Kombinuoto Laminaria Japonica ir Cistanche Tubulosa ekstraktų gydymo veiksmingumas skatinant plaukų augimą

Susisiekite: emily.li@wecistanche.com

Kyungha Shin1# ir kt

Kadangi galvos odos plaukų slinkimas pastaruoju metu padaugėjo net tarp jaunų žmonių, o tai labai pablogina žmonių gyvenimo kokybę,plaukų augimą-stimuliuojantis Laminaria japonica ekstrakto (LJE) poveikis irCistanche tubulosaekstraktas (CTE). Patvirtinus anageninę folikulų fazę skutimosi metu, C57BL/6 pelių patinams buvo užtepta 3 procentų minoksidilio arba per burną su LJE ir CTE deriniais.Cistanche tubulosaekstraktas)21 dienai. Minoksidilis skatino plaukų ataugimą ir padidino -glutamilo transpeptidazės (-GTP) ir šarminės fosfatazės (ALP) aktyvumą. Be to, minoksidilis padidino epidermio augimo faktoriaus (EGF) ir kraujagyslių endotelio augimo faktoriaus (VEGF) lygį. Bendras LJE ir CTE administravimas（Cistanche tubulosaekstraktas)esant 54 mg/kg LJE plius 162 mg/kg, CTE (Cistanche tubulosaekstraktas)darė sinergetinį poveikį plaukų ataugimui, palyginus su 3 procentais minoksidilio. LJE pirmiausia sustiprino ALP aktyvumą, o CTE（Cistanche tubulosaekstraktas)padidino -GTP ir ALP aktyvumą, taip pat EGF ir VEGF ekspresiją. In vivo oro maišelio uždegimo modelis, karagenino sukeltas kraujagyslių išsiskyrimas ir padidėjusi azoto oksido bei prostaglandino E2 koncentracija eksudatuose buvo sinergiškai slopinami kartu vartojant LJE ir CTE.（Cistanche tubulosaekstraktas). Be to, kombinuotas gydymas iš esmės slopino uždegiminių ląstelių infiltraciją. Rezultatai rodo, kad kombinuotas geriamasis gydymas LJE ir CTE（Cistanche tubulosaekstraktas)Netinkamos dozės ir santykis apsaugo nuo plaukų slinkimo ir pagerina alopeciją, kurią iš dalies gali lemti jų priešuždegiminė veikla.

Raktažodžiai Plaukų augimas, uždegimas, Laminaria japonica,Cistanche tubulosa, kombinuotas gydymas

Cistanche tubulosaekstraktas turi daug funkcijų

Pastaruoju metu net jaunų žmonių galvos odos plaukų slinkimas vis dažniau slinko, o tai labai pablogina žmogaus gyvenimo kokybę. Nors nuplikimas nėra viena iš sveikatos problemų, jis gali sukelti gilų psichologiškai nepatogų socialinį stresą. Todėl labai svarbu sukurti naujas prevencines ir (arba) gydomąsias medžiagas, skirtas plaukų slinkimui ir ataugimui. Nepaisant milijardo dolerių rinkos, yra keletas šiuo metu veiksmingų produktų [1].
Plaukų folikulai atsinaujina augimo ciklo (anageno), regresijos (katageno), poilsio (telogeno) ir slinkimo (egzogeno) laikotarpiais [2]. Katageno metu daugelis folikulų ląstelių patiria užprogramuotą ląstelių mirtį (apoptozę) [3], sumažinant folikulų dydį, kai folikulai patenka į telogeną. Retai besikeičiančių epitelio kamieninių ląstelių, esančių folikulų išsipūtimo srityje, aktyvinimas sukelia folikulų regeneraciją kitos anageno fazės pradžioje [4]. Kamieninių ląstelių palikuonys ankstyvojo anageno metu sudaro naują folikulinę matricą, o plauko velenas ir vidinis šaknies apvalkalas yra gaunami iš šių santykinai nediferencijuotų matricos ląstelių [5]. Gerai žinoma, kad plaukų folikulo dydis ir anageno fazės trukmė atitinkamai priklauso nuo plauko stiebo dydžio (skersmens) ir ilgio. Šį ciklinį plaukų augimą reguliuoja įvairūs augimo veiksniai.

Minoksidilis, finasteridas ir Propecia yra parduodami siekiant sulėtinti plaukų slinkimą ir palengvinti plaukų ataugimą. Minoksidilis yra kraujagysles plečiantis vaistas, turintis šalutinį poveikįplaukų augimą[6], kuris gali būti dėl jo aprūpinimo maistinėmis medžiagomis ir kalio kanalų atidarymo veiklos [7,8]. Minoksidilis yra veiksmingas androgeninei alopecijai, be kitų nuplikimo gydymo būdų, nors jo veiksmingumas išnyksta per kelis mėnesius po gydymo nutraukimo. Palyginimui, finasteridas ir Propecia, vaistai nuo gerybinės prostatos hiperplazijos ir prostatos vėžio, buvo užregistruoti daugelyje šalių nuo androgeninės alopecijos (vyriško nuplikimo). Finasteridas ir Propecia yra sintetiniai antiandrogenai, slopinantys II tipo 5- reduktazę – fermentą, paverčiantį testosteroną dihidrotestosteronu (DHT) papilių ląstelėse, esančiose plaukų folikulų apačioje [9].

