Tongluo Digui nuoviras gydo diabetu sergančių žiurkių inkstų pažeidimus, skatindamas podocitų autofagiją

Kontaktas:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

HAN Jiarui, ZHANG Yage, SHI Xiujie, PENG Zining, XING Yufeng, PANG Xinxin

Abstraktus

TIKSLAS:

Ištirti Tongluo Digui nuoviro poveikį inkstų pažeidimui ir streptozotocino sukeltai podocitų autofagijai diabetu sergančioms žiurkėms.

METODAI:

Sprague-Dawley žiurkių patinai buvo atsitiktinai suskirstyti į šešias grupes: normalią, modelio, Tongluo Digui nuoviro (didelė, vidutinė ir maža dozė) ir valsartano. Streptozotocinas buvo švirkščiamas į pilvaplėvės ertmę, kad būtų atkartotas diabeto gyvūnų modelis. Po 8 savaičių buvo įvertinta proteinurija, siekiant nustatyti diabetinės nefropatijos modelį. Gydymas buvo skiriamas kasdien intragastriniu būdu. Praėjus 16 savaičių po zondavimo, mes nustatėme 24 valandų šlapimo baltymų koncentraciją, gliukozės kiekį kraujyje, kreatinino koncentraciją serume ir karbamido azoto koncentraciją. Tada žiurkės buvo paaukotos, o inkstai buvo surinkti ir nudažyti periodine Schiff rūgštimi, kad būtų galima įvertinti patologinius glomerulų pokyčius, įskaitant glomerulų podocitus, naudojant perdavimo elektronų mikroskopiją. Western blot analizė buvo naudojama nefrino, podocino, p62, beklino -1, LC3Ⅱ/Ⅰ ir p-mTOR/mTOR baltymo ekspresijai inkstų audiniuose nustatyti.

REZULTATAI:

Palyginti su modelio grupe, Tongluo Digui nuoviras buvo susijęs su 24 valandų šlapimo baltymų koncentracijos, gliukozės kiekio kraujyje, hemoglobino A1c, kreatinino, karbamido azoto koncentracijos serume, bendro baltymo serume ir albumino sumažėjimu. Kartu sumažėjo mezangialinis mezenterinis išsiplėtimas ir pėdos procesų susiliejimas, nebuvo reikšmingai sustorėjusi glomerulų bazinė membrana, padidėjo podocitų ir autofagosomų skaičius podocituose. Be to, nefrino, podocino, LC3Ⅱ ir beklino -1 baltymų ekspresija inkstų audinyje buvo reguliuojama, o p62 baltymo ekspresija buvo sumažinta ir mTOR fosforilinimas buvo slopinamas.

IŠVADA:

Tongluo Digui nuoviras gali slopinti diabetinės nefropatijos progresavimą, slopindamas mTOR fosforilinimą, taip padidindamas autofagiją, kad apsaugotų podocitus ir sumažintų proteinuriją.

Raktiniai žodžiai:Diabetinės nefropatijos; autofagija; podocitas; Tongluo Digui nuoviras

cistanche stiebo privalumaidėlinkstų funkcija

ĮVADAS

Diabetinė nefropatija (DN) yra viena iš sunkių mikrovaskulinių diabeto komplikacijų, nes 30 procentų -40 procentų diabetu sergančių pacientų kenčia nuo inkstų ligos. Didėjant sergamumui diabetu, DN tapo pagrindine galutinės stadijos inkstų ligos priežastimi visame pasaulyje.1 Tai yra didelė ekonominė našta tiek šeimoms, tiek visuomenei.

