Du triterpenoidai iš Rubus Fraxinifolius lapų ir jų tirozinazę bei elastazę slopinantis aktyvumas

Prašau susisiektioscar.xiao@wecistanche.comDaugiau informacijos

Iš natūraliai gausių organinių išteklių buvo išskirta daug gydomųjų junginių, kurie gali būti ekonomiški ir tvarūs junginių šaltiniai, pasižymintys saugia ir efektyvia biologine veikla. Kosmetikos pramonėje noriai ieškoma natūralių junginių, kurie stabdo senėjimą. Taigi iš Rubusfraxinifolius lapų ruošėme įvairius ekstraktus ir panaudojome fermentų slopinimo tyrimus, kad išskirtume junginius, turinčius apsauginį poveikį nuo odos senėjimo. Du triterpenoidai buvo išskirti iš Rubus fraxinifolius Poir. lapai. Struktūros buvo apibūdintos spektroskopinėmis analizėmis (LC-ESI-MS, 1D/2D BMR) ir palyginimu su pateiktais duomenimis. 1 ir 2 junginiai buvo nustatyti kaip 2,3-O-etilenglikolis,19-hidroksiuras-12-en-23,28-dio rūgštis ir 2,{{15} }O-propandiolis, 19-hidroksiuras-12-en-28-o rūgštis. Metanolio ekstraktas ir izoliatai buvo įvertinti dėl slopinančio poveikio elastazei ir tirozinazei. 1 ir 2 junginiai slopino elastazę atitinkamai ICso 122,199 ug/mL ir 98,22 ug/mL, taip pat tirozinazę atitinkamai 207,79 ug/mL ir 221,51 ug/mL. Molekulinis prijungimas įrodė, kad abu junginiai turi ryšį su fermentais.

Norėdami sužinoti daugiau, spustelėkite čia

Nors ir sunku pasiekti, natūralias senėjimą stabdančias medžiagas, kurios yra saugios žmonėms, galima ekonomiškai ir tvariai išgauti iš gausių gamtos išteklių. Pasaulyje paplitę apie 700 Rubus (Rosaceae) rūšių, nors tropikuose aptinkama nedaug rūšių. Šioje gentyje yra maistinių medžiagų (cukraus, vitaminų ir kt.), antrinių metabolitų (triterpenoidų, flavonoidų, polifenolių ir kt.) ir turi daug senėjimą stabdančių veiklų (antioksidantas, skruzdžių elastazė, skruzdžių tirozinazė, antikolagenazė, anti-UV, priešuždegiminis, žaizdų gijimas ir kt.)1. Be to, Rubus rūšys taip pat pranešė, kad turi įvairių triterpenų, turinčių skirtingą biologinį aktyvumą.

Indonezijoje R. fraxinifolius Poir. (Rosaceae) yra platinami Java, Borneo ir kt. ir populiariai vadinami „miestais“.kas yra cistancheBe to, kai kurie vietiniai ūkininkai nuima šių augalų derlių, o uogos dažniausiai vartojamos arba šviežios, arba šaldytos. Mūsų ankstesnis tyrimas parodė, kad R. frascinifolius stiebo ekstraktas slopina elastazę, tirozinazę ir yra antioksidantas8. Kai kurie kiti tyrimai taip pat parodė, kad R. fraxinifolius lapai ir vaisiai turi stiprų antioksidacinį aktyvumą?10. Tačiau R. fraxinifolius tyrimai buvo mažai ištirti, nebuvo pranešta apie cheminių komponentų tyrimus.

