Cistanche poveikis funkciniams plaučių, kepenų ir užkrūčio liaukos pažeidimams žiurkėms, sergančioms sepsiu

Abstraktus

Tikslas: Ištirti Cistanche ekstrakto poveikį ūminiamkepenys, plaučių ir užkrūčio liaukos funkcijos pažeidimą žiurkėms, sergančioms septiniu šoku, ir ištirti septinio šoko gydymą.

Metodai: naudokite aklųjų žarnų ligavimą ir perforaciją (CLP), kad atkartotumėte septinio šoko modelį, stebėtumėte patologiniuskepenys, plaučių ir užkrūčio liaukos audinį bei nustatyti ūminio kepenų, plaučių ir užkrūčio liaukos pažeidimo biologinius rodiklius bei įtakąCistancheekstraktas.

Rezultatai: po CLP žiurkėms reikšmingai sumažėjo mitochondrijų būsena III, P/O santykis ir hepatocitų kvėpavimo kontrolės greitis normalaus druskos tirpalo grupėje, o mitochondrijų membranos natrio-kalio kalcio magnio-ATPazės aktyvumas reikšmingai sumažėjo; reikšmingai padidėjo plaučių drėgno ir sauso svorio santykis, alveolių komunikacija Pralaidumo indeksas, plaučių kapiliarų pralaidumas ir plaučių audinio malondialdehidas, o superoksido dismutazė reikšmingai sumažėjo; žymiai padidėjo timocitų apoptozės ir DNR fragmentacijos procentas. VidujeCistancheadministravimo grupėje, minėti rodikliai ženkliai pagerėjo, lyginant su įprasto fiziologinio tirpalo grupe, pasiekus arba priartėjus prie dirbtinės chirurgijos grupės lygio.

Išvada:Cistancheturi gerą apsauginį poveikį ūminiamkepenys, plaučių iružkrūčio liaukos pažeidimasseptinio šoko žiurkėms. Jo mechanizmas gali būti sumažinti deguonies laisvųjų radikalų žalą audiniams, pagerinti ląstelių membranų funkciją ir pagerinti organizmo imuninę funkciją bei streso gebėjimą.

Raktiniai žodžiai:

augalų ekstraktai/farmakologijaCistanchedeserticola/farmakologija sepsis/komplikacijos šokas, sepsis/kinų medicinos terapijos žiurkės.

Šis tyrimas stebėjo poveikįCistancheseptinio šoko modelio žiurkėms, sergančioms ūminiu plaučiu,kepenysir užkrūčio liaukos bei kitų organų pažeidimai, bandant apsaugoti ląstelių funkciją kaip proveržį, ištirti jo poveikį ir mechanizmą.Cistanchesergant sepsiu, siekiant sukurti veiksmingus apsauginius vaistus nuo sepsio. Atlikite naudingus tyrimus.

Norėdami gauti daugiau informacijos, kreipkitės:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche tubulosa apsaugo nuo inkstų ligos, spustelėkite čia, kad gautumėte mėginį

1 . Medžiaga ir metodai

1.1 Vaistai, reagentai ir instrumentiniai vaistai:

Natrio pentobarbitalis (China National Pharmaceutical Group Shanghai Chemical Reagent Company), malondialdehido (MDA) rinkinys, superoksido dismutazės (SOD) rinkinys, ATPazės reagentas (Nanjing Jiancheng biologinės inžinerijos institutas),CistancheĮvertino dr. Wang Chizhi iš Trijų tarpeklių universiteto Tradicinės kinų medicinos katedros) Vandens nuoviras, Evans Blue. Prietaisas: Hitachi H-600 perdavimo elektronų mikroskopas, srauto citometras (EPICS, Beckman Coulter), 721 tipo spektrofotometras.

1.2 Cistanche deserticola ekstrakto paruošimas

Ekstraktas išCistanche\ buvo paruoštas išplovimo būdu. Paimkite 200 g sausos masėsCistanche, sudėkite į stiklinę, įpilkite distiliuoto vandens santykiu 1:1O, pamirkykite 30min – 1h, kaitinkite ant elektrinės viryklės 1h, filtruokite ir pakartokite procesą du kartus. Surinktas filtratas kaitinamas, kad išgaruotų, ir sukoncentruotas iki 1 g/ml, po to sandariai uždarytas ir laikomas šaldytuve 4 laipsnių temperatūroje, kad vėliau būtų galima naudoti.

