Santrauka:Egipto mandarinų (Citrus reticulata Blanco, F. Rutaceae) sėklų fitocheminis tyrimas davė trylika žinomų junginių, 1–13. Išskirtų junginių struktūros buvo priskirtos naudojant 1D ir 2D BMR ir HRESIMS analizes. Šių junginių farmakologiniam aktyvumui apibūdinti buvo pritaikyti keli integruoti virtualia atranka pagrįsti ir molekulinės dinamikos modeliavimu pagrįsti eksperimentai. Dėl to 2, 3 ir 5 junginiai buvo tariamai identifikuoti kaip hialuronidazės, ksantino oksidazės ir tirozinazės inhibitoriai. Tolesnis bandymas in vitro buvo atliktas siekiant patvirtinti in silico pagrįstus eksperimentus, siekiant pabrėžti šių flavonoidų, kaip perspektyvių hialuronidazės, ksantino oksidazės ir tirozinazės inhibitorių, potencialą, kurių IC50 vertės svyruoja nuo 6,39 ± 0,36 iki 73,7 ± 2,33 µM. . Šis tyrimas atskleidė Egipto mandarinų apelsinų atliekų (ty jo sėklų) kaip odos sveikatą stiprinančios natūralios medžiagos potencialą. Be to, jis atskleidė integruoto atvirkštinio prijungimo virtualaus atrankos ir MDS pagrįstų eksperimentų pritaikymą efektyviai prognozuojant natūralių produktų biologinį potencialą.

Cistancho glikozidas taip pat gali padidinti SOD aktyvumą širdies ir kepenų audiniuose bei žymiai sumažinti lipofuscino ir MDA kiekį kiekviename audinyje, efektyviai pašalindamas įvairius reaktyviuosius deguonies radikalus (OH-, H2O₂ ir kt.) ir apsaugodamas nuo DNR pažeidimo. OH-radikalais. Cistanche feniletanoidiniai glikozidai pasižymi stipriu laisvųjų radikalų šalinimo gebėjimu, didesne redukcijos savybe nei vitaminas C, pagerina SOD aktyvumą spermos suspensijoje, mažina MDA kiekį ir turi tam tikrą apsauginį poveikį spermos membranos funkcijai. Cistanche polisacharidai gali padidinti SOD ir GSH-Px aktyvumą eksperimentiškai senstančių pelių eritrocituose ir plaučių audiniuose, kuriuos sukelia D-galaktozė, taip pat sumažinti MDA ir kolageno kiekį plaučiuose ir plazmoje bei padidinti elastino kiekį. geras sugeriantis poveikis DPPH, pailgina senstančių pelių hipoksijos laiką, pagerina SOD aktyvumą serume ir lėtina fiziologinę plaučių degeneraciją eksperimentiškai senstančiose pelėse Dėl ląstelių morfologinės degeneracijos, eksperimentai parodė, kad Cistanche pasižymi geru antioksidaciniu gebėjimu. ir gali būti vaistas, skirtas odos senėjimo ligų prevencijai ir gydymui. Tuo pačiu metu Cistanche esantis echinakozidas turi didelį gebėjimą sunaikinti DPPH laisvuosius radikalus ir geba pašalinti reaktyviąsias deguonies rūšis ir užkirsti kelią laisvųjų radikalų sukeltam kolageno skaidymui, taip pat turi gerą atkuriamąjį poveikį timino laisvųjų radikalų anijonų pažeidimams.