Podocitų pažeidimas yra svarbi DN progresavimo priežastis. Kaip galutinai diferencijuota ląstelė, autofagija atlieka svarbų vaidmenį palaikant fiziologinę podocitų funkciją.2,3 Esant normaliai fiziologinei būklei, podocituose yra didelis autofagijos laipsnis, kuris pašalina pažeistus baltymus ir organelius.4 Tačiau sergant cukriniu diabetu. Podocitų autofagija yra slopinama, o tai rodo, kad podocitų autofagija vaidina svarbų vaidmenį DN patogenezėje.5 DN tradicinėje kinų medicinoje priklauso „Xiao Ke“, „Guan Ge“ ir „edemos“ kategorijoms. Tradicinės kinų medicinos teorija teigia, kad kraujo sąstingis irYin trūkumasyra svarbiausios DN priežastys.6 Todėl DN gydymas turėtų skatinti kraujotaką ir maitinti yin, tam buvo sukurtas Tongluo Digui nuoviras. Anksčiau mes nustatėme, kad Tongluo Digui nuoviras turėjo teigiamą gydymo poveikį DN. Šiame tyrime siekėme panaudoti streptozotocino (STZ) sukeltą 1 tipo DN žiurkės modelį, kad įvertintume Tongluo Digui nuoviro poveikį inkstų pažeidimui, autofagijai ir mTOR signalizacijos keliui. Taip pat ištyrėme pagrindinį Tongluo Digui nuoviro molekulinį mechanizmą, lėtinant DN progresavimą, ir pateikėme klinikinės DN prevencijos ir gydymo įrodymų.

MEDŽIAGOS IR METODAI

Gyvūnai

Specifinių patogenų neturinčios (SPF) Sprague-Dawley žiurkės [n=60, patinai, (150 ± 10) g; kvalifikacijos pažymėjimo numeris: SCXK (Yu) 2017-0001] buvo įsigyti iš Henano eksperimentinio gyvūnų centro (Džengdžou, Kinija). Standartinis šviesos ciklas (14 val. šviesa, 10 val. naktis), patalpų temperatūra (23 ± 2) laipsniai, drėgmė (40 proc. -50 proc.), laikymas (trys gyvūnai narve) ir šėrimas (sterilizuotas pašaras ir buvo naudojamas geriamasis vanduo). Eksperimentas buvo baigtas Henano tradicinės kinų medicinos ligoninės (Džengdžou, Kinija) Ląstelių vaizdo gavimo centro laboratorijoje. Visi eksperimentai buvo atlikti pagal Nacionalinių sveikatos institutų paskelbtą laboratorinių gyvūnų priežiūros ir naudojimo vadovą.

Narkotikai

Valsartano (Val) kapsulės buvo įsigytos iš Novartis Pharma Schweiz AG (X2307 CN-b, Pekinas, Kinija). Tongluo Digui nuovirą sudaro Shuichi (Hirudo) 12 g, Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) 30 g, Dihuang (Radix Rehmanniae) 20 g, Huangqi (Radix Astragali Perparata) 20 g, Danggui (Radix Zeomaz) S Alismatis) 10 g, Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei) 15 g, Gancio (Radix Glycyrrhizae) 6 g. Kiniškos žolės buvo pirktos iš Henano tradicinės kinų medicinos ligoninės (Džengdžou, Kinija).

Eksperimentinis dizainas

Žiurkės buvo atsitiktinai suskirstytos į šešias grupes, kurių kiekvieną sudaro 10 žiurkių: kontrolinė grupė (Ctrl), DN modelio grupė (STZ), DN modelis su Val gydymo grupe (Val), DN modelis su Tongluo Digui nuoviru didelės dozės gydymo grupė (HTL). , DN modelis su Tongluo Digui nuoviru vidutinių dozių gydymo grupe (MTL) ir DN modelis su Tongluo Digui nuoviru mažos dozės gydymo grupe (LTL). Šešios žiurkių grupės buvo nužudytos praėjus 16 savaičių po zondavimo ir inkstų surinkimo.

Val (10 mg · kg–1 · d–1 ) ir Tongluo Digui nuoviras trimis skirtingomis dozėmis buvo duodama zondu kartą per dieną 16 savaičių. Vartojamos dozės buvo pagrįstos vaistų dozių tarp gyvūnų ir žmonių perskaičiavimo lygtimi. Žiurkių dozė (mg/kg)=dozė suaugusiam žmogui (mg/kg) × konversijos koeficientas (6,25). Didelės, vidutinės ir mažos dozės Tongluo Digui nuoviro grupėms buvo duota atitinkamai 5,4, 2,7 ir 1,35 g·kg – 1·d–1. Žiurkės buvo sveriamos kas savaitę. 24-h šlapimas buvo surinktas naudojant metabolinius narvus 0, 12 ir 24 savaičių pabaigoje. Pasibaigus gydymui (24 savaitę), žiurkės buvo anestezuotos chloro hidrato injekcija po oda, o inkstų ir kraujo audinių mėginiai buvo paimti ir laikomi -80 laipsnių temperatūroje. Žiurkės turėjo laisvą prieigą prie įprastos laboratorinių gyvūnų dietos ir švaraus vandens (išskyrus aprašytus toliau).

