Feniletanoidų glikozidų biosintezės stiprinimas Cistanche Deserticola ląstelių kultūrose dėl osmosinio streso

Kontaktas:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Chun-Zhao Liu. Xi-Yu Cheng

AbstraktusOsmosinio streso poveikis ląstelių augimui ir feniletanoidinių glikozidų (PeG) biosintezei buvo ištirtas ląstelių suspensijos kultūrose.Cistanche deserticolaYC Ma, dykumos vaistinis augalas, auginamas Vakarų Kinijos regione. Įvairios pradinės sacharozės koncentracijos reikšmingai paveikė ląstelių augimą ir PeGs biosintezę suspensijos kultūrose, o didžiausias sausasis svoris ir PeGs kaupimasis siekė atitinkamai 15,9 gl–1-DW ir 20,7 mg g–1-DW pradiniame osmosiniame taške. 300 mOsm kg–1 įtempis, kai sacharozės koncentracija buvo 175,3 mM. Stechiometrinė analizė su skirtingais sacharozės ir nemetabolinio cukraus (manitolio) arba necukrinių osmosinių medžiagų (PEG ir NaCl) deriniais parodė, kad pats osmosinis stresas buvo svarbus veiksnys, skatinantis PeG biosintezę ląstelių suspensijos kultūrose.Cistanche deserticola. Didžiausias PeG kiekis – 26,9 ir 23,8 mg g–1-DW buvo gautas po 21 dienos, derinant atitinkamai 87,6 mM sacharozės ir 164,7 mM manitolio (303 mOsm kg–1) arba 20 mM PEG, o tai buvo didesnis nei C. deserticola ląstelių kultūrų, auginamų esant pradinei 175,3 mM sacharozės koncentracijai po 30 dienų. Stimuliuotas PeG kaupimasis ląstelių suspensijos kultūrose buvo koreliuojamas su osmosinio streso sukeltu fenilalanino amonio liazės (PAL) aktyvumo padidėjimu.

Raktažodžiai Cistanche deserticola, dykumos vaistinis augalas, feniletanoidiniai glikozidai, osmosinis stresas, fenilalanino amoniako liazė

Cistanchekanalėliųturi daug efektų, spustelėkite čia norėdami sužinoti daugiau

Įvadas

Cistanche deserticolaYC Ma, brangioji Kinijos žolė, parazituoja Haloxylon ammodendrun šaknyse ir auga dykumose Vakarų Kinijoje. Feniletanoidiniai glikozidai (PeG), pagrindiniai biologiškai aktyvūs komponentai, išskirti iš C. deserticola, pasižymi ryškiu laisvųjų radikalų šalinimo, imuniteto, seksualinės funkcijos gerinimu ir kt. (Zong ir kt., 1996; Lu 1998; Wang ir kt., 2001). Dėl nekontroliuojamo eksploatavimo ir panaudojimoCistanche deserticola, gamtos ištekliusCistanche deserticola buvo ant nuovargio ribos. Atsižvelgiant į šias problemas, PeG gamyba C. deserticola ląstelių suspensijos kultūrose buvo laikoma perspektyvia alternatyva, siekiant išspręstiCistanche deserticolaaugalinės medžiagos (Lu ir Mei 2003; Ouyang ir kt. 2003; Cheng ir kt. 2005a).

Osmosinis stresas yra svarbus veiksnys, turintis įtakos augalų augimui, vystymuisi, morfogenezei ir antrinių metabolitų susidarymui. Buvo pranešta apie suaktyvėjusią antrinių metabolitų gamybą iš in vitro audinių kultūrų, esant optimaliam osmosiniam stresui, kai kuriose vaistinių augalų rūšyse (Kim ir kt., 2001; Wang ir kt., 1999; Wu ir kt., 2005). Sacharozė yra įprasta tokiais atvejais naudojama osmosinio streso agentė, kuri taip pat yra gyvybiškai svarbus anglies ir energijos šaltinis. Todėl labai sunku atskirti osmosinio streso poveikį ir cukrų, kaip anglies šaltinių, vaidmenį mityboje. Pradinio osmosinio streso padidėjimas naudojant nemetabolinį manitolį, sorbitolį ir PEG taip pat pagerino paklitakselio kaupimąsi Taxus Chinensis ląstelių kultūrose, saponinų ir polisacharidų kaupimąsi Panax notoginseng ląstelių kultūrose ir eleuterozidų kaupimąsi Eleutherogenrysm. ir kt., 2001; Shohael ir kt., 2006). Jų rezultatai parodė, kad angliavandenių koncentracijos ir osmosinio streso poveikis buvo skirtingas atsižvelgiant į augalų rūšis ir antrinius metabolitus.

