Hipokampo neurofiziologijos ir erdvinės atminties paros kitimo ir lyties skirtumų tyrimas 2 dalis

Visos ląstelės patch-clamp įrašai

Visi duomenys buvo surinkti iš vainikinio hipokampo pjūvių ZT 2–6 (dieną) arba ZT 13–17 (naktį) 32 laipsnių temperatūroje standartiniame ACSF, kuriame yra: 125 NaCl, 2,5 KCl, 1,25 Na2PO4, 2 CaCl2, 1 MgCl2, 25 NaHCO3 ir 25 gliukozė, burbuliuota 95 % O2/5 % CO2.

Koroninis hipokampas yra svarbi smegenų sritis, kuri atlieka pagrindinį vaidmenį žmogaus atminties procese.

Tyrimai rodo, kad vainikinis hipokampas yra labai svarbus norint išsaugoti ir atkurti ilgalaikius prisiminimus. Tai, ką žmonės vadina „keliautoju laiku“, gali sugrąžinti žmones į praeities patirtį ir patirtį. Koroninis hipokampas atlieka svarbų vaidmenį mūsų tapatybės, emocinės kontrolės, savęs supratimo ir tarpasmeniniuose santykiuose.

Laikui bėgant mūsų atmintis blogėja, tačiau yra keletas dalykų, kuriuos galime padaryti, kad pagerintume atmintį. Visų pirma, svarbu išlaikyti teigiamą požiūrį, nes tai gali sumažinti stresą ir pagerinti atmintį. Antra, daugiau mankštos ir dietos gali padėti skatinti vainikinio hipokampo funkciją ir būti naudinga fizinei sveikatai. Galiausiai, atminties lavinimas ir įrankių, tokių kaip užrašų knygelės, naudojimas taip pat gali padėti pagerinti atmintį.

Apskritai, vainikinis hipokampas vaidina nepakeičiamą vaidmenį žmogaus atmintyje ir pažinimo veikloje. Todėl turėtume atkreipti dėmesį į jo vaidmenį ir kiek įmanoma išlaikyti sveiką. Imdamiesi iniciatyvių veiksmų, galime pagerinti savo atmintį ir sulėtinti jos blogėjimą, kad galėtume toliau aiškiai mąstyti ir gyventi prasmingą gyvenimą. Matyti, kad turime pagerinti atmintį, o Cistanche deserticola gali žymiai pagerinti atmintį, nes Cistanche deserticola taip pat gali reguliuoti neuromediatorių pusiausvyrą, pavyzdžiui, padidinti acetilcholino ir augimo faktorių kiekį. Šios medžiagos labai svarbios atminčiai ir mokymuisi. Be to, mėsa taip pat gali pagerinti kraujotaką ir skatinti deguonies tiekimą, o tai gali užtikrinti, kad smegenys gautų pakankamai maistinių medžiagų ir energijos, taip pagerinant smegenų gyvybingumą ir ištvermę.

Spustelėkite žinokite būdus, kaip pagerinti smegenų veiklą

CA1 piramidinių neuronų visos ląstelės patch-clamp įrašai buvo gauti naudojant aklo pleistro techniką. Trumpai tariant, patchpipetės buvo dedamos į vidurinį arba šoninį CA1 srities galą (priklausomai nuo to, ar pjūvis buvo iš kairiojo ar dešiniojo pusrutulio) 50–150 mM gylyje, buvo taikomas teigiamas slėgis, nes pipete lėtai judėjo į vidurį arba į šoną. piramidinės ląstelės sluoksnis, kol spartus pipetės pasipriešinimo padidėjimas rodė kontaktą su neuronu, tuo metu buvo išleistas teigiamas slėgis, buvo gautas sandarus sandarumas (0,1 GX) ir buvo taikomas nedidelis neigiamas slėgis, kad būtų pasiekta visos ląstelės pleistro konfigūracija.

Duomenys buvo gauti naudojant Multiclamp700B stiprintuvą, Axon Digidata 1440A ir 1550B skaitmenizatorių ir pClamp10/11 programinę įrangą (Molecular Devices). Patch pipetės (BF150–086; Sutter Instruments) buvo ištrauktos ant Sutter P-97 horizontalaus traukiklio Sutter Instruments. ) atsparumui nuo 2,5 iki 5 MV. Ląstelės buvo dializuojamos 5 minutes prieš eksperimentinius įrašus. Analizei naudotos ląstelės turėjo prieigos pasipriešinimą, 30 MV, kuri nepadidėjo 0,20 % per kiekvieno 5-min eksperimento trukmę.

Įtampos gnybtų eksperimentams visos ląstelės buvo laikomos 70 mV, o signalai buvo filtruojami 5 kHz ir skaitmeninami 10 kHz. IPSC eksperimentuose buvo naudojamas pleistras pipetės tirpalas, kurio sudėtyje (mM): 140 CsCl, 10 EGTA, 5 MgCl2, 2 NaATP, 0,3 Na-GTP, 10 HEPES, 0,2 % biocitino (pH 7,3, 290 mm) ir 5 QX{{19} (natrio kanalų antagonistas) pridėta naudojimo metu. IPSC buvo farmakologiškai izoliuoti su 10 mM NBQX (AMPAR antagonistas, HelloBio) ir 5 mM CPP (NDMAR antagonistas, Hello Bio) perfuzija.

