Terapinis feniletanoidinių glikozidų poveikis ciklopfosfamido sukeltai pelių diszoospermijai ir jos mechanizmui

Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com

ZHAO Dong-hail, Zhang Lei?, ZHANG Yan², QI Ling', ZOU Xiang-ming'

Anotacija: Tikslas Ištirti terapinį feniletanoidinių glikozidų poveikį pelių ciklofosfamido (CTX) sukeltai diszoospermijai ir preliminariai išsiaiškinti su procesu susijusius mechanizmus. Metodai Feniletanoidinis glikozidas buvo ekstrahuotas ekstrahuojant etanoliu. Keturiasdešimt BALB/C pelių patinų buvo atsitiktinai suskirstyti į kontrolinę grupę, pavyzdinę grupę, mažos feniletanoidų glikozidų dozės grupę (50 mg · kg-I) ir didelę feniletanoidinių glikozidų dozę (100 mg). ·kilogramas-). Išskyrus kontrolinę grupę, pelių disoospermijos modelis buvo nustatytas į pilvaplėvės ertmę suleidžiant CTX 80 mg·kg-i paros dozę kartą per dieną 5 dienas iš eilės. Po modeliavimo feniletanoidiniai glikozidai buvo švirkščiami į skrandį atitinkamomis dozėmis kiekvienai feniletanoidų glikozidų grupei. Kontrolinės grupės ir pavyzdinės grupės pelėms buvo duotas vienodas normalaus fiziologinio tirpalo tūris, naudojant skrandį. Visi vaistai buvo vartojami vieną kartą per dieną 30 dienų. Sėklidžių audinys buvo gautas praėjus 24 valandoms po paskutinės intragastrinio vartojimo. Testosterono lygis sėklidžių audinio homogenate buvo nustatytas su fermentu susietu imunosorbentu. Buvo lyginamas spermatozoidų skaičius, judrumas ir teratozoospermijos dažnis įvairiose grupėse. Sėklidžių audinio morfologiniai pokyčiai buvo stebimi naudojant HE dažymą. Rezultatai Palyginti su kontroline grupe, modelinėje grupėje sumažėjo spermatozoidų skaičius ir judrumas, padidėjo teratozoospermijos dažnis, sumažėjo testosterono lygis sėklidžių audinio homogenate (P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" sperm="" counts="" and="" the="" motility="" rates="" were="" increased,="" the="" teratozoospermia="" rates="" were="" decreased,="" and="" the="" testosterone="" levels="" in="" the="" testis="" tissue="" homogenate="" were="" increased="" in="" phenylethanoid="" glycosides=""><0.05 or=""><0,01). the="" histological="" results="" showed="" atrophy="" and="" degeneration="" of="" seminiferous="" tubule,="" thicker="" seminiferous="" epithelium,="" and="" azoospermic="" lumina="" in="" the="" model="" group;="" the="" number="" of="" seminiferous="" epithelial="" layers="" was="" increased="" and="" the="" seminiferous="" cells="" orderly="" arranged,="" and="" many="" sperms="" were="" found="" in="" the="" tubules="" in="" phenylethanoid="" glycosides="" groups.="" conclusion="" phenylethanoid="" glycosides="" have="" obviously="" therapeutical="" effects="" on="" ctx-induced="" dyszoospermia="" in="" mice,="" and="" their="" mechanisms="" might="" be="" correlated="" with="" recovering="" the="" testosterone="">

Raktažodžiai: feniletanoidiniai glikozidai; ciklofosfamidas; spermatogeninis pažeidimas; pelės, BALB/C

Cistanche deserticola turi daug efektų, spustelėkite čia, kad sužinotumėte daugiau