cistanche augalas

DN modelio sukūrimas

STZ (Sigma, Sent Luisas, MO, JAV) buvo naudojamas diabetui sukelti, kaip aprašyta anksčiau.7 Visos 6 0 žiurkės turėjo ribotą prieigą prie vandens 12 valandų prieš eksperimentą. Iš jų 50 žiurkių buvo suleista viena intraperitoninė STZ 60 mg/kg injekcija, ištirpinta citratiniame buferyje (0,1 mol/L, pH 4,5). Diabetas buvo patvirtintas išmatavus gliukozės koncentraciją kraujyje praėjus 72 valandoms po STZ injekcijos. Gyvūnai, kurių gliukozės koncentracija tris dienas iš eilės buvo didesnė arba lygi 16,7 mmol/l, buvo laikomi diabetu. Po 8 savaičių žiurkės buvo laikomos atskiruose metaboliniuose narvuose, o šlapimas buvo renkamas 24 valandas, kad būtų galima išmatuoti šlapimo mikroalbuminą (JAE). DN modelis buvo patvirtintas gavus JAE Didesnį arba lygų 30 mg/24 val.

Biocheminiai rodikliai

Gyvūnų inkstų funkcijai įvertinti buvo naudojami serumo ir šlapimo tyrimai. Žiurkės šlapimas buvo įvertintas naudojant metabolinį narvą. Žiurkių kraujo mėginiai buvo paimti naudojant uodegos pjovimo metodą.8 Serumo ir šlapimo mėginiai buvo užšaldyti –80 laipsnių temperatūroje iki naudojimo. Kreatinino, kraujo karbamido azoto, albumino ir šlapimo baltymų koncentracijos buvo išmatuotos radioimuniniu tyrimu. Hemoglobino A1c (HbA1c), C-peptido ir insulino lygiai buvo matuojami naudojant HbA1c ELISA rinkinį (Crystal Chem INC, Elk Grove Village, IL, JAV), C-peptido Elisa rinkinį (Kainu Bio Ltd., Pekinas, Kinija) ir insuliną. Elisa rinkinys (Merck Millipore Co., Ltd., Bed ford, MA, JAV) pagal gamintojo instrukcijas. Šlapimo rūgštis, bendras serumo baltymas (TP), albuminas (ALB), alanino aminotransferazė (ALT) ir aspartataminotransferazė (AST) žiurkėms buvo nustatyti automatiniu biocheminiu analizatoriumi.

Histopatologinis tyrimas

Formalinu fiksuotas inkstų audinys buvo įterptas į parafiną, supjaustytas 3-4 μm storio dalimis ir nudažytas periodine Šifo rūgštimi (PAS). Morfologiniai inkstų audinio pokyčiai, įskaitant mezangialinių ląstelių proliferaciją, ląstelių infiltraciją ir mezangialinės matricos pokyčius, buvo ištirti kiekvienoje nudažytoje pjūvyje šviesos mikroskopu (NIKON D3100) (× 400).

Perdavimo elektronų mikroskopas

TEM buvo naudojamas stebėti podocitų ir mezangialinių ląstelių morfologiją inkstų audinyje. Švieži inkstų audiniai buvo suskirstyti į blokus (< 1="" mm3="" ),="" were="" quickly="" fixed="" in="" 2%="" phosphate-buffered="" glutaraldehyde="" for="" at="" least="" 2="" h,="" washed="" three="" times="" with="" pbs,="" fixed="" in="" 1%="" osmium="" tetroxide="" for="" 2="" h,="" and="" then="" embedded="" in="" acetone="" wrap="" after="" dehydration.="" specimens="" were="" sliced="" in="" 50-60="" nm="" ultrathin="" sections,="" double-stained="" with="" 3%="" uranyl="" acetate="" and="" lead="" citrate,="" and="" then="" examined="" under="" a="" tem="" (jeol-jem-1400="" plus,="" japan="" electron="" optics="" laboratory,="">

