Kokie yra Cistanche polisacharido privalumai imuninei funkcijai

Susisiekite: emily.li@wecistanche.com

Cistanche polisacharido imunologinis aktyvumas ir mechanizmas

Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lu Zhiliang

[Santrauka]Tikslas: IšstudijuotiimuninisveiklaCistanchePolisacharidas(CDPS) ir jo veikimo mechanizmasimuninisreguliavimas in vitro. Metodai: CDPS reguliavimo efektui stebėti buvo naudojamas tiazolo mėlynojo kolorimetrinis metodas (MTT).Cistanche polisacharidas) ant IQS DEX TNF, slopinančio pelių užkrūčio liaukos limfocitų proliferaciją in vitro; CDPS (Cistanche polisacharidas) buvo naudojamas ląstelių ciklo ir ląstelių ciklo analizei atlikti naudojant srauto citometriją. Viduląstelinio Ca2 nustatymas. Rezultatai: CDPS (Cistanche polisacharidas) esant didesnei koncentracijai, gali atsispirti slopinančiam ISQDEX poveikiui limfocitų proliferacijai ir didelės koncentracijos TNF slopinančiam poveikiui limfocitų proliferacijai ir sinergizuoti mažos koncentracijos TNF limfocitų proliferaciją skatinantį poveikį; 100 ug/ml 200 ug/ml CDPS (Cistanche polisacharidas) gali žymiai padidinti ląstelių skaičių dalijimosi fazėje; didesnė koncentracija (100 ug/ml) CDPS (Cistanche polisacharidas) gali žymiai padidinti Ca jonų koncentraciją pelių timocituose. Išvada: CDPS (Cistanche polisacharidas) gali paskatinti ląsteles patekti į dalijimosi fazę, ir daroma išvada, kad jo skatinamasis poveikis pelių užkrūčio liaukos limfocitų proliferacijai yra susijęs su kalcio išsiskyrimo pelių užkrūčio liaukos limfocituose skatinimu.

Cistanche(CistancheDeserticolaYC Ma) yra reta ir brangi kinų vaistinė medžiaga mano šalyje. Jis įtrauktas į aukščiausią „Shen Nong's Materia Medica“ laipsnį.Cistancheatlieka kraujo, inkstų maitinimo ir yang palaikymo, žarnyno drėkinimo ir senėjimo stabdymo funkcijas. Šiuolaikiniai farmakologiniai tyrimai rodo, kadCistanchePolisacharidasgali pagerinti organizmo būklęimuninisfunkcija, skatina DNR sintezę, stiprina fizinę jėgą, gerina intelektą ir turi akivaizdų senėjimą stabdantį poveikį [1]. Autorius studijavo CDPS reguliavimą(Cistanche polisacharidas), polisacharido komponentasCistanche, antimuninisfunkcijapelių limfocitų.

Cistanche polisacharidasskatinantišplitimaslimfocitai

1 Medžiaga ir metodai

1.1 Reagentai ir vaistai.

RPM, I 1640 terpė: GIB-CO; HEPES: FARCO; L-glutaminas: Šanchajaus Dongfengo reagentų gamykla; Penicilinas ir streptomicinas: Šiaurės Kinijos farmacijos gamykla; Concanavalin (ConA), MTT: SIGM A kompanija; Fitohemagliutininas (PHA): Šanchajaus medicinos laboratorija; Izoproterenolis (ISO): Šanchajaus Tianfengo farmacijos gamykla; Merkaptoetanolis: Fluka Company; Naujagimio veršelio serumas: Sijiqing Bioengineering Company; Deksametazoną (DEX) pristatė Dr. Ma Liang, pirmoji dukterinė Zhejiang universiteto medicinos mokyklos ligoninė; Auglio slopinimo faktorių (TNF) suteikė Zhejiang universiteto Gyvybės mokslų mokyklos Ląstelių katedros profesorius Yu Yuehanas; Visi kiti reagentai yra vietinės gamybos analitinės kokybės.

1.2 Eksperimentiniai gyvūnai.

ICR pelės, patinai, 68 savaičių amžiaus, sveriantys 18-20g, 22, buvo įsigytos iš Zhejiang eksperimentinio gyvūnų centro.

