Abstraktus
Tikslas: šis tyrimas buvo atliktas siekiant patvirtinti mišraus žolelių ekstrakto (MHE) tinkamumą naudoti kaipkosmetika nuo senėjimosudedamoji dalis tiriant jąodos senėjimą stabdantisaktyvumas in vitro ir in vivo. Metodai: Šiame tyrime mes paruošėme MHE naudodami ultragarso ekstrakciją, kurioje yra Forsythiae fructus, Tribuli fructus, Saliamono antspaudas, Sibiro ženšenis, Ponciri Fructus ir ženšenis. Mes ištyrėmesenėjimą stabdantis MHE poveikis odai, esantis odos fibroblastuose. Theanti-senėjimo veiklabuvo nulemtas I tipo kolageno sintezės lygių. Matricos metaloproteinazės-1 (MMP1) ir metaloproteinazės 1 audinių inhibitoriaus (TIMP1) mRNR lygis buvo išmatuotas naudojant qRT-PGR. MMP1 baltymų lygis buvo įvertintas blotavimo analize. Klinikiniai odos drėgmės, elastingumo, tekstūros ir raukšlių tyrimai buvo atlikti naudojant kosmetiką, kurioje yra 1 procentas MHE. Rezultatai: MHE sukėlė I tipo prokolageno sintezės ir TIMP1 mRNR ekspresijos reguliavimą. Dėl MHE sumažėjo MMP1 mRNR lygis ir baltymų kiekis. Be to, ant odos užtepus kosmetikos, kurioje yra 1 procentas MHE, odos drėkinimas, elastingumas, tekstūra ir varnų pėdos pagerėjo praėjus 4 savaitėms po gydymo. Išvada: MHE turi senėjimą stabdantį poveikį skatindama kolageno sintezę ir slopindama MMP1 geno ekspresiją in vitro, o in vivo – odą gerinantį poveikį. Todėl buvo įrodyta, kad MHE yra vertingas kaip funkcinis kosmetikos ingredientas.
Raktiniai žodžiai:Odos priežiūra, Anti-senėjimo, Nuo raukšlių, Natūrali kosmetika, Vaistažolės
Žolelių papildai Cistanche, stabdantys senėjimą
Įvadas
Oda yra organas, kuris liečiasi su išorine aplinka ir yra gyvybiškai svarbus mūsų išlikimui, veikdamas kaip pagrindinis barjeras.nuo išorinių išpuoliųinfekcijos sukėlėjai ir fiziniai sužalojimai; be to, jis atlieka keletą svarbių fiziologinių vaidmenų (Slominski ir kt., 2004; Vollmer ir kt., 2018). Mums senstant,odos funkcijapalaipsniui blogėja dėl atrofinių pokyčių dėl ultravioletinių (UV) spindulių, užterštumo ir streso bei dėl odos senėjimo, kuris atsiranda mažėjant odos ląstelių skaičiui ir odos storiui (Farage ir kt., 2013).
Odos senėjimasGalima suskirstyti į endogeninį ir egzogeninį senėjimą. Endogeninis odos senėjimas vyksta natūraliai laikui bėgant, nepaisant išorinių poveikių. Oda-epiderminissandūros (DEJ) sanglauda susilpnėja, o kartu su diferenciacijakeratinocitų, lipidų susidarymas mažėja (Makrantonakiir kt., 2007). Kita vertus, egzogeninį senėjimą sukelia išoriniai veiksniaiveiksniai, tokie kaip UV spinduliai, infraraudonieji spinduliai (IR), rūkymas, baudadulkės ir gyvenimo būdas. Tarp jų fotosenėjimą sukelia UVspinduliai prasiskverbia pro odą ir pažeidžia kolageną bei elastinądermoje. Šiame procese elastinės skaidulos ir kolagenasdeformuojasi odos skaidulos, dėl to sumažėja elastingumasir nukaręs. Kolagenas yra pagrindinis tarpląstelinės sistemos komponentasmatrica ir atlieka svarbų vaidmenį nustatant audinių funkciją.