Laminaria japonica, Undaria pinnatifida ir Cladosiphon okamuranus, plačiai paplitę daugelyje šalių, ilgą laiką buvo naudojami kaip terapiniai vaistai Rytų medicinoje. Ankstesniuose tyrimuose fukoidanas, sulfato polisacharidų kompleksas, buvo išskirtas ir identifikuotas iš jūros dumblių ir patvirtinta, kad jis turi antioksidacinį, antikoaguliacinį, priešvėžinį ir priešuždegiminį poveikį [10, 11]. Po to buvo įrodytas teigiamas fukoidano poveikis uždegiminėms ligoms, išemijai, imuninės sistemos disfunkcijai ir navikams [12, 13]. Iš kitos pusės,Cistanche tubulosaekstraktas (CTE) taip pat buvo plačiai naudojamas tradiciniams vaistams Kinijoje. CTE（Cistanche tubulosaekstraktas)gerina kraujotaką, mažindamas cholesterolio kiekį kraujyje [14]. Neseniai buvo pranešta, kad CTE sumažino naviko nekrozės faktoriaus (TNF-) ir interleukino -4 (IL-4), kurie yra pagrindiniai azoto oksido (NO) gamybos uždegiminiame kelyje, gamybą. [15]. Taip pat parodėme, kad fukoidanas iš Laminaria japonica ekstrakto (LJE) ir CTE（Cistanche tubulosaekstraktas)sinergiškai susilpnino uždegimą in vitro ir in vivo [16]. Pažymėtina, kad buvo įrodyta, kad odos (ypač ašarų liaukų) uždegimas buvo glaudžiai susijęs su alopecija [17]. Taigi išryškėja priešuždegiminiai alopecijos gydymo aspektai [18].
Remdamiesi kraujotakos ir uždegimo gerinimo veikla, tiriame kombinuotą LJE ir CTE veiksmingumą.（Cistanche tubulosa ekstraktas)įjungtaplaukų augimąir pagrindinis mechanizmas (-ai), palyginti su 3 procentų minoksidiliu (Hyundai Pharmaceutical, Seulas, Korėja), gerai žinomuplaukų augimąstipriklis.

Cistanche tubulosaekstraktas tinkaPlaukų augimas

Medžiagos ir metodai

Medžiagos

LJE ir CTE (Cistanche tubulosaekstraktas)buvo gauti iš Misuba RTech Co., Ltd. (Asanas, Korėja). Džiovinti Laminaria japonica milteliai 24 valandas ekstrahuojami išvalytame vandenyje 6 {{2} oC temperatūroje, filtruojami per 0,45 μm membraną, dezinfekuojami ir džiovinami purškiant.Cistanche tubulosabuvo ekstrahuotas 80 procentų etanoliu, dezinfekuotas, koncentruotas ir išdžiovintas. LJE ir CTE (Cistanche tubulosaekstraktas)buvo laikomi 4oC temperatūroje, prieš naudojimą sumaišomi (1:3) ir ištirpinami išgrynintame vandenyje bei geriami 5 ml/kg tūrio.
Gyvūnai
C57BL/6 pelių patinai, skirtiplaukų augimątyrimo ir ICR pelių patinai, skirti uždegimo tyrimui, buvo įsigyti iš Daehan Biolink (Eumseong, Korėja) ir laikomi patalpoje su pastoviomis aplinkos sąlygomis (23±2ºC; 45-65 proc. santykinė drėgmė; 12-valandos šviesa). -tamsus ciklas; 150-300 liuksų šviesumas). Granulių pašaras ir išgrynintas vanduo buvo prieinami ad libitum. Visus eksperimentus su gyvūnais patvirtino Chungbuk nacionalinio universiteto (CBNU), Korėja, Institucinis gyvūnų priežiūros ir naudojimo komitetas (IACUC) ir jie buvo atlikti pagal CBNU laboratorinių gyvūnų tyrimų centro standartines veikimo procedūras (SOP).

Gydymas plaukų augimui

Patvirtinus anageno fazę stebint homogeniškai rausvą odos spalvą C57BL/6 pelių (6 sav. amžiaus, n=8/grupei) nugaros odoje po kirpimo telogeninėje fazėje, plaukai buvo nuskusti [1,19 ,20]. Nuo kitos dienos buvo atrinktos pelės be matomų įbrėžimų ir per burną
gydyti LJE (18 arba 54 mg/kg), CTE (54 arba 162 mg/kg) arba jų mišiniu (18 plius 54 arba 54 plius 162 mg/kg) vieną kartą per parą 21 dieną. Mažos LJE (18 mg/kg) ir CTE (54 mg/kg) dozės buvo gautos iš apskaičiuotų žmogaus dozių – 100 mg/kūnui (70 kg) ir 300 mg/kūnui po kūno svorio (Km) paviršiaus ploto perskaičiavimo{14} } žmogui / Km{15}} pelei). Didelės LJE ir CTE dozės（Cistanche tubulosaekstraktas)buvo nustatyti 3 kartus, atskirai arba kartu, siekiant įvertinti maksimalų sinergetinį poveikį [16]. Minoksidilis (3 proc., 0,2 ml) buvo naudojamas lokaliai vieną kartą per dieną ant nuskustos odos pagal tą patį tvarkaraštį, naudojant LJE/CTE.

Grubus plaukų augimo stebėjimas

Dienomis 3-dienų intervalais po skutimosi ir gydymo metu pelės buvo lengvai anestezuojamos dietilo eteriu, o jų nugarėlės buvo nufotografuotos. Plaukų ataugimo santykis (ataugęs plotas / nuskustas plotas) nuotraukose buvo analizuojamas naudojant kompiuterinę vaizdų analizės sistemą (Imageinside, Daejeon, Korėja).

