysčiu kambario temperatūroje 10 min. Mes stebėjome storosios žarnos gaureles, epitelio ląstelių mitochondrijas ir taurelių ląsteles Philips Tecnai{7}} perdavimo elektroniniu mikroskopu.

Statistinė analizė

Duomenų analizei buvo naudojama SPSS 19.{1}} programinė įranga, o rezultatams braižyti – GraphPad Prism8.4 programinė įranga. Normalumo testui buvo naudojamas Shapiro-Wilk testas. Duomenys su normaliu pasiskirstymu buvo pavaizduoti vidurkiu ± SD. Klaidų elementai buvo naudojami hemoglobino vidurkiui ± SD po gydymo parodyti. Dviejų grupių palyginimui buvo naudojamas studento t testas. Kelių grupių palyginimui buvo naudojama dispersijos analizė. Studento-Newmano-Keulso metodas buvo naudojamas kelių grupių poroms palyginimui, o Dunnett testas buvo naudojamas kiekvienos eksperimentinės ir kontrolinės grupės skirtumams iš eilės išmatuoti. Susiję duomenys buvo matuojami keliais laiko taškais, o pakartotinė matavimo duomenų dispersinė analizė buvo atlikta. atliekami. Jei sferiškumo bandymas parodė P > 0.{{10}}5, buvo naudojama pakartotinė matavimo duomenų dispersinė analizė. Jei P < 0,05,="" buvo="" paimta="" apibendrinto="" įvertinimo="" lygtis.="" duomenys,="" kurie="" neatitiko="" normalaus="" pasiskirstymo,="" buvo="" pavaizduoti="" m="" (p25,="" p75),="" o="" grupių="" palyginimui="" buvo="" naudojamas="" kruskal-wallis="" h="" rangų="" sumos="" testas.="" grupių="" palyginimui="" buvo="" naudojamas="" χ2="" testas,="" kai="" duomenys="" buvo="" netvarkingi,="" o="" pirsono="" χ2="" testas="" buvo="" naudojamas,="" jei="" ląstelių,="" kurių="" teorinis="" dažnis="">< 5,="" dalis="" buvo="">< 20="" procentų.="" jei="" ląstelių,="" kurių="" teorinis="" dažnis="">< 5,="" dalis="" buvo="" didesnė="" arba="" lygi="" 20="" procentų,="" buvo="" naudojamas="" tikslus="" fišerio="" testas.="" p="">< 0,05="" buvo="" naudojamas="" siekiant="" nustatyti,="" kad="" skirtumas="" buvo="" statistiškai="">

1 pav. Storosios žarnos histopatologiniai pokyčiai.

REZULTATAI

Bendros sąlygos

Praėjus vienai dienai po loperamido zondavimo, palyginti su normalia grupe, modelio grupės kūno svoris ir išmatų svoris žymiai sumažėjo (P < {0}},05),="" tačiau="" reikšmingo="" išmatų="" kokybės="" skirtumo="" nebuvo.="" balas="" (p=""> 0,05). C. deserticolinis gydymas modelių grupėje sulėtino kūno svorio ir išmatų svorio mažėjimą (P< 0.05),="" but="" the="" bodyweight="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" reduced.="" after="" 10="" d="" of="" treatment,="" compared="" with="" the="" normal="" group,="" the="" body="" weight="" and="" stool="" volume="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" were="" further="" significantly="" reduced,="" and="" the="" stools="" were="" dry="" and="" almost="" contained="" no="" water="" (p="" <="" 0.05).="" the="" body="" weight="" loss="" of="" rats="" was="" also="" significantly="" reduced="" by="" treatment="" with="" c.="" deserticola="" (p="" <="" 0.05).="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" different="" from="" that="" in="" the="" model="" group="" (p="" >="" 0.05).="" on="" day="" 20="" before="" sampling,="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" normal="" group,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" significantly="" increased="" (p="" <="" 0.05),="" while="" the="" weight="" loss="" caused="" by="" constipation="" was="" inhibited="" by="" c.="" deserticola="" treatment,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" decreased="" (p="" <="">

Storosios žarnos histopatologija

Žiurkių storosios žarnos audinio dažymas hematoksilinu ir eozinu parodytas 1 paveiksle. Normalioje grupėje žarnyno gaureliai buvo nepažeisti, žarnyno gleivinė buvo nepažeista ir ištisinė, ląstelės ir liaukos buvo reguliariai išsidėsčiusios. Gleivinės ir pogleivinės nebuvo infiltruotos uždegiminių ląstelių, o audinių struktūra buvo normali. Pavyzdinėje grupėje žarnyno virusai ir gleivinės buvo iš esmės sunaikintos, vietiniai gaureliai išsiliejo ir laisvai išsidėstė, o dalis liaukų struktūros išnyko. C. deserticola grupėje histopatologinis dažymas buvo mažesnis nei pavyzdinėje grupėje, tačiau kai kuriose taurelės ląstelėse buvo nekrozė. Po intraperitoninės injekcijos blokatorių grupėje, palyginti su C.deserticola grupe, vis dar buvo vietinis žarnyno gaurelių praradimas, buvo lūžių ir žarnyno gleivinės praradimas.