Iš įvairių kolageno tipų 1 tipo kolagenas sudaro apie 75-80 proc. viso kolageno (Landau, 2007; Lovell ir kt., 1987; Mays ir kt., 1988). Kai oda yra veikiamaUV spinduliai ilgą laiką, gaminasi laisvieji radikalai. Šie nemokamiradikalai skatina matricos metaloproteinazės ekspresiją-1(MMP1), kuris skatina kolageno skaidymą ir slopina kolagenąsintezė, kuri sumažina odos elastingumą ir sukelia raukšles.Todėl siekiant užkirsti kelią ir pagerinti odos raukšles, kurias sukeliasenstant, būtina sukurti ingredientą, kuris skatinakolageno gamybą ir slopina jo ekspresiją bei aktyvumąMMP1 (Wlaschekir kt., 2001).
Odos senėjimasyra glaudžiai susiję su gyvenimo kokybe. Kadangi oda yra labiausiai matomas organas, ji mus informuoja apie senėjimo procesą (Binic ir kt., 2013). Medicinos, farmacijos ir kosmetikos srityse dedamos įvairios pastangosužkirsti kelią ir pagerinti odos senėjimą. Thesenėjimą stabdančių ingredientų kūrimasyra viena iš svarbiausių kovos su senėjimu strategijų.
Mes paruošėme žolelių ekstraktus, naudodami ultragarso ekstrakciją, kad sukurtume naujus senėjimą stabdančius ingredientus, kurių sudėtyje yra Forsythiae fructus, Tribuli fructus, Solomon's Seal, Sibiro ženšenis, Ponciri fructus ir ženšenis.
Iš augalų, turinčių įvairų medicininį ir odos poveikį, buvo atrinkti šeši vaistažolių preparatai. Forsythiae fructus, džiovinti Forsythia suspense (oleaceae šeimos), žinomi kaip Lian Qiao, vaisiaiKinijoje, pirmą kartą buvo įrašytas Shennong Bencao Jing, aprestižinė tradicinės kinų medicinos (TCM) monografija(Dongasir kt., 2017). Jis buvo naudojamas kaip šilumos valymo irdetoksikuojantis TCM, skirtas infekcinėms ligoms gydyti, pvzūminis nefritas, erysipelas ir opos (Wangir kt., 2018). tai yraplačiai naudojamas klinikose kaip vienas vaistas arba sudėtinis receptas.Šiuolaikinė farmakologija parodė, kad ji turi įvairiųbiologinio aktyvumo, įskaitant priešuždegiminį, antibakterinį, antivirusinis, antioksidantas, priešnavikinis, antidiabetinis, antihiperlipideminis,antiandrogeninė alopecija, vėmimą, senėjimą stabdanti irnutukimo veikla ir neuroprotekcinė, kepenų apsauga irkraujagysles atpalaiduojantis poveikis (Dongir kt., 2017). Be to, buvopranešė, kadForsythiae fructusturi odos balinimo, anti-atopinis dermatitas ir senėjimą stabdantis poveikis. Anot Taivanovisos šalies receptų duomenų bazė,Forsitija Fructusbuvoįtraukta į 10 populiariausių žolelių, dažniausiai vartojamų atopijai gydytidermatitas (15,9 proc.), dilgėlinė (11.{3}},4 proc.) ir spuogai (22,3 proc.)(Dongasir kt., 2017). Forsythiae fructussudėtyje yra saponinų,flavonoidai,ir alkaloidai bei oleanolio rūgštis, kuri turi naudingąfarmakologinis poveikis. Be to, jame yra arctigenino irmatairezinolis. Kaip fiziologiškai aktyvios odos sudedamosios dalys, josyra tirozinazės inhibitoriai, kurie veikia melanino metabolizmąsukeltas kelias - melanocitus stimuliuojantis hormonas ( -MSH)ir patraukia dėmesį kaip kosmetinės balinimo medžiagos(Yang & Choe, 2011).Tribuli fructus, kurio džiovinti vaisiaiTribulus terrestrisL, buvo pranešta, kad turi farmakologiniųseksualinės funkcijos gerinimo, profilaktikos ir gydymo veiklaširdies ir kraujagyslių ligų, gerinant neuroprotekciją iratmintis. Jis taip pat turi antidiabetinį, priešuždegiminį irantioksidacinis poveikis (Chhatreir kt., 2014). Tribuli fructusekstrakte yra daug diosgenino, tigogeino, įvairiųsaponinai ir kt. Šie saponinai yra svarbiausios bioaktyvios medžiagoskomponentai, atsakingi už įvairius biologinius efektus, pvzafrodiziakinis, antihipertenzinis ir apsauginis poveikispoveikis nuo išemijos-reperfuzijos pažeidimo ir priešvėžinio poveikio,antibakterinė ir priešgrybelinė veikla (Chhatreir kt., 2014).