Cistanche gali kovoti su senėjimu

Elastazė yra serino proteazės fermentas, turintis lemiamą vaidmenį odos raukšlėjimui arba suglebimui dėl odos elastingumo skaidulų (elastino) irimo ir sukeliantis odos elastingumo praradimą. Viena iš jų yra odos fibroblastų kilmės elastazė. Taigi, kaip elastino skaidulų skilimo, sukeliančio odos senėjimą, moderatoriai, elastazės inhibitoriai patraukė dėmesį kaip kosmetinių preparatų agentai12. Melanogenezę tarpininkauja tirozinazė ir reguliuoja melanino biosintezę per dviejų pakopų reakciją. Pradiniame etape L-tirozinas hidroksilinamas iki L-3,4-dihidroksifenilalanino (L-DOPA). Antrame etape L-DOPA oksiduojamas iki atitinkamo O-chinono. Todėl natūralūs junginiai, slopinantys tirozinazę, dažniausiai naudojami kosmetikoje, kuri slopina hiperpigmentaciją su melaninu ir todėl skatina odos balinimą.Anti-senėjimo cistancheElastazės ir tirozinazės fermentų inhibitoriai gali būti sukurti kaip odą balinančios, senėjimą stabdančios arba raukšles mažinančios priemonės, skirtos gydyti dermatologinius sutrikimus44.

Šio tyrimo metu iš R.fraxinifolius lapų buvo išskirti ursano triterpenoidai ir išaiškintos jų struktūros spektroskopinėse analizėse, naudojant elektropurškimo jonizacijos masės spektroskopiją (ESI-MS) ir 'H BMR, |3CNMR ir 2D BMR (DEPT, HSQC, HMQC ir HMBC). Vėliau atlikome neapdorotų ekstraktų, frakcijų ir izoliuotų junginių elastazę ir tirozinazę slopinančio aktyvumo tyrimus.

Šiame tyrime in silico metodu buvo stebimas ir dviejų pasirinktų junginių aktyvumas. Molekulinio prijungimo metodas buvo atliktas naudojant DockThorl516. Šiame tyrime naudotos makromolekulės buvo gautos iš baltymų duomenų banko (RCSB PDB, 2000) su 2y9x ir 3hgp tirozinazei ir elastazei, atitinkamailyl718. Makromolekulės buvo optimizuotos ir rezultatai buvo optimizuoti UCSF chimeroje. buvo pastebėti naudojant PyMOL1920.

Rezultatai ir DISKUSIJA

The ethyl acetate and methanolic extracts of R. fraxinifolius leaves showed potential as elastase inhibitors with percent inhibitory>40 procentų 100 ug/ml, o n-heksano ekstraktas neturėjo aktyvumo (1 pav.). Kai kurie Rubus taip pat parodė elastazę slopinantį aktyvumą, pavyzdžiui, R. Sanctus (procentinis slopinimas 14.{5}}.20 100 ug/mL), R.compactus,R. robustas ir kt.221. Taigi, mes frakcionavome aktyvius ekstraktus naudodami vakuuminę skysčių chromatografiją / VLC ir iš kiekvienos surinkome 1 frakcijas. Frakcijos iš etilo acetato ekstrakto parodė silpną elastazę slopinantį poveikį (<20% in="" 100="" ug/ml),but="" some="" methanol="" fractions="" showed="" potential="" activity="" in="" these="" assays.="" we="" choose="" metha-nol="" fraction="" 8(m8)for="" further="" isolation="" because="" it="" hadthe="" largest="" yield(57%)="" and="" also="" have="" elastase="" inhibitory="" activity(44.82%).m8="" was="" further="" partitioned="" and="" purified="" over="" silica="" gel="" and="" through="" a="" sephadex="" column,="" and="" two="" amorphous="" powders="" were="">

Izoliatai buvo identifikuoti ir apibūdinti naudojant skysčių chromatografijos-masių spektroskopiją (LCMS), 'H ir 13CNMR, DEPT, heterobranduolinę vienkvantinę koherenciją (HSQC), heterobranduolinę daugybinę kvantinę koreliaciją (HMQC) ir heterobranduolinę daugybinio ryšio koreliaciją (HMBC). 1 lentelėje pateikti junginių BMR spektriniai duomenys.