Spustelėkite Cistanche tablečių privalumai

【Daugiau informacijos: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

1. Įvadas

Mandarinai, C. reticulata, yra vieni puikiausių citrusinių augalų, skirtų šviežiam naudojimui [1]. Jie dažnai pristatomi kaip "mandarinai"; tačiau „mandarinas“ yra populiaresnis pavadinimas. Gamtoje paplitę keli mandarinų rūšių hibridai ir atmainos [1]. Garsiausios, sudėtingiausios rūšys yra C. unshiu Marcovitch, C. nobilis Loureiro, C. deliciosa Tenore ir C. reticulata Blanco [1,2]. Mandarinai yra vieni iš pagrindinių citrusinių vaisių, skinamų daugelyje šalių. Nors šie augalai daugiausia naudojami desertui, jie turi didelę komercinę reikšmę dėl savo eterinių aliejų [3]. Citrusiniai skoniai naudojami gėrimuose, konditerijos gaminiuose, sausainiuose ir desertuose [4]. Taip pat C. reticulata žievelė naudojama gėrimų kvapiosioms priemonėms [4].

Atvirkštinis prijungimas yra virtualaus atrankos metodo tipas, kuriuo galima manipuliuoti, kad būtų galima numatyti galimus molekulinius taikinius tam tikroje junginio struktūroje. Anksčiau mes naudojome šį efektyvų virtualų atrankos metodą, norėdami nustatyti geriausius baltymų taikinius keliems izoliuotiems natūraliems produktams [5]. Tačiau doko balai, gauti atlikus šį preliminarų atrankos etapą, suteikia tik šiek tiek informacijos apie struktūrinį baltymų taikinių ir užklausos junginio struktūros papildomumą [6]. Atitinkamai, molekulinės dinamikos modeliavimo (MDS) eksperimentai, įskaitant absoliučią surišimo laisvąją energiją (∆Gbinding), suteikia tikslesnius ir patikimesnius rezultatus, kuriuos galima pasirinkti in vitro bandymams. Čia mes laipsniškai chromatografiškai izoliavome C. reticulata sėklas, kad gautume supratimą apie pagrindines fitochemines medžiagas šiose atliekose. Vėliau mes ištyrėme, ar šios fitocheminės medžiagos turi tam tikrą farmakologinį poveikį, atlikdami joms laipsnišką silicio analizę, kuri buvo pradėta visapusišku atvirkštiniu prijungimu ir baigėsi keliais MDS eksperimentais. Bioaktyvių fitocheminių medžiagų, gautų iš C. reticulata sėklų, potencialas atskleidžia didelę valgomųjų vaisių atliekų produktų talpą, nes tai yra didžiulis sveikatą stiprinančių medžiagų rezervuaras.

2. Medžiagos ir metodai

2.1. Augalinė medžiaga

C. reticulata vaisiai buvo surinkti 2021 m. sausio mėn. iš vietinio Beni-Suef (Egipto) regiono ir patvirtino vyresnysis botanikas prof. dr. Abd El-Halim A. Mohammed Floros ir fitotaksonomijos tyrimų skyriaus; Sodininkystės tyrimų institutas; Dokki; Kairas; Egiptas). Vaisių egzempliorius buvo laikomas Farmakognozijos skyriuje su čekio numeriu 2021-BuPD 80; Farmacijos mokykla; Beni-Suef universitetas; Egiptas).

2.2. Cheminės medžiagos ir reagentai

Etilo acetatas (EtOAc), metanolis (MeOH), n-heksanas (n-Hex), etanolis (EtOH), dichlormetanas (DCM) ir n-butanolis (n-BuOH) buvo įsigyti iš El-Nasr Company, Egiptas. Sigma Aldrich, Sent Luisas, MO, JAV, pateikė deuteruotų tirpiklių BMR analizei, taip pat didelio grynumo tirpiklius HPLC, spektroskopinei ir chromatografinei analizei (pvz., metanolis-d4 (CD3OD), dimetilsulfoksidas-d6 (DMSO), chloroformas -d (CDCl3), metanolis HPLC, HPLC kokybės vanduo ir HPLC kokybės acetonitrilas). Chromatografinei izoliacijai naudoti Sephadex LH20 (0,25–0,1 mm, GE Healthcare, Sigma-Aldrich; CA, JAV) ir silikagelį (E-Merck, Sigma-Aldrich, CA, JAV) buvo naudojami. Vakuuminei skysčių chromatografijai buvo naudojamas silikagelis, skirtas TLC (Pharmaceuticals and Chemicals; El-Nasr Company; Kairas, Egiptas) (VLC). TLC tyrimams buvo naudojamas iš anksto padengtas silikagelis (E-Merck, Darmštatas, Vokietija). Susidariusios dėmės buvo identifikuojamos paraanisaldehidu, pakaitinus 110 ◦C [7]. Visos medžiagos biologiniams tyrimams buvo iš Sigma Chemical Company (SCC; CA, JAV).