Kitos sudedamosios dalys yra furostanolis ir spirostanolio saponinai, polisacharidai, flavonoidiniai glikozidai, alkaloidai ir amidai. Be to, jis veiksmingas nuo atopinio dermatito žiurkėms ir turi priešuždegiminį poveikį (Chhatre ir kt., 2014). Buvo pranešta, kad Tribuli fructus ekstrakto senėjimą stabdantis poveikis padidina I tipo prokolageno ir elastino gamybą HS68 ląstelėse, skatina lipidų kaupimąsi adipocituose ir galiausiai pagerina odos raukšles ir elastingumą (Kim et al., 2016). ). Sibiro ženšenis (Acanthopanax senticosus) yra lapuočių krūmas, priklausantis Oga šeimai kartu su ženšeniu ir laukiniu ženšeniu. Sibiro ženšenis turi daug panašumų su ženšeniu ir yra naudojamas kaip žolinis vaistas nuo insulto, aukšto kraujospūdžio ir diabeto. Sibiro ženšenio ekstraktas rytų medicinoje naudojamas jau seniai, o farmakologiniai ir fiziologiniai rezultatai buvo pateikti įvairiuose tyrimuose dar visai neseniai. Iki šiol identifikuoti Sibiro ženšenio komponentai yra eleutero pusės A, B, C, D, E, I, K, L ir M, sezaminas, chiizanozidas, kavos rūgštis, chlorogeno rūgštis, kampesterolis, vitaminai ir mineralai (Park). ir kt., 2010).
Jame yra triterpenoidinių saponinų, lignanų, kumarinų irflavonoidų, tarp kurių fenoliniai junginiai laikomi aktyviausiais komponentais (Huang ir kt., 2011). Yra daug pranešimų apie Sibiro ženšenio ekstrakto veiksmingumą ant odos.Anti-raukšlių poveikis,antioksidacinis poveikis,kolageno sintezė, ir buvo pranešta apie kolagenazę slopinantį aktyvumą prieš fotosenėjimą (Park ir kt., 2010). Buvo pranešta, kad Sibiro ženšenio ekstraktas reguliuoja IV tipo kolageno sintezę, paveikdamas epidermio kamieninių ląstelių proliferacinį gebėjimą ir storindamas epidermį (Choi ir kt., 2016). Saliamono antspaudas – tonizuojantį poveikį turintis Polygonatum odoratum (sinonimas: P.officinale) šakniastiebis, Rytų medicinoje naudojamas širdies nepakankamumui ir diabetui gydyti. Saliamono antspaudas yra anticiklinis ir priešnavikinis; malšina širdies įtampą, yra diuretikas, energijos suteikiantis, hipoglikeminis, raminantis ir tonizuojantis; jis vartojamas plaučių ligoms, įskaitant tuberkuliozę ir virškinimo trakto sutrikimus, gydyti (Haroon ir kt., 2012). Be to, jis plačiai naudojamas gydant kraujo sutrikimus; jis teigiamai veikia inkstų latakus ir apsaugo nuo žilų plaukų, regėjimo problemų, galvos svaigimo ir grybelio. Tai nervų tonikas ir naudojamas diabetui gydyti (Haroon ir kt., 2012). Saliamono antspaudas pasižymi dideliu fenolio kiekiu ir antioksidaciniu