Western blot analizė

Visas baltymas buvo išgautas iš inkstų audinio baltymų lizės buferiu (Solarbio Biotech, Pekinas, Kinija). Baltymų koncentracija supernatante buvo tiriama naudojant BCA tyrimo rinkinį (Solarbio Biotech, Pekinas, Kinija, PC0020). Mėginiai, kuriuose yra 40 ug baltymų, buvo atskirti 12 procentų SDS-poliakrilamido gelio elektroforeze (SDS PAGE) (Applygen, Pekinas, Kinija, B1004), o po to perkelti į nitroceliuliozės filtro membraną (Solar bio Biotech, Pekinas, Kinija). Užblokavus 5 procentų nugriebtu pienu kambario temperatūroje 2 val., -aktinas (Proteintech, gaminio numeris: 60008-1-lg), LC3II/I (Ab cam, prekės numeris: ab48394), P62 (Proteintech, prekės numeris: 18420-1-AP), beclin-1 (baltymų technologija, prekės numeris: 11306-1-AP), p-mTOR (CST, prekės numeris: #5536), mTOR (CST, prekės numeris: # 2983), nefrinas (Abcam, prekės numeris: ab58968) ir podocinas (kiekvienas baltymas, prekės numeris: 20384 -1-AP) ir inkubuojami 4 laipsnių temperatūroje per naktį. Po to šis mišinys penkis kartus buvo plaunamas TBS ir 0,05 procento Tween-20 (Solar bio Biotech, Pekinas, Kinija) (TBS-T) 5 minutes, prieš įdedant antrinį antikūną (1∶2000), prieš inkubuojant kambaryje. 1 val. temperatūroje, penkis kartus plaunant TBST 5 minutes, skleidžiant spalvą su sustiprinta chemiliuminescencija (ECL, Millipore, Billerica, MA, JAV) ir ekspozicija naudojant ImageJ programinę įrangą juostelių pilkos spalvos analizei.

Statistinė analizė

Duomenys buvo analizuojami naudojant SPSS programinę įrangą (IBM SPSS Statistics for Windows, versija 23.0. 2014, Armonk, NY, USA). Skirtumai tarp grupių buvo tikrinami naudojant vienpusę dispersijos analizę, po kurios buvo atliktas Tukey testas. Duomenys buvo išreikšti kaip vidurkis ± standartinis nuokrypis. P < 0,05="" buvo="" laikomas="">

liuteolinas

REZULTATAI

Apsauginis Tongluo Digui nuoviro poveikis DN žiurkės inkstams

Biocheminiai rodikliai, tokie kaip gliukozės kiekis kraujyje, glikuotas hemoglobinas, kreatinino kiekis serume, karbamido azoto koncentracija kraujyje ir {{0}}valanda šlapimo baltymų koncentracija, buvo išmatuoti praėjus 16 savaičių po zondavimo. (1 lentelė). Rezultatai parodė, kad lyginant su normalia grupe, modelio grupėje gliukozės kiekis kraujyje, glikuotas hemoglobinas, kreatinino koncentracija serume, karbamido azoto koncentracija kraujyje, 24-valanda šlapimo baltymų koncentracija, TP ir ALB buvo žymiai didesni (P < {{="" 7}}.{12}}1),="" tai="" rodo,="" kad="" modelio="" grupės="" inkstų="" funkcija="" sutrikusi.="" val="" grupėje="" sumažėjo="" ir="" kreatinino="" koncentracija="" serume,="" ir="" 24="" valandų="" šlapimo="" baltymų="" koncentracija="" (p="">< 0,05).="" be="" to,="" didelės="" dozės="" tongluo="" digui="" nuoviro="" grupėje="" buvo="" pastebėtas="" reikšmingas="" gliukozės,="" hba1c,="" kreatinino="" ir="" karbamido="" azoto="" koncentracijos="" serume="" sumažėjimas,="" taip="" pat="" šlapimo="" išsiskyrimas="" per="" 24="" valandas="" (p="">< 0,01).="" šis="" poveikis="" priklausė="" nuo="" dozės.="" kiekvienoje="" žiurkių="" grupėje="" reikšmingų="" šlapimo="" rūgšties,="" insulino,="" alt="" ir="" ast="" koncentracijos="" skirtumų="" nebuvo.="" apibendrinant,="" mūsų="" išvados="" parodė,="" kad="" tongluo="" digui="" nuoviras="" sumažino="" inkstų="" pažeidimą="" ir="" pagerino="" inkstų="" funkciją="" dn="" žiurkėms="" priklausomai="" nuo="">