Mikroskopinis plaukų folikulų tyrimas

14 ir 21 dienomis pelės buvo paaukotos taikant gilią anesteziją dietilo eteriu, o jų nugarinė oda buvo pašalinta [1]. Nugaros oda buvo perpjauta į dvi dalis. Formalinu fiksuotos, parafinu įterptos audinių pjūviai (5 μm skersmens) vienoje dalyje buvo nudažyti hematoksilinu-eozinu, siekiant ištirti plaukų folikulų skaičių ir histologinius radinius. Kita audinio dalis buvo užšaldyta skystame azote fermentų tyrimui ir imuniniam tyrimui.

Fermentų aktyvumo tyrimas

Odos audinys buvo homogenizuotas 4 tūriuose fosfatinio buferio (pH 7,4). Homogenatas centrifuguojamas 3, 000 aps./min. greičiu 20 min., o supernatantas buvo naudojamas -glutamiltranspeptidazės (-GTP) ir šarminės fosfatazės (ALP) aktyvumui tirti, naudojant p-nitrofenilfosfatą (PNPP)-DEAV. substratas [1,21].

Cistanche tubulosa

Augimo faktorių kiekybinis įvertinimas

Epidermio augimo faktorius (EGF) ir kraujagyslių endotelio augimo faktorius (VEGF) buvo kiekybiškai įvertinti naudojant su fermentais susieto imunosorbento tyrimo (ELISA) rinkinius (R&D Systems, Mineapolis, JAV) pagal gamintojo instrukcijas [1,22].

Uždegimo gydymas

ICR pelės (7 savaičių amžiaus, n=8/grupė) buvo gydomos LJE (18 arba 54 mg/kg), CTE.（Cistanche tubulosaekstraktas)(54 arba 162 mg/kg), arba jų mišinį (18 plius 54 arba 54 plius 162 mg/kg) vieną kartą per dieną 7 dienas [16]. 1-ąją LJE ir CTE dieną（Cistanche tubulosaekstraktas)Gydymo metu pelėms į nugarą buvo įšvirkščiama 10 ml sterilaus oro, kad būtų suformuotas maišelis [16, 23, 24]. Po 2 ir 5 dienų į maišelį pakartotinai įšvirkščiama 5 ml oro. Viena valanda po galutinio LJE ir CTE（Cistanche tubulosaekstraktas)gydymas, į maišelį buvo sušvirkštas 1 ml karagenino (1 proc. fiziologiniame tirpale; Sigma-Aldrich, Sent Luisas, JAV) arba jo nešiklio (fiziologinio tirpalo).

Eksudatų analizė

Oro maišelis buvo išplautas 1 ml šalto fiziologinio tirpalo praėjus 6 valandoms po karagenino injekcijos ir užregistruotas grynasis plovimo skysčio tūris [16]. Bendras uždegiminių ląstelių, įskaitant neutrofilus, monocitus ir limfocitus, skaičius buvo nustatytas naudojant colter skaitiklį.

NO ir prostaglandino E2 (PGE2) koncentracijos buvo nustatytos atitinkamai Grieso reagentu (Sigma-Aldrich) ir fermento imuniniu tyrimu (EIA), naudojant Correlate-EIA rinkinį (Assay Designs, Ann Arbor, JAV) [16].

Statistinė analizė

Duomenys pateikiami kaip vidurkis±standartinė paklaida. Statistinis reikšmingumas buvo nustatytas atliekant vienpusę dispersijos analizę, po kurios buvo atliktas posthoc Tukey daugkartinio palyginimo testas. P vertės<0.05 were="" considered="" to="" be="" statistically="">

Rezultatai

Minoksidilio (3 proc.), etaloninės medžiagos, naudojimas žymiai palengvinoplaukų augimąC57BL/6 pelių, kurios beveik visą (92,4 proc.) apėmė nuskustą plotą (1, 2B pav.), palyginti su 29,2 proc. normaliu augimu (1, 2A pav.) 21 dieną. Nors ir mažiau veiksmingas nei minoksidilis. , LJE gydymas per burną taip pat palengvinoplaukų augimą, todėl aprėptis atitinkamai 18 ir 54 mg/kg buvo 33,5 ir 69,1 proc. (1, 2C, 2D pav.). CTE（Cistanche tubulosaekstraktas)taip pat buvo veiksmingas stiprinantplaukų augimą, pasiekęs 73,6 ir 80,4 procentų aprėptį atitinkamai vartojant 54 ir 162 mg/kg (1, 2E, 2F pav.). Pažymėtina, kad kombinuotas gydymas didelėmis LJE dozėmis (54 mg/kg) ir CTE（Cistanche tubulosaekstraktas)(162 mg/kg) žymiai padidinoplaukų augimąnuo 12 dienos, panašus į minoksidilio poveikį (1, 2H pav.), nors mažos LJE (18 mg/kg) ir CTE dozės（Cistanche tubulosaekstraktas)(54 mg/kg) turi sinergetinį poveikį tik ankstyvoje fazėje (1, 2G pav.).