aktyvumu. Homoizoflavanonai iš Saliamono antspaudo slopina pažangių glikozilinimo galutinių produktų susidarymą. Saliamono antspaudas parodė stiprų žarnyno imuninės sistemos reguliavimo aktyvumą ir gebėjimą sukelti osteoklastų diferenciaciją ir lektino sukeltą apoptozę. P. odoratum lapų ekstrakto atveju žaizdų gijimo funkcija pateikiama kaip pavyzdys (Fathi ir kt., 2014). Ponciri fructus immatures yra neprinokęs Poncirus trifoliata Rafinesque vaisius, priklausantis Rutaceae šeimai (Jung ir kt., 2016). Pastaruoju metu buvo pranešta apie priešuždegiminį ir padidėjusį jautrumą mažinantį poveikį, o riebalų dumblo ekstrakto poveikis sukelia vėžio ląstelių apoptozę (Lee ir kt., 2008). Yra žinoma, kad Ponciri fructus yra veiksmingas gydant atopinį dermatitą. Buvo pranešta apie Ponciri fructus ekstraktą ant odos, jo poveikį atopiniams dermatitams, pvz., epidermio hiperkeratozei, odos edemai ir citokinams. Visų pirma buvo pranešta apie reikšmingą niežulio, putliųjų ląstelių skaičiaus, IgE gamybos ir nervų augimo faktoriaus ekspresijos sumažėjimą. Ponciri fructus ekstraktai parodė veiksmingą priešuždegiminį poveikį nuo atopinio dermatito ir antipruritinį veiksmingumą reguliuojant imuninius mechanizmus. Be to, žinoma, kad Ponciri fructus ekstrakto vartojimas per burną yra naudingas alerginių ligų gydymui ir profilaktikai (Hwang ir kt., 1997). Ženšenis yra plačiai naudojamas tradicinis augalinis vaistas, turintis daug funkcijų. Ženšenis buvo naudojamas dėl priešuždegiminių, antioksidacinių, priešnavikinių ir senėjimą stabdančių veiklų (Choi, 2008; Kim & Ko, 2020). Buvo atlikta daug tyrimų apie ženšenio veiksmingumą odai (He ir kt., 2018). Tarp jų yra daug pranešimų apie saponinus ir ginsenozidus, kurie yra tipiškos ženšenio sudedamosios dalys. Saponinai yra junginiai, randami daugumoje augalų ir egzistuoja įvairiomis formomis. Saponinai gali pagreitinti įvairią biologinę veiklą, pvz., hemolizę, ir antibakterines, antivirusines ir antioksidacines funkcijas. Be to, saponinai turi priešuždegiminių savybių, kurios gali sumažinti patinimą ir odos uždegimą. Ginzenozidai padidina interleukiną (IL){20}} – vieną iš uždegiminių citokinų, skatinančių angiogenezę ir kraujagyslių endotelio augimo faktorių bei kaupimąsi.pelių odos nudegimų vietose. Taip pat buvo pranešta apie jų poveikį makrofagus pašalinant iš odos žaizdų ir skatinantį žaizdų gijimą (Kim ir kt., 2011).
Šio tyrimo tikslas buvo išsiaiškinti mišraus žolelių ekstrakto (MHE) odos senėjimą stabdantį poveikį in vitro ir in vivo.