EPSC eksperimentuose buvo naudojamas pleistro pipetės tirpalas, kuriame yra (inmM): 100 CsOH, 100 gliukono rūgšties (50%), 0,6 EGTA, 5MgCl2, 2 Na- Naudojant ATP*3H2O, 0,3 Na-GTP, 40 HEPES, 7 fosfokreatinas, biocitinas (0,2 %) ir 5 QX-314. EPSC buvo farmakologiškai izoliuoti naudojant 10 mM gabazino (GABAAR antagonisto, Hello Bio) perfuziją vonioje. Atskiri eksperimentai miniatiūriniams IPSC ir miniatiūriniams EPSC (mIPSC/mEPSC) matuoti buvo užregistruoti kaip aukščiau, pridedant 0,5 mM tetrodotoksino (TTX; įtampa reguliuojamas natrio kanalas). inhibitorius, Tocris).

Srovės apkabos eksperimentams signalai buvo filtruojami 10 kHz ir skaitmeninami 20 kHz dažniu. Pleistro pipetės tirpale (mM): 135 K-gliukonato, 2 MgCl2, 0,1 EGTA,10 HEPES, 4 KCl, 2 Mg-ATP, 0,5 Na-GTP, 10 fosfokreatino ir biocitinas (0,2 %; pH 7,3, 310 mOsm ir 2–4 MV). Neuronų jaudrumas buvo įvertintas įvedant progresuojančius depoliarizuojančios srovės žingsnius iš ramybės (0–500 pA, D 20 pA) ir skaičiuojant per 1000 sužadintų veikimo potencialų skaičių. ms dabartinis žingsnis.

Atsako nuolydis buvo gautas apskaičiuojant tiesinį ryšį tarp degimo dažnio ir įpurkštos srovės per {{0}} iki 400-pAsteps. Taip pat buvo išmatuotas didžiausias veikimo potencialo (AP) šaudymo dažnis (max) ir srovė, kuriai esant max įvyko (Imax). Nuokrypis buvo matuojamas kaip hiperpoliarizacinės srovės įpurškimo didžiausios įtampos amplitudė (mV), kuri pasiekė pastovų 90–93 mV membranos potencialą. Įėjimo varža (MX) buvo matuojama kaip srovės atsako į hiperpoliarizuojančios srovės seriją nuolydis. injekcijos (nuo 150 iki 0 pA, D 50 pA).

Reobazė buvo apibrėžta kaip minimali srovė, reikalinga vienam AP sukelti. Veikimo potencialo savybėms analizuoti buvo naudojami pavieniai AP, pažymėti reobaze (1, 2 lentelės). AP amplitudė buvo apibrėžta kaip įtampos skirtumas tarp AP slenksčio ir jo smailės. Slenkstis buvo apibrėžtas kaip įtampa (mV), kuriai esant AP pirmoji išvestinė (dV/dt) viršijo 20 mV/s. AP kilimo laikas buvo laikas (ms), per kurį AP pasiekia 90% didžiausios amplitudės nuo 10% smailės. Skilimo laikas buvo laikas nuo 90% iki 10% AP smailės amplitudės. Pusė pločio buvo laikas (ms) tarp AP bangos formos kilimo ir mažėjimo pusės amplitudės. Pohiperpoliarizacija (AHP) buvo skirtumas tarp pradinės linijos ir labiausiai hiperpoliarizuoto taško, atsirandantis per 3 ms po greito AHP (fAHP) AP slenksčio ir 10–50 ms po AP slenksčio vidutinio AHP (mAHP).

Didžiausias AP padidėjimas ir sumažėjimas buvo apibrėžti kaip didžiausias nuolydis (DmV / Dms) atitinkamai AP padidėjimui ir mažėjimui. Pradinis membranos potencialas buvo apskaičiuotas kaip vidutinė įtampa per 1400- ms slinkimą 0-pA žingsnio metu. Pradiniai eksperimentai buvo atlikti nesant sinapsinių blokatorių, siekiant nustatyti, kaip lytis ir paros laikas prisideda prie CA1 piramidinių neuronų sužadinimo nepažeistoje grandinėje. Norint pradėti vertinti sinapsinio perdavimo įtaką padidėjusiam jaudrumui naktį, buvo atliktas atskiras tolesnis eksperimentas, dalyvaujant GABAA antagonistui gabazinui (10 mM) ir glutamaterginiams antagonistams NBQX (10 mM) ir CPP (5 mM). .

Imunohistochemija

Siekiant patvirtinti, kad ląstelės, užregistruotos postsinapsinėms srovėms matuoti, buvo CA1 piramidinės ląstelės, visos ląstelės buvo užpildytos biocitinu mažiausiai 2 0 min. Pjūviai, kuriuose yra užpildytų ląstelių, buvo fiksuojami 4% paraformaldehidu mažiausiai 24 valandas, tada plaunami 3 10 minučių PBS ir 2–3 valandas inkubuojami kambario temperatūroje TBS tirpale, kuriame yra 10% NDS, 3% BSA, 1% glicino, 0,4 % Triton X-100 ir streptavidinas-488(1:1000).