1 pav. Pelių, gydytų minoksidiliu arba Laminaria japonica ekstraktu (LJE) ir (arba) plaukų ataugimo laikas.Cistanche tubulosaekstraktas (CTE). ,

○normalus; ●, Minoksidilis (3 proc. ) aplikacija; △, 18 mg/kg LJE; ▼, 54 mg/kg LJE; □, 54 mg/kg CTE; ■, 162 mg/kg CTE; ◇, 18 mg/kg LJE plius 54 mg/kg CTE; ◆, 54 mg/kg LJE plius 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaekstraktas).

2 pav. Reprezentatyvūs bendri plaukų ataugimo pelių, gydytų minoksidiliu arba Laminaria japonica ekstraktu (LJE) ir (arba)Cistanche tubulosaekstraktas (CTE) 21 dieną.

A, normalus; B, Minoksidilio (3 proc.) aplikacija; C, 18 mg/kg LJE; D, 54 mg/kg LJE; E, 54 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaekstraktas); F, 162 mg/kg CTE; G, 18 mg/kg LJE plius 54 mg/kg CTE; H, 54 mg/kg LJE plius 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaekstraktas).

Palyginti su įprastais plaukų folikulais (3A pav.), Minoksidilio naudojimas pagerino plaukų folikulų vientisumą, parodydamas didesnius folikulus ir storesnius plaukų stiebus (3B pav.). Toks poveikis taip pat buvo nustatytas pelių, gydytų LJE ir (arba) CTE, odos（Cistanche tubulosaekstraktas)(3C-3H pav.). Ypač svarbus plaukų folikulus stiprinantis LJE ir CTE gydymo efektyvumas.Cistanche tubulosaekstraktas)buvo panašus į minoksidilį.

3 pav. Reprezentatyvūs mikroskopiniai pelių, gydytų minoksidiliu arba Laminaria japonica ekstraktu (LJE) ir (arba) plaukų ataugimo rezultatai.Cistanche tubulosaekstraktas (CTE) 21 dieną.

A, normalus; B, Minoksidilio (3 proc.) aplikacija; C, 18 mg/kg LJE; D, 54 mg/kg LJE; E, 54 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaekstraktas); F, 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaekstraktas); G, 18 mg/kg LJE plius 54 mg/kg CTE; H, 54 mg/kg LJE plius 162 mg/kg CTE

Minoksidilio naudojimas padidino -GTP, skatinančio plaukų folikulus į anageno fazę, aktyvumą 90-120 proc. 14 ir 21 dienomis, palyginti su normalios odos lygiu (4 pav.). LJE (54 mg/kg) taip pat padidino fermentų aktyvumą, nors buvo didelių skirtumų. CTE darė panašų poveikį, žymiai padidindamas -GTP aktyvumą 14 dieną. Įdomu tai, kad kombinuotas LJE ir CTE gydymas（Cistanche tubulosaekstraktas)dar labiau padidino fermentų aktyvumą nei naudojant vien ekstraktus.
ALP aktyvumas, kaulų augimo ir angiogenezės žymuo, žymiai padidėjo odoje 14 ir 21 dieną po vietinio Minoksidilio vartojimo (5 pav.). LJE ir CTE（Cistanche tubulosaekstraktas)taip pat padidino ALP aktyvumą išgėrus, priklausomai nuo dozės. Pažymėtina, kad fermentų aktyvumas buvo sinergiškai sustiprintas kombinuotai gydant LJE ir CTE.

4 pav. Minoksidilio (MXD, 3 proc.) arba Laminaria japonica ekstrakto (LJE) ir (arba)Cistanche tubulosaekstraktas (CTE) (mg/kg) dėl -glutamiltranspeptidazės (-GTP) aktyvumo 14 (A) ir 21 (B) gydymo dieną.

* Žymiai skiriasi nuo įprastos (Nor) kontrolės (P<>

5 pav. Minoksidilio (MXD, 3 proc.) arba Laminaria japonica ekstrakto (LJE) ir (arba)Cistanche tubulosaekstraktas (CTE) (mg/kg) dėl šarminės fosfatazės (ALP) aktyvumo 14 (A) ir 21 (B) gydymo dienomis.

* Žymiai skiriasi nuo įprastos (Nor) kontrolės (P<>

Analizuojant EGF, gerai žinomasplaukų augimąMinoksidilis padidino EGF lygį 3,5 karto, palyginti su normalia kontrole, tiek 14, tiek 21 dieną (6 pav.). LJE (18 mg/kg) padidino EGF tik 21 dieną, o CTE (162 mg/kg) labai padidino savo gamybą 14 ir 21 dienomis. Įdomu pažymėti, kad kombinuotas LJE ir CTE gydymas（Cistanche tubulosaekstraktas)net vartojant mažas dozes, pasireiškė ryškus sinerginis poveikis.

Gydymas minoksidiliu taip pat padidino VEGF lygį 50-80 procentais virš kontrolinės vertės (7 pav.). Nors LJE buvo neveiksminga, CTE (Cistanche tubulosaekstraktas)padarė nepaprastą stiprinamąjį poveikį. Be to, kombinuota LJE ir CTE terapija（Cistanche tubulosaekstraktas)14 dieną ankstyvoje fazėje parodė sinerginį aktyvumą.

6 pav. Minoksidilio (MXD, 3 proc.) arba Laminaria japonica ekstrakto (LJE) ir (arba)Cistanche tubulosaekstraktas (CTE) (mg/kg) dėl epidermio augimo faktoriaus (EGF) kiekio 14 (A) ir 21 (B) gydymo dienomis.