1.3 Cistanche polisacharido ekstrahavimas [2]:

CistanchePolisacharidasišgaunama mūsų laboratorijoje! Susmulkinus žalią narkotikąCistanche, jis panardinamas į karštą etanolį, ekstrahuojamas verdančiu vandeniu ir nusodinamas etanolyje. Neutralus fermentas kartu su Sewag metodu deproteinizavimui, anijonų DEAE-Sephadex A- 50 mainų chromatografija ir Sephacry S-200 gelio filtravimo chromatografija, kad būtų gautas vienas CDPS komponentas (Cistanche polisacharidas)). Laikykite sausai, naudokite nepilną RPMI1640, kad prieš naudodami sukurtumėte tam tikrą koncentraciją, ir sterilizuokite ultrafiltruodami

1.4 Blužnies ir užkrūčio liaukos limfocitų paruošimas [3]:

The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93, blužnies ląstelių koncentraciją sureguliuokite iki X 10 /ml, o timocitų koncentraciją iki × 10 laipsnių / ml

1.5 Limfocitų proliferacijos reakcija:Pagal Mosmanmno metodą [4] Patobulinimas: 96-šulinėlių kultūros plokštelė, į kiekvieną duobutę įpilkite 10/ml blužnies ląstelių suspensijos arba vandens 10/ml timocitų suspensijos 100M1 ir skirtingos koncentracijos vaistų 10041. Kultivuokite CO2.37C inkubatoriuje 72 valandas. Likus 4 valandoms iki kultūros pabaigos, į kiekvieną šulinėlį įpilkite 8 μ1 MTT (5 mg/ml). Kultūros pabaigoje iš kiekvieno šulinėlio išsiurbkite 150"1 supernatanto ir įpilkite 0,5N izopropanolio hidrochlorido 150M1. Švelniai pakratykite mikrokratytuvą, kad visiškai ištirptų mėlyni kristalai. Išmatuokite OD570 ant mikroplokštelių skaitytuvo. Nustatykite kiekvieną eksperimentą. taškas kaip trys pasikartojantys šuliniai.

1.6. Poveikio ląstelių ciklui nustatymas [5]:

{{0}}šulinėlių ląstelių kultūros plokštelė, į kiekvieną šulinėlį įpilkite 4 10 laipsnio /ml timocitų suspensijos po 1 ml, įpilkite įvairių reagentų ir polisacharido tirpalo į 2 ml stipriame CO, 37 inkubatoriuose. Po kultivavimo 72 val., centrifuguokite esant 1500r/min greičiui 15 min., išmeskite supernatantą, įpilkite 7 etanolio, kad užfiksuotumėte nusodintas ląsteles, laikykite 4 °C temperatūroje laukimo režimo bandymui, du kartus plaukite ląsteles PBS, centrifuguokite 1500 aps./min. greičiu 15 min., išmeskite supernatantą ir įpilkite Po to, kai 0,5 ml0,1 RNazėA buvo virškinama 4 °C temperatūroje 30 min., 50 ug/ml bromacetatas buvo dažomas 30 minučių 4 °C temperatūroje, o ląstelių mėginių fluorescencijos intensyvumas buvo išmatuotas FACScan srauto citometru. Kiekvienam mėginiui buvo surinkta 10,000 ląstelių bandymo taškai, o duomenims panaudota Mul triračio programinės įrangos analizė.

1.7 Viduląstelinio kalcio jonų koncentracijos nustatymas [6]

Paimkite pelių timocitus taip pat, kaip aprašyta aukščiau. Suspensuokite nepilnoje RPMIl640 auginimo terpėje ir nustatykite ląstelių koncentraciją iki × 10'/ml. Į kiekvieną eksperimentinį mėgintuvėlį įpilkite 1 ml timocitų suspensijos ir 1 μM Fluo-3AM dažymo tirpalo 5 μ1, 2 procentai F-275 μ1, po inkubacijos 37 °C temperatūroje 30 min., du kartus plaukite nepilnu RPM1640, 1500r/ min, centrifuguokite 10 min., išmeskite supernatantą ir į nusodintas ląsteles įpilkite skirtingų koncentracijų polisacharidų ir polisacharidų. Po ConA fluorescencijos intensyvumas buvo matuojamas FACScan srauto citometru. Kiekvienam mėginiui buvo surinkti 10,{16}} ląstelių tyrimo taškų duomenys ir išanalizuoti naudojant CELLQUEST programinę įrangą. 1.8 Dispersinei analizei buvo naudojami statistiniai metodai, o ląstelių ciklas ir kalcio jonų matavimas buvo išanalizuoti srauto citometro programine įranga.