Šio tyrimo tikslas yra sutelkti dėmesį į sacharozės, manitolio, PEG ir NaCl osmosinį poveikį ląstelių augimui ir PeG biosintezei.Cistanche deserticolaląstelių suspensijos kultūros. PAL aktyvumas suspensijos kultūrose buvo tiriamas naudojant skirtingus pradinių osmosinių agentų derinius, ir aptartas galimas geresnio PeG kaupimosi mechanizmas didinant osmosinį stresą.

medžiagos ir metodai

Augalinės medžiagos ir kalio indukcija

Sėklos išCistanche deserticolaYC Ma buvo surinkti iš dykumų vietovių Kinijos Sindziango provincijoje ir prieš naudojimą buvo laikomi 4C. Botaninė tapatybė buvo patvirtinta palyginus su etaloniniais standartais Kinijos mokslų akademijos Botanikos institute, PR China. Sėklos buvo sterilizuotos paviršiuje 30 s panardinant į 70 procentų etanolį, po to 20 minučių panardintos į 20 procentų vandeninį 5,4 procento natrio hipochlorito tirpalą vandenyje, po to tris kartus nuplaunant steriliu distiliuotu vandeniu. Calli buvo sukelti iš paviršiuje sterilizuotų sėklųCistanche deserticolaMS (Murashige ir Skoog, 1962) terpėje, papildyta 1.0 mg l–1 naftaleno acto rūgšties (NAA), 2.0 mg l–1 6-benziladenino ({{7}). }BA), 0,25 mg l–1 2, 4-dichlorfenoksiacto rūgštis (2, 4-D), 6 gl–1 agaras (PhytoTechnology LaboratoriesTM, produkto ID: A181) ir 30 gl–1 sacharozės 60 dienų auginimo spintelėje tamsoje 25 C temperatūroje. Iš sėklų eksplantų sukeltos kalio kultūros vėliau buvo persodinamos į pirmiau nurodytą kietą terpę kas 30 dienų (Cheng ir kt., 2005a).

Ląstelių suspensijos kultūrų kūrimas ir priežiūra

Suspensijos kalio kultūros (3.0 g šviežio svorio), kurios buvo filtruotos per 1,000 lm tinklelį ir laikomos ant 200 lm tinklelio, buvo subkultūrintos į 500- ml Erlenmeyer. kolba, kurioje yra 100 ml minėtos skystos terpės sukamojoje purtyklėje, esant 110 aps./min. 25 °C temperatūroje, tamsoje su 18 dienų subkultūros intervalu. Prieš autoklavą terpės pH buvo sureguliuotas iki 5,8 naudojant 1 M NaOH arba 1 M HCl. Suspensijos kalio kultūros, subkultūrintos po dešimties kartų, buvo naudojamos kaip inokuliatas sekančiai eksperimentinei kolbų kultūrai. Visi kolbos eksperimentai buvo atlikti 250 ml Erlenmeyerio kolbose, kuriose buvo 50 ml skystos terpės su 30 gl–1 sacharozės ir pasėtos 1,5 g šviežios 18-dienų senumo ląstelių suspensijos kultūrų. Šios Erlenmejerio kolbos buvo inkubuojamos sukamajame kratytuve (110 aps./min.) 25 °C temperatūroje tamsoje.

Osmosinio streso eksperimentas

Ištirti pradinės sacharozės koncentracijos poveikįląstelių augimas ir PeG kaupimasis,Cistanche deserticolasuspensijos kultūros buvo auginamos MS terpėje su 87,6,175,3 ir 262,9 mM sacharozės. Esant osmosinio streso sąlygoms,Cistanche deserticolasuspensijos kultūros buvo inkubuojamos MSterpėje, kurioje yra 87,6 mM sacharozės kartu su164,7 mM manitolio. Kitos osmosinės medžiagos (PEG 4, 000 irNaCl) buvo pridėta osmoliarumo ekvivalentu87,6 mM sacharozės. Osmosinės ekvivalentinės koncentracijososmosinių agentų buvo eksperimentiškai nustatytas kaip PEG4, 000 atitinkamai 20 mM ir NaCl 50 mM. Visuose eksperimentuose ir visose vertėse buvo naudojamos trys kolbosbuvo trijų kolbų priemonės ± SD.