2.3. Spektrinės analizės

BMR signalai buvo gauti esant 400 1H-BMR ir 100 MHz 13C-BMR. CDCl3-d, CD3OD-d4 ir DMSO-d6 tirpiklio smailės buvo naudojamos kaip atskaitos signalai. BMR signalas buvo gautas naudojant BMR aparatą Bruker Advance-III 400 MHz (Bruker AG-Billerica, Kalifornija, MA, JAV).

Didelės skiriamosios gebos masės duomenys buvo renkami naudojant Acquity-Ultra-Performance-Liquid Chromatography-machine, sujungtą su Quadrupole-Time-of-Flight-Hybrid-Mass-Spectrometer (Waters, Milford, MA, JAV). HPLC chromatografiniam atskyrimui atlikti buvo naudojamas Agilent/1260-Infinity-preparative-HPLC.

2.4. C. reticulata sėklų ekstrakto paruošimas

C. reticulata sėklos (1 kilogramas) buvo perkamos šviežios ir išdžiovintos ore pavėsyje. Po to sėklos buvo sutarkuotos šlifavimo mašina (Henanas, žemyninė Kinija). Tada miltelių pavidalo produktas buvo kruopščiai ekstrahuotas 7 0 procentų EtOH (1 L × 5). Gautas skystas ekstraktas buvo sukoncentruotas naudojant rotacinį garintuvą (Buchi-Rotavapor-R-300, ColeParmer, Vernon Hills, IL, JAV) vakuume 45 ◦C temperatūroje, kad būtų gauta 100 g neapdoroto sauso ekstrakto, kuris po to buvo padalintas naudojant eilę didėjančio poliškumo tirpiklių: n-Hex-DCMEtOAc-n-BuOH. I (240 g), II (5,0 g), III (3,0 g) ir IV (6,0 g) frakcijos gautos išgarinant atskirtą organinę fazę sumažintame slėgyje. Visi ekstraktai ir frakcijos buvo laikomi 4 ◦C temperatūroje, kad būtų galima atlikti tolesnę fitocheminę ir biocheminę analizę.

2.5. C. reticulata sėklų pagrindinių natūralių produktų išskyrimas 

TLC-silikagelio kolonėlė buvo naudojama I frakcijai (20 g) paveikti normalią VLC. Buvo naudojamas nuoseklus EtOAc ir n-Hex eliuavimas (0–100 proc., didėjant 5 proc.). Surinkus identiškas frakcijas ir jas išgarinant sumažintame slėgyje, gautos trys subfrakcijos (I1–I3). Kitoje silikagelio kolonėlėje subfrakcija I1 (1,0 g) buvo plačiai frakcionuota. Chromatografinis eliuavimas buvo atliktas naudojant n-Hex į EtOAc, gradiento mišinius (0-10 proc., 1 proc. kylantis, kiekvienas po 100 ml), kad gautų 13 junginį (10 mg).

I2 subfrakcija (50 mg) toliau buvo chromatografuojama naudojant silikagelį-60 (100 × 1 cm, 20 g). Chromatografinė procedūra buvo atlikta naudojant DCM: MeOH, izokratinį mišinį (0,5 proc., 500 ml), kad būtų gauti 8 (20 mg) ir 9 (15 mg) junginiai. Subfrakcija I3 buvo šiek tiek frakcionuota ant silikagelio 60 (100 × 1 cm, 20 g). Gautas eliuavimas naudojant DCM:MeOH, izokratinį mišinį (0,5 proc., 500 ml), kad gautų 10 (20 mg).

