Echinozido poveikis monoamino neurotransmiteriams tarpląsteliniame striatum skystyje žiurkėms, sergančioms smegenų išemija

Wei Lili1, Chen Hong1, Jiang Yong2, Tu Pengfei 2, Zhong Ming1, Du Juan1, Liu Fei1, Liu Chunyang1, Wang Lei1

(1. Farmacijos mokykla, Shihezi universitetas, Sindziango pagrindinė specialiosios augalų medicinos laboratorija, Švietimo ministerija, Shihezi, Sindziangas 832002;2. Šiuolaikinis tradicinės kinų medicinos tyrimų centras, Pekino universitetas, Pekinas 100083)

Kinijos knygos klasifikacijos numeris: R-332; R284．1; R322．81; R338．14; R743.310.531

Dokumento ID: Straipsnio Nr.: 1001-1978 (2011) 02-0174-04

Abstraktus: Tikslas Ištirti poveikįEchinozidas(ECH) apie monoamino neuromediatorius, esančius tarpląsteliniame striatum skystyje žiurkių, sergančių židinine smegenų išemija, ir ištirti galimą ECH neuroprotekcinio poveikio smegenims mechanizmą. Metodai SD žiurkės buvo atsitiktinai suskirstytos į kontrolinę grupę, modelio grupę, ECH didelės ir mažos dozės grupes ir ligustrazino (CXQ) grupes. Kiekvienos grupės žiurkėms buvo duodama atitinkamų vaistų arba fiziologinio fiziologinio tirpalo intraperitoniniu būdu vieną kartą per dieną 7 dienas. Trečią vartojimo dieną zondo įvorė buvo įdėta į smegenų striatumą. Praėjus valandai po paskutinio vartojimo, buvo sukurtas žiurkių židininės smegenų išemijos (MCAO) modelis. Sukūrus modelį, iš karto buvo atlikta mikrodializė. Dializatas buvo įšvirkščiamas į didelio efektyvumo skysčių chromatografijos-elektrocheminį detektorių (HPLC-ECD), siekiant nustatyti norepinefrino (NE), dopamino (DA), 5-hidroksitriptamino (5-HT), 3 kiekį. ,4-dihidroksifenilacto rūgštis (DOPAC), homovanilino rūgštis (HVA), 5-hidroksiindolo acto rūgštis (HIAA) kiekvienos grupės juostelės tarpląsteliniame skystyje. Rezultatai Palyginti su kontroline grupe, modelių grupėje padidėjo NE, DA ir 5-HT lygis, taip pat padidėjo rūgščių metabolitų DOPAC, HVA ir HIAA kiekis. Palyginti su modelio grupe, sumažėjo šešių medžiagų kiekis didelės ir mažos dozės ECH (30, 15 mg · kg - 1 · d - 1) ir CXQ grupėse. Išvada Neuroprotekcinis ECH poveikis gali būti susijęs su monoamino neurotransmiterių padidėjimu po smegenų išemijos.

Cistanche milteliai

Pagrindiniai žodžiai: Echinozidas; Smegenų išemija; Striatum; HPLC-ECD; Monoamino neurotransmiteriai ir metabolitai

Echinaceozidas(ECH) yra veiksmingas feniletanoidinių glikozidų, išskirtų ir išgrynintų, komponentasCistanche deserticola, speciali gamykla Sindziange. Tyrimai parodė, kad ECH turi neuroprotekcinį poveikį, pvz., antioksidaciją [1-2], nervų apsaugą [3-4], senėjimą stabdantį [5] ir mokymosi bei atminties gerinimą [6-8]. Chen Hong ir kt. patvirtino, kad ECH turi apsauginį poveikį DA neuronams sergant Parkinsono liga [9]. Monoamino neurotransmiteriai yra svarbios medžiagos, reguliuojančios fiziologinę organizmo veiklą.Turinys audinyje gali atspindėti neuromediatorių biosintezės, išsiskyrimo, įsisavinimo ir inaktyvavimo procesus [10-11]. Šiuo metu nėra jokios atitinkamos ataskaitos apie ECH poveikį monoamino siųstuvams žiurkių, sergančių smegenų išemija, smegenyse. Šiame tyrime, naudojant smegenų mikrodializės technologiją, buvo tiriamas ECH poveikis monoamino neuromediatorių kiekiui žiurkių, sergančių smegenų išemija, juostelės tarpląsteliniame skystyje ir preliminariai ištirtas galimas ECH mechanizmas smegenų neuroprotekcijai.