Analizė

Cistanche deserticolakultivuotos ląstelės, patiriančios įvairų osmosinį stresą, buvo stebimos Nikon AFX-DX šviesos mikroskopu (Nikon, Japonija), padidinus 400 ·. Auginimo terpės osmoliariškumas buvo matuojamas garų slėgio osmometru (Fiske One-Ten Osmometer, MA, JAV). Šviežiam svoriui (FW) nustatytiCistanche deserticolaląstelės buvo švelniai spaudžiamos ant filtravimo popieriaus, kad būtų pašalintas vandens perteklius, ir pasvertos. Vėliau ląstelės buvo džiovinamos orkaitėje 60 C temperatūroje 24 valandas ir buvo užregistruotas sausasis svoris (DW). Likučio cukraus koncentracija buvo nustatyta naudojant fenolį ir koncentruotą sieros rūgštį, kaip standartą naudojant gliukozę (Dubois ir kt., 1956).

PeG buvo ekstrahuoti iš džiovintų ląstelių metanoliu 15 min 60 C temperatūroje ultragarsinėje vandens vonioje (KQ2200, Shanghai Cany Precision Instrument Co., Ltd, Kinija) 40 kHz dažniu ir 100 W galia. Filtratas buvo sukoncentruotas. ir likutis ištirpintas distiliuotame vandenyje, o po to praleistas per makro tinklinę dervos kolonėlę (AB-8, Nankai universiteto Tiandzine, Kinijoje cheminis produktas). Metanolio eliuatas buvo surinktas ir bendras PeG kiekis buvo ištirtas esant 333 nm, naudojant echinakozidą kaip standartą (Du ir Liu 1993a; Du ir kt. 1993b).

Ląstelių gyvybingumas buvo įvertintas sumažinus 2, 3, 5-trifeniltetrazolio chloridą (TTC) (Steponkus ir Lanphear, 1967). Gyvybingumo indeksas apibrėžiamas kaip absorbcija, išmatuota vienam gramui šviežio audinio. PAL aktyvumas buvo nustatytas remiantis Koukol ir Conn (1961) metodu. Vienas PAL aktyvumo vienetas (U) apibrėžiamas kaip 0.01 absorbcijos kitimo dydis.

Rezultatai ir DISKUSIJA

Pradinės sacharozės koncentracijos poveikis ląstelių augimui ir PeG biosintezei ląstelių suspensijos kultūroseCistanche deserticola.Atsakymas išCistanche deserticolabuvo tiriamos ląstelių suspensijos kultūros iki pradinės sacharozės koncentracijos nuo 87,6 iki 262,9 mM. Kaip parodyta 1 pav., ląstelės greitai augo ir kaupėsi PeG, esant žemai pradinei sacharozės koncentracijai – 87,6 mm, o ląstelių augimas ir PeG kaupimasis buvo akivaizdžiai slopinami esant didelei pradinei sacharozės koncentracijai – 262,9 mM. Šviežios masės ir sausos masės santykis sumažėjo, kai pradinė sacharozės koncentracija padidėjo nuo 87, 6 nuo 262, 9 mM (duomenys nerodomi). Didžiausia sausos medžiagos masė – 15,9 gl–1, o PeG kiekis – 20,7 mg g–1-DW buvo gautas 30 dieną, kai pradinė sacharozės koncentracija buvo 175,3 mM, kurios osmoliarumas buvo apie 300 mOsm kg–1. Mikroskopu stebint, ląstelių sienelės buvo atskirtos nuo citoplazmos esant didžiausiam osmosiniam stresui – 388 mOsm kg–1, kai pradinė sacharozės koncentracija buvo 262,9 mM (2 pav.), o didžiausias osmosinis stresas gali sutrikdyti ląstelių metabolizmą ir sukelti stiprus augimo slopinimas ir PeG biosintezės sumažėjimas. Panašus reiškinys buvo pastebėtas ir suspensinėse T. Chinensis ląstelių kultūrose, o optimali sacharozės koncentracija paklitakselio gamybai buvo 175,3 mM (Kim ir kt., 2001). Tačiau pradinė 204,5 mM sacharozės koncentracija buvo naudinga E. sessiliflorus ląstelių kultūrų augimui. Didesnė sacharozės koncentracija 262,9 mM sustiprino eleuterozidų, fenolio ir flavonoidų biosintezę eleuterokokų kultūrose (Shohael ir kt., 2006). Akivaizdu, kad pradinė sacharozės koncentracija yra svarbi augalų ląstelių kultūrų augimui ir antrinių metabolitų kaupimuisi, o jos poveikis yra susijęs su konkrečia ląstelių linija.