Metodai
1. In vitro veiksmingumo vertinimas
1) MHE rengimas
Džiovinti Forsythia suspense vaisiai, džiovinti Tribulus Terrestris L. vaisiai, Sibiro ženšenis (Acanthopanax senticosus (Eleuthero) šaknis), Saliamono antspaudas (Polygonatum Officinale šakniastiebis ir šaknis), Poncirus Trifoliata Rafinesque (Panax) vaisiai pirktas iš vietinės rinkos. Remiantis tradicinės kinų medicinos (TCM) "Yin-Yang" ir "Penkių elementų" teorija, Forsythia suspensa, Tribulus terrestris L. ir Poncirus trifoliata Rafinesque, atitinkantys "Yang" ir Sibiro ženšenį, ženšenį ir Saliamono antspaudą, atitinkantį "Yang" Buvo pasirinktas „Yin“. Šešios vaistažolės vėl buvo suskirstytos į charakteristikas, atitinkančias penkis elementus (mediena, ugnis, vanduo, metalas arba auksas ir žemė arba dirvožemis). Šios vaistažolės buvo sumaišytos tokiu pačiu santykiu, kad būtų išlaikytas kiekvieno elemento balansas, o Poncirus trifoliata ir ženšenis, atitinkantis žemę, buvo derinami su kitais elementais, kad atitiktų proporcijas (1 lentelė). Šeši vaistiniai augalai buvo ekstrahuoti 30 procentų etanolyje ultragarsu (20 kHz, 2 val.). Koncentravus sukamuoju garintuvu, buvo pridėta 30 procentų (t/v) butileno glikolio ir tirpalas praskiedžiamas, kad gautų ekstraktą, kuriame yra 1 procentas kietųjų medžiagų.
1 lentelė. Vaistažolių mišinių sudėtis
2) Ląstelių kultūros ir reagentai
Žmogaus pirminės fibroblastų ląstelės (HDFn) buvo gautos iš PromoCell (Normal Human dermal fibroblasts juvenile foreskin, C-12300; PromoCell, Vokietija). Ląstelių kultūros su Dulbeccomodifikuotas Eagle's vidutinio didelio gliukozės kiekis (DMEM high glucose, SH30243.01, Hyclone, Cytiva), kuriame yra 10 procentų (t/v) galvijų vaisiaus serumo (FBS, SH30084.03, Hyclone) ir 1 procentas antibiotikųpriešgrybeliniai agentai (Anti-anti, 15240-062, Gibco, JAV) buvo auginami 37 laipsnių temperatūroje 5 procentų CO2 inkubatoriuje.
3) Ląstelių gyvybingumo tyrimas (MTT tyrimas)
MTT tyrimas matavo ląstelių gyvybingumą ir nustatė MHE citotoksiškumą. Ląstelės buvo pasėtos po 5 × 103 ląstelių/šulinėlių į 96-šulinėlių plokštelę ir kultivuojamos 24 valandas ląstelių kultūrojesąlygos. Tada terpę išmetėme, ląsteles nuplovėme fosfatiniu buferiniu tirpalu (PBS, 21-040-CV; Corning, JAV), patalpinome ląsteles į naują terpę be serumo irapdorojo ląsteles koncentracijomis {{0}}.01, 0.025, {{10}}.05. 0,10, 0,25, 0,50, 0,75 ir 1.{15}} proc. mėginių, ir ląsteles inkubavo 24 ir 48 val. Tada įpylėme 100 μL MTT tirpalo(0,5 proc., 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil-2H tetrazolio bromidas) kiekvienam gerai ir inkubavo ląsteles dar 2 valandas. Išėmę auginimo terpę, įpylėme 100 μL 100 procentų dimetilsulfoksido (DMSO), ląsteles pakratėme 10 minučių ir išmatavome absorbciją esant 590 nm mikroplokštelių skaitytuvu (Epoch 2 mikroplokštelių skaitytuvas, BioTek, JAV).