1.3 Gyvūnai ir septicemijos gyvūnų modeliai

Sveiki SD žiurkių patinai (pateikti Huazhongo mokslo ir technologijos universiteto Eksperimentinių gyvūnų centro, sveriantys 200 25 og. Gyvūnai buvo atsitiktinai suskirstyti į 3 grupes, fiktyvių operacijų grupę (, z-8), normali fiziologinio tirpalo kontrolinė grupė (, z-8) ir aCistanchedeserticolagrupė (viena 8). Apgaulingos operacijos grupei ir kontrolinei grupei buvo duodama įprasto fiziologinio tirpalo (10 ml/kg) per zondą, o vartojusiai grupei – 1 g/ml (vartojimo dozė 200 mg/kg).Cistanchezondu, ld 2 kartus ir maitinama iki 15 fiziologijos dienų. Fiziologinio tirpalo kontrolinė grupė irCistanche deserticolagrupė naudojo aklųjų žarnų perrišimą ir perforaciją, kad atkartotų sepsio modelį. Prieš operaciją gyvūnai turėjo nemokamo geriamojo vandens ir 12 valandų nevalgė.

1.4. Žiurkių kepenų mitochondrijų ATPazės aktyvumo ir kepenų mitochondrijų kvėpavimo funkcijos matavimas

16 valandų po operacijos 6g žiurkėskepenysbuvo greitai patalpintas į {{0}} laipsnio atskyrimo terpę (250mmol sacharozės, 2mmol etoksietilpiperazino 2-etilsulfonrūgšties, 0,1mmol etilendiaminotetraacto rūgšties, pH 7.4), naudojant skirtingą greitį. Žiurkių mitochondrijos buvo paruoštos žemos temperatūros išcentriniu atskyrimu. ATPazės aktyvumui matuoti naudokite fosforo nustatymo metodą [2. Klarko deguonies elektrodo metodas [3] buvo naudojamas mitochondrijų redokso reakcijos kreivei įrašyti JYD-IA ištirpusio deguonies matuokliu, III ir IV stadijų kvėpavimo dažniui, kvėpavimo kontrolės greičiui (RCR) ir fosforo ir deguonies santykiui ( ADlP/0) buvo apskaičiuoti.

1.5 Žiurkių plaučių histologija ir plaučių funkcijos matavimas

Po 16 valandų buvo atidaryta krūtinė ir ištraukta kairioji plaučių skiltis. Pasvėrus šlapią svorį, jis buvo kepamas orkaitėje (80 laipsnių, 20 val.), kol svoris buvo pastovus, ir skaičiuojamas sausas svoris. Dėl baltymų kiekio apskaičiuokite plaučių pralaidumo indeksą (alveolių plovimo skysčio baltymas/ga plazmos baltymas, LPI). Pagal intraveninės injekcijos Evans mėlynąjį metodą, kurį pristatė Zhou ir kt. [4], buvo išmatuoti žiurkių plaučių kraujagyslių pralaidumo (PVP) pokyčiai. Malondialdehido (MDA) aktyvumui žiurkės plaučių audinyje nustatyti taikytas tiobarbitūro rūgšties (TBA) metodas Ls. Ksantino oksidazės metodo naudojimas [6 SOD aktyvumui nustatyti.

1.6 Užkrūčio liaukos audinys

Fizinis tyrimas ir ląstelių apoptozės greičio nustatymas Kiekvienoje grupėje 2–3 žiurkės buvo numarintos atitinkamu laiku po operacijos, išskirta nepažeista užkrūčio liauka, padarytos įprastinės parafino pjūviai, HE nudažytas ir stebimas šviesos mikroskopu; 2.5 Gliutaraldehido fiksavimas, Padarykite elektroninio mikroskopo pjūvį ir stebėkite jį perdavimo elektroniniu mikroskopu. Kitas timocitų suspensijos paruošimas, srauto citometrinis ląstelių, esančių apoptozinėje zonoje, skaičiaus nustatymas, gauti apoptozinių ląstelių procentą. Pasak Burton ir kt. L7] metodu (difenilamino metodas), mikroplokštelių skaitytuvas nustato ir apskaičiuoja timocitų genominės DNR fragmentacijos procentą.

1.7 Statistinis apdorojimas

Eksperimentiniai duomenys išreiškiami vidurkiu ± standartinis nuokrypis ± s). SPSS programinė įranga atlieka vienpusę dispersinę ir koreliacinę analizę. P<0.05 indicates="" a="" statistical="">

2. Rezultatas

2.1 Kepenų mitochondrijų Ⅲ būklės, RCR ir P/O santykio kontrolinės grupės pokyčiai

III būsenos kvėpavimo dažnis buvo žymiai mažesnis nei fiktyvių operacijų grupės (P<0.01). the="" breathing="" rate="" of="" state="" iv="" was="" not="" significantly="" changed="" compared="" with="" that="" of="" the="" sham="" operation="" group.="" as="" a="" result,="" the="" rcr="" of="" the="" control="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" sham="" operation="" group=""><0.01). the="" rcr="" in="" the="">Cistanchegydymo grupė buvo artimesnė fiktyvių operacijų grupei. Kontrolinės grupės ADP/0 santykis sumažėjo, o Cistanche gydomos grupės santykis atsigavo. Palyginti su fiktyvių operacijų grupe, buvo didelis skirtumas (P<>