Įvairių osmosinių agentų poveikis ląstelių augimui ir PeG biosintezei C. deserticola ląstelių suspensijos kultūrose

Suprasti metabolinės sacharozės ir kitų nemetabolinių cheminių substratų osmosinį vaidmenį PeG biosintezėje ląstelių suspensijos kultūroseCistanche deserticola, buvo atlikta eksperimentų serija, naudojant sacharozę kartu su nemetaboliniais osmosiniais agentais (manitoliu, PEG ir NaCl). Šių eksperimentų metu į terpę, kurioje yra 87,6 mM sacharozės, buvo pridėta 164,7 mM manitolio, 20 mM PEG ir 50 mM NaCl, o pradinis osmoliarumas buvo maždaug 300 mOsm kg–1, o tai buvo lygiavertė osmosinė sąlyga, panaši į terpę su 175,3 mM. sacharozės.

Kaip parodyta 3a, b pav., manitolio (nemetabolinio cukraus osmosinio agento) ir PEG (nepralaidžio osmosinio agento) pridėjimas šiek tiek slopino ląstelių augimo greitį, bet žymiai padidino PeG biosintezęCistanche deserticolaląstelių suspensijos kultūros. Didžiausias PeGs kiekis atitinkamai 26,9 ir 23,8 mg g–1-DW buvo gautas 21 dieną, kai ląstelės buvo auginamos 87,6 mM sacharozės ir 164,7 mM manitolio (303 mOsm kg–1) deriniuose arba 20 mM PEG (299 mOsm kg–1). PeG sumos buvo didesnės neiCistanche deserticolaląstelių kultūros, auginamos MS skystoje terpėje, kurios pradinė sacharozės koncentracija 30 dieną buvo 175,3 mM. Cukrus buvo vartojamas palaipsniui perCistanche deserticolaląstelių kultūrą, o tada cukraus sukeltas osmosinis stresas atitinkamai sumažėjo (3c, d pav.). Skystos terpės, kurios pradinė sacharozės koncentracija buvo 175, 3 mM, osmosinis įtempis sumažėjo nuo 280 iki 110 mOsm kg–1, kai PeG ląstelių kultūrose pradėjo kauptis 9 dieną ir pasiekė didžiausią 30 dieną (duomenys nerodomi). Ląstelių kultūros metu nebuvo vartojami nemetaboliniai osmosiniai agentai (manitolis ir PEG), todėl skystos terpės osmosinis įtempis gali būti nuo 200 iki 280 mOsm kg–1, o osmosinis slėgis palankus PeG biosintezei. Šie rezultatai parodė, kad pats osmosinis stresas vaidino svarbų vaidmenį stiprinant PeG biosintezęCistanche deserticolaląstelių kultūros.

Buvo pranešta, kad NaCl pridėjimas pagerino atitinkamai indolo alkaloidų ir saponinų biosintezę Catharanthus roseus ir Panax ginseng ląstelių kultūrose (Smith ir kt., 1987; Wu ir kt., 2005), tačiau gydymas NaCl slopino T. Chinensis ląstelių augimą. tuo tarpu palitakselio biosintezė nesiskiria (Kim ir kt., 2001). Todėl kiekvienu atveju būtinas išsamus tyrimas. Osmosinio ekvivalento 50 mM NaCl pridėjimas slopino ląstelių augimą ir PeG biosintezę. Tokį rezultatą gali lemti pralaidus NaCl pobūdis, kuris nėra naudingas šios dykumos augalų rūšies, kuri labai gerai toleruoja sausros stresą, ląstelių kultūroms.