TLC silikagelio kolonėlė buvo naudojama II frakcijai (2,5 g) atskleisti. DCM: EtOAc (0–100 proc., didėja 5 proc.) buvo naudojamas mėginiams eliuuoti. Susidariusios nuotekos buvo priimtos 250 ml dalimis. Gautos identiškos frakcijos ir sumažintame slėgyje sumažintos iki dviejų subfrakcijų (II1–II2). Kitoje silikagelio kolonėlėje subfrakcija I1 (1,0 g) buvo plačiai frakcionuota. 5 junginys buvo išplautas naudojant DCM: EtOAc (0-10 proc., 1 proc. kylantis, po 100 ml) (10 mg).

Subfrakcija I2 (50 mg) toliau buvo chromatografuojama naudojant silikagelį60 (100 × 1 cm, 20 g). Chromatografinis eliuavimas buvo taikomas naudojant DCM su MeOH (izokratinis eliuavimas; 0,5 proc., 500 ml), kad būtų gauti 11 (20 mg) ir 12 (15 mg) junginiai.

Naudojant įprastą VLC, IV frakcija (6.{1}} g) buvo atskirta naudojant silikagelį. DCM: EtOAc (0–100 proc., 5 proc. kylantis, po 250 ml) buvo naudojamas mėginiams eliuuoti. Chromatografinės nuotekos buvo gaunamos po 250 ml.

Identiškos frakcijos buvo sugrupuotos ir sumažintame slėgyje sumažintos, kad gautų penkias subfrakcijas (IV1–V5); IV1, IV2, IV3 ir IV4 subfrakcijos buvo tik šiek tiek chromatografuotos Sephadex-LH20 kolonėlėje, eliuuotame MeOH, kad gautų 4 (30 mg), 6 (50 mg), 7 (70 mg) ir 1 (15 mg, atitinkamai, o subfrakcija IV5 buvo reikšmingai gryna (10 mg).

2.6. In Silico tyrimas

2.6.1. Atvirkštinis prijungimas

Tikėtini atskirtų flavonoidų molekuliniai taikiniai buvo nustatyti atliekant virtualų jų struktūrų patikrinimą, priklausomai nuo atvirkštinio prijungimo prie beveik visų baltymų, pateiktų Baltymų duomenų banke; PBP.

Šiam veiksmui buvo naudojama internetinė platforma „IdTarget“. Šioje virtualios struktūros menkos atrankos programoje naudojamas konkretus atvirkštinis prijungimo metodas, būtent DivideConquer-Docking, kuris sukuria ribotus persidengiančius tinklus, todėl baltymų tyrinėjimas tampa labiau suvaržytas. Dėl to per trumpą laiką jis gali atlikti daugybę prijungimų [8]. Gauti balai buvo apibūdinti kaip reitingų sąrašas nuo blogiausių iki geriausių. Norėdami nustatyti optimalius baltymų taikinius kiekvienai konkrečiai struktūrai, kaip ribinę vertę naudojome –10 kcal/mol afiniteto balą (1 lentelė).

Molekulinės dinamikos modeliavimo (MDS) eksperimentai buvo atlikti, kaip anksčiau pranešė Alhadrami ir kt. 2021 m. [6]. MDS eksperimentams atlikti buvo naudojamas Maestro programinės įrangos MDS įrenginys (ty Desmond v. 2.2; Hamburgas, Vokietija) [9–11]. OPLS-Force-Field buvo naudojamas modeliavimo važiavimams.