Dėl spartėjančio socialinio ritmo, blogų gyvenimo įpročių ir aplinkos užterštumo bei kitų veiksnių nenormali spermos kokybė, tokia kaip oligospermija ir astenospermija, tapo pagrindine vyrų nevaisingumo priežastimi [1]. Šiuo metu vaistų, skirtų oligospermijai ir astenospermijai gydyti, yra mažiau, o gydomasis poveikis nėra akivaizdus. Tradicinės kinų medicinos receptai arba veikliosios medžiagos turi gerą poveikį vyrų reprodukcinei funkcijai [2-6]. Tačiau dėl didelės receptinių vaistų įvairovės nėra aiškus ryšys tarp farmakologinio poveikio ir veiksmingų vaisto sudedamųjų dalių, o tai riboja spermatogeninių vaistų propagavimą ir taikymą. Tradicinės kinų medicinos veiksmingų ingredientų tyrimai ir plėtra bei jo gydomojo poveikio reprodukcinės sistemos pažeidimams tyrimas turi gerą taikymo vertę. Thefeniletanoidiniai glikozidaiCistanche cistanche yra viena iš svarbiausių Cistanche veikliųjų medžiagų. Paprastai tai yra natūralūs glikozidai, turintys esterinių ir oksoglikozidinių jungčių, kurių branduolys yra gliukozė. Jų gausu dviskilčiuose augaluose 7]. Tyrimai [8] parodė, kad Cistanche fenetanolio glikozidai gali apsaugoti žiurkės spermą nuo oksidacinės pažaidos in vitro, tačiau pranešimų apie jo spermatogenezę nėra. Šis eksperimentas tiria gydomąjį Cistanche poveikįfeniletanoidiniai glikozidaiapie pelių, kurių spermatogenezę sukelia ciklofosfamidas, spermatogenezę ir suteikia eksperimentinį bei teorinį pagrindą Cistanche fenetilo alkoholio glikozidų taikymui gydant spermatogenezės sutrikimus.

1 Medžiaga ir metodai

1.1 Eksperimentiniai gyvūnai, pagrindiniai reagentai ir instrumentai

40 SPF suaugusių BALB/C pelių, 6-8 sav., svoris 20-22 g, pirktos iš Jilin universiteto Pagrindinės medicinos mokyklos gyvūnų eksperimentinio centro, gyvūno sertifikato numeris: SCXK (Kirgizija) {{3} }. Pelės buvo auginamos adaptyviai 5 dienas prieš eksperimentą. Maitinimo sąlygos: 22 laipsniai -25 laipsniai, cirkadinis ritmas (12 val./12 val.), nemokamas geriamasis vanduo ir maistas. Cistanche yra Xinjiang Dakang Trading Company produktas, ciklofosfamidas injekcijoms buvo nupirktas iš Jiangsu Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd. (partijos numeris 11061921), sėklidžių audinio homogenato testosterono fermento imuninio tyrimo rinkinys buvo nupirktas iš Tianjin Jiuding, Ltd Medical Bioengineering. (partijos numeris 20120812), visi kiti reagentai yra vietinės gamybos analitinės kokybės. PLUS384 mikroplokštelių skaitytuvas (MDC, JAV), TE2000U apverstas mikroskopas (Nikon, Japonija), J-26XP centrifuga (Nanodrop, JAV).

1.2 Cistanche paruošimasfeniletanoidiniai glikozidai

10 gCistanche tubulosamilteliai buvo virinami su grįžtamu šaldytuvu su 70 procentų etanolio du kartus, kiekvieną kartą po 2 valandas, kad gautųfeniletanoido glikozidassusikoncentruoti. Koncentruotam tirpalui buvo atlikta D101 makroporingos dervos kolonėlės chromatografija ir eliuuojamas 70 procentų etanoliu, kad gautųCistanche feniletanoido glikozidasalkoholio. UV spektrofotometras identifikavo ekstraktą esant 333 nm bangos ilgiui.

