Cistanche Deserticola ekstraktas padidina kaulų susidarymą osteoblastuose
Mar 05, 2022
Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com
Te-Mao Lia, Hsin-Chih Huangb, Chen-Ming Suc, Tin-Yun Hoa, Chi-Ming Wua, Wen-Chi Chend, Yi-Chin Fonga,eir Chih-Hsin Tangf,c
Abstraktus
Tikslai:Mes ištyrėme poveikįCistanche deserticola Ma. (CD) dėl kaulų formavimosi kultivuotų osteoblastų.MetodaiMineralizuotų mazgelių formavimosi tyrimas buvo naudojamas tiriant CD poveikį kaulų formavimuisi in vitro. Šarminės fosfatazės (ALP), kaulų morfogenetinių baltymų (BMP)-2 ir osteopontino (OPN) mRNR ekspresija buvo analizuojama kiekybine realaus laiko polimerazės grandinine reakcija. CD ekstrakto veikimo mechanizmas buvo tiriamas naudojant Western blot metodą. In vivo anti-osteoporozinis CD ekstrakto poveikis buvo įvertintas pelėms, kurioms buvo pašalintos kiaušidės.Pagrindinės išvadosCD ekstraktas neturėjo įtakos kultivuotų osteoblastų proliferacijai, migracijai ar žaizdų gijimui, tačiau padidino ALP, BMP-2 ir OPN mRNR bei kaulų mineralizaciją. Mitogeno aktyvuotos proteinkinazės (MAPK) arba branduolinio faktoriaus (NF)-kB inhibitoriai sumažino CD ekstrakto sukeltą kaulų formavimąsi ir ALP, BMP-2 ir OPN ekspresiją. Tačiau CD ekstraktas neturėjo įtakos osteoklastogenezei. Be to, CD ekstraktas užkirto kelią kaulų retėjimui, kurį sukėlė kiaušidžių pašalinimas in vivo.IšvadosCD gali būti nauja kaulų formavimo priemonė osteoporozei gydyti.
Įvadas
Kaulas yra sudėtingas audinys, sudarytas iš kelių tipų ląstelių, kuriose vyksta nuolatinis atsinaujinimo ir taisymo procesas, vadinamas „kaulų remodeliavimu“. Du pagrindiniai ląstelių tipai, atsakingi už kaulų remodeliavimą, yra osteoklastai, kurie rezorbuoja kaulą, ir osteoblastai, kurie sudaro naują kaulą. Kaulų remodeliavimąsi reguliuoja keli sisteminiai hormonai (pvz., prieskydinės liaukos hormonas, 1, 25-hidroksivitaminas D3, lytiniai hormonai ir kalcitoninas) ir vietiniai veiksniai (pvz., azoto oksidas, prostaglandinai, augimo faktoriai ir citokinai).[1]
Osteoporozė atsiranda tada, kai rezorbcija ir kaulų formavimasis yra nekoordinuoti, o perteklinis kaulų irimas viršija kaulų susidarymą.[2] Šiuolaikiniai osteoporozės gydymo būdai apima bisfosfonatus, kalcitoniną ir estrogeną, kurie yra kaulų rezorbcijos inhibitoriai, kurie palaiko kaulų masę slopindami osteoklastų aktyvumą.[3] Tačiau šių vaistų poveikis kaulų masės didinimui ar atsistatymui yra palyginti nedidelis, tikrai ne didesnis kaip 2 procentai per metus.[3] Todėl reikia kaulus formuojančių medžiagų, tokių kaip teriparatidas, skatinančių naujų kaulų formavimąsi ir koreguojančių trabekulinės mikroarchitektūros pokyčius, būdingus nusistovėjusiai osteoporozei.[4,5] Kadangi naujų kaulų formavimasis pirmiausia yra Osteoblastai, agentai, kurie veikia didindami osteoblastinės linijos ląstelių proliferaciją arba skatindami osteoblastų diferenciaciją, gali sustiprinti kaulų formavimąsi.[5,6]
