Poligonos polisacharozės poveikis diabetinės nefropatijos žiurkių ferroptozei

Raktiniai žodžiai:diabetinė nefropatija;poligona-polisacharozė; ferroptozė; transferinas; FTH1; GPX4

 

Diabetinė nefropatija(DN) yra rimta mikrovaskulinė komplikacijacukrinis diabetas[1] DN yra rimtasmikrovaskulinė diabeto komplikacijacukrinis diabetas [1], dažniausiai pasireiškiantis kaip mikroalbuminurija ankstyvosiose stadijose, po to progresuojantis vystymasis. Ankstyvoji stadija dažniausiai pasireiškia mikroalbuminurija, vėliau progresuoja masinė proteinurija, laipsniškai mažėja glomerulų filtracijos greitis ir laipsniškai didėja kreatinino kiekis kraujyje [2]. ]. laipsniškas kreatinino padidėjimas[2] . Negydoma liga gali sukelti lėtinę ligą. Jei jis negydomas, jis gali sukelti lėtinį progresuojantį inkstų pažeidimą ir galiausiai galutinę ligos stadiją. Jei jis negydomas, jis gali sukelti lėtinį progresuojantį inkstų pažeidimą ir galiausiai galutinės stadijos inkstų nepakankamumą[3]. Geležies mirtis Geležies mirtis yra nuo geležies priklausomas nesočiųjų riebalų rūgščių kaupimasis. Geležies mirtis yra nuo geležies priklausomas nesočiųjų riebalų rūgščių fosfolipidų kaupimasis, sukeliantis ląstelių mirtį, daugiausia pasireiškiantis intraląsteliniai lipidų peroksidai[4] . [4] . Tyrimai Nustatyta, kad inkstų kanalėlių epitelio ląstelių pažeidimas yra glaudžiai susijęs su geležies mirtimi[5]. Wang ir kt.

Wang ir kt. [6] nustatė, kad glutationo peroksidazės 4 (GPX4) ekspresija inkstų kanalėlių intersticinėje (GPX4) ekspresijoje yra glaudžiai susijusi su DN ligos sunkumu ir progresavimu. GPX4, kaip svarbus geležies mirties programos taikinys, yra oksidacinio streso ir ląstelių mirties signalizacijos jutiklis, o sumažėjusi GPX4 ekspresija žymiai padidina gyvojo GPX4 ekspresijos sumažėjimą, todėl organizme žymiai padidėja gyvojo deguonies kiekis. 7] . . Todėl inkstų kanalėlių epitelio ląstelių mirties slopinimas reguliuojant geležies mirtį. Todėl inkstų kanalėlių epitelio ląstelių mirties slopinimas reguliuojant geležies mirtį, siekiant palengvinti DN inkstų pažeidimą, gali būti veiksminga DN gydymo strategija. epitelio ląstelių mirtis reguliuojant geležies mirtį gali būti veiksminga DN gydymo strategija.
ThepolisacharidasapieC. flavusyra gausiausias ir svarbiausias farmakologinis Tai vienas gausiausių ir svarbiausių C. flavus farmakologinių komponentų. Eksperimentinis tyrimas parodė, kad jis vaidina svarbų vaidmenį gerinant DN inkstų funkciją ir palengvinant uždegiminį atsaką. Li ir kt[8]. Li ir kt[9]. nustatė, kad Li ir kt. [9] nustatė, kad C. flavus polisacharido įsikišimas žymiai pagerino diabetu sergančių pelių gliukolipidų apykaitos sutrikimus ir insulino toleranciją. Li ir kt. Kitas tyrimas parodė, kad diabetine nefropatija sergančių pelių gliukozės, 24 valandų gliukozės ir insulino tolerancija žymiai pagerėjo po geltonojo ekstrakto polisacharido įsikišimo. Kitas tyrimas parodė, kad diabetinės nefropatijos modelio pelių gliukozės kiekis kraujyje, 24-h šlapimo mikroalbuminas, kreatininas (SCr) ir kraujo šlapalo azotas (BUN) žymiai pagerėjo po Fructus flavus polisacharido įsikišimo. o šlapalo azoto (BUN) kiekis kraujyje buvo žymiai sumažintas pagal diabetinės nefropatijos modelį[10]. DN gydymas polisacharidu iš Flos Chrysanthemi Tačiau konkretus jo veikimo mechanizmas nėra aiškus. Todėl dabartinis Šiame tyrime DN žiurkės modeliui sukurti buvo naudojama riebi dieta kartu su streptozotocino (STZ) injekcija.
Todėl šiame tyrime mes sukūrėme DN žiurkės modelį naudodami riebią dietą kartu su streptozotocino (STZ) injekcija ir stebėjome C. flavus polisacharido poveikį žiurkių geležies žūčiai. Todėl šis tyrimas buvo atliktas siekiant stebėti C. flavus polisacharido poveikį geležies žūčiai žiurkėms, šeriamoms riebiu maistu kartu su streptozotocino (STZ) injekcija, ir išsiaiškinti C. flavus polisacharido veikimo DN mechanizmą.