DN žiurkės inkstų patologijos pokyčiai buvo įvertinti PAS dažymu po gydymo Tongluo Digui nuoviru (1 pav.). Palyginti su normalia grupe, modelių grupėje buvo pastebėtas reikšmingas glomerulų mezangialinių ląstelių ir mezanginės stromos padidėjimas, taip pat mezangialinės srities išsiplėtimas. Glomerulų mezangialinis plotas padidėjo kiekviename iš trijų Tongluo Digui nuoviro dozių ir Val grupėje. Be to, šios keturios gydymo grupės sumažino mezangialinės matricos plotį, palyginti su modelio grupe, o glomerulų mezangialinė sritis didelės dozės Tongluo Digui nuoviro grupėje buvo mažesnė nei Val grupėje. Šie radiniai parodė, kad Tongluo Digui nuoviras sulėtino DN glomerulų pažeidimų progresavimą.

Tongluo Digui nuoviro poveikis glomerulų podocitų pažeidimui DN žiurkėms

Western blot analizė buvo naudojama podocitų žymenų baltymų nefrino ir podocino ekspresijai nustatyti (2 pav.). Palyginti su normalia grupe, abiejų baltymų ekspresija modelio grupėje buvo reikšmingai sumažėjusi (P < 0.01),="" o="" tai="" rodo="" podocitų="" pažeidimą.="" be="" to,="" nefrino="" ir="" podocino="" ekspresija="" buvo="" padidinta="" tongluo="" digui="" nuovirų="" grupėse,="" palyginti="" su="" modelio="" grupe="" (p="">< 0,="">

Tongluo Digui nuoviro poveikis glomerulų podocitų autofagijai DN žiurkėse

Glomerulų podocitų autofagosomų pokyčiai buvo pastebėti naudojant TEM (3 pav.). Rezultatai parodė autofagosomas normalios grupės glomerulų podocituose. Modelių grupėje podocitų autofagosomų nebuvo, o podocitų pėdos procesai taip pat išnyko. Trijose Tongluo Digui nuoviro dozių grupėse ir valsartano grupėje stebėjome glomerulų podocitų autofagosomas, o tai rodo, kad Tongluo Digui nuoviras sustiprino podocitų autofagiją DN žiurkėse. Western blot buvo naudojamas su autofagija susijusių baltymų P62, beklino -1 ir LC3Ⅱ ekspresijai nustatyti (4 pav.). Palyginti su normalia grupe, beclin-1 ir LC3Ⅱ ekspresija modelių grupėje buvo reikšmingai sumažinta (P < 0.01),="" o="" p62="" ekspresija="" reikšmingai="" padidėjo="" (p="">< 0.01).="" šie="" radiniai="" parodė,="" kad="" autofagija="" buvo="" susilpnėjusi="" dn="" žiurkėms.="" palyginti="" su="" modelių="" grupe,="" didelės="" dozės="" tongluo="" digui="" nuoviro="" grupėje="" buvo="" padidinta="" beklino="" -1="" ir="" lc3ⅱ="" ekspresija="" (p="">< 0,05),="" o="" p62="" ekspresija="" buvo="" sumažinta.="" kartu="" šie="" rezultatai="" parodė,="" kad="" tongluo="" digui="" nuoviro="" inkstų="" apsauginis="" poveikis="" žiurkėms,="" turinčioms="" dn,="" gali="" būti="" susijęs="" su="" padidėjusia="" autofagija="" inkstų="">

Tongluo Digui nuoviras sustiprina glomerulų podocitų autofagiją DN žiurkėse, slopindamas mTOR fosforilinimą

MTOR fosforilinimo slopinimas sustiprina autofagiją (5 pav.). Palyginti su normalia grupe, mTOR fosforilinimas modelių grupėje buvo sustiprintas (P < 0.01),="" o="" tongluo="" digui="" nuovirų="" grupėse="" jis="" buvo="" slopinamas="" (p="">< 0,05).="" tai="" leido="" manyti,="" kad="" tongluo="" digui="" nuoviras="" sustiprino="" podocitų="" autofagiją,="" slopindamas="" mtor="" signalizacijos="" kelio="" aktyvavimą.="" ankstesni="" tyrimai="" parodė,="" kad="" autofagija="" apsaugo="" podocitus="" ir="" gerina="" inkstų="">