Nors osteoporozės mechanizmai lieka neaiškūs, jie greičiausiai yra susiję su sumažėjusiu kaulų augimo faktorių, tokių kaip kaulų morfogenetiniai baltymai (BMP), prieinamumas arba poveikis[7]. BMP, kurios struktūriškai yra susijusios su transformuojančia augimo faktoriaus b superšeima, iš pradžių buvo identifikuoti pagal jų gebėjimą sukelti negimdinį graužikų kaulų susidarymą.[8] BMP vaidina svarbų vaidmenį kaulų formavime ir kaulų ląstelių diferenciacijoje, nes skatina šarminės fosfatazės (ALP) aktyvumą, taip pat proteoglikano, kolageno ir osteopontino (OPN) sintezę[9]. Neseniai atliktas tyrimas nustatė ryšį tarp osteoporozės ir specifinių BMP-2, ALP ir OPN genų polimorfizmų, o tai rodo, kad jie yra susiję su osteoporozės išsivystymu.[10]
Cistanche deserticola Ma.(Orobanchaceae; sutrumpinta kaip CD) yra vietinė žolė Kinijoje ir plačiai naudojama tradicinėje medicinoje kaip gydomoji priemonė dėl savo raminamųjų, nuskausminamųjų ir imunostimuliuojančių savybių.[11] Šiuolaikiniai farmakologiniai tyrimai parodė, kad CD ekstraktai gali stimuliuoti imunitetą[12], pašalinti laisvuosius radikalus[13] ir padidinti superoksido dismutazės aktyvumą[14]. Priešuždegiminiai ir antioksidaciniai vaistai gali gydyti osteoporozę didindami kaulų formavimąsi ir (arba) slopindami kaulų rezorbciją.[15,16] Tačiau CD poveikis kaulų ląstelių funkcijai dar nenustatytas. Čia pranešame, kad CD ekstraktas neturėjo įtakos kultivuotų osteoblastų proliferacijai, migracijai ar žaizdų gijimo aktyvumui, tačiau padidino ALP, BMP-2 ir OPN ekspresiją bei kaulų mineralizaciją. Be to, parodome, kad mitogeno aktyvuotos baltymų kinazės (MAPK) ir branduolinio faktoriaus (NF)-kB signalizacijos keliai gali būti susiję su CD sukeltu genų ekspresijos ir kaulų mineralizacijos padidėjimu. Priešingai, CD ekstraktas neslopino osteoklastogenezės in vitro. Pažymėtina, kad pelių gydymas CD ekstraktu užkirto kelią kaulų retėjimui, kurį sukėlė kiaušidžių pašalinimas in vivo . Todėl mūsų duomenys rodo, kad CD gali būti naudojamas kaulų formavimuisi stimuliuoti osteoporozei gydyti.
Cistanche deserticola
Medžiagos ir metodai
Cistanche deserticola ekstraktas ir medžiagos
CD ekstraktas buvo įsigytas iš Chuang Song-Zong Pharmaceutical Company (Kaohsiung, Taivanas). CD ekstrahavimas ir išskyrimas buvo stebimi, kaip aprašyta anksčiau (remdamiesi spektriniais duomenimis jie nustatė cheminę sudėtį, įskaitant beta-sitosterolį, daukosterolį, gintaro rūgštį, triakontanolį, akteozidą, betainą ir polisacharidą).[17] Triušio polikloniniai antikūnai, specifiniai p-ekstraląstelinėms signalo reguliuojamoms kinazėms (ERK), ERK, p-p38, p38, pc-Jun N-galinėms kinazėms (JNK), JNK, p-p65 ir p65, buvo įsigyti iš Santa Cruz Biotechnology ( Santa Krusas, JAV). Osteokalcino ELISA rinkinys buvo įsigytas iš Biosource Technology (Nivelles, Belgija). I tipo kolageno ELISA rinkinio C-galo telopeptidai buvo gauti iš Cross Laps (Herlev, Danija). P38 dominuojantį neigiamą mutantą pateikė dr. J. Han (Pietvakarių medicinos centras, Dalasas, JAV). JNK dominuojantį-neigiamą mutantą pateikė dr. M. Karin (Kalifornijos universitetas, San Diegas, JAV). ERK2 dominuojantį neigiamą mutantą pateikė daktaras M. Cobbas (Pietvakarių medicinos centras). Visi kiti reagentai buvo gauti iš Sigma-Aldrich (Sent Luisas, JAV).