medžiagos ir metodai
1.1 Gyvūnai
Penkiasdešimt sveikų SD žiurkių patinų, kurių kūno masė (200±20) g, buvo laikomi Kinijos medicinos mokslų akademijos Radiologijos institute, Pekine, Kinijoje, veikiant 12-h šviesos-tamsos ciklui esant (25±2) laipsnis ir santykinė oro drėgmė (50±15) proc., o šeriamas ad libitum. Daug cukraus ir riebumo dieta (10 proc. taukų, 20 proc. sacharozės, 2,5 proc. cholesterolio, 67,5 proc. įprastinių pašarų), (4,8 proc. riebalų, 20 proc. baltymų ir 59,4 proc. bendro cukraus), Beijing Huafukang Biotechnology Co. Šį eksperimentą patvirtino Kandžou integruotosios medicinos ligoninė (CZX2022-KY-023).

1.2 Vaistas ir preparatas
PolisacharidasapieFlos Astragalus(grynumas 70 proc., partijos numeris S27804), Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd. buvo paruoštas su fiziologiniu tirpalu, kurio koncentracija atitinkamai 200, 800 mg/ml. 800 mg/ml tirpalo. Irbesartano tabletės (8A411 partija), Sanofi (Hangzhou) Pharmaceutical Co. (Hangzhou) Pharmaceutical Co., Ltd. buvo paruoštos 30 mg/ml fiziologiniame tirpale. sprendimas.

 

1.3 Pagrindiniai reagentai ir prietaisai
Šlapimo baltymas (partijos numeris C035-2-1), SCr (partijos numeris C011-2-1), BUN (partijos numeris C013-2-1) BUN (partijos numeris C013-2-1), malondialdehidas ( MDA, partijos numeris C003-1- 2), glutationas (GSH, partija C006-2-1), bendras geležies jonų kiekis (partijos numeris A039-2-1), Nanjing Jiancheng biologinės inžinerijos tyrimų institutas Biologijos inžinerijos institutas , Nankinas, Kinija; Transferinas (partijos numeris ab278498), feritinas Transferinas (partija ab278498), feritino sunkioji grandinė (FTH1, partija ab75973), GPX4 (partija ab252833) ir -feritinas (partija ab252833). ab252833), -aktinas (ab179467 partija), Abcam, JK. iMark680 daugiafunkcis fermentų žymeklis, Bio-Rad, JAV. Fresco17 centrifuga, Thermo, JAV; 5810 stalinė šaldyta centrifuga, Eppndorf, Vokietija; ABI Prism® 7500 fluorescencijos kiekybinis nustatymas Applied Biosystems, JAV; DYCZ-24DN vertikalios elektroforezės bakas, Pekino Liuyi instrumentų gamykla, Pekinas, Kinija; „SH-523 chemiluminescence imaging Ltd“, „Hangzhou Shenhua Technology Co.

 

1.4 Modeliavimas, grupavimas ir vaistų administravimas
Po 1 savaitės adaptyvaus šėrimo 10 žiurkių buvo atsitiktinai atrinktos kaip normalios. Likusios 40 žiurkių buvo nukreiptos į literatūros metodą [11], siekiant sukurti DN žiurkės modelį. Žiurkės 7 savaites buvo šeriamos dideliu cukraus ir riebalų kiekiu, o po to 12 valandų nevalgė be vandens. Žiurkės 7 savaites buvo šeriamos dideliu cukraus ir riebalų kiekiu, po to 12 valandų nevalgė maistu ir vandeniu. STZ buvo švirkščiamas į pilvaplėvės ertmę 30 mg / kg. Po 72 valandų buvo paimtas kraujas iš uodegos venos, kad būtų galima nustatyti atsitiktinį gliukozės kiekį kraujyje, o 16,7 mmol/l arba didesnis gliukozės kiekis kraujyje buvo laikomas sėkmingu diabeto modeliavimu. Žiurkės 1 savaitę buvo šeriamos daug cukraus ir riebalų turinčiu maistu, o iš medžiagų apykaitos narvo buvo renkamas 24-h šlapimas.