Tada griežinėliai buvo plaunami 3 10 minučių PBS ir pritvirtinami ant stiklinių stiklelių ir dengiamųjų stiklelių naudojant ProLongGold Antifade tvirtinimo terpę, kurioje yra DAPI. Skaidrės buvo vizualizuotos BZ-X700 fluorescenciniu mikroskopu (Keyence). Visos ląstelės, kurios pagal vietą ir morfologiją negalėjo būti klasifikuojamos kaip CA1 piramidinės ląstelės, nebuvo įtrauktos į analizę.

Analizė ir statistika
Duomenys buvo analizuojami ir vizualizuojami naudojant SPSS (27/28 versija) ir Prism-GraphPad programinę įrangą. Buvo įvertintos parametrinių testų prielaidos, įskaitant dispersijos normalumą ir homogeniškumą, o jei buvo pažeistos, duomenys buvo transformuojami arba naudojami neparametriniai testai. Jei nenurodyta kitaip, reikšmingumas buvo priskirtas p, 0.05. Visų statistinių testų suvestinė pateikta išplėstinių duomenų lentelėje 1-1.

Objekto vietos atmintis

OLM duomenys buvo analizuojami naudojant nepriklausomą dvipusę ANOVA, kai nepriklausomi kintamieji buvo paros laikas ir lytis, o priklausomas kintamasis – diskriminacijos indeksas (1D pav.). Pirsono koreliacija buvo naudojama siekiant įvertinti ryšį tarp bendro tyrinėjimo laiko ir diskriminacijos indekso balų, o nenumatytų atvejų analizė buvo naudojama siekiant nustatyti ilgo ir žemo tyrinėjimo laiko pasiskirstymą pagal lytį ir paros laiką (Išplėsti duomenys 1-1B pav.) .

Lauko įrašai

Įvesties-išvesties duomenys buvo analizuojami naudojant linijinį mišrų modelį su fEPSP nuolydžiu kaip paros laiko, lyties ir stimuliacijos intensyvumo funkcija. Atliekant LTP eksperimentus, fEPSP nuolydžiai buvo normalizuoti pagal pradinius atsakymus, o atsakymai, gauti per paskutines 10 minučių po HFS įrašymo laikotarpio, buvo analizuojami naudojant trijų krypčių ANOVA su pakartotiniais matavimais (RM-ANOVA).

Visos ląstelės patch-clamp elektrofiziologija

Postsinapsinės srovės (slopinančios ir sužadinamosios) buvo automatiškai aptiktos iš 5-minutės įrašymo, naudojant pClamp įvykių šablono paiešką, o tada rankiniu būdu patikrintos, ar nėra klaidingų įvykių. Amplitudės ir intereventinterval (IEI) buvo analizuojami naudojant apibendrintą įvertinimo lygtį (GEE), kuri leido įvertinti parametrus pagal populiacijos vidurkio modelius, kartu atsižvelgiant į pasikartojančių matavimų koreliacijas tiriamiesiems (Reed ir Kaas, 2010; Cook ir kt., 2016).

GEE modelis apibrėžė nestruktūruotą darbo koreliacijos matricos struktūrą, subjektinį ląstelės poveikį ir subjektinį postsinapsinių įvykių poveikį. Neapdoroti duomenys turėjo reikšmingą teigiamą pakreipimą su ekstremaliomis reikšmėmis, todėl buvo iškirpti viršutiniai ir apatiniai iškrypimai (10 %), po kurio buvo atlikta log transformacija amplitudės duomenų atveju arba log 1 1 transformacija IEI duomenų atveju , kad atitiktų normaliųjų skirstinių prielaidas prieš analizę.

Visi srovės gnybtų duomenys buvo išanalizuoti naudojant EasyElectrophysiology (Easy Electrophysiology, RRID: SCR_021190), programinės įrangos paketą, kuriame naudojamas Neo (Garcia ir kt., 2014). Veiksmų potencialai buvo skaičiuojami naudojant veiksmų potencialo skaičiavimo modulį su numatytuoju automatiniu slenksčio smaigalio algoritmu. RM-ANOVA buvo naudojamas analizuoti veikimo potencialą dabartiniuose etapuose, kurių duomenys nepažeidė tiesiškumo ir normalumo prielaidų: 160–400 pA. Visos kitos membranos savybės (1, 2 lentelės) buvo analizuojamos naudojant dvipusę ANOVA su nepriklausomais paros laiko ir lyties kintamaisiais. Prieš galutinę statistinę analizę visi srovės gnybtų duomenys buvo stratifikuoti pagal padėtį išilgai priekinės ir užpakalinės ašies.

Rezultatai

Dienos ir nakties OLM našumo skirtumai priklauso nuo lyties

Norėdami ištirti sekso poveikį cirkadiniams mokymosi ir atminties ritmams, naudojome objekto vietos atminties (OLM) testą, kuris remiasi