Ląstelių kultūros
Pelės osteoblastų ląstelių linija MC3T3-E1 buvo įsigyta iš American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, JAV). Ląstelės buvo kultivuojamos 95 procentų oro, 5 procentų CO2 su a-MEM, kuris buvo papildytas 20 mm HEPES ir 10 procentų termiškai inaktyvuotu veršelio vaisiaus serumu, 2 mm glutaminu, penicilinu (100 V/ml) ir streptomicinu (100 mg). /ml).
Mineralizuotų mazgelių susidarymo matavimas
Mineralizuotų mazgelių susidarymas buvo įvertintas kaip aprašyta.[18] Trumpai tariant, osteoblastai buvo auginami terpėje, kurioje yra vitamino C (50 mg/ml) ir b-glicerofosfato (10 mm), dvi savaites, o terpė buvo keičiama kas tris dienas. Po 12 dienų inkubacijos su CD ekstraktu ląstelės du kartus plaunamos 20 mm Tris buferiniu tirpalu, kuriame yra
0.15 m NaCl (pH 7,4), fiksuotas lediniame 75 procentų (v/v) etanolyje 30 min. ir išdžiovintas ore. Kalcio nusėdimas buvo nustatytas naudojant alizarino raudonojo S dažymą. Trumpai tariant, etanoliu fiksuotos ląstelės ir matrica buvo nudažytos 1 valandą 40 mm alizarino raudonuoju S (pH 4, 2) ir plačiai nuplaunamos vandeniu. Surišta dėmė buvo išplauta 10 procentų (m/v) cetilpiridinio chloridu, o alizarino raudonasis S kiekis mėginiuose buvo kiekybiškai įvertintas matuojant absorbciją ties 550 nm ir palyginta su standartine kreive. Vienas molis alizarino raudonojo-S selektyviai suriša maždaug du molius kalcio.
Kiekybinė realaus laiko polimerazės grandininė reakcija
Bendra RNR buvo išgauta iš osteoblastų naudojant TRIzol rinkinį (MDBio Inc., Taipėjus, Taivanas). Atvirkštinė transkripcija buvo atlikta naudojant 2 mg bendros RNR ir oligo(dT) pradmenį.[19,20] Kiekybinė realaus laiko polimerazės grandininė reakcija (qPCR) buvo atlikta naudojant TaqMan® vieno etapo PCR Master Mix (Applied Biosystems, Carlsbad, JAV). Pridėta bendra cDNR (100 ng vienai 25- ml reakcijai) su sekai specifiniais pradmenimis ir Taqman® zondais. Visi tiksliniai genų pradmenys ir zondai buvo įsigyti komerciškai, įskaitant b-aktiną kaip vidinę kontrolę (Applied Biosystems). qPCR tyrimai buvo atlikti trimis egzemplioriais StepOnePlus sekos aptikimo sistema (Applied Biosystems). Ciklo sąlygos buvo 10-min polimerazės aktyvinimas 95 laipsnių kampu, po to 40 ciklų 95 laipsnių 15 s ir 60 laipsnių 60 s. Slenkstis buvo nustatytas virš ne šablono kontrolinio fono ir linijinėje tikslinio geno amplifikacijos fazėje, kad būtų galima apskaičiuoti ciklo numerį, kuriuo buvo aptiktas nuorašas (žymimas CT).