* Žymiai skiriasi nuo įprastos (Nor) kontrolės (P<>

7 pav. Minoksidilio (MXD, 3 proc.) arba Laminaria japonica ekstrakto (LJE) ir (arba)Cistanche tubulosaekstrakto (CTE) (mg/kg) dėl kraujagyslių endotelio augimo faktoriaus (VEGF) kiekio 14 (A) ir 21 (B) gydymo dienomis.

* Žymiai skiriasi nuo įprastos (Nor) kontrolės (P<>

Karagenino įpurškimas į ICR pelės oro maišelį padidino eksudato tūrį maišelyje 6 kartus daugiau nei kontrolinis lygis (1 lentelė). Tokį padidėjusį eksudaciją žymiai sumažino gydymas LJE (18 ir 54 mg/kg) arba CTE.（Cistanche tubulosaekstraktas)(54 ir 162 mg/kg). Pažymėtina, kad kombinuotas gydymas LJE ir CTE dar labiau sumažino eksudato kiekį, palyginti su individualiu poveikiu. Karagenino injekcija drastiškai padidino uždegiminių ląstelių skaičių: neutrofilų, monocitų ir limfocitų kontrolinius lygius atitinkamai 34,6, 4,2 ir 24,9 karto (1 lentelė). Tačiau LJE ir CTE（Cistanche tubulosaekstraktas)žymiai sumažino uždegimines ląsteles priklausomai nuo dozės, kai LJE buvo šiek tiek pranašesnė už CTE（Cistanche tubulosaekstraktas). Tikimasi, kad sinergetinis poveikis uždegiminių ląstelių infiltracijai buvo pasiektas kartu vartojant LJE ir CTE（Cistanche tubulosaekstraktas).
Lygiagrečiai su uždegiminių ląstelių infiltracija maišelyje, NO ir PGE2 kiekis maišelyje taip pat drastiškai padidėjo po karagenino injekcijos (1 lentelė). Palyginti su švelniu LJE poveikiu, CTE（Cistanche tubulosaekstraktas)žymiai sumažino NO koncentraciją. Kombinuotas LJE ir CTE gydymas（Cistanche tubulosaekstraktas)toliau sumažino NO lygį priklausomai nuo dozės. Panašiai padidėjusį PGE2 lygį sinergiškai slopino kombinuotas LJE ir CTE gydymas (1 lentelė).

Diskusija

Žmogaus galvoje yra vidutiniškai 100,{1}} plaukų folikulų. Per visą gyvenimą kiekvienas folikulas auga ir slenka apie 20 kartų, todėl kasdien iškrenta 100 plaukų [25]. Plaukų slinkimas, įskaitant alopeciją ir nuplikimą, yra varginanti vyrų ir moterų būklė, ypač šiuolaikinėje visuomenėje. Todėl labai svarbu sukurti naujus gydymo būdus, kurie apsaugotų nuo plaukų slinkimo ir pagerintų plaukų ataugimą. Šiuo požiūriu alternatyvioji medicina sulaukė tyrėjų susidomėjimo.

Su senėjimu susiję morfologiniai, histocheminiai ir biocheminiai vyriškojo nuplikimo aspektai buvo atskleisti atlikus daugybę kelminių makakų tyrimų. Vyriško nuplikimo atveju telogeno fazė pailgėjo, o anageno fazė sutrumpėjo. Taigi manoma, kad norint pagerinti plaukų slinkimą, labai svarbu palaikyti plaukų folikulų pailgėjimą, kuris vyksta nuo ankstyvo anageno iki vidurio anageno [26]. Šiame tyrime mes parodėmeplaukų augimą- palengvina kombinuoto gydymo LJE ir CTE veiklą（Cistanche tubulosaekstraktas). Svarbiausia, kad kombinuotas LJE (54 mg/kg) ir CTE (162 mg/kg) receptas parodė puikų plaukų augimo aktyvumą, nepaisant geriamųjų ekstraktų vartojimo. Pažymėtina, kad kombinuotojo terapijos poveikis buvo panašus į didelės koncentracijos (3 proc.) išgryninto junginio minoksidilio panaudojimo per odą poveikį, nors LJE ir CTE veikliųjų medžiagų koncentracijos.（Cistanche tubulosaekstraktas)odoje po geriamojo vartojimo nepatvirtinta.
Pelės odoje -GTP aktyvumas yra ryškus anageno metu, bet labai sumažėja telogeno metu [27]. Odoje fermentas egzistuoja tik plaukų folikulų išoriniuose ir vidiniuose šaknų apvalkaluose, esančiuose žemiau riebalinių liaukų, kuriose nėra -GTP [27]. Palyginimui, ALP yra ryškiai išreikštas plaukuotumo vienetais, o aktyvumas didėja plaukų ataugimo srityje. ALP, kaip angiogeninis faktorius, pagerina odos papilių aprūpinimą mityba ir taip padidina storį anageno metu [28]. Tačiau buvo patvirtinta, kad ALP aktyvumas sumažėjo alopecinėje odoje [21]. Mechanistinio tyrimo metu etaloninis junginys minoksidilis žymiai sustiprino -GTP ir ALP aktyvumą, o tai reiškia, kad minoksidilis palengvinaplaukų augimąne tik skatinant plaukų folikulus
į anageno fazę, bet ir pagerinant kraujotaką angiogenezės būdu. Kadangi LJE padidino ALP aktyvumą, siūloma, kad LJE turėtų teigiamą poveikįplaukų augimądėl savo angiogeninio potencialo, kaip buvo nustatyta iš ankstesnio tyrimo, kad fukoidanas, veiklioji LJE medžiaga, turi kraujotaką gerinantį poveikį [29]. Palyginimui, CTE（Cistanche tubulosaekstraktas)sustiprino ir -GTP, ir ALP veiklą, o tai rodo jo poveikį anageno fazės indukcijai ir kraujo tėkmės pagerėjimui. Atsižvelgiant į sinergetinį poveikį GTP ir ALP fermentams, manoma, kad kartu vartojant LJE ir CTE galima greičiau ataugti plaukai.（Cistanche tubulosaekstraktas).
Gerai žinoma, kad įvairūs citokinai ir augimo faktoriai, įskaitant EGF ir VEGF, dalyvauja reguliuojant plaukų morfogenezę ir augimą [30, 31]. Įdomu pažymėti, kad iš odos papilių ląstelių gauti veiksniai turi chemotaktinį poveikį aplinkinėms ląstelėms, o tai savo ruožtu skatinaplaukų augimą[32]. EGF išreiškiamas kartu su plaukų folikulų vystymusi [33, 34]. Nors ir EGF, ir jo receptoriaus (EGFR) ekspresija išoriniame šaknies apvalkale yra sumažinta, kai baigiasi folikulų augimas, jų ekspresija atsistato, kai folikulinės ląstelės patenka į anageno fazę. VEGF vaidina svarbų vaidmenį angiogenezėje uždegiminės reakcijos ir naviko vystymosi metu [35]. Ypač kraujagyslių tinklas yra glaudžiai susijęs su plaukų augimo ciklu [36-38]. Todėl buvo patvirtinta, kad VEGF genų ekspresija skiriasi priklausomai nuo žmogaus plaukų ciklo [39].