 

 

1.5.5 Western blot tyrimas
Surinkite inkstų audinius, įpilkite 150 μL RIPA lizės buferio, homogenizuokite Baltymų supernatantas pasiliko po centrifugavimo. Bendra baltymų koncentracija buvo nustatyta naudojant BCA baltymų tyrimo rinkinį. Bendra baltymų koncentracija buvo nustatyta naudojant BCA baltymų tyrimo rinkinį, o baltymų koncentracija buvo homogenizuota. Baltymų atskyrimui buvo panaudoti vienodi kiekiai baltymų 20 ug, 8 procentai -12 procentų SDS-PAGE, ir baltymas perkeltas. Membranos uždarytos 5 procentų nugriebto pieno milteliais kambario temperatūroje 2 val. Pridėtas triušių pirminis antikūnas prieš žiurkę transferriną (1:2 000), FTH1 (1:3 000) ir GPX4 (1:3 000). 3,000), GPX4 (1:3,000), -aktinas (atskiestas 1:5, 000) ir inkubuojamas per naktį 4 laipsnių temperatūroje. Inkubuokite per naktį 4 laipsnių temperatūroje. Membrana nuplaunama, pridėta antrinio antikūno (1:9 000) ir inkubuojama 2 valandas kambario temperatūroje. Membranos buvo plaunamos TBST, sukurtos naudojant ECL chemiliuminescenciją ir aptiktos naudojant
Juostų pilkumo tonų reikšmėms analizuoti buvo naudojama Image J programinė įranga.

 

1.6 Statistiniai metodai
Analizei buvo naudojama SPSS Statistics25.{1}} statistinė programinė įranga. Eksperimentas Rezultatai buvo išreikšti xˉ±s, o visi duomenys buvo patikrinti normalumui ir chi kvadratui. Visi duomenys buvo tikrinami dėl normalumo ir chi kvadrato, o t testai buvo naudojami, jei jie buvo patenkinti, o neparametriniai testai buvo naudojami, jei jie nebuvo patenkinti. P<0.05 indicates that the difference is statistically significant.

 

2 rezultatai
2.1 Flavopiridium polisacharido poveikis pavyzdinių žiurkių kūno masei ir gliukozės kiekiui kraujyje nevalgius Palyginti su normalia grupe, modelio grupės žiurkių kūno masė buvo žymiai mažesnė (P<0.01) and FBG was significantly increased (P<0.01); compared with the model group, the body mass of rats in the positive drug group was significantly increased (P<0.05), and the differences in FBG of rats in each group were not statistically significant (P>0.05). Žr. 2 lentelę.

2.2 Flavopiridium polisacharido poveikis žiurkių modelių inkstų funkcijos rodikliams
Palyginti su normalia grupe, modelio grupės žiurkių SCr, BUN lygis ir 24 valandų šlapimo baltymų kiekis buvo žymiai didesnis (P<0.01); compared with the model group, the Cr, BUN level and 24 h urine protein content of rats in the positive drug group and the high dose group of Flavopiridium polysaccharide were significantly lower (P<0.05, P<0.01). See Table 3.

2.3 Geltonojo ekstrakto polisacharido poveikis pavyzdinių žiurkių inkstų histopatologinei morfologijai
Normalios grupės žiurkių glomerulų ir kanalėlių struktūra nepastebėjo jokių anomalijų, o tilakoidinė membrana ir tilakoidinė stroma nebuvo išplitusios, nebuvo uždegiminių ląstelių infiltracijos ir pan.; modelis Modelio žiurkėms buvo pastebėta židinio kanalėlių degeneracija ir atrofija, o glomerulų bazinė membrana buvo šiek tiek. Modelių grupės žiurkėms pasireiškė židinio kanalėlių degeneracija ir atrofija, šiek tiek sustorėjusi glomerulų bazinė membrana, tilakoidų hiperplazija ir riebalinė glomerulų degeneracija ir atrofija. kanalėlių. Kiekvienos vaisto vartojimo grupės žiurkėms sumažėjo pažeidimų, o pagerėjimas buvo akivaizdesnis teigiamų vaistų grupėje ir didelėje flavopiridium polisacharido dozėje. Pagerėjimas buvo akivaizdesnis teigiamų vaistų grupėje ir vartojant didelę Flavopiridium polisacharido dozę. Žr. 1 pav.