3 pav. Sacharozės ir kitų nemetabolinių osmosinių agentų derinių poveikis ląstelių augimui (a), PeG kaupimuisi (b), cukraus suvartojimui (c) ir osmosinio streso pokyčiams (d) C. deserticola ląstelės eigoje kultūra. Vertės yra trijų kolbų vidurkis ± SD

Įvairių osmosinių agentų poveikis ląstelių gyvybingumui ir PAL aktyvumui Cistanche deserticola ląstelių suspensijos kultūrose

Ankstesniuose mūsų tyrimuose (Cheng ir kt., 2005b, 2006), žadintuvo pridėjimas smarkiai paskatino PeG biosintezęCistanche deserticolaląstelių kultūros, o stimuliacija buvo koreliuojama su padidėjusiu PAL, pirmojo pagrindinio fermento PeG biosintezėje, aktyvumu (Hahlbrock ir Grisebach 1979). Kaip parodyta 4 pav., nemetabolinio 164,7 mM manitolio arba 20 mM PEG pridėjimas į MS skystą terpę, kurioje yra 87,6 mM sacharozės, šiek tiek sumažino ląstelių gyvybingumą, tačiau žymiai padidino PAL aktyvumą, kuris buvo didesnis nei sukeltas pradinės sacharozės koncentracijos. 175,3 mM. Patobulintas PeG kaupimasisCistanche deserticolaląstelių suspensijos kultūros buvo susijusios su PAL aktyvumo padidėjimu, kurį skatina pats osmosinis stresas. Pradinė 175,3 mM sacharozės koncentracija MS skystoje terpėje sumažino ląstelių gyvybingumą per 15 dienų ir slopino PAL aktyvumą per 21 dieną. Po tam tikro cukraus vartojimo auginimo laikotarpiuCistanche deserticolaląstelių kultūrų, tiek ląstelių gyvybingumas, tiek auginamų ląstelių PAL aktyvumas padidėjo ir pasiekė maksimumą atitinkamai 24 ir 30 dieną. Taip pat pastebėta, kad dėl osmosinio streso sustiprėjęs PAL aktyvumas pagerina saponinų biosintezę P. ginseng ląstelių kultūrose ir alkaloidų kaupimąsi C. roseus auginamose ląstelėse (Godoy-Hernandez ir kt. 2000; Wu ir kt. 2005). Tačiau pralaidaus NaCl pridėjimas į MS skystą terpę, kurioje yra 87, 6 mM sacharozės, sumažino ląstelių gyvybingumą ir slopino PAL aktyvumą per visą auginimo laikotarpį. Dėl to ir ląstelių augimas, ir PeG biosintezė buvo akivaizdžiai slopinami.

4 pav. Ląstelių gyvybingumo (a) ir PAL aktyvumo (b) kitimas C. deserticola ląstelių kultūrose, patiriančiose skirtingą osmosinį stresą.Cistanche deserticolaląstelių kultūros. Vertės yra trijų kolbų vidurkis ± SD

Cistanche deserticolayra dykumos rūšis, o dykumos rūšių tyrimas in vitro ląstelių kultūrose pateikė naujų iššūkių ir galimybių suprasti augalų fiziologiją ir ekologinius prisitaikymus. Šiame tyrime sukūrėme sistemą, galinčią ištirti osmosinio streso sukeltą signalo perdavimo biosintezės kelią, ir ši sistema suteikė pagrindą didelio masto PeG gamybai naudojantCistanche deserticolaląstelių kultūras naudojant naują osmosinio streso reguliuojamą strategiją.

Padėkos

Autoriai pripažįsta finansinę paramą iš Kinijos mokslų akademijos Inovacijų tyrimų programos.

Iš: Chun-Zhao Liu „Feniletanoidinių glikozidų biosintezės gerinimas Cistanche deserticola ląstelių kultūrose dėl osmosinio streso“. Xi-Yu Cheng

---Plant Cell Rep (2008) 27:357–362 DOI 10.1007/s00299-007-0443-3

Nuorodos

Cheng XY, Wei T, Guo B, Ni W, Liu CZ (2005a)Cistanche deserticolaląstelių suspensijos kultūros: feniletanoidų glikozidų biosintezė ir antioksidacinis aktyvumas. Process Biochem 40:3119-3124
Cheng XY, Guo B, Zhou HY, Ni W, Liu CZ (2005b) Pakartotinis sužadinimas padidina feniletanoidų glikozidų kaupimąsi ląstelių suspensijos kultūroseCistanche deserticola. Biochem Eng J 24:203–207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, Ni W, Liu CZ (2006) Feniletanoidų glikozidų biosintezės tobulinimas Cistanche deserticola ląstelių suspensijos kultūrose naudojant chitozano elicatorių. J Biotech 121:253–260
Du NS, Liu JL (1993a) Feniletanoidinių glikozidų nustatymasCistanche deserticolamakroretikulinės dervos spektrofotometrija. Nat Prod Res Dev 5:30–33
Du NS, Wang H, Yi YH (1993b) Feniletanoidinių glikozidų išskyrimas ir identifikavimas išCistanche deserticola. Nat Prod Res Dev 5:5–8
Dubois M, Gilles KA, Hamilton JK (1956) Kolorimetriniai cukraus ir susijusių medžiagų nustatymo metodai. Anal Chem 28:350-357