DISKUSIJA

DN dažniausiai būdingi požymiai ir simptomai, tokie kaip baltymų buvimas šlapime, didelis gliukozės kiekis kraujyje, polidipsija, polifagija ir poliurija. Simptomai yra panašūs į tradicinės kinų medicinos simptomus, tokius kaip „Xiao Ke“, „Guan Ge“ ir „edema“. DN atsiradimas ir vystymasis yra neatsiejami nuo patologinio yin trūkumo ir kraujo sąstingio pagrindo.6 Vystantis Yin trūkumui ir kraujo sąstingiui, inkstai pamažu pažeidžiami, todėl šlapime netenkama baltymų, o tai dar labiau lemia mikrotrombų susidarymą ir kraujo stazę. inkstų fibrozė. DN pacientai neišvengiamai serga galutinės stadijos inkstų liga.11

Tongluo Digui nuovirą sukūrė garsus kinų tradicinės medicinos gydytojas Zhang Binghou, o remiantis jo ilgamete patirtimi gydant DN.12, 13 Tougluo Digui nuovirą sudaro Shuichi (Hirudo), Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis), Dihuang (Radix Rehmanniae), Huangqi (Radix Astragali Perparata), Danggui (Radix Angelicae Sinensis), Ze Xie (Rhizoma Alismatis), Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei), Gancio (Radix Glycyrrhizae). Tarp jų Shuizhi (Hirudo) ir Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) yra monarchiniai vaistai, kurie, mūsų manymu, vaidina svarbų vaidmenį maitinant Yin ir skatinant kraujotaką DN. Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) gerina organizmo imunitetą ir sekrecinę būseną bei lėtina senėjimą.14 Shuizhi (Hirudo) turi antikoaguliantų, priešnavikinį, priešuždegiminį ir antifibrozinį poveikį, be kitų farmakologinių veiksmų, ir gali pagerinti inkstų veiklą. patologinius DN pokyčius, kad žymiai sumažėtų kreatinino ir kraujo karbamido azoto koncentracija serume bei sumažėtų baltymų išsiskyrimas su šlapimu.15,16 Esant DN, podocitų pažeidimas vaidina svarbų vaidmenį glomerulų bazinės membranos filtracijos barjere ir formuojant proteinuriją.17 Nefrinas ir podocinas yra abu porų membranos baltymai podocitų paviršiuje. Abu baltymai sąveikauja sudarydami kompleksą, kuris vaidina pagrindinį vaidmenį glomerulų filtracijos barjero funkcijoje.18 Nenormalus baltymų ekspresijos pasiskirstymas sukelia skirtingą proteinurijos laipsnį.19 Šiame tyrime STZ sukeltos 1 tipo DN žiurkės parodė, kad padaugėjo. baltymų išsiskyrimas su šlapimu ir inkstų funkcijos sutrikimas per 24 val. Be to, PAS dažymas parodė, kad modelio grupėje padidėjo mezangialinių ląstelių ir mezangialinės matricos skaičius, o tai rodo, kad modelis buvo sėkmingai sukurtas. Skirtingos Tongluo Digui nuoviro dozės sumažino 24 valandų šlapimo baltymų ir kreatinino koncentraciją serume bei pagerino DN žiurkių inkstų patologiją, kai sumažėjo mezangialinių ląstelių ir matricos kiekis. Western blot analizė parodė, kad nefrino ir podocino ekspresija Tongluo Digui nuovirų grupėje buvo didesnė nei modelio grupėje, o tai rodo, kad ši formulė atitolina DN progresavimą žiurkėms, apsaugodama podocitus.