4) I tipo prokolageno kartos matavimas
I tipo prokolageno koncentracija ląstelių auginimo terpėje buvo matuojama naudojant prekyboje parduodamą ELISA rinkinį (Procollagen Type I C-peptide EIA Kit, MK101, TaKaRa).Bio, Japonija) pagal gamintojo instrukcijas. Kiekvienas mėginys buvo analizuojamas trimis pakartojimais.
5) iRNR ekspresijos lygių matavimas naudojant kiekybinį metodą
Realaus laiko polimerazės grandininė reakcija (qRT PGR) Ląstelės buvo pasėtos po 1 × 105 ląstelių/šulinėlių į 6-šulinėlių plokšteles. HDFn ląstelės buvo kultivuojamos 24 valandas; tada ląstelės buvo sinchronizuotos su DMEM didelės gliukozės kiekiu be FBS 24 valandas. Terpė buvo pakeista terpe be serumo ir apdorota 0.05, 0.10, 0,25, 0,5 ir 0,75 proc. 24 ir 48 valandas. RNR ekstrahavimas buvo atliktas su HDFn ląstelėmis, naudojant RNR ekstrahavimo rinkinį (TaKaRa MiniBEST Universal RNR ekstrahavimo rinkinys, 9767A, Takara Bio, JAV), o mėginiai buvo išvalyti pagal gamintojo protokolus. Išskirta RNR (1 ug) buvo susintetinta į cDNR, naudojant TR reagentų rinkinį (PrimeScriptTM RT reagentų rinkinys su gDNA Eraser, RR047A, Takara Bio, JAV). Naudojant SYRB Green Realtime PCR pagrindinį mišinį (Power SYBRTM Green PCR Master Mix, 4367659, Applied BiosystemsTM, JAV) ir QuantStudioTM 3 (QuanStudioTM 3 Real-Time PCR instrumentą, A28132, Thermo Fisher Scientific, JAV) realaus laiko PCR aparatą genų ekspresijos lygiai buvo standartizuoti pagal namų tvarkymo geno gliceraldehido 3-fosfato dehidrogenazę (GAPDH). Šiame tyrime naudojami pradmenys pateikti 2 lentelėje. Eksperimentai buvo atlikti dviem egzemplioriais trims nepriklausomiems kartojimams. Lydymosi kreivės analizėbuvo atliktas kiekvienam pradmenų rinkiniui.
6) Western blot analizė
Baltymų lizatai iš fibroblastų ląstelių buvo ekstrahuoti lizės buferiu (EzRIPA Lysis Kit, WSE{0}}; ATTO Corporation, Japonija). Baltymų kiekiui nustatyti buvo naudojamas Bradfordo metodas.Vienodai kiekiai baltymų buvo sumaišyti su 5X mėginio buferiu (TLP-102-01, TransLab, Korėja) ir denatūruojami 99 laipsnių temperatūroje 10 min. Baltymai buvo atskirti 10 procentų SDS-PAGE esant 150 V įtampai 150 minučių ir perkelti į PVDF membranas (Clear Blot Membrane, 3322546, ATTO Corporation, Japonija). Membranos buvo blokuojamos 0,5 proc. galvijų serumo albuminu (BSA, A4503-10G; Sigma) 1 valandą ir plaunamos Tris buferiniu fiziologiniu tirpalu, kuriame buvo Tween-20 (10X TBS su Tween 30, TR{ {17}}; Biosesang, Korėja) tris kartus; tada membranos buvo inkubuojamos su pirminiais antikūnais prieš MMP-1 (rekombinantinis anti-MMP1 antikūnas [EP1249Y], ab134184, Abcam, JAV), -aktinas (anti- -aktinas (N-tern) ir PA0207 (Abfrontier). , Korėja) 4 laipsnių temperatūroje per naktį. Po skalavimo membranos buvo apdorotos anti-triušio IgG krienų peroksidaze (HRP) (Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody, #7074; Cell Signaling Technology, JAV) kaip antriniu antikūnu. 1 val. Chemiliuminescencinis aptikimas buvo atliktas naudojant ECL Prime Western blot aptikimo reagentą (GE Healthcare, JAV) ir ATTO WSE-6100 LuminoGraph (ATTO Corporation, Japonija). Kiekybinei analizei užfiksuoti vaizdai buvo analizuojami naudojant Image programinė įranga (CS analizatorius 4, ATTO korporacija, Japonija).