Iš šio tyrimo rezultatų paaiškinama, kadplaukų augimąMinoksidilio skatinamasis poveikis gali būti dėl jo galimo EGF ir VEGF reguliavimo, kurie palengvina folikulų augimą ir angiogenezę. Nors LJE neturėjo įtakos VEGF ekspresijai, po geriamojo vartojimo padidino EGF kiekį odoje. Palyginimui, CTE（Cistanche tubulosaekstraktas)buvo veiksmingas tiek EGF, tiek VEGF ekspresijai. Visų pirma, LJE ir CTE（Cistanche tubulosaekstraktas)darė papildomą poveikį augimo faktorių raiškai.

Be plaukų pailgėjimo, po gydymo minoksidiliu, LJE ir (arba) CTE žymiai pagerėjo plaukų folikulų vientisumas.（Cistanche tubulosaekstraktas)atliekant mikroskopinį tyrimą. Ankstyvoje pacientų ir gyvūnų modelių plaukų slinkimo ir nuplikimo fazėje buvo pažeistas folikulų vientisumas ir sumažėjo plauko stiebo storis, o atsinaujinančiuose plaukuose atsistato folikulų vientisumas ir stiebo storis. Įdomu tai, kad toks teigiamas poveikis plaukų komponentų vientisumui ir ataugimui buvo pasiektas vartojant LJE plus CTE per burną.（Cistanche tubulosaekstraktas), kurio poveikis buvo panašus į vietinį didelės koncentracijos minoksidilio vartojimą. Todėl tikimasi, kad derinys, skirtas gerti LJE ir CTE（Cistanche tubulosaekstraktas)gali būti gana patogus receptas, palyginti su minoksidilio vartojimu per odą.
Pelės alopecijos modelyje dažna steroidams jautrių limfocitų infiltracija aplink plaukų folikulus, panaši į žmogaus alopecijos imunoterapiją su ašarų liaukų uždegimu [17, 40]. Šiame tyrime karagenino sukeltas odos uždegimas buvo žymiai susilpnintas LJE ir CTE.（Cistanche tubulosaekstraktas)gydymas; ty kraujagyslių eksudacija ir uždegiminių ląstelių infiltracija buvo sinergiškai slopinami. Kiekybinės analizės metu pagrindiniai uždegimo mediatoriai NO ir PGE 2 buvo iš esmės kontroliuojami po to, kai kartu buvo vartojama LJE ir CTE.Cistanche tubulosaekstraktas). Įdomu tai, kad kadangi LJE priešuždegiminis aktyvumas buvo didesnis nei pusiau išgryninto fukoidano [16], daroma prielaida, kad LJE, be fukoidano, gali būti ir papildomos veikliosios medžiagos.

Apibendrinant, rezultatai rodo, kad kombinuotas geriamasis gydymas LJE ir CTE（Cistanche tubulosaekstraktas)pagerina plaukų slinkimą reguliuodamas augimo faktorius ir susijusius fermentų aktyvumus ir iš dalies dėl priešuždegiminio poveikio. Todėl siūloma naudoti LJE ir CTE derinį（Cistanche tubulosaekstraktas)Netinkamos klinikinės dozės ir santykiai gali būti tinkamas receptas pacientams, sergantiems plaukų slinkimu.

Cistanche tubulosaekstrakto produktai

Padėkos

Šį tyrimą finansiškai rėmė Chungcheong pirmaujančio pramonės biuro ekonominio regiono pirmaujanti pramonės plėtra, Korėjos technologijų pažangos institutas (KIAT) ir Žinių ekonomikos ministerija (MKE), o iš dalies – didelės pridėtinės vertės maisto technologijų plėtros programa. , Žemės ūkio, maisto ir kaimo reikalų ministerija (MAFRA; dotacijos numeris 113034-3).