Western blot analizė
Ląstelių lizatai buvo paruošti, kaip aprašyta anksčiau.[21,22] Baltymai buvo atskirti SDS-PAGE ir perkelti į Immobilon polivinildifluorido membranas (Millipore, Billerica, JAV). Blotai buvo blokuojami 4 procentų galvijų serumo albuminu 1 valandą kambario temperatūroje, o po to 1 valandą kambario temperatūroje tiriami triušio anti-žmogaus antikūnais prieš p-65 arba p-p65 (1: 1000). Po trijų plovimų blotai 1 valandą kambario temperatūroje buvo inkubuojami su peroksidaze konjuguotu asilo antriniu antikūnu prieš triušius (1: 1000). Blotai buvo vizualizuoti sustiprinta chemiliuminescencija naudojant X-OMAT LS plėvelę (Eastman Kodak, Rochester, JAV).
Ovariektomijos sukelta osteoporozė
Šiam tyrimui buvo naudojamos keturių savaičių amžiaus ICR pelių patelės, sveriančios 22–28 g. Palyginimui, pelėms buvo pašalintos kiaušidės abipusiai taikant trichloracetaldehido (100 mg/kg) anesteziją, o kontrolinėms pelėms buvo atlikta fiktyvi operacija (Sham). Kaulų mineralų tankis ir mineralų kiekis kauluose buvo matuojamas po geriamojo įvairios koncentracijos CD ekstraktų kas dvi dienas keturias savaites. Bendras kūno kaulų mineralų tankis ir kaulų mineralų kiekis buvo nustatyti dvigubos energijos rentgeno spindulių absorbcometru (DEXA; XR-26; Norland, Fort Atkinson, JAV), naudojant mažiems tiriamiesiems skirtą režimą, kaip aprašyta anksčiau.[18, 23] Visi protokolai atitiko institucines gaires ir buvo patvirtinti Kinijos medicinos universiteto Gyvūnų priežiūros komiteto.
Statistinė analizė
Statistinė analizė atlikta naudojant Prism 4.{6}}1 programinę įrangą. („GraphPad Software Inc.“, San Diegas, JAV). Pateiktos reikšmės yra vidurkis ± SEM. Statistinė dviejų mėginių analizė buvo atlikta naudojant Stjudento t testą. Daugiau nei dviejų grupių statistiniai palyginimai buvo atlikti naudojant vienpusę dispersijos analizę su Bonfer-Roni posthoc testu. Visais atvejais P < 0,05="" buvo="" laikomas="">
Cistanche deserticola ekstraktas
Rezultatai
Cistanche deserticola ekstraktas padidina kaulų mineralizaciją dėl osteoblastų
CD ekstrakto pridėjimas 24 ar 48 valandas neturėjo įtakos pelių osteoblastų MC3T3-E1 ląstelių dauginimuisi MTT tyrime (duomenys nerodomi). Kadangi osteoblastų diferenciacija yra sudėtingas procesas, apimantis ląstelių proliferaciją ir migraciją, mes taip pat išbandėme MC3T3-E1 ląstelių gebėjimą migruoti po apdorojimo CD ekstraktu. Naudodami Transwell ir žaizdų gijimo tyrimus, nustatėme, kad CD ekstraktas neturėjo įtakos osteoblastų migracijai (duomenys nerodomi). Mineralinių mazgų susidarymas yra vienas iš osteoblastų brendimo žymenų. Alizarino raudonojo S dažymas parodė, kad mineralizuoti mazgeliai susidarė, kai osteoblastai buvo auginami dvi savaites terpėje, kurioje yra vitamino C (50 mg/ml) ir b-glicerofosfato (10 mm), ir tai padidėjo priklausomai nuo koncentracijos pridedant. kompaktinio disko (1a pav.). Todėl CD ekstraktas paskatino kultivuojamų osteoblastų kaulų mazgelių susidarymą, bet ne jų proliferaciją ar migraciją. Mes taip pat ištyrėme CD ekstrakto vaidmenį RANKL sukeltai osteoklastogenezei, bet neradome jokio poveikio (duomenys nerodomi).