1.3. Gyvūnų modelio paruošimas ir vartojimo būdai

40 BALB/C pelių patinų buvo adaptyviai šeriami 5 dienas, o pelės atsitiktinai suskirstytos į 4 grupes (po 10 pelių kiekvienoje grupėje): kontrolinė grupė, modelio grupė, Cistanche cistanche mažos feniletanoidų glikozidų dozės ir didelės Cistanche fenetilo alkoholio dozės. glikozidų grupė. Išskyrus kontrolinę grupę, kitoms trims pelių grupėms 5 dienas iš eilės kiekvienai pelei buvo švirkščiama į pilvaplėvės ertmę 80 mg·kg -1 ciklofosfamido, kad būtų parengti spermatogenezės sutrikimo gyvūnų modeliai. Parengus modelį, pelės mažos ir didelės dozės grupėseCistanche feniletanoidasbuvo duota atitinkamai 50 ir 100 mg·kg-'·d-'. , 1 kartą per dieną 30 dienų iš eilės. Visos pelės buvo nužudytos praėjus 24 valandoms po paskutinės dozės ir buvo atlikti dvišaliai tyrimai. Dešinė sėklidė buvo fiksuota formaldehidu. Sėklidė ir prielipis paimti iš kairės pusės. Sėklidė buvo homogenizuota ir centrifuguojama 3, 000 min. greičiu 10 min. Supernatantas buvo paimtas ir laikomas šaldytuve 20 laipsnių temperatūroje bandymui. Kairysis prielipas buvo tiriamas dėl spermos tankio, spermatozoidų judrumo ir deformacijos greičio.

1.4 Spermos tankio, spermatozoidų judrumo ir deformacijos greičio nustatymas

Mėgintuvėlį, kuriame yra 10 ml spermos maistinių medžiagų tirpalo, įdėkite į pastovios temperatūros vandens vonią, kad pašildytų iki 37 laipsnių, pašalinkite jungiamąjį audinį ir riebalus iš vienos epididimio pusės, perpjaukite audinį ir įdėkite į mėgintuvėlį 37 laipsnių temperatūroje. 10 min. Kai sperma visiškai atsilaisvina, užlašinkite 1 lašą ant kraujo ląstelių skaičiavimo plokštelės ir apskaičiuokite spermatozoidų tankį pagal ląstelių skaičiavimo metodą. Rezultatas išreiškiamas spermatozoidų skaičiumi mililitre; be to, iš mėgintuvėlio paimkite 5 μL spermos suspensijos ir tolygiai sumaišykite su tokiu pat kiekiu Eozin-Y, pastatykite 10 minučių kambario temperatūroje, uždėkite dangtelį ir stebėkite šviesos mikroskopu. Negyvi spermatozoidai nusidažo rausvai, o gyvi spermatozoidai nedažyti, tačiau citoplazma yra skaidri. Suskaičiuokite 200 spermatozoidų kiekviename mėginyje, apskaičiuokite spermatozoidų gyvybingumą ir rezultatas išreiškiamas procentais, spermatozoidų gyvybingumas=gyvų spermatozoidų skaičius / bendras spermatozoidų skaičius × 100 procentų . Dar 5 μL spermos suspensijos buvo fiksuota metanolyje 5 minutes, džiovinama ir 1 valandą dažoma 2 procentų eozino vandeniniu tirpalu, nuplaunama ir išdžiovinta. Mažos galios mikroskopu ieškokite dalių, kuriose spermatozoidai mažiau persidengia, ir naudokite didelės galios mikroskopą, kad iš eilės patikrintumėte spermatozoidų morfologiją. Kiekviena pelė patikrino 1000 pilnų spermatozoidų. Spermatozoidų galvutės buvo atkabintos, deformacijomis vertinamos banano formos, amorfinės, riebios galvos, dvigalvės ir kt. Apskaičiuotas spermatozoidų deformacijos greitis, o rezultatai išreikšti procentais. Spermos deformacijos rodiklis=deformuotų spermatozoidų skaičius/bendras spermatozoidų skaičius × 100 proc.

1.5 Reprodukcinių hormonų nustatymas

Sėklidė buvo nulupama ir dedama į buteliuko lėkštelę, o iš anksto atšaldyta homogenizavimo terpė (0.01 mol·L-sacharozė, 0,01 mol·L{{ 6}}Tris-HCl, 0,1 mmol· L-1EDTA-Naz tirpalai, pH 7,4), supjaustykite sėklidžių audinį oftalmologinėmis žirklėmis, supilkite į stiklinį homogenizacijos mėgintuvėlį ir homogenizuokite, centrifuguokite 4 000 ×g 10 minučių žemoje temperatūroje, paimkite supernatantą ir naudokite su fermentu susietą imunosorbentą. Testosterono lygis sėklidžių audinio homogenate buvo nustatytas pagal dėžutę ir kiekvienam mėginiui buvo ištirti 3 lygiagrečiai mėginiai. Eksperimentiniai žingsniai ir metodai buvo atlikti pagal rinkinio instrukcijas.