Cistanche polisacharidas iš cistanche deserticola

2 rezultatai

2.1 Cistanche polisacharidas in vitro slopina pelių užkrūčio liaukos limfocitų dauginimąsi naudojant ISO DEX TNF

Adrenerginių receptorių agonistas izoproterenolis (ISO) ir antinksčių žievės hormono deksametazono (DEX) klasė slopina limfocitų proliferaciją CDPS.Cistanche polisacharidas), esant didesnei koncentracijai (75 125 ug/ml), gali atsispirti slopinančiam ISO DEX poveikiui limfocitų proliferacijai (P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">Cistanche Polisacharidas) (125 ug/ml), esant didesnei koncentracijai, gali atsispirti slopinančiam TNF poveikiui ir sinergiškai skatinti limfocitų dauginimąsi su maža TNF koncentracija (2 pav.)

2.2 Cistanche Polisacharidas reguliuoja užkrūčio liaukos limfocitų ciklą

CDPS (CistanchePolisacharidas) 25ug/ml 100ug/ml 200#g/ml 72 valandas buvo veikiamos pelės užkrūčio liaukos limfocitai, DNR kiekis ląstelėse buvo išmatuotas FACS metodu ir apskaičiuotas proliferacijos indeksas (PI). pagal formulę. Rezultatai rodo, kad tiek 100 ug/ml, tiek 200 ug/ml gali žymiai padidinti ląstelių skaičių dalijimosi fazėje, o abiejų proliferacijos indeksas (68,0 proc., 56,6) yra žymiai didesnis nei kontrolinės grupės (44,6) ir 200 ug/ml. grupė yra šiek tiek mažesnė nei 100 ug/ml grupė, nes esant 200 ug/ml koncentracijai jos poveikis ląstelių proliferacijai tapo mažėjančia tendencija [7]. 25 ug/ml grupės PI reikšmė (47,5 proc.) nebuvo reikšmingai didesnė nei kontrolinės grupės.

2.3 Cistanche polisacharido poveikis kalcio jonų koncentracijai pelių timocituose

Eksperimentiniai rezultatai rodo, kad didesnė CDPS koncentracija (100 ug/ml)Cistanche polisacharidase) gali žymiai paskatinti kalcio jonų koncentracijos padidėjimą pelių timocituose Palyginti su kontroline grupe, yra reikšmingas skirtumas (P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">

3 Diskusija

Cistanche, paprastai žinomas kaip"dykumos ženšenis“, yra sausas, žvynuotas mėsingas stiebasCistanche.Cistancheatlieka inkstų yang, maitinančios esencijos, kraujo ir žarnyno funkcijas. Jis priklauso tam tikram hipofizės-antinksčių žievės susijaudinimui arba turi į hormoną panašų poveikį, panašų į antinksčių žievę. Vertingas kinų vaistas, galintis reguliuotiimuninisfunkcijakūno. Mūsų ankstesnių tyrimų rezultatai rodo, kad CDPS (Cistanche polisacharidas) in vitro gali paskatinti užkrūčio liaukos T limfocitų, kurie nebuvo aktyvuoti arba aktyvuoti ConA PHA, dauginimąsi. Kartu su ConA PHA yra dviejų tipų T ląstelių stimuliatoriai, manome, kad CDPS (Cistanche polisacharidas) yra T ląstelių badjuvantas, taip pat nustatėme, kad CDPS (Cistanche polisacharidas) gali žymiai padidinti pelių blužnies limfocitų sekreciją esant didesnėms koncentracijoms [8]

Kai kurie tyrimai parodė, kad rekombinantinis TNF gali sukelti normalių pelių ir žmogaus T limfocitų grupių apoptozę in vitro, o šį poveikį gali slopinti IIL{0}} IL-1 IFN ir IIL-4 su deksametazonu (DEX) Jis gali slopinti limfocitų proliferaciją, slopindamas limfocitų ekspresiją ir IL-2 sekreciją bei sumažindamas didelio afiniteto IL-2R gamybą. Šis eksperimentas parodė, kad didesnė CDPS koncentracija (CistanchePolisacharidas) gali neutralizuoti didelės TN F koncentracijos poveikį limfocitų proliferacijai. Slopinimas, sinergetinis su maža TNF koncentracija, skatinantis limfocitų dauginimąsi, ir gali neutralizuoti ISQ DEX slopinamąjį poveikį limfocitų proliferacijai. Šie efektai yra būtent per CDPS (CistanchePolisacharidas) skatinti T limfocitų dauginimąsi ir yra autokrininės T ląstelės IL{0}} ir kitų citokinų užbaigti.