Autofagija yra lizosomų baltymų skilimo ląstelėse būdas ir atlieka lemiamą vaidmenį pašalinant pažeistus arba pernelyg išreikštus baltymus, kurie palaiko ląstelių homeostazę ir vientisumą.20 ​​Autofagija yra neatsiejama podocitų lizosomų homeostazė sergant diabetu, o sustiprinta autofagija gali sumažinti podocitų pažeidimą. .5 Podocituose specialiai pašalinus su autofagija susijusį geną Atg5, pelėms podocituose pamažu pasireiškė baltymų agregacija, mitochondrijų pažeidimai ir autofagijos aktyvumas; podocitai buvo pažeisti, o pėdos procesai išnyko ir susiliejo, kas rodė, kad autofagija išliko. Svarbu palaikyti normalią podocitų funkciją.21,22 Šiame tyrime tyrėme Tongluo Digui nuoviro poveikį autofagijai glomerulų podocituose, naudojant TEM ir Western blot analizę. TEM parodė, kad podocitų autofagosomų skaičius kiekvienoje Tongluo Digui nuoviro dozės grupėje padidėjo, palyginti su modelio grupe. Be to, Western blot parodė su autofagija susijusių baltymų LC3, beklino -1 ir p62 ekspresiją. Palyginti su modelių grupe, LC3Ⅱ ir beclin{11}} ekspresija buvo reikšmingai padidėjusi Tongluo Digui nuovirų grupėje, o p62 baltymo ekspresija buvo reikšmingai sumažinta. Šie radiniai parodė, kad Tongluo Digui nuoviras padidino autofagijos lygį glomerulų podocituose.

Rapamicino tikslinis baltymas (mTOR) yra vienas iš pagrindinių autofagijos reguliatorių.23 Jis plačiai paplitęs inkstų žievėje ir smegenyse ir vaidina svarbų vaidmenį vystantis DN podocitų pažeidimui.24,25 Didelės gliukozės ir streso situacijose, mTOR yra aktyvuojamas ir fosforilinamas, o tai lemia jo pasroviui esančių taikinių fosforilinimą ir autofagijos slopinimą. Liu ir kt. 26 parodė, kad mTOR inhibitorius rapamicinas specifiškai prisijungė prie mTOR kinazės ir slopino mTOR aktyvumą, sustiprino podocitų autofagiją ir apsaugojo inkstų funkciją. Mes nustatėme, kad modelių grupėje buvo sustiprintas mTOR fosforilinimas ir kad Tongluo Digui nuoviras slopino šį procesą, o tai rodo, kad Tongluo Digui nuoviras sustiprino podocitų autofagiją ir gali slopinti mTOR signalizacijos kelio aktyvavimą.

Apibendrinant galima pasakyti, kad Tongluo Digui nuoviras gali slopinti podocitų autofagiją, apsaugoti glomerulų podocitus, išlaikyti glomerulų filtracijos membranos vientisumą, sumažinti 24 valandų šlapimo baltymų išsiskyrimą ir atitolinti DN progresavimą slopindamas mTOR aktyvaciją. Šios išvados suteikia įžvalgų, kaip geriau suprasti apsauginį Tongluo Digui nuoviro poveikį DN, tačiau pagrindinis mechanizmas dar turi būti išaiškintas.