2.2 Cistanche poveikis mitochondrijų ATPazės aktyvumui

Kontrolinės grupės hepatocitų mitochondrijų membranos kalcio-ATPazės, natrio-kalio ATPazės, magnio-ATPazės ir kalcio-magnio-ATPazės aktyvumas buvo žymiai mažesnis nei fiktyvių operacijų grupėje. Fermentų veiklaCistanchegydymo grupėje buvo žymiai aukštesnės už atitinkamą kontrolinę grupę ir pasiekė fiktyvių operacijų grupės lygį.

2.3 Cistanche poveikis timocitų apoptozei

Srauto citometrijos rezultatai parodė, kad lyginant su fiktyvių operacijų grupe, kontrolinės grupės timocitų apoptozė po operacijos žymiai padidėjo, oCistanchedeserticola ekstraktas galėjo veiksmingai sumažinti apoptozės greitį, o DNR suskaidymo procentas buvo panašus į tą, kuris nustatytas srauto citometrija. Rezultatai iš esmės yra tokie patys (4 lentelė).

2.4 Cistanche poveikis užkrūčio liaukos histologiniams pokyčiams

Stebint parafino pjūvį užkrūčio liauka fiktyvių operacijų grupėje akivaizdžių patologinių pokyčių nepastebėta. Timocitai buvo tankiai pasiskirstę užkrūčio žievėje, branduolys buvo apvalus, tamsiai mėlynos spalvos, mažiau citoplazmos; perėjus į medulę, branduolys palaipsniui didėjo, vyrauja šviesiau nusidažytos Epitelinės tinklinės ląstelės. Kontrolinėje grupėje gyvūnų užkrūčio žievė buvo menkai sudaryta iš ląstelių, sumažėjo limfocitų, padaugėjo makrofagų. Vietoje buvo pastebėta židininė nekrozė ir išsibarstę ląstelių fragmentai. Smegenų užkrūčio liaukos ląstelės reikšmingai nesumažėjo, o ląstelės buvo išsidėsčiusios tankiau nei žievės srityje, susiformavo vadinamasis „žievės-meduliarinės inversijos“ reiškinys. Gyvūnų timocitų fragmentaiCistanche-vartojamoje grupėje buvo ženkliai sumažintas, o "žievės ir pulpos inversijos" reiškinys taip pat buvo žymiai pagerėjęs.

Kontrolinės grupės elektroninis mikroskopinis stebėjimas parodė, kad sumažėjo didžioji dalis ląstelių tūrio, susitraukė ląstelės paviršius, susidarė pūslės, susikaupė chromatinas, kai kurios ląstelės buvo pusmėnulio formos, susiformavo apoptoziniai kūnai, dažna ląstelių nekrozė ir lizė. VidujeCistanchegydymo grupėje, žymiai sumažėjo ląstelių morfologijos pokyčiai, o ląstelių nekrozės ir lizės reiškinys žymiai pagerėjo.