1 junginys: buvo išskirtas kaip amorfiniai balti milteliai. Šio junginio LCMS-ESI spektrai parodė molekulinę jonų smailę esant m/z 543,32[MH]t, o tai rodo, kad molekulinė formulė C32H48O- su devyniais neprisotinimo ekvivalentais. IR spektrai atskleidė absorbcijos maksimumus, atitinkančius hidroksilo (3,343,4 cm-l) ir olefininių (1,684 cm-1) funkcinių grupių. Be to, I junginio 'H BMR spektrai atskleidė metino protono (CH) vienetinį signalą, kurio vertė yra 2,6, būdingą ursano tipo H-18 signalą. triterpenai su 19-O pakaitais. Triterpeno tipo 19a-hidroksi-ursanas taip pat turi tipišką protonų signalą srityje, kurioje yra apie 2,6 ppm. Šis neekranuotas signalas gali labai skirtis nuo kitų eilinių I metileno protonų signalų, būdingas poslinkis dėl olefininio protono (H12) esant 5,28 (t, J=6 Hz).cistanche benefíciosIšsamius ir nedviprasmiškus „H ir l3C cheminio poslinkio priskyrimus padėjo atlikti HMQC(13Cx'H) ir HMBC(15Cx'H) spektrai. Iš HMBC kryžminės smailės protonas, esantis ou 2,60, yra H{ {5}}(2a pav.). Kiti specifiniai simboliai buvo rasti penkiems metilo vienetams ties 1,89,1.{19}}2,0,82,1,32,1,20 (kiekvienas,H24-27;29), metilo dubletas ties og 0,92 (d, J=6 Hz), o olefininio protono signalas yra 5,30 (t, J=7 Hz, H-12). Dabartiniai13CNMR spektrai rodo 32 anglies rezonansus, o su DEPT ir HMQC spektrais rodo du karbonilo anglies atomus (δC183.70,C-28 ir 8-178.96,C-23), olefininę anglį. esant oc 127,23,C-12,olefininė ketvirtinė anglis (oc139,49,C-13),deguonies turinti ketvirtinė anglis (o-72.7, C-19 ）, dešimt alifatinių metilenų ir šeši metilo anglies atomai. Dvi olefininės anglies atomai esant δ-127.23（C-12) ir 139,49(C-13) buvo būdingi ursano-triterpenoidų tipui. Kitas signalas, rodantis etilenglikolio buvimą (-OCH-CH-O-), buvo rodomas esant δ4,62（d, J=11.5 Hz）, 4,05（d, J=11 signalams. 5 Hz）, 3,52（d, J=11,5 Hz） ir 4,06（d, J=11,5 Hz） ir palaikoma δ61,27（t） ir 63,20（t. Jis buvo C-2ir C-3, remiantis tolimojo nuotolio koreliacijos buvimu HMBC spektruose. Taigi 1 junginys buvo identifikuotas kaip 2,3-O-etilenglikolis,19-hidroksiuras-12-en-23,28-dio rūgštis (3a pav.).