Cistanche ekstrakto milteliai

1.Medžiaga

1.1 Eksperimentiniai gyvūnai

SD žiurkės, ♂, kūno masė 250–300 g (pirkta iš Sindziango eksperimentinių gyvūnų centro, licencijos numeris: 2009-0053).

1.2 Vaistai ir reagentai

ECH dovanoja Pekino universiteto Farmacijos mokyklos profesorius Tu Pengfei (grynumas didesnis nei 95 proc.); Norepinefrinas (NE), dopaminas (DA), 5-hidroksitriptaminas (5-HT), 3,4-dihidroksifenilacto rūgštis (DOPAC), homovanilo rūgštis (HVA)

5-hidroksiindolo acto rūgštis (HIAA) yra Sigma; Tetrametilpirazino hidrochloridas injekcijoms (CXQ, Harbin Sanlian Pharmaceutical Co., Ltd.); Cinko fosfatinis cementas (Shanghai Medical Instruments Co., Ltd. produktas, sudarytas iš skysčio ir miltelių, sumaišytų su laiku); natrio 1-alkilsulfatas (DIKMA); Citrinų rūgšties hidratas (Tianjin Jinke Fine Chemical Research Institute); Trinatrio citratas (Acros); Dinatrio etilendiamino tetraacto rūgštis (JTTakerChemicalco); Metanolis (DIKMA); Acetonitrilas (DIKMA); Smegenų mikrodializės perfuzinis skystis yra jungtinio natrio chlorido injekcija (Beijing Shuanghe Pharmaceutical Co., Ltd.); Visas naudojamas vanduo yra pakartotinai garinamas vanduo.

1.3 Priemonė

Amerikos BAS4100 žiurkės smegenų stereotaktinis aparatas; CMA/12 zondas ir zondo įvorė; CMA/120 sąmoningo gyvūno prietaisas; CMA/402 mikro siurblys; CMA/150 žemos temperatūros mėginių automatinis rinktuvas. Esa 5600A infuzijos pompa; Esa 5600A infuzijos pompa; Esa 542 automatinis mėginių įpurškimo įrenginys; Esa CoulArray elektrocheminis detektorius; Stiklinis anglies darbinis elektrodas ir Ag/AgCl etaloninis elektrodas; C18 kolonėlė (DIKMA, ODS5 μm, 150mm × 4,6mm); CoulArraywin chromatografijos darbo stotis (Esa įmonė); Vortex maišytuvas (QL-861 tipo); Stalinis rūgštingumo matuoklis (HANNA-211); Stalinė didelės spartos centrifuga (XYJ-2 tipo).

2.Metodas

Cistanche papildas šalia manęs – Imįrodyti atmintį

Spustelėkite čia norėdami pamatyti „Cistanche Improve Memory“ produktus

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

2.1 Gyvūnų grupavimas ir administravimas

Trisdešimt žiurkių atsitiktinai suskirstytos į penkias grupes: ① Kontrolinė grupė: 1ml · kg-1 · d-1 normalaus fiziologinio tirpalo; ② Modelių grupė: normalus fiziologinis tirpalas 1ml · kg-1 · d-1; ③ Modelis plius ligustrazinas (CXQ) 30mg · kg-1 · d-1; ④ - ⑤ Modelis plius ECH didelės ir mažos dozės grupės (ECHB, ECHS): 30, 15 mg · kg-1 · d-1; Visi kiekvienos grupės gyvūnai buvo švirkščiami į pilvaplėvės ertmę 7 dienas.

2.2 Modeliavimo metodas ir mikrodializė

Kiekviena žiurkė buvo palaidota su kaniule trečią vartojimo dieną: žiurkės buvo anestezuojamos 10 procentų chloro hidratu (3,5 ml · kg-1), pritvirtintu prie BAS4100 smegenų stereotaktinis aparatas, o zondo kateteris buvo implantuotas į kairįjį striatumą (koordinatės AP: plius 0,2 mm; ML: - 3,0 mm; DV: - 3,5 mm) dėl GeorgePaxinos „Žiurkės smegenų stereotaktinio žemėlapio“ “. Po paskutinės injekcijos žiurkės buvo anestezuotos po 1 valandos, o žiurkėms buvo pritaikytas židininės smegenų išemijos modelis (MCAO modelis), naudojant Yang Zanzhang [12] patobulintą Longa siūlų metodą. Žuvies valas kontrolinėje grupėje buvo įterptas tik 10 mm, o kiti žingsniai buvo tokie patys kaip ir operacijos grupėje. Po modeliavimo įdėkite mikrodializės zondą sąmoningo ir laisvo judėjimo būsenoje ir naudokite Ringerio tirpalą iki μ Smegenų mikrodializatas buvo surinktas 4 laipsnių kampu, o vamzdelis su dializatu buvo surinktas 20 minučių. Paėmus kiekvieną dializato mėgintuvėlį, jis nedelsiant laikomas - 20 laipsnių šaldytuve ir po dializės perkeliamas į - 70 laipsnių šaldytuvą. Prieš naudojimą buvo išmatuotas zondo atkūrimo greitis, kuris buvo naudojamas konvertuoti monoamino neurotransmiterių koncentraciją dializate.