Baltymų struktūrų paruošimas buvo atliktas pagal System-Builder algoritmą, kuriame jie buvo supakuoti į ortorombinę vandens dėžę (20 Å3 ), naudojant TIP3P vandens modelį kartu su Na plus ir Cl− jonais, {{ 16}}.15 M už kiekvieną iš jų. Tada optimizuotos modeliuotos struktūros buvo preliminariai subalansuotos 10 ns. Ligandų struktūros buvo automatiškai parametruojamos struktūros paruošimo etape pagal OPLSForce-Field. Metalų turintys baltymai, tokie kaip MMP, kurių veiksmingoje vietoje yra histidino-Zn plius 2 kompleksas, turėtų būti parametruojami baltymų formavimo etape. Norėdami tęsti, heteroatomams, tokiems kaip Zn (generuoti heterogenines būsenas), reikia nustatyti hetero būseną. Ši funkcija yra maestro baltymų formavimo vedlio dalis. Šis žingsnis palengvins heteroatomo (ty Zn plius 2) tinkamos heterobūsenos arba koordinatės kovalentinės būsenos sukūrimą tinkle su baltymu, kad jėgos laukai, tokie kaip OPLS, galėtų greitai stebėti cinko atomą. Nano-scale Molecular Dynamics programine įranga (NAMD 3.0) [12] atliekamiems atkūrimams modeliuojamų struktūrų topologijas ir parametrus nustatė internetinė platforma Ligand Reader and Modeler. Harmoninės Tcl jėgos buvo naudojamos Zn plius 2 laikyti vietoje.

Surišimo laisvosios energijos (∆Gbinding) skaičiavimas buvo atliktas taip, kaip anksčiau aprašė Alhadrami ir kt. 2021 m. [6]. ∆Šlifavimas buvo atliktas naudojant laisvosios energijos perturbacijos (FEP) procedūrą [12], kuri išsamiai aprašyta Kim et al publikacijoje. Trumpai tariant, šis metodas apskaičiuoja reikiamą prieinamą energiją ∆Gbinding naudojant lygtį ∆Gbinding=∆GComplex − ∆GLigand. Kiekvieno ∆Šlifavimo vertė apskaičiuojama naudojant NAMD programą atskiruose eksperimentuose.

Visus įvesties failus galima paruošti per svetainę CharmmGUI. Tada failai buvo naudojami planuotiems ∆G surišimo skaičiavimams atlikti naudojant NAMD FEP protokolą. Pusiausvyra vėliau buvo nustatyta NPT (300 K, 1 atm, Langevin-Piston-Pressure "Complex" - "Ligand"), egzistuojant TIP3P vandens modeliui. Vėliau kiekvienai struktūrai buvo sukurti 10 ns FEP modeliai, o paskutinės 5 ns iš turimų energijos kiekių buvo apskaičiuotos galutiniam laisvos energijos kiekiui [12]. Galiausiai surišimo pozos buvo numatytos ir įvertintos naudojant VMD programą [13].

2.7. Hialuronidazės aktyvumo in vitro tyrimas

Hialuronidazę slopinantis aktyvumas buvo suformuotas pagal anksčiau nustatytą tvarką, suteiktą Chaiyana ir kt. 2019 [14]. Slopinamasis poveikis hialuronidazės aktyvumui buvo įvertintas pagal šią lygtį: hialuronidazės slopinimas (procentais )=(1 − A/B) × 100, kur A ir B yra hialurono rūgšties pobūdis po gydymo, kai yra arba nėra pavyzdį, atskirai. Kaip teigiama kontrolė buvo panaudota 6-O-palmitoil-laskorbo rūgštis. Eksperimentas buvo atliktas trimis egzemplioriais.

2.8. Ksantino oksidazės aktyvumo in vitro tyrimas

Ksantino oksidazės (XO) slopinimo potencialas buvo atliktas pagal anksčiau aprašytą metodą [15]. Spalva, susidariusi dėl vandenilio peroksido išsiskyrimo XO oksidacijos proceso metu, buvo išmatuota esant 570 nm, naudojant plokštelių skaitytuvą EPOCH™ „MICROPLATE READER (BIOTEK)“. Keturiasdešimt keturi mikrolitrai ksantino oksidazės buferio buvo sumaišyti su 2 µL ksantino substrato tirpalo ir 2 µL XO. L-mimozinas buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė. Šis eksperimentas buvo atliktas trimis egzemplioriais.