Interesų konfliktas

Autoriai pareiškia, kad nėra finansinio interesų konflikto skelbti šiuos rezultatus.

Iš: "Laminaria japonica ir Cistanche tubulosa ekstraktų kombinuoto gydymo efektyvumas plaukų augimui"Kyungha Shin1# ir kt

--- Lab Anim Res 2015: 31(1), 24-32http://dx.doi.org/10.5625/lar.2015.31.1.24

NUORODOS

1. Kim JS, Kang BS, Park HJ, Kim DY, Hwang SY, Nam SY, Yun YW, Lee BJ. Vaistažolių ekstraktų mišinių poveikis C3H/HeJ pelių plaukų ataugimui skatinantis. J Biomed Res 2009; 10(3): 99-108.
2. Paus R, Cotsarelis G. Plaukų folikulų biologija. N Engl J Med 1999; 341 straipsnio 7 dalis; 491-497.
3. Cotsarelis G. Plauko folikulas: miršta dėl dėmesio. Am J Pathol 1997; 151(6): 1505-1509.
4. Cotsarelis G, Sun TT, Lavker RM. Etiketes išlaikančios ląstelės yra išgaubtoje žievės dalyje: poveikis folikulų kamieninėms ląstelėms, plaukų ciklui ir odos kancerogenezei. Ląstelė 1990; 61(7): 1329-1337.
5. Oshima H, Rochat A, Kedzia C, Kobayashi K, Barrandon Y. Plaukų folikulų morfogenezė ir atnaujinimas iš suaugusių multipotentinių kamieninių ląstelių. Ląstelė 2001; 104(2): 233-245.
6. Burton JL, Marshall A. Hipertrichozė dėl minoksidilio. Br J Dermatol 1979; 101(5): 593-595.
7. Meisheri KD, Cipkus LA, Taylor CJ. Minoksidilio sulfato sukeltos vazodilatacijos veikimo mechanizmas: padidėjus K ir pralaidumui. J Pharmacol Exp Ther 1988; 245(3): 751-760.
8. Buhl AE, Waldon DJ, Baker CA, Johnson GA. Minoksidilo sulfatas yra aktyvus metabolitas, kuris stimuliuoja plaukų folikulus. J Invest Dermatol 1990; 95(5): 553-557.
9. Kaufman KD, Dawber RP. Finasteridas, 2 5tipo alfa-reduktazės inhibitorius, skirtas androgenine alopecija sergantiems vyrams gydyti. „Expert Opin Investig Drugs“, 1999 m.; 8(4): 403-415.
10. Feldman SC, Reynaldi S, Stortz CA, Cerezo AS, Damont EB. Leathesia difformis fukoidano frakcijų antivirusinės savybės. Fitomedicina 1999; 6(5): 335-340.
11. Wang J, Zhang Q, Zhang Z, Song H, Li P. Mažos molekulinės masės fukoidano frakcijų, išgautų iš Laminaria japonica, potencialus antioksidantas ir antikoaguliantas. Int J Biol Macromol 2010; 46(1): 6-12.
12. Bojakowski K, Abramczyk P, Bojakowska M, Zwoliñska A, Przybylski J, Gaciong Z. Fucoidan pagerina inkstų kraujotaką ankstyvoje žiurkės inkstų išemijos / reperfuzijos pažeidimo stadijoje. J Physiol Pharmacol 2001; 52(1): 137-143.
13. Li N, Zhang Q, Song J. Fukoidano, išskirto iš Laminaria japonica Wistar žiurkėse, toksikologinis įvertinimas. Food Chem Toxicol 2005; 43(3): 421-426.
14. Shimoda H, Tanaka J, Takahara Y, Takemoto K, Shan SJ, Su MH. Cistanche tubulosa ekstrakto, tradicinio neapdoroto kinų vaisto, hipocholesteroleminis poveikis pelėms. Am J Chin Med 2009; 37(6): 1125-1138.
15. Yamada P, Iijima R, Han J, Shigemori H, Yokota S, Isoda H. Iš Cistanche tubulosa išskirto akteozido slopinamasis poveikis cheminių mediatorių išsiskyrimui ir uždegiminių citokinų gamybai RBL-2H3 ir KU812 ląstelėse. Planta Med 2010; 76(14): 1512-1518.
16. Kyung J, Kim D, Park D, Yang YH, Choi EK, Lee SP, Kim TS, Lee YB, Kim YB. Sinergetinis priešuždegiminis Laminaria japonica fukoidan ir Cistanche tubulosa ekstrakto poveikis. Lab Anim Res 2012; 28 straipsnio 2 dalis: 91-97.
17. Chee E, Fong KS, Al Jajeh I, Nassiri N, Rootman J. Ašarų liaukų uždegimo ryšys su alopecija areata. Orbita 2015; 34(1): 45-50.
18. Brzezinska-Wcislo L, Bergler-Czop B, Wcislo-Dziadecka D, LisSwiety A. Nauji areata alopecijos gydymo aspektai. Postepy Dermatol Alergol 2014; 31(4): 262-265.
19. Hattori M, Ogawa H. Biocheminė analizėplaukų augimąiš senėjimo ir fermentų veiklos aspektų. J Dermatol 1983; 10(1): 45-54.
20. Lee SH, Lee HJ, Baek IJ, Yon JM, Nam SY, Lee BJ, Yun YW, Kim YB, Hwang SY, Hong JT. DREAMMO® galvos odos losjono poveikisplaukų augimąC57BL/6 pelių alopecijos modelio skatinimas. Lab Anim Res 2006; 22(1): 91-96.
21. Handjiski BK, Eichmüller S, Hofmann U, Czarnetzki BM, Paus R. Šarminės fosfatazės aktyvumas ir lokalizacija pelių plaukų ciklo metu. Br J Dermatol 1994; 131(3): 303-310.
22. Cross MJ, Dixelius J, Matsumoto T, Claesson-Welsh L. VEGF receptorių signalo perdavimas. Trends Biochem Sci 2003; 28(9): 488-494.
23. Shin S, Jeon JH, Park D, Jang JY, Joo SS, Hwang BY, Choe SY, Kim YB. Angelica gigas etanolio ekstrakto priešuždegiminis poveikis karagenino ir oro maišelio uždegimo modelyje. Exp Anim 2009; 58(4): 431-436.
24. Kim D, Park D, Kyung J, Yang YH, Choi EK, Lee YB, Kim HK, Hwang BY, Kim YB. Houttuynia cordata superkritinio ekstrakto priešuždegiminis poveikis karagenino ir oro maišelio uždegimo modelyje. Lab Anim Res 2012; 28(2): 137-140.
25. Rebora A. Androgeninės alopecijos patogenezė. J Am Acad Dermatol 2004; 50(5): 777-779.
26. Shirai A, Ikeda J, Kawashima S, Tamaoki T, Kamiya T. KF19418, naujas junginys, skirtasplaukų augimąin vitro ir in vivo pelių modelių skatinimas. J Dermatol Sci 2001; 25 straipsnio 3 dalis: 213-218.
27. Kawabe TT, Kubicek MF, Johnson GA, Buhl AE. Gama-glutamilo transpeptidazės aktyvumo naudojimas kaip plaukų ciklo ir anageno indukcijos žymeklis pelių plaukų folikuluose. J Invest Dermatol 1994; 103(1): 122-126.
28. Hamada K, Suzuki K. Biocheminių rodiklių įvertinimas kaip plaukų ciklo žymuo C3H pelėse. Exp Anim 1996; 45(3): 251-256.
29. Park SJ, Lee KW, Lim DS, Lee S. Sulfatuotas polisacharidas fukoidanas stimuliuoja osteogeninę žmogaus riebalinių kamieninių ląstelių diferenciaciją. Stem Cells Dev 2012; 21(12): 2204-2211.