kas yra cistanchedėl inkstų ligų

NUORODOS
1 Tesch GH. Diabetinė nefropatija – ar tai imuninis sutrikimas? Clin Sci 2017; 131(16): 2183-2199.
2 Li JJ, Kwak SJ, Jung DS ir kt. Podocitų biologija sergant diabetine nefropatija. Kidney Int Suppl 2007; (106): S36-S42.
3 Liu N, Xu L, Shi Y, Zhuang S. Podocitų autofagija: galimas terapinis tikslas užkirsti kelią diabetinės nefropatijos progresavimui. J Diabetas Res 2017; 2017 (4): 1-6.
4 Mizushima N, Komatsu M. Autofagija: ląstelių ir audinių atnaujinimas. Ląstelė 2011; 147(4): 728-741.
5 Tagawa A, Yasuda M, Kume S ir kt. Sutrikusi podocitų autofagija padidina proteinuriją sergant diabetine nefropatija. Diabetas 2016; 65(3): 755-767.
6 Sun C, Xie QY, Meng QG. Diabetinės nefropatijos TCM sindromo pasiskirstymo dėsnio tyrimas. Pekinas Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao 2015; 38(4): 266-270.
7 Szkudelski T. Aloksano ir streptozotocino veikimo mechanizmas žiurkės kasos B ląstelėse. Physiol Res 2001; 50(6):537-546.
8 Dang WY, Hou LY, Wu HM, Yan XM, Zheng XF, Hao J. Qingre Lishi Yishen nuoviro veiksmingumas imunoglobulino A nefropatijos glomerulų fibrozei žiurkės modelyje. J Tradit Chin Med 2019; 39(4): 516-523.
9 Lu MK, Gong XG, Guan KL. mTOR podocitų funkcijoje: ar rapamicinas tinka diabetinei nefropatijai? Ląstelių ciklas 2011; 10(20): 3415-3416.
10 Hartleben B, Godel M, Meyer-Schlesinger C ir kt. Autofagija įtakoja glomerulų ligų jautrumą ir palaiko podocitų homeostazę senstančiose pelėse. J Clin Invest 2010; 120(4): 1084-1096.
11 Sun GD, Li CY, Cui WP ir kt. Žolelių tradicinės kinų medicinos, skirtos diabetinei nefropatijai gydyti, apžvalga. J Diabetes Res 2016; 2016 m.: 5749857.
12 Zhao WJ, Cai Z, Meng Y ir kt. Zhang Binghou maitinančio inkstų Yin metodo taikymas gydant lėtinę inkstų ligą. Pekinas Zhong Yi Yao 2016 m.; 35(4): 341-343.
13 Duan YF, Zhang HB. Profesoriaus Zhang Binghou taikymo patirties pristatymas. Xin Zhong Yi 2012; 44 (4): 147-149.
14 Yu XJ, Chen SH, Lu GY. Vėžlio kiauto „Ziyin Bushen“ farmakodinamikos tyrimų apžvalga. Dang Dai Yi Xue 2009; 15(10): 15-17.
15 Pang XX, Tong Y, Li HP, Han JR. Dėlės ir jos ekstraktų tyrimų pažanga gydant diabetinę nefropatiją. Guang Ming Zhong Yi 2019 m.; 34(1): 168-171.
16 Zhang ZL, Dong H. Dėlės ir jos veikliųjų medžiagų tyrimų pažanga gydant diabetinę nefropatijąZhong Xi Yi Jie He Yan Jiu 2018 m.; 10(02): 106- 110.
17 Dai H, Liu Q, Liu B. Diabetinės nefropatijos podocitų išeikvojimo mechanizmo tyrimų pažanga. J Diabetas Res 2017; 2017 m.: 2615286.
18 Martin CE, Jones N. Nefrino signalizacija podocite: atnaujintas signalo reguliavimo plyšinėje diafragmoje ir už jos ribų vaizdas. Front Endocrinol (Lozana) 2018 m.; 9: 302.
19 Jaakko P, Karl T. Glomerulų filtracijos barjero molekulinė sandara. Biochem Bioph Res Co 2010; 396(1): 164-169.
20 Noboru M, Beth L, Ana Maria C, Klionsky DJ. Autofagija kovoja su liga per ląstelių savarankišką virškinimą. Gamta 2008; 451 (7182): 1069.
21 Lenoir O, Jasiek M, Henrique C ir kt. Endotelio ląstelė
ir podocitų autofagija sinergiškai apsaugo nuo diabeto sukeltos glomerulosklerozės. Autofagija 2015; 11(7): 1130-1145.
22 Ilatovskaya DV, Levchenko V, Lowing A, Shuyskiy LS, Palygin O, Staruschenko A. Podocitų pažeidimas sergant diabetine nefropatija: nuo angiotenzino Ⅱ priklausomo TRPC kanalų aktyvavimo pasekmės. Sci Rep 2015; 5: 17637.
23 Rabanal-Ruiz Y, Otten EG, Korolchuk VI. mTORC1 kaip pagrindiniai vartai į autofagiją. Esė Biochem 2017; 61 (6): 565-584.
24 Kim YC, Guan KL. mTOR: farmakologinis autofagijos reguliavimo tikslas. J Clin Invest 2015; 125(1): 25-32.
25 Li XY, Wang SS, Han Z ir kt. Triptolidas atkuria autofagiją, kad sumažintų diabetinę inkstų fibrozę per miR-141-3p/PTEN/Akt/mTOR kelią. Mol Ther Nucleic Acids 2017; 9: 48-56.
26 Liu L, Yang L, Chang B, Zhang J, Guo Y, Yang X. Apsauginis rapamicino poveikis ląstelių autofagijai žiurkių, sergančių diabetine nefropatija, inkstų audiniuose per mTORS6K1-LC3 Ⅱ signalizacijos kelią. Ren Fail 2018; 40(1): 492-497.