Cistanche deserticola ekstraktas padidina šarminės fosfatazės, kaulų morfogenetinio baltymo-2 ir osteopontino ekspresiją auginamuose osteoblastuose
Diferencijuotiems osteoblastams būdingas padidėjęs ALP aktyvumas, o tai koreliuoja su aukštu fermentų ekspresijos lygiu.[18] Mes nustatėme, kad gydymas CD ekstraktu 72 valandas žymiai padidino osteoblastų ALP aktyvumą (1b pav.). Atsižvelgdami į esminį BMP-2, ALP ir OPN vaidmenį osteoblastų diferenciacijoje, išbandėme, ar CD ekstraktas daro poveikį osteoblastų diferenciacijai, reguliuodamas BMP-2, ALP ir OPN raišką. Ląstelių apdorojimas CD ekstraktu padidino ALP, BMP-2 ir OPN mRNR ekspresiją priklausomai nuo koncentracijos (1c pav.), parodydamas, kad CD ekstraktas paskatino osteoblastų diferenciaciją padidindamas ALP, BMP-2 , ir OPN išraiška.
Cistanche deserticola ekstraktas padidina kaulų mazgelių susidarymą per mitogeno aktyvuotą baltymų kinazės kelią
Buvo pranešta, kad MAPK vaidina svarbų vaidmenį formuojant kaulus [24, 25], todėl toliau ištyrėme, ar šis signalizacijos kelias yra susijęs su CD ekstrakto sukelta kaulų mineralizacija. Išankstinis ląstelių apdorojimas ERK inhibitoriumi U0126, p38 inhibitoriumi SB203580 arba JNK inhibitoriumi SP600125 sumažino CD ekstrakto padidintą kaulų mineralizaciją (2a, 3a ir 4a pav.). Be to, inhibitoriai taip pat blokavo CD ekstrakto sukeltą ALP, BMP-2 ir OPN ekspresiją (2b–4c pav.). Ląstelių transfekcija su ERK2, p38 arba JNK mutantu sumažino CD ekstrakto ALP, BMP-2 ir OPN mRNR ekspresijos padidėjimą (2c, 3c ir 4c paveikslai). Tada mes tiesiogiai ištyrėme ERK, p38 ir JNK aktyvaciją po gydymo CD ekstraktu. Ląstelių inkubavimas su CD ekstraktu sukėlė ERK, p38 ir JNK fosforilinimą (2d, 3d ir 4d paveikslai). Todėl ERK, p38 ir JNK tarpininkauja padidėjusiam kaulų susidarymui, kurį sukelia osteoblastų CD gydymas.
Cistanche deserticola ekstraktas padidina kaulų mazgelių susidarymą per branduolinio faktoriaus kB kelią
Kaip minėta anksčiau, NF-kB aktyvinimas yra būtinas kaulų formavimuisi.[26,27] Vėliau osteoblastus gydėme NF-kB inhibitoriais pirolidino ditiokarbamatu (PDTC) ir N-tosil-L-fenilalanino chlormetilketonu (TPCK) Calbiochem (Darmštatas, Vokietija), kad nustatytų, ar NF-kB aktyvacija yra susijusi su CD ekstrakto sukelta kaulų mineralizacija. 5a paveiksle parodyta, kad išankstinis osteoblastų apdorojimas PDTC arba TPCK slopino CD ekstrakto sukeltą kaulų mazgelių susidarymą ir taip pat sumažino ALP, BMP-2 ir OPN ekspresijos padidėjimą (5b ir 5c pav.). NF-kB p65 subvieneto fosforilinimas yra NF-kB aktyvacijos rodiklis; [28] pagal tai nustatėme, kad CD ekstraktas padidino p65 fosforilinimą osteoblastuose (5d pav.). Šie rezultatai parodė, kad NF-kB aktyvacija yra svarbi CD ekstrakto sukeltai ALP, BMP-2 ir OPN ekspresijai bei kaulų mazgelių formavimuisi.