2 pav. Kamieninių ląstelių faktoriaus ir santykinio optinio tankio santykio išraiška storosios žarnos audinyje imunohistocheminiu aptikimu.

Kamieninių ląstelių faktoriaus ir C-kit baltymo ekspresijos nustatymas imunohistocheminiu dažymu

Imunohistocheminis dažymas parodė, kad SCF ir C-kit buvo išreikšti kontrolinės grupės dvitaškyje. Palyginti su kontroline grupe, SCF ir C-kit ekspresija modelio grupėje buvo reikšmingai sumažinta (P < 0.05).="" palyginti="" su="" modelių="" grupe,="" scf="" ir="" c-kit="" ekspresija="" c.="" deserticola="" grupėje="" buvo="" reikšmingai="" padidinta="" (p="">< 0.05).="" scf="" ir="" c-kit="" raiškos="" skirtumų="" tarp="" blokatorių="" ir="" modelių="" grupių="" nebuvo="" (p="">< 0,05,="" 2="" ir="" 3="">

RT-qPCR

RT-qPCR showed that expression of C-kit mRNA in the model group was significantly lower than in the normal group (Figure 4, P < 0.05). Compared with the model group, C-kit in the C. deserticola group was significantly increased (P < 0.05). There was no significant difference in C-kit mRNA level between the model and blocker groups (P >0.05). Šie rezultatai parodė, kad C. deserticola pakoreguota C-kit ekspresija prisidėjo prie vidurių užkietėjimo pagerėjimo, o blokatoriai slopino C. deserticola veiksmingumą. deserticola.

cistanche salsos privalumai

Western blotingas

Western blot tyrimas parodė, kad AQP3 baltymas buvo išreikštas žemu lygiu normalioje kontrolinėje grupėje, o modelių grupėje jis buvo žymiai padidėjęs, palyginti su kontroline grupe (5 pav.) (P < 0.05)="" .="" aqp3="" baltymo="" ekspresija="" sumažėjo="" po="" gydymo="" c.="" deserticola,="" o="" slopinamąjį="" c.deserticola="" poveikį="" aqp3="" ekspresijai="" slopino="" gydymas="" blokatoriais="" (p="">< 0,05).="" cx43="" ekspresija="" buvo="" priešinga="" aqp3="" ekspresijai.="" šie="" rezultatai="" rodo,="" kad="" c.="" deserticola="" farmakologinis="" poveikis="" žiurkėms,="" sergančioms="" sc,="" buvo="" pasiektas="" skatinant="" cx43="" ekspresiją="" ir="" slopinant="" aqp3="" ekspresiją="" (5-7="">

Perdavimo elektronų mikroskopija

Po loperamido indukcijos kai kuriose modelio grupės storosios žarnos gleivinės epitelio ląstelėse pasireiškė mitochondrijų patinimas ir autofagija. Sumažėjo žarnyno mikrograužėlių skaičius ir ilgis, atsirado taurinių ląstelių piknozė (8 pav.). Po gydymo C. deserticola padidėjo žarnyno mikrovilliukų skaičius. Themicrovili buvo tvarkingai išdėstyti, o struktūra buvo baigta. Taurės ląstelės yra trumpesnės, netaisyklingos mitochondrijų morfologijos ir sunki taurelių piknozė.

3 pav. C rinkinio išraiška ir santykinis optinio tankio santykis storosios žarnos audinyje imunohistocheminiu aptikimu.

DISKUSIJA

Vidurių užkietėjimas yra dažnas vyresnio amžiaus žmonėms ir yra vienas iš dažniausių simptomų, turinčių įtakos pagyvenusių žmonių sveikatos būklei ir gyvenimo kokybei[10,11]. Tradicinės kinų medicinos atstovai Bai ir kt.[12] manė, kad pagrindinė SC patogenezė buvo storosios žarnos laidumo funkcijos sutrikimas, senatvinio kūno nepakankamumas, laipsniškas kepenų ir inkstų funkcijų praradimas, qi ir kraujo trūkumas bei kūno skysčių netekimas. , dėl kurių išmatos išsausėjo ir užkietėjo viduriai[13]. SC daro spaudimą pacientams ir jų šeimoms daugeliu aspektų, todėl svarbu ištirti jo patogenezę.