7) Statistinė analizė
Statistinė analizė atlikta naudojant GraphPad Prism 3.03 versiją, skirtą Windows (GraphPad Software, JAV). Rezultatai pateikiami kaip 3 eksperimentų vidurkis ± SD. NeporuotasBuvo naudojamas Stjudento t testas ir p reikšmės<0.05 were considered statistically significant.
2. In vivo veiksmingumo vertinimas
1) Reagentai ir kosmetikos gaminiai
Bandomieji produktai buvo odos losjonas, esencijos kremas ir paakių kremas; tuose kremuose buvo 1 procentas MHE kaip veikliosios medžiagos, nurodytos 3 lentelėje.
2) Dalyviai
Visi savanoriai sutiko su testo tikslu ir turiniu ir prieš pradėdami testą pasirašė rašytines informuoto sutikimo formas. Jiems nebuvo leista naudoti jokių kitų odos priežiūros priemonių, o bandomieji produktai buvo tepami ant veido odos – paakių kremo (tik ant varnų pėdų) – esencijos kremo – losjono kremo eilės. Tyrimas buvo atliktas pagal Helsinkio deklaracijos gaires ir patvirtintas Korėjos nacionalinio bioetikos politikos instituto institucinės peržiūros tarybos (#P01-202108-13-001).
3) Veiksmingumo testas
Šiame tyrime dalyvavo 21 moteris nuo 45 iki 55 (vidurkis ± SD 50,81 ± 2.86) metų su normalia oda. Bandomieji produktai buvo naudojami du kartus per dieną (ryte ir vakare) 4 savaites. Dalyviai į tyrimų centrą lankėsi kas 2 savaites, o bandymų aikštelės buvo matuojamos laboratorijoje, kur aplinkos temperatūra ir santykinė oro drėgmė buvo atitinkamai palaikoma 22±2 laipsniai ir 50±5 proc. Nusiplovę veidą dalyviai aklimatizavosi 20 minučių laboratorijoje ir buvo vertinami dėl odos drėkinimo, elastingumo, tekstūros ir varnų pėdų. Odos drėkinimas buvo matuojamas naudojant Corneometer® CM825 (C plus K electronic GmbH, Kelnas, Vokietija); elastingumas buvo matuojamas naudojant Cutometer® MPA 580 (C plus K electronic GmbH, Kelnas, Vokietija), o tekstūra ir varnų pėdos buvo išmatuotos naudojant DermaTOP 3D-HE (EOTECH SAS, prancūzų kalba).
4) Nepageidaujamų odos reakcijų įvertinimas
Nepageidaujamos reakcijos buvo tikrinamos kiekvieną apsilankymą klausimynu ir stebėjimu. Vertinant subjektyvūs parametrai buvo klasifikuojami kaip niežulys, perštėjimas, kutenimas, deginimas, perštėjimas,sustingimas ir tempimas, o objektyvūs parametrai buvo klasifikuojami kaip eritema, edema, pleiskanojimas ir papulė.
5) Statistinė analizė
Duomenys buvo analizuojami naudojant SPSS® programinę įrangą. Skirtumų tarp laiko taškų statistinis reikšmingumas nustatytas naudojant kartotinių matavimų analizę; p reikšmė<0.05 buvo laikomas statistiškai reikšmingu. Pokyčio rodiklis (procentais) nuo pradinės vertės buvo apskaičiuotas taip:
Pokyčio rodiklis=((po gydymo – pradinis lygis) / pradinis lygis) × 100 proc.