Kaulų praradimo slopinimas Cistanche deserticola ekstraktu pelėms, iš kurių pašalintos kiaušidės
Norint ištirti CD ekstrakto poveikį kaulų retėjimui, pelių patelėms buvo sukelta osteoporozė atliekant kiaušidžių pašalinimą. Kaip ir tikėtasi, pelėms iš kiaušidžių pašalintas bendras kaulų mineralų tankis ir kaulų mineralų kiekis sumažėjo (6a ir 6b paveikslai). Gydymas CD ekstraktu keturias savaites slopino kaulų mineralinio tankio ir kaulų mineralų kiekio sumažėjimą priklausomai nuo dozės (6a ir 6b pav.). ALP koncentracija kraujyje gali atspindėti osteoblastinį aktyvumą.[29] Kaip parodyta 6c paveiksle, CD ekstraktas slopino serumo ALP aktyvumo sumažėjimą, kurį sukėlė kiaušidžių pašalinimas. Be to, CD ekstraktas taip pat padidino osteokalcino, kaulų formavimosi žymens, lygį ir sumažino I tipo kolageno, kaulų rezorbcijos žymens, C-galo telopeptidų lygį (6d ir 6e pav.). Taigi šie atradimai patvirtina CD ekstrakto stiprumą ir veiksmingumą užkertant kelią kaulų nykimui in vivo.
Diskusija
Cistanche deserticolaMa, vietinė Kinijos žolė, plačiai naudojama tradicinėje medicinoje įvairiems terapiniams gydymo būdams dėl raminamojo, analgezinio ir imunostimuliuojančio poveikio.[11–15] Čia mes parodėme, kad CD ekstraktas skatina kaulų mineralizaciją kultivuotuose osteoblastuose, tačiau tai padarė. neturi įtakos jų ląstelių migracijai ar dauginimuisi. Be to, mes nustatėme, kad ALP, BMP-2 ir OPN yra CD ekstrakto sukeltos signalizacijos tiksliniai baltymai, kuriems reikia aktyvuoti ERK, p38, JNK ir NF-kB.
Kaulas yra sudėtingas audinys, sudarytas iš kelių tipų ląstelių, kurios nuolat atsinaujina ir atsinaujina.[30] Kai rezorbcija ir kaulų formavimasis yra nesubalansuoti, kaulų skilimas viršija kaulų formavimąsi ir osteoporozės rezultatus.[30] Norėdami ištirti CD ekstrakto anti-osteoporozinį poveikį, naudojome peles, iš kurių pašalintos kiaušidės. Pelėms, kurioms atlikta kiaušidžių pašalinimas, sumažėjo bendras kaulų mineralų tankis ir kaulų mineralų kiekis, o tai buvo sumažinta gydant CD ekstraktu. CD ekstraktas taip pat padidino osteogeninio žymens ALP ir osteokalcino koncentraciją serume. Todėl CD yra kaulų formavimo priemonė, kuri apsaugo nuo kaulų nykimo, kurį sukelia kiaušidžių pašalinimas in vivo.
Nors osteoporozės mechanizmai nėra visiškai aiškūs, jie greičiausiai susiję su sumažėjusiu kaulų augimo faktorių, tokių kaip ALP, BMP{0}} ir OPN, prieinamumas arba sumažėjęs poveikis. Šie trys veiksniai vaidina svarbų vaidmenį kaulų formavimosi ir remodeliavimosi procese[31], ir buvo gerai dokumentuota, kad osteoblastų ląstelių diferenciacijos stimuliacijai daugiausia būdinga padidėjusi ALP, BMP-2 ir OPN ekspresija.[32] ] Šiame tyrime nustatėme, kad CD ekstraktas padidino ALP, BMP-2 ir OPN ekspresiją ir sustiprino kaulų mineralizaciją. Todėl CD ekstraktas iš dalies tarpininkauja kaulų formavimuisi padidindamas ALP, BMP{5}} ir OPN ekspresiją.