C. deserticola atlieka tonizuojančias inkstų Yang funkcijas, teikia naudą kraujui ir reguliuoja organizmo imunitetą[14]. C. deserticola ir Kinijos žolelių nuoviras, kuriame yra C. deserticola buvo plačiai naudojami vidurių užkietėjimui gydyti, o klinikinis poveikis yra puikus. Du ir kt.[15] žiurkės Yang trūkumo ir vidurių užkietėjimo modelyje nustatė, kad C. deserticola pagerino izoliuotos gaubtinės žarnos susitraukimų amplitudę, sustiprino žarnyno trakto susitraukimą ir sugrąžino virškinimo trakto hormonų lygį į normalų. Be to, C. deserticola maistinės skaidulos, šalutinis C. deserticola perdirbimo produktas, pagerina išmatų gebėjimą sulaikyti vandenį ir turi mažos dozės pranašumą bei gerą poveikį žarnyno maitinimui ir tuštinimosi gerinimui[16]. Mūsų tyrimas parodė, kad gydymas C. deserticola pagerino žiurkių, sergančių vidurių užkietėjimu, išmatų drėgmę ir storosios žarnos histopatologiją.

ICC yra randami visame žarnyno trakte ir atlieka gyvybiškai svarbų vaidmenį reguliuojant žarnyno judesius kaip širdies stimuliatorius ir žarnyno nervų perdavimą[17]. Proto-onkogeną koduojančią receptorių tirozino kinazę, C-kit, ekspresuoja ICC, o SCF yra ligandas. C rinkinys[18]. SCF/C-kit sistema yra labai svarbi kuriant ICC. SCF/C-kit signalizacijos kelias buvo ištirtas gydant žiurkių lėtą vidurių užkietėjimą akupunktūra[19]. Elektroakupunktūra Tianshu taške padidino gaubtinės žarnos ICC skaičių ACK2-gydytose pelėse, padidino SCF ir C-kit baltymų ekspresijos reguliavimą ir pakeitė ICC fenotipą. Receptai, skirti stimuliuoti qi ir blužnį, gali padidinti ICC ekspresiją storosios žarnos audinyje ir sureguliuoti C-kit ir SCF mRNR ekspresiją, taip pagerindami vidurių užkietėjimo simptomus[20]. Mūsų tyrime imunohistochemija parodė, kad C. deserticola žymiai padidino SCF ir C-kit baltymo ekspresiją SC žiurkės modelyje, o RT-qPCR parodė, kad C. deserticola žymiai padidino C-kitmRNR ekspresiją. C-kit blokatorius slopino C. deserticola sukeltą SCF ir C-kit ekspresijos padidėjimą.

Vandens kiekis išmatose ir vandens pernešimas storojoje žarnoje yra glaudžiai susiję su AQP, kurie atlieka svarbų vaidmenį žarnyno vandens metabolizme[21]. Tiriant žiurkes, kurių vidurių užkietėjimas buvo lėtas, tuštinimosi nuoviras žymiai pagerino vidurių užkietėjimo simptomus, nes reguliavo vandens absorbciją žarnyne sumažindamas AQP3 ir AQP4 reguliavimą[22]. Funkcinio vidurių užkietėjimo žiurkių modelyje Oral Xiaofu Tongjie Fluid funkcinio vidurių užkietėjimo gydymo mechanizmas gali būti įgyvendintas reguliuojant vazoaktyvaus žarnyno polipeptido ir AQP3 ekspresiją storojoje žarnoje[23]. Tarpai atlieka esminį vaidmenį tarpininkaujant sinchroniniam lygiųjų raumenų ląstelių susitraukimui. Cx43 yra svarbiausias šio proceso baltymas[24]. Cx43 ekspresijos praradimas iš dalies gali būti atsakingas už lygiųjų raumenų motorinės funkcijos sutrikimą[25]. Žarnyno nervų sistemos tinklo struktūros atstatymas žiurkėms, kurių vidurių užkietėjimas lėtai praeina, gali pagerinti Cx43 ekspresiją ir tt bei vidurių užkietėjimo simptomus[26]. Šie rezultatai rodo, kad padidėjęs AQP3 ekspresija sumažina išmatų vandens kiekį ir sukelia vidurių užkietėjimą, kuris gali būti svarbus vidurių užkietėjimo mechanizmas. Cx43 ekspresija gali būti susijusi su žarnyno lygiųjų raumenų susitraukimu ir sumažinti vidurių užkietėjimo atsiradimą. Mūsų tyrime Western blotting parodė, kad Cx43 ekspresija padidėjo, o AQP3 ekspresija buvo slopinama gydant C.deserticola, dėl ko padidėjo lygiųjų raumenų susitraukimas ir sumažėjo vandens absorbcija, o gydymas blokatoriais panaikino šiuos efektus.

Cistanche tubulosa ekstrakto tabletėspagerinavidurių užkietėjimassukeltasloperaminasir sumažinastorosios žarnos audinių pažeidimas.

Norėdami gauti daugiau informacijos, spustelėkite čia.

IŠVADA

Apibendrinant galima teigti, kad C. deserticola gali slopinti AQP3 ekspresiją ir skatinti Cx43 ekspresiją per SCF/C-kit kelią, taip pagerindama vidurių užkietėjimą, sukeltą loperamino ir sumažindama storosios žarnos audinių pažeidimus senyvoms žiurkėms. Šis tyrimas suteikė gerą teorinį pagrindą C. deserticola klinikiniam naudojimui.