30. Danilenko DM, Ring BD, Pierce GF. Augimo faktoriai ir citokinai plaukų folikulų vystyme ir cikle: naujausios gyvūnų modelių įžvalgos ir klinikinės terapijos galimybės. Mol Med Today 1996; 2(11): 460-467.
31. Ozeki M, Tabata Y. In vivo skatino pelių plaukų folikulų augimą kontroliuojamu augimo faktorių išsiskyrimu. Biomedžiagos 2003; 24(13): 2387-2394.
32. Fujie T, Katoh S, Oura H, Urano Y, Arase S. The chemotactic effect of a dermal papilla cell derived factor on outer root sheath cells. J Dermatol Sci 2001; 25(3): 206-212.
33. Stenn KS, Paus R. Plaukų folikulų ciklo kontrolė. Physiol Rev 2001; 81(1): 449-494.
34. Chapman RE, Hardy MH Intraderminiu būdu sušvirkšto ir lokaliai tepamo pelių epidermio augimo faktoriaus poveikis merino avių vilnos augimui, odai ir vilnos folikulams. Aust J Biol Sci 1988; 41 straipsnio 2 dalis: 261-268.
35. Dvorakas HF, Brownas LF, Detmaras M, Dvorakas AM. Kraujagyslių pralaidumo faktorius / kraujagyslių endotelio augimo faktorius, mikrovaskulinis hiperpralaidumas ir angiogenezė. Am J Pathol 1995; 146(5): 1029-1039.
36. Ellis RA, Moretti G. Kraujagyslių modeliai, susiję su katageniniais plaukų folikulais žmogaus galvos odoje. Ann NY Acad Sci 1959; 83: 448-457.
37. Stenn KS, Fernandez LA, Tirrell SJ. Angiogeninės žiurkės vibrisos plaukų folikulo savybės yra susijusios su svogūnėliu. J Invest Dermatol 1988; 90 straipsnio 3 dalis: 409-411.
38. Yano K, Brown LF, Detmar M. Kontrolėplaukų augimąir folikulų dydį dėl VEGF sukeltos angiogenezės. J Clin Invest 2001; 107(4): 409-417.
39. Lachgar S, Charveron M, Ceruti I. VEGF mRNR indiferentinių plaukų folikulų stadijų pasiskirstymas fluorescencine in situ hibridizacija kartu su konfokaline lazerine mikroskopija. In: Hair Research for the Next Millennium (Van Neste DJJ, red.), Elsevier, Amsterdamas, 1996; pp 407-12.
40. Freyschmidt-Paul P, Sundberg JP, Happle R, McElwee KJ, Metz S, Boggess D, Hoffmann R. Sėkmingas į alopeciją panašaus plaukų slinkimo gydymas kontaktiniu jautrikliu kvadrato rūgšties dibutilo esteriu (SADBE) C3H/HeJ pelėms . J Invest Dermatol 1999; 113(1): 61-68.