2 junginys: buvo gautas kaip balti amorfiniai milteliai. MS-ESI m/z 527,33 [MH]t (apskaičiuota 528,3815). LCMS-ESI spektruose molekulinio jono smailė yra esant m/z 527,33 [MH]t, o tai rodo molekulinę formulę CH Os, kuriai reikėjo 8 neprisotinimo laipsnių." IR spektre buvo absorbcijos maksimumai, atitinkantys hidroksilą (2 927,8 cm{). {15}}) ir olefino (1 686 cm-1) funkcinės grupės. Be to, 2 junginio HBMR spektrai parodė 2,42 vienetą, būdingą ursano tipo triterpeno H18 su {{24 }}O pakeitimas.Cistanche ekstraktas, apsaugantis nuo radiacijosKiti specifiniai charakteristikų spektrai apėmė šešių metilo vienetų buvimą ties og1.22 0.76, 0.97, 0.69, 1.30ir 1.17(kiekvienas,H -24-28,H-30), metilo dubletas, esant 0,91 (d, J=7Hz), ir olefininio protono signalas, esant ou 5,37 (d, J=7 Hz, H-12). Atitinkamas l3 (CNMR ir DEPT spektrai rodo 33 anglies rezonansus, o HSQC ir HMQC spektrai rodo, kad yra karbonilo anglies (oc 182,23, C-28), olefininės anglies （δ-129.36, C -12）, olefininė ketvirtinė anglis （δ-140.24, C-13）, deguonies turinti ketvirtinė anglis (oc73,68, C-19), vienuolika alifatinių metileno ir septynių metilo anglies atomų. Šie duomenys rodo, kad junginys 2 turi ursano-triterpenoidinį skeletą. Kiti signalai rodo, kad yra 1,3-propandiolio funkcinė grupė, og 3,22 (d, J=11 0,5 Hz), 3,42 (d, J=10,5 Hz), 1,38 (m), 1,51 (m) ir 4,02 (d, J=11,5 Hz) ir 3,36 (t, J{) {57}}.5 Hz). Jo funkcinė grupė turi ilgalaikę koreliaciją su C2-C3. Remiantis šiais rezultatais, junginys 2 buvo identifikuotas kaip 2,3-O-propandiolis,{{ 66}}hidroksiurai-12-en-28-o rūgštis (2b ir 3b pav.). Panašus junginys yra 2,3-O-izopropilideno kankinimo rūgštis, išskirta iš Rubus xanthocarpus.7

1 lentelėje visi 'H ir 'C BMR spektrai buvo lyginami su kankinimo rūgštimi (TA/2a,3a, 19-trihidroksi-12-ursen-28-oic acid）²), kuri yra ursano triterpenoidas, rastas keliose Rubus rūšyse-p Tormentinė rūgštis buvo labai panaši į 1 ir 2 junginius, išskyrus tai, kad cheminiai poslinkiai, susiję su C-23 ir C31-33, skyrėsi. Ši dalis taip pat patvirtinta DEPT, HMQC ir HMBC eksperimentai (2 pav.).

Triterpenoidas kankina rūgštis yra plačiai paplitęs natūraliame augaliniame maiste. Jis pasižymi įvairiu biologiniu aktyvumu: hipoglikeminiu poveikiu, priešuždegiminėmis ir antiaterogeninėmis savybėmis mažina kraujagyslių lygiųjų raumenų ląstelių dauginimąsi, o inkstų, prostatos ir melanomos vėžio ląstelių linijose – antiproliferacinę veiklą2426. Todėl, kadangi šie junginiai turi tą patį skeletą, jie negali turėti tinkamos galimos veiklos.

4 paveiksle pavaizduotas izoliatų slopinamasis elastazės ir tirozinazės aktyvumas. Duomenys, gauti iš in vitro fermentų slopinimo tyrimų, buvo išreikšti standartiniu nuokrypiu (SD). 1 ir 2 junginiai slopino elastazę atitinkamai ICso 122,199 ir 98,22 ug/mL, taip pat tirozinazę atitinkamai 7,79 ir 221,51 ug/mL ICso 2{19}}. Kai kurie pentacikliniai triterpenoidai (ursolio rūgštis ir oleanolio rūgštis) pranešė, kad jie slopina elastazę2728. Taip pat 2 junginio elastazės slopinimo reikšmė yra mažesnė nei junginio 1. Abu junginiai buvo mažesnio slopinimo aktyvumo nei teigiamos kontrolinės oleanolio rūgšties, kurios ICso vertė buvo 90,39 ug/ml. Ankstesni tyrimai parodė, kad oleanolio rūgšties ICso yra 76,5 ug/ml, o ursolio rūgšties ICso vertė buvo 31,0 ug/ml28. Anksčiau pranešta pentaciklinių triterpenų kinetinė analizė parodė, kad šie junginiai konkurencingai ir grįžtamai slopina neutrofilų elastazę. Tame pačiame tyrime molekulinio prijungimo eksperimentai parodė, kad molekulinė pastolių dalis 28-COOH ir dvigubos jungtys pentacikliniuose triterpenuose yra būtinos jų slopinamajai veiklai.