Buvo pranešta, kad p38 dalyvauja reguliuojant ALP ekspresiją osteoblastinių ląstelių diferenciacijos metu; [33] taip pat ERK1/2 yra svarbus osteoblastų proliferacijai ir diferenciacijai.[34,35] JNK dalyvauja osteoklastų formavime. [36] Čia parodėme, kad CD ekstraktas sukėlė ERK, p38 ir JNK fosforilinimą, o šių fermentų inhibitoriai antagonizuoja su CD ekstraktu sukeltą kaulų mineralizacijos stiprinimą, o tai rodo, kad ERK, p38 ir JNK aktyvacija atlieka privalomą vaidmenį CD ekstrakto sukeltame kaulų formavime. osteoblastai. Be to, fermentų inhibitoriai ir dominuojantys neigiami ERK, p38 ir JNK mutantai sumažino CD ekstraktu sustiprintą ALP, BMP-2 ir OPN ekspresiją. Šie duomenys rodo, kad norint padidinti ALP, BMP-2 ir OPN ekspresiją ir brendimą, kurį sukelia CD ekstraktas osteoblastuose, būtina suaktyvinti ERK, p38 ir JNK kelius. Buvo pranešta, kad ERK padidina osteoblastų proliferaciją ir diferenciaciją.[34,35] Tačiau CD ekstrakto poveikio osteoblastų proliferacijai nenustatėme. Todėl kiti būdai galėjo neutralizuoti ERK poveikį po CD ekstrakto stimuliacijos arba būti būtini proliferacijai. Šiuo atžvilgiu nustatėme, kad PI3K ir Akt inhibitoriai taip pat mažina CD ekstrakto sukeltą kaulų mineralizaciją ir ALP, BMP-2 arba OPN mRNR ekspresiją (duomenys nerodomi). Todėl šie keliai gali būti reikalingi CD ekstrakto sukeltam kaulų formavimuisi.
Įrodyta, kad NF-kB kontroliuoja osteoblastų funkciją kauluose.[37] Šio tyrimo rezultatai rodo, kad NF-kB aktyvinimas prisideda prie CD ekstrakto sukeltos kaulų mineralizacijos ir ALP, BMP-2 ir OPN ekspresijos kultivuotuose osteoblastuose ir kad nuo NF-kB priklausomo signalizacijos kelio (PDTC ir TPCK) inhibitoriai. ) slopino CD ekstrakto sukeltą kaulų mineralizaciją ir ALP, BMP-2 ir OPN ekspresiją. p65 yra fosforilinamas Ser536 įvairiomis kinazėmis keliais signalizacijos keliais, o tai padidina p65 transaktyvacijos potencialą.[38] Šio tyrimo rezultatai parodė, kad CD ekstraktas padidino p65 fosforilinimą. Apibendrinant, šie rezultatai rodo, kad NF-kB aktyvinimas reikalingas CD ekstrakto sukeltam kaulų formavimuisi kultivuotuose osteoblastuose. Mes taip pat nustatėme, kad ERK, p38 ir JNK inhibitoriai pakeitė CD ekstrakto sukeltą NF-KB luciferazės aktyvumą (duomenys nerodomi), todėl šie fermentai yra CD ekstrakto sukeltos NF-KB aktyvacijos prieš srovę tarpininkai. Todėl CD ekstraktas skatina kaulų formavimąsi per ERK/p38/JNK/ ir NF-kB kelius.
Išvados
Šis tyrimas parodė, kad CD ekstraktas sukelia osteoblastų diferenciaciją ir brendimą, bet ne proliferaciją ar migraciją. CD ekstraktas taip pat padidino ALP, BMP{0}} ir OPN ekspresiją bei kaulų mineralizaciją. Mes parodėme, kad ERK, p38, JNK ir NF-kB keliai yra susiję su CD ekstrakto sąlygojamu kaulų formavimu ir ALP, BMP-2 ir OPN ekspresija. Be to, CD ekstraktas užkirto kelią in vivo kaulų retėjimui, kurį sukėlė kiaušidžių pašalinimas. Todėl CD gali būti naudingas skatinant kaulų formavimąsi gydant osteoporozines ligas.