1.6 Morfologinis sėklidžių audinio stebėjimas

Paimkite pelės sėklidžių parafino pjūvius, HE dėmes ir šviesos mikroskopu stebėkite spermatogonijų ir spermatogeninių ląstelių pasiskirstymą sėklidžių audinyje.

1.7 Statistinė analizė

Statistinė analizė atlikta naudojant SPSS 17.{1}} statistinę programinę įrangą. Kiekvienos grupės pelių spermos tankis, spermatozoidų judrumo greitis, spermatozoidų deformacijos greitis ir sėklidžių testosterono lygis buvo išreikšti z±s, o grupių palyginimas atliktas vienpuse dispersijos analize.

2. rezultatai

2.1 Kiekvienos pelių grupės spermatozoidų tankis, gyvybingumas ir spermatozoidų deformacijos greitis

Palyginti su kontroline grupe, modelio grupės spermatozoidų tankis ir judrumas sumažėjo (P<0.01), and="" the="" sperm="" deformity="" rate="" increased=""><0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" sperm="" density="" and="" sperm="" motility="" rate="" of="" mice="" in="" each="" dose="" group="" of="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" increased=""><0.05 or=""><0.01), and="" the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><0.05 and=""><0.01). compared="" with="" the="" low-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group,="" the="" high-dose="">Cistanche fenetilo alkoholio glikozidasgrupė padidino spermatozoidų tankį ir judrumą (P<0.05), and="" the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><>

2.2 Testosterono kiekis kiekvienos grupės pelių sėklidžių audiniuose

Testosterono lygis kontrolinės ir pavyzdinės grupės sėklidžių audinių homogenatuose buvo atitinkamai (10,26±0,57) ir (5,33±0,84) nmol·L-'. Pavyzdinės grupės testosterono lygis buvo žymiai mažesnis nei kontrolinės grupės (P<0.01). the="" testosterone="" levels="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" of="" the="" low-dose="">Cistanche feniletanoido glikozidasgrupėje buvo (7,55±1,21) ir (10,35±0,94) nmol·L-1. Mažos ir didelės dozės Cistanche testosterono lygisfeniletanoido glikozidasgrupės buvo žymiai didesnės nei pavyzdinės grupės (P<0.05 or=""><0.01). the="" level="" of="" testosterone="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" of="" the="" high-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" low-dose="" group=""><>

2.3 Pelės sėklidžių morfologija kiekvienoje grupėje

Stebima šviesos mikroskopu; normalios grupės sėklidėse spermatogeniniai kanalėliai išsidėstę tankiai, lytinių ląstelių lygis ir skaičius daug, sėklinis epitelis išsidėstęs tvarkingai, o sėkliniai kanalėliai – visi iš spermatozoidų. Modelių grupėje pelių sėklidėse esantys sėkliniai kanalėliai buvo atrofuoti ir išsigimę, sėklinis epitelis gerokai suplonėjęs, sumažėjęs epitelio sluoksnių skaičius, netvarkingas išsidėstymas, sumažėjęs spermatozoidų skaičius ertmėje. Palyginti su modelių grupe, sėklinių kanalėlių ir sėklinio epitelio sluoksnių skaičius mažose dozėseCistanche feniletanoido glikozidasgrupė padidėjo, epitelio išsidėstymas buvo taisyklingesnis, o sėklinių kanalėlių pažeidimas žymiai pagerėjo; didelės dozėsCistanche feniletanoido glikozidasgrupėje reikšmingiau pagerėjo sėklinių kanalėlių struktūra, Sėklinio epitelio skaičius ir skaičius žymiai padidėjo, jie tvarkingai išsidėstę, sėkliniuose kanalėliuose yra subrendusių spermatozoidų, struktūra iš esmės normalizavosi. Žr. 1 paveikslą (6 įdėklas).