Pastaraisiais metais buvo atlikta daug augalų polisacharidų imunofarmakologinio poveikio tyrimų, tačiau nedaug tyrimųimuninispolisacharidų reguliavimo mechanizmas, ypač polisacharidų, veikiančių limfocitus su Ca2 kaip antruoju pasiuntiniu, signalo perdavimo kelias. Pranešimo nėra. Šis eksperimentas atliko preliminarų šios srities tyrimą. Tarpląstelinės signalizacijos molekulės apima cAM R Ca", IP3 DG cGMP ir kt., Tarp kurių Ca" turi nepaprastai svarbų fiziologinį poveikį ląstelėms. Viduląstelinės Ca² koncentracijos padidėjimas yra svarbus reiškinys ankstyvoje limfocitų aktyvacijos ir proliferacijos stadijoje. Šis procesas daugiausia vyksta per pirmąsias dešimtis sekundžių ar minučių, kai ląsteles aktyvuoja stimuliatoriai. Klasikinis T ląstelių aktyvinimo būdas yra fosfatidilinozitolis (PIB), skirtas metabolizuoti fosfatidilo raumenis. Alkoholio metabolitas 1,4.5-inozitolio trifosfatas (IP3) gali skatinti vidiniame tinkle laikomo Ca išsiskyrimą, jungdamasis prie vidinių tinklelio receptorių, padidindamas intracelulinio Ca2 lygį ir intracelulinio Ca koncentraciją. * didina.Didelis gali skatinti NF-AT (aktyvuotų T ląstelių nudeic faktoriaus) gamybą, pastarasis skatina IIL-2 geno ekspresiją.Eksperimentiniai rezultatai rodo, kad didesnė koncentracija (100ug/ml) ) iš CDPS (CistanchePolisacharidas) yra veiksmingas 5 10 min. Laikas turi reikšmingos įtakos Ca* koncentracijos padidėjimui pelių timocituose ir turi sinergetinį poveikį su ConA. Todėl spėjame, kad CDPS (Cistanche polisacharidas) skatina kalcio išsiskyrimą pelių užkrūčio liaukos limfocituose, kad padidėtų tarpląstelinė kalcio jonų koncentracija. Padidėjimas skatina IL-2 geno ekspresiją ir skatina T ląstelių dauginimąsi, o tai yra vienas iš teoriniųCistanchePolisacharidaireguliuojantis poveikis organizmui

Cistanche polisacharidas

Nuorodos

1. IN XiuHin, SU Yuke (Bendra farmakologijos tyrimų padėtisCistancheSka 【J】. Kinijos tradiciniai ir vaistažolių vaistai ((kinų vaistažolių medicina). 1993.24(10. 550-552(kinų k.))

2. ZHANG Weijiee (Biocheminė junginio polisacharido [M] technologija. Hangzhou Zhejiang University Pres (Zhejiang University Press), 1994 m.16-17 (kinų k.)

3. MA Bo- (Ma Baoli).Imunologijos technika【M1. Šanchajaus medicinos universiteto leidykla (Šanchajaus medicinos universiteto leidykla), 1984 188-190. (n Kinijos))

4. Mosmann T. Rapiloloimerinis tyrimas, skirtas lengviau augti ir išgyventi proliferacijos ir citotoksiškumo pašalinimui [JJ Immun Meth.1983, 6 55- 58.

5. WU is-hi, WU shailing, Acai-n ir kt. (Wu Jiahui, Wu Shuibing. Li Carian ir kt.), Zino poveikis ciklinių ląstelių dauginimuisiimuninisorganų analizė naudojant srauto citometriją [J]. Kinijos imunologija (Chinese Journal of Immunology), 1994, 10x5: 278-281. (Kinijoje)

6. TAO aksinas. JIYong-yong, GAO Qi-rong ir kt. (Tao Jiaxian, Ji Yongpu Gao Qirong ir kt.). FACS analizė apie intracelulinio C2 pokyčius aktyvacijos metu [J] Kinijos imunologijos žurnalas (China Journal of Immunology), 1993, 9 (2): 97-10L. (kinų kalba)

7. ZENGQu-li.MAO Jum-hao, LU Suchiang; Išgryninimas polisadariduCistancheDeserticolaYC Mfa ir jo imunomoduliuojantis poveikis Tellfunction[J]. Burnal of Zhejiang Medical University (Journal of Zhejiang Medical University), 1998.27 (3: 108-111. (kinų k.)

8. Sarin A, Michelle C C. Perre AH Citotoxic Efed of TNF ir limfotoksinas ant T Lymphoblak. J Immunol, 1995, 1553716-3721.