2.9. Tirozinazės aktyvumo tyrimas in vitro

Kiekvieno flavonoido tirozinazės slopinimo aktyvumas buvo stebimas naudojant DOPAchromo procesą, atitinkantį Momtaz ir kt. 2008 [16], kuri buvo pakeista iš Nerya ir kt. 2003 [17] ir Curto et al. 1999 [18]. Tirozinazę slopinantis aktyvumas buvo matuojamas pagal šią lygtį: slopinamasis aktyvumas (procentais )=(1 − A/B) × 100, (9) čia A ir B yra mišinio absorbcija, kai yra arba nėra atitinkamai išbandykite flavonoidą. Kiekvienas eksperimentas buvo atliktas trimis egzemplioriais.

3. Rezultatai ir aptarimas

3.1. Fitocheminis C. reticulata sėklų tyrimas

Naudojant UV, 1H ir DEPT-Q BMR, be palyginimo su literatūra ir kai kuriais autentiškais mėginiais, žinomi junginiai kaempferolis 1 [19], kaempferolis-40 -O- -Dgliukopiranozidas 2 [19], kaempferolis. -7-O- -D-gliukopiranozidas 3 [19], 2-hidroksigenisteinas 4 [19], hesperetinas 5 [19], 3000 (1000-O- - D-gliukopiranozil)-sacharozė 6 [20], 6(1000 -O- -Dfruktofuranozė)-30 (1"-O- -D-gliukopiranozil)-sacharozė 7 [20 ], 1-O-elaidoilglicerolis 8 [21], 1- O-oleoil-2-palmitoilglicerolis 9 [22], 1-O-oleoilglicerolis 10 [ 21], (E)-3-((4-metilheptiloksi)karbonil)akrilo rūgštis 11 [23], (E)-3-((6-metilnoniloksi) karbonil)akrilo rūgštis 12 [23] ir -sitosterolis 13 [24] (1 pav.) buvo identifikuoti iš neapdoroto C. reticulata sėklų etanolio ekstrakto. Visi nustatyti 11 ir 12 junginiai čia pirmą kartą buvo atskirti nuo Citrus genties ( 1 ir S1–S28 pav.. Verta pažymėti, kad, skirtingai nei plačiai paplitę flavanonai ir flavonai C. reticulata antžeminėse dalyse, įskaitant vaisius, flavonoliai buvo vyraujanti flavonoidų rūšis sėklose.

3.2. In Silico tyrimas

Norėdami apibūdinti išskirtų junginių biologinį aktyvumą, atlikome keletą in-silico analizių. Pirma, mes sutelkėme dėmesį į izoliuotus flavonoidus (1–5), atlikdami pradinį virtualų patikrinimą, nes flavonoidai yra gerai žinomi biologiškai aktyvūs augalų antriniai metabolitai. Be to, likę izoliuoti junginiai (6–13) yra įprasti pirminiai metabolitai, kurie greičiausiai neturi terapinio veiksmingumo.

1–5 flavonoidų struktūroms buvo atliktas virtualus patikrinimas, pagrįstas prijungimu, prieš beveik visus PBP esančius baltymus. Internetinė platforma, būtent idTarget, buvo panaudota šiai preliminariai virtualiai atrankai atlikti [8]. Atgauti balai buvo gauti kaip sąrašas nuo didžiausios neigiamos vertės iki mažiausio. Mes nustatėme galutinį –10 kcal/mol afiniteto balą kaip ribinę vertę, kad išskirtume gerus kiekvieno izoliuoto flavonoido tikslus (1–5). Nustatyta, kad keli įdomūs molekuliniai taikiniai tikriausiai yra geri šių susijusių junginių, įskaitant baltymų kinazes ir sintazes, taikiniai (1 lentelė).