ką daro cistanche – gerina atmintį

2.3 HPLC-ECD analizė

Judančios fazės konfigūracija: judriojoje fazėje yra 829 ml 0.15mol · L-1 citrinų rūgšties-natrio citrato buferio litre; 0.1mol · L-1 dinatrio EDTA 1ml; Metanolis 15{11}}ml; Natrio {{10}}alkilsulfatas 0.283g. Nustatykite judriosios fazės srautą kaip 0,7 ml · min-1, o kolonėlės krosnies temperatūrą – kaip 28 laipsnius . Elektrocheminio detektoriaus darbinė įtampa yra 200mV, 400mV ir 600 mV, atitinkamai su 2, 3 ir 4 kanalais; Stiprinimas yra 2nA. Įpurškimo tūris yra 25 μl. Standartinė kreivė brėžiama naudojant 0,025, 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 mg · L-1 gradiento mišrų etaloninį tirpalą.

2.4 Statistinis apdorojimas

Eksperimentiniai duomenys išreiškiami x laukeliu ± s, o pakartotinių matavimų duomenys analizuojami naudojant SPSS13.{1}} statistinę programinę įrangą.

1-6 pav. pavaizduoti NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA ir 5-HT lygių pokyčiai žiurkės striatum ekstraląsteliniame skystyje. Iš paveikslo matyti, kad po smegenų išemijos striatum ekstraląsteliniame skystyje esantys monoamino neuromediatoriai turi medžiagų apykaitos sutrikimą ir kiekvieno neurotransmiterio kiekis padidėjo. Tam tikrame diapazone padidėjimas yra akivaizdesnis, kai pailgėja išemijos laikas. 90 minučių išemijos metu DA ir NE koncentracija juostelės tarpląsteliniame skystyje buvo daugiau nei tris kartus didesnė už kontrolinės grupės lygį. NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA ir 5-HT lygiai kontrolinėje grupėje sumažėjo nuo didelio iki žemo, o tai gali būti susiję su laikina kairiosios smegenų išemijos po kairiosios bendrosios miego arterijos perrišimo. ir žalą, padarytą įkišus zondą. Iš pokyčių kreivės ECH ir CXQ gali sumažinti didžiausią DA, DOPAC, HIAA, HVA ir 5-HT koncentraciją po smegenų išemijos, o CXQ ir didelės dozės ECH yra akivaizdžiau. Kiekvieno neurotransmiterio laiko eigos kreivės poslinkis žemyn rodo, kad ECH gali slopinti neurotransmiterių ir jų metabolitų padidėjimą žiurkių, sergančių smegenų išemija, smegenyse.

                                                                           2 pav. Echinozido poveikis ekstraląsteliniam DA lygiui žiurkių striatumoje

3 pavEchinozidastarpląsteliniame DOPAC lygyje žiurkių striatumoje Fig4 PoveikisEchinozidastarpląstelinis ŽIVV lygis žiurkių striatumoje

5 pavEchinozidasapie tarpląstelinį HVA lygį žiurkių striatumoje 6 pavEchinozidasžiurkių 5-HT instriatum ekstraląsteliniame lygyje