Viena iš problemų, kylančių su amžiumi, yra hiperpigmentacija.cistanche žolėTodėl nuolat ieškoma odą šviesinančių priemonių ar naujų depigmentavimo priemonių. Tirozinazės slopinimas gali veikti prieš melanogenezę". Kaip parodyta 4 pav., metanolio ekstraktas ir I ir 2 junginiai parodė vidutinį aktyvumą kaip tirozinazės inhibitoriai.

Šiame tyrime molekulinis prijungimas taip pat buvo naudojamas analizuojant pasirinktų junginių prisijungimo prie tirozinazės ir elastazės aktyvumą kaip jų taikinius. Naudotos kristalinės struktūros buvo 2Y9X, kristalinė tirozinazės struktūra iš Agaricus bisporus su inhibitoriumi tropolonu; ir BHGP, kiaulių kasos elastazės kristalinė struktūra, sudaryta komplekse su stipriu peptidilo inhibitoriumi FR130180. Abu buvo atrinkti, nes buvo gauti iš to paties organizmo, naudoto šio tyrimo in vitro tyrimui. Makromolekulės taip pat yra susietos su atitinkamais inhibitoriais, kad būtų galima gauti aktyvią fermentų konformacijų būseną. Kokristalai buvo naudojami kaip molekulinio prijungimo taikinio centras, siekiant susiaurinti junginių surišimo tikimybes, kad taškų skaičiavimo procesas taptų efektyvesnis.

Remiantis molekuliniu prijungimu, buvo gauti vidutiniai abiejų junginių surišimo afinitetai, kaip parodyta 5 ir 6 pav. Afiniteto prognozė naudojama skirtingiems ligandams reitinguoti, atsižvelgiant į kiekvieno junginio didžiausią energijos pozą. Geresnės energijos pozicijos prognozė rodoma mažesni surišimo afiniteto balai16. Paskirto inhibitoriaus tropolono perkrovimas buvo atliktas vidutiniu surišimo afinitetu -7,41 kcal/mol. Vidutinis 1 ir 2 junginių prisijungimo prie tirozinazės afinitetas buvo atitinkamai -7,84 kcal/mol ir -8,37 kcal/mol (2 lentelė). Numatyta, kad abu junginiai turi geresnį afinitetą nei inhibitorius.

Tuo tarpu vidutinis elastazės surišimo afinitetas buvo -7,84 kcal/mol. Vidutinis 1 ir 2 junginių prisijungimo prie elastazės afinitetas buvo atitinkamai -7,58 kcal/mol ir -8,06 kcal/mol. Nors rezultatas parodė, kad 1 junginys turi mažesnį giminingumą nei kokristalas, jis šiek tiek skiriasi (<0.5 kcal/mol)compared="" to="" the="" inhibitor="" used="" hence="" the="" scores="" may="" ovelrlap31.="" these="" scores="" showed="" that="" both="" compounds="" were="" predicted="" to="" have="" affinities="" toward="" the="" enzymes,="" which="" is="" in="" conjunction="" with="" the="" in="" vitro="" assay="">

Metodai

Bendrosios eksperimentinės procedūros. 'H ir ' BMR spektrai buvo įrašyti esant 500 MHz, naudojant JEOL JNM-ECZ500R/S1 prietaisą. Infraraudonųjų spindulių (IR) spektrai buvo matuojami naudojant FTIR, IRPrestige-21, Shimadzu. Kitos analizės buvo atliktos naudojant Waters UPLC-MIS XEVO G2-XS QTof instrumentą, VersaMax Microplate skaitytuvą ir BioTek ELX800 Microplate Reader, moksliškai padengtus aliuminio lakštus TLC-Silica gel 60 GF254 (Merck, Darmstadt, Vokietija). , kolonėlės chromatografija (CC) buvo atlikta naudojant silikagelį 60 (Merck, Darmstadt, Vokietija) su 70-230 tinkleliu atvirai chromatografijai ir 230-400 tinkleliu vakuuminei chromatografijai. Augalinės medžiagos. R. fraxinifolius lapai buvo surinkti iš plantacijų ploto Pangrango kalne, Vakarų Java 4 343 pėdų aukštyje, 2018 m. gruodžio mėn. Pavyzdį identifikavo Indonezijos instituto Biologijos tyrimų centro botanikas (dr. Joni Setijo). Sciences, Indonezija, pavyzdžio numeris 033/IPH.1.01/If.07. Augalinės medžiagos rinkimas gavo ūkininko leidimą ir atitiko institucinius reglamentus bei gaires.