3. Diskusija

Kelių organų disfunkcijos sindromai yra pagrindinė negrįžtamos būklės ir didelio mirtingumo vėlyvoje septinio šoko stadijoje priežastis. Organų funkcijos apsauga yra labai svarbi siekiant sumažinti didelį klinikinį mirtingumą nuo septinio šoko. Cistanche yra tradicinis mūsų šalies kinų augalinis vaistas. Pirmą kartą jis buvo paskelbtas "Shenlong Materia Medica". Tai vienas garsiausių tradicinių kinų vaistų, skirtų esencijai ir kraujui maitinti, inkstams maitinti ir yang stiprinimui. Šiuolaikiniai farmakologiniai tyrimai parodė, kad jis gali pagerinti organizmo imuninę funkciją ir stresą, skatinti DNR sintezę, atsispirti spinduliuotei, senėjimui, padidinti ląstelių DNR sintezės greitį ir apsaugoti audinių ląsteles. Pagrindiniai jo sudėtyje esantys ingredientai yra Cistanche Polisacharidas (cDPS) ir D-manitolis, kurie gali veiksmingai pašalinti laisvuosius radikalus.Cistanchepolisacharidai taip pat gali skatinti T ir B limfocitų dauginimąsi ir gali sinergiškai stimuliuoti pelių timocitų proliferaciją su ConA ir PHA. Šis eksperimentas pagrįstas esminiu svarbių gyvybiškai svarbių organų funkcijos gerinimo ir apsaugos septinio šoko metu ir TCM idėja, stiprinanti organizmą, naudojant objektyvius ir jautrius aptikimo metodus, siekiant stebėti septinio šoko poveikį.CistancheⅢ būsenojekepenysseptinio šoko žiurkių mitochondrijos, kvėpavimo kontrolės greitis (RCR), P / O santykis, membranos ATPazė ir plaučių pralaidumo indeksas, plaučių kraujagyslių pralaidumas, plaučių audinio MDA, SOD aktyvumas, timocitų apoptozė. Eksperimentų rezultatai rodo, kadCistanchegali padidėtikepenysmitochondrijų RCR, P/O santykis, sustiprinakepenysmitochondrijų kvėpavimo funkcija, pagreitina elektronų perdavimą mitochondrijų kvėpavimo grandinėje, padidina oksidacinio fosforilinimo ir membranos ATPazės aktyvumo sujungimo laipsnį ir padidina intracelulinę ATP sintezę. Cistanche vartojimo grupėje reikšmingai sumažėjo plaučių pralaidumo indeksas ir plaučių kraujagyslių pralaidumas, sumažėjo plaučių audinio malondialdehido aktyvumas, labai padidėjo superoksido dismutazė. Manoma, kad Cistanche gali sumažinti laisvųjų deguonies radikalų žalą plaučių audinio ląstelėms dėl savo antioksidacinio poveikio ir turi gerą apsauginį poveikį nuo plaučių pažeidimo. Sergant septiniu šoku, timocitai, ypač nesubrendę T-limfocitai, dėl didelio apoptozės skaičiaus gali sumažėti subrendusių limfocitų išsiskyrimas į periferinius limfoidinius organus, o vėliau tiesiogiai ar netiesiogiai pažeisti organizmo imuninę funkciją. Nenormalios timocitų apoptozės koregavimas esant septiniam šokui yra naudingas organizmo imunitetui gerinti. Šis eksperimentinis tyrimas parodė, kadCistancheekstraktas gali žymiai pagerinti timocitų apoptozę ir turi reikšmingą apsauginį poveikį gyvūnų, sergančių septicemija, timocitams. Be to, jis stiprina organizmo imunitetą infekcijos proceso metu ir sumažina pašalinių toksinų žalą svarbiems organams. Taip pat nustatėme, kad vaistų grupės kraujospūdis žymiai pagerėjo, o mirtingumas žymiai sumažėjo. Cistanche ir Cistanche sustiprino kepenų ir plaučių ląstelių funkciją ir sumažino timocitų apoptozę. Yra reikšminga teigiama koreliacija, tai rodoCistanchegali pagerinti gyvybiškai svarbių organizmo organų funkcijas ir sustiprinti organizmo imunitetą, gali būti svarbus Cistanche farmakologinis pagrindas gydant septinį šoką.

Cistancheturi didelį apsauginį poveikį ūminiam organų pažeidimui, o jo mechanizmas gali būti: ① priešintis membranos esterio peroksidacijai, padidinti membranos stabilumą ir sumažinti laisvųjų radikalų žalą membranos struktūrai. ② Skatinti audinių nukleino rūgšties sintezę ir sulėtinti nukleino rūgšties skilimą ir naikinimą, skatinti baltymų sintezę ir pagreitinti audinių ląstelių taisymą bei regeneraciją. ③Stiprinti organizmo imuninę funkciją ir sumažinti patogeninių veiksnių daromą žalą organizmui. ④ Slopinti pernelyg didelę audinių ląstelių apoptozę. ⑤Gerinti organizmo mikrocirkuliaciją ir užtikrinti gyvybiškai svarbių organų aprūpinimą krauju.

Nuorodos

[1] Jin Huiming, sepsio modelis po aklosios žarnos perrišimo ir perforacijos [J]. China Disease Journal of Physiology, 1990, 6(2):126.

[2]3 Wang Qian, Zhu Xiaofeng, Zhao Xilong. Šiuolaikiniai medicinos eksperimentiniai metodai [M]. Šiaurės Pekinas: Liaudies sveikatos leidykla, l997:342.

[3] Wang Qian, Zhu Xiaofeng, Zhao Xilong. Šiuolaikiniai medicinos eksperimentiniai metodai [M3. Šiaurės Pekinas: People's Health Press, 1997: 508-510.

[4] Zhang Xiuming, Li Jianzhai, Wei Mingjing ir kt. Šiuolaikinis klinikinis biocheminis tyrimas

[5]. Pekinas: Liaudies armijos medicinos leidykla, 2001: 896-899.

[6] He Weijing, Li Wei, Bi Zheng ir kt. Apoptozės nustatymas leukemijos ląstelėse Difenilamino metodas [J]. Shanghai Journal of Medical Testing, 2001, 16(3): 160.