Godoy-Hernandez GC, Vazquez-Flota FA, Loyola-Vargas VM (2000) osmosinio streso paveiktų Catharanthus roseus ląstelių, kultivuotų 14-l bioreaktoriuje, trans-cinamono rūgšties poveikis padidina alkaloidų kaupimąsi. Biotechnol Lett 22:921-925
Hahlbrock K, Grisebach H (1979) Ligino ir flavonoidų biosintezės fermentų kontrolė. Ann Rev Plant Physiol 30:105–130
Kim SI, Choi HK, Kim JH (2001) Osmosinio slėgio poveikis paklitakselio gamybai Taxus Chinensis suspensijos ląstelių kultūrose. Enzyme Microb Tech 28:202–209
Koukol J, Conn EE (1961) Hordeum vulgare fenilalanino deaminazės aromatinių medžiagų ir savybių metabolizmas. J Biol Chem 236:2692-2698
Lu MC (1998) Raminamojo poveikio tyrimaiCistanche deserticola.J Ethnopharmacol 59:161-165

Lu CT, Mei XG (2003) Feniletanoidinių glikozidų gamybos gerinimas naudojant grybelių sukėlėjus ląstelių suspensijos kultūrojeCistanche deserticola. Biotechnol Lett 25:1437-1439
Murashige T, Skoog F (1962) Peržiūrėta terpė greitam augimui ir biologiniams tyrimams su tabako audinių kultūromis. Plant Physiol 15:473-497
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003) Retųjų žemių elementų poveikis augalų augimuiCistanche deserticolaląstelės ir feniletanoidinių glikozidų gamyba. J Biotechnol 102:129-134
Shohael AM, Hakrabarty D, Ali MB, Yu KW, Hahn EJ, Lee HL, Paek KY (2006) Eleutherococcus sessiliflorus embriogeninių kultūrų eleuterozidų gamybos stiprinimas reaguojant į sacharozės sukeltą osmosinį stresą. Process Biochem 41:512-518
Smith JL, Smart NJ, Kurd WGW, Misawa M (1987) Organinių ir neorganinių junginių naudojimas siekiant padidinti indolo alkaloidų kaupimąsi Catharanthus roseus (L.) Don ląstelių suspensijos kultūrose. J Exp Bot 38:1507–1511
Steponkus PL, Lanphear FO (1967) Trifeniltetrazolio chlorido metodo tobulinimas šalčio sužalojimui nustatyti. Plant Physiol 42: 1423–1426 Wang HQ, Wu JT, Zhong JJ (1999) Reikšmingas taksano gamybos pagerėjimas Taxus Chinensis suspensijos kultūrose taikant sacharozės maitinimo strategiją. Process Biochem 35:479-483
Wang XW, Jiang XY, Wu LY, Wang XF (2001) Glikozidų šalinimo poveikisCistanche deserticolaapie laisvuosius radikalus ir jo apsaugą nuo OH sukeltų DNR pažeidimų in vitro. Chin Pharm J 36:29–31
Wu JY, Wong K, Ho KP, Zhou LG (2005) Saponino gamybos didinimas Panax ženšenio ląstelių kultūroje osmosiniu stresu ir maitinant maistinėmis medžiagomis. Enzyme Microb Technol 36:133-138
Zhang YH, Zhong JJ, Yu JT (1995) Osmosinio slėgio poveikis ląstelių augimui ir ženšenio saponino bei polisacharido gamybai Panax Notoginseng suspensijos kultūrose. Biotechnol Lett 17:1347-1350
Zong GZ, He W, Wu GL, Chen LH (1996) Palyginimai tarpCistanche deserticolaYC Ma ir Cistanche tubulosa (Scheak) Wight kai kurios farmakologinės veiklos. Tradit Chin Med J 21:436–438