Ištraukimas ir izoliacija. Oru išdžiovinti miltelių pavidalo lapai (23 00 g) buvo ekstrahuojami naudojant Soksleto aparatą su gradiento tirpikliu (n-heksanu, EtOAc ir MeOH), kad būtų gauti atitinkami ekstraktai, po to išgarinami sukamuoju garintuvu. ir vakuuminė orkaitė. Metanolio ekstraktas (291 g) ir etilo acetato ekstraktas (65 g) buvo adsorbuoti ant silikagelio ir atlikta vakuuminė skysčių chromatografija/VLC, eliuuojant laipsnišku EtOAc:MeOH (nuo 1:0 iki 0:1) gradientu. pagaminti frakcijas kiekvienam ekstraktui (Eal-Hall ir M{10}}Mill and). Panašios frakcijos, kurių reakcija su vanilino sieros reagentais TLC buvo teigiama, buvo sujungtos. Frakcijos išeiga: Eal-3 (2,27 g);Ea4-6(8,47 g);Ea7-8(12,9 g);Ea9-11 (22,3 g); ir M1-3 (4,89 g); M4-5 (5,1 g); M6-7 (6,02 g); M8 (166,42 g); M9 (10,53 g); M{{38 }}(2,9g).Visos frakcijos pateiktos dėl inhibitorinio elastazės aktyvumo, kun. M8 davė didžiausią derlių ir turėjo stiprų aktyvumą. Kun. M8 paeiliui paskirstoma naudojant CC per silikagelį (eliuentas CH2Cl2/MeOH su laipsnišku gradientu) ir išgrynintas naudojant Sephadex LH-20 kolonėlę (eliuuojant su CHCl3-MeOH 100:10, t/t. Dvi frakcijos buvo kietos ir buvo kristalizuoti su chloroformu ir metanoliu, kad gautų du izoliatus: junginį 1 (18 mg) ir: 2 (31 mg). Visų izoliatų grynumas buvo įvertintas dvimačiu TLC ir vizualizuojant dėmę naudojant 5 procentų sieros rūgštį. rūgštimi metanolyje, po to plokšteles kaitinant 110 laipsnių temperatūroje 5 min.

Kristalai buvo identifikuoti ir apibūdinti naudojant skysčių chromatografijos-masių spektroskopiją (LCMS), LH ir '3C iškraipymų padidinimą poliarizacijos perdavimo (DEPT) NMR, heterobranduolinės vienkvantinės koherencijos (HSQC), heterobranduolinės daugybinės kvantinės koreliacijos (HMQC) ir heterobranduolinės kartotinės metodu. obligacijų koreliacija (HMBC).

Elastazės slopinimo tyrimas. Elastazės slopinimo tyrimas buvo atliktas taip, kaip aprašyta anksčiau su kai kuriais pakeitimais32. Trumpai tariant, Nunc-96 šulinėlių mikrotitravimo plokštelėse 20-μL 0.8-vnt./mL AAP Trizma laipsnio baziniame buferyje (pH 8.{6}}) ) buvo sumaišyti su 20- μL mėginių, o po to mišiniai buvo atskiesti iki 180 μL Trizma laipsnio baziniame buferyje. Bandomieji ekstraktai buvo iš anksto inkubuojami su fermentu 15 min., įpilami 20-μL substrato N-sukcinil-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilido (A3PVN; 2,9 mM) alikvotinės dalys ir inkubuojamos dar 15 min. Teigiamame kontroliniame ir tuščiajame šuliniuose buvo atitinkamai oleanolio rūgšties ir vandens. Eksperimentai buvo atlikti trimis egzemplioriais, o slopinimo laipsniai buvo nustatyti pagal absorbciją; 401 nm, naudojant VersaMax mikroplokštelių skaitytuvą. Slopinimo procentas buvo apskaičiuotas naudojant šią lygtį:

čia Ei yra fermento reakcijos absorbcija, Eb yra tuščiojo fermento mėginio absorbcija, T yra tiriamojo mėginio absorbcija ir Tb yra tuščiojo bandinio absorbcija. taip pat vertės buvo nustatytos iš linijinės elastazės slopinimo procentinės grafikos ir koncentracijos (50,75,100,125,150 ug/mL). Tirozinazės slopinimo tyrimas. Tirozinazės slopinimas buvo nustatytas naudojant DOPA-chromo formavimo metodą, kaip aprašyta anksčiau su nedideliais pakeitimaisl3. Trumpai tariant, 96-šulinėlių plokštelėse 20 μL alikvotinės dalys DMSO (kontrolinis) arba bandomųjų junginių skirtingos koncentracijos buvo sumaišytos su 40 μL alikvotinėmis dalimis 30 U/mL grybų tirozinazės (Sigma Aldrich) ir {{11} μl. 0.{13}}M fosfatinis buferis (pH 6,8). Jie buvo iš anksto inkubuoti 10 minučių kambario temperatūroje. Reakcijos buvo inicijuotos pridedant 4 μL 10 mML-DOPA alikvotas į kiekvieną šulinėlį ir inkubuojant 37 laipsnių temperatūroje 20 min. Tada tirozinazės aktyvumas buvo nustatytas matuojant absorbciją esant 475 nm. Kojic rūgštis buvo naudojama kaip teigiama kontrolė. Eksperimentai buvo atlikti trimis egzemplioriais. Tirozinazės slopinimo procentas buvo apskaičiuotas naudojant šią lygtį:

čia E – fermento reakcijos absorbcija, Eb – tuščiojo fermento mėginio absorbcija, T – tiriamojo mėginio absorbcija, o Tb – tuščiojo bandinio absorbcija. taip pat vertės buvo nustatytos iš linijinės elastazės slopinimo procentinio grafiko ir koncentracijos (250,125,62,5,31,25,15,6 ug/mL).

Molekulinis prijungimas. Šiame tyrime in silico farmakologinis aktyvumas buvo prognozuojamas naudojant molekulinį prijungimą naudojant gydytoją. Tikslinis molekulinis prijungimas buvo atliktas naudojant kokristalizuotą ligandą kaip aktyvios vietos centrą. Struktūra 2Y9X buvo naudojama tirozinazės molekuliniam prijungimui su tropolonu, grybų tirozinazės inhibitoriumi, kaip jo kristalu. Molekulinės prijungimo vietos centras yra apibrėžtas -10.032; -28.769 ir -43.467 kaip atitinkamai X, Y ir Z matmenys. Grandinė A buvo atskirta naudojimui, o Holmio atomas buvo pašalintas iš struktūros naudojant UCSF Chimera.

Šiame tyrime taip pat buvo panaudota 3HGP, kiaulių elastazės struktūra. FR130180, nes kokristalas buvo naudojamas kaip molekulinės prijungimo vietos centras. X, Y, Z matmenų koordinatės buvo atitinkamai 12.453, 9.237 ir 1.199. Ryšio afinitetas buvo analizuojamas iš dešimties geriausių kiekvieno molekulinio prijungimo skaičiavimo konformerių.

Šis straipsnis yra ištrauktas iš Scientifc Reports|(2021) 11:20452|https://doi.org/10.1038/s41598-021-99970-x