Įdomu tai, kad tarp šių flavonoidų, hialuronidazės, ksantino oksidazės ir tirozinazės fermentų buvo pranešta apie tris bendrus molekulinius taikinius. Šie fermentai yra susiję su sveikos odos palaikymu [25–30], todėl preliminarus virtualus atrankos žingsnis tariamai nustatė, kad šie flavonoidai yra tikėtini odos priežiūrą skatinantys agentai.

3.3. Molekulinės dinamikos modeliavimas ir absoliutaus surišimo laisvosios energijos skaičiavimas

Norėdami dar labiau paremti preliminarų doku pagrįstą atrankos etapą, įvertinome 1–5 junginių absoliučią surišimo laisvąją energiją (∆G surišimą) su hialuronidazės, ksantino oksidazės ir tirozinazės fermentais, naudodami nuo MDS priklausomą metodą, būtent laisvosios energijos perturbacijos metodą ( FEP) [26,31].

Kaip parodyta 2 lentelėje, tik 2, 3 ir 5 junginiai sugebėjo pasiekti didžiausią afinitetą hialuronidazei, ksantino oksidazei ir tirozinazei, o ∆ šlifavimo vertės svyravo nuo –8,1 iki –9,9 kcal/mol. Likusių junginių ∆G surišimo vertės buvo didesnės nei –6 kcal/mol.

Kiti 50 ns MDS eksperimentai buvo atlikti siekiant ištirti 2, 3 ir 5 junginių sąveiką ir jungimosi stabilumą su hialuronidaze, ksantino oksidaze ir tirozinazės fermentais. Kaip pavaizduota 2 paveiksle, tiek 3 junginys, tiek bendrai kristalizuotas ligandas pasiekė panašų surišimo stabilumą fermento surišimo vietoje per MDS, kai RMSD buvo ~ 2,8 Å nuo pradinių prijungimo pozų. 2 0 junginio RMSD taip pat buvo panašus į 3 junginio RMSD iki 28,7 ns, kai jis pradeda šiek tiek skirtis nuo 3 junginio ir bendrai kristalizuoto ligando, kad pasiektų vidutinį RMSD 3,8 Å per visą MDS. Paskutinis momentinis vaizdas, gautas iš 2 ir 3 junginių MDS ir kokristalizuoto ligando, parodė, kad TYR-75, ASP-129 ir GLU-131 buvo dažniausiai sąveikaujančios aminorūgščių liekanos per H- surišimas.

Kalbant apie ksantino oksidazę, 3 junginys pasiekė stabilų surišimą savo aktyvioje vietoje per visą MDS, užfiksuodamas vidutinį 2, 6 Å RMSD, kuris buvo konvergencinis su bendrai kristalizuoto inhibitoriaus (RMSD ~ 2, 4 Å). Tokį stabilų 3 junginio surišimą akivaizdžiai lėmė H jungčių tinklas, kurį jis sukūrė su LYS-771, PHE-798, GLU-802, SER-876, ARG{{ 12}}, PHE-911, ARG-912 ir THR-1010 (3 pav.).

Galiausiai, 5 junginys taip pat buvo stabilus tirozinazės aktyviojoje vietoje per 50 ns MDS, o vidutinė RMSD vertė buvo 4, 9 Å, o tai buvo didesnė nei bendrai kristalizuoto inhibitoriaus (RMSD ~ 3, 8 Å). Kaip parodyta paskutinėje MDS gautoje nuotraukoje, 5 junginys galėjo sąveikauti su dviem Zn2 plius jonais panašiai kaip bendrai kristalizuotas inhibitorius. Be to, jis buvo stabilizuotas keliomis H jungtimis su LYS-198, GLY-209, TYR-362, ARG-374 ir THR-391 (4 pav. ).

【Daugiau informacijos: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】