4.Diskusija

Supermeno žolelių cistanche – improturi atmintį

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Smegenų sužalojimo, kurį sukelia smegenų išemija, mechanizmas yra sudėtingas. Smegenų išemijos atveju smegenyse sutrinka monoamino neurotransmiteriai, žymiai sumažėja NE, DA ir 5-HT kiekis. Kuo sunkesnė smegenų išemija, tuo mažesnis NE, DA ir 5-HT kiekis smegenų audinyje [13]. Intracerebrinės mikrodializės metodas parodė, kad monoamino neuromediatorių kiekis ekstraląsteliniame skystyje padidėjo smegenų išemijos metu, tęsėsi visą išeminį periodą ir toliau didėjo ilgėjant išemijos laikui. Eksperimento rezultatai atitiko ataskaitoje pateiktą informaciją [14].Echinozidasyra veiksmingas feniletanoidinių glikozidų komponentas, išskirtas ir išgrynintas iš Cistanche deserticola, specialaus augalo Sindziange. Jis turi daug neuroprotekcinių poveikių, tokių kaip senėjimą stabdantis, mokymosi ir atminties gerinimas bei antineuronų apoptozė.. Šiame tyrime vietinė pažangi smegenų mikrodializė kartu su HPLC-ECD aptikimo technologija buvo naudojama preliminariai ištirtiEchinozidasapie monoamino neuromediatorius ir jų metabolitus eksperimentinių žiurkių, sergančių smegenų išemija, tarpląsteliniame skystyje. Rezultatai parodė, kad ECH gali sumažinti dėl smegenų išemijos sukeltą monoamino neurotransmiterių padidėjimą tarpląsteliniame striatum skystyje ir geriau pagerinti smegenų išeminio audinio pažeidimus.

nuoroda:

［1］ Pellati F, Benvenuti S, Magro L ir kt. Echinacea spp［J］． fenolinių junginių ir radikalų šalinimo aktyvumo analizė. JPharm Biomed Anal, 2004, 35(2): 289.

［2］ Kuang R, Sun YG, Deng TL, Zheng XX. Echinakozido apsauginis poveikis ir mechanizmai H2O{2}}pažeistoms PC12 ląstelėms［J］． Chin Pharmacol Bull, 2009, 25(4): 515–8.

［3］ Zhao X, Pu XP, Geng XC. Echinakozido poveikis baltymų išsiskyrimui iš substanti anigra ir striatalinio audinio pelių Parkinsono ligos MPTP modelyje, naudojant matmenų elektroforezės analizę［J］． Chin Pharmacol Bull, 2008, 24(1): 28–32.

［4］ Koo KA, Sung SH, Park JH ir kt. In vitro neuroprotekcinė feniletanoidinių glikozidų veikla iš kalikarpos dichotomos［J］． Planta Med, 2005, 25(4): 356.

［5］ Li Y, Song YY, Zhong HQ. Echinakozido poveikis imuninei funkcijai ir mitochondrijų DNR santykiniam senstančių pelių kiekiui ［J］． Chin Pharmacol Bull, 2010, 26(6): 810–3.

［6］ GLNE, Lei L, Tu PF ir kt. Echinakozido molekulinio mechanizmo tyrimas kovojant su senėjimu［J］． Acta Biophysica Sitica, 2004, 20 (3): 184.

［7］ Gao C, Wang CS, Wu GZ ir kt. Cistanche glikozidų poveikis mokymuisi ir atminties sutrikimui sergant kraujagyslinės demencijos žiurkėmis［J］． Chin Tradit Herb Drugs, 2005, 36( 12): 1852.

［8］ Tian F, Zhang K, Kang AJ ir kt. Echinakozido poveikis ir mechanizmas SAM-P/8 mokymosi ir atminties gebėjimui［J］． Lab orat Anim Sci Manag, 2006, 2( 23): 510.

［9］ Chen H, Jing FC, Li CL ir kt. Echinakozidas neleidžia sumažėti tarpląstelinių monoamino neuromediatorių lygiui 6-hidroksidopamino pažeidimo žiurkėms［J］． J Ethnopharmacol, 2007, 114(3): 285.

［10］ Amara SG. Neurotransmiterių pernešėjų naujausia pažanga［J］． Annu Rev Neurosci, 1993, 16(1): 73–93.

［11］ Wu GX, Su RB, Li J. Dopamino pernešėjo vaidmuo priklausomybėje nuo psichostimuliatorių ［J］． Chin Pharmacol Bull, 2010, 26 ( 2 ): 141–3.

［12］ Yang ZZ, Chen H. Žiurkių židininės smegenų išemijos modelio siuvimo metodų tobulinimas ir patirtis［J］． Lishlzhen Med Mat Med Res, 2008, 19(9): 2189–90.

［13］ Tanaka K, Wada N, Ogawa N. Lėtinė smegenų hipoperfuzija sukelia laikinus grįžtamus monoaminerginius pokyčius žiurkės smegenyse ［J］． Neurochem Res, 2000, 25(2): 313.

［14］ Li H. Puerarino poveikis monoamino neurotransmiteriams žiurkių juostoje［J］． J Zhejiang Univ Sci Technol, 2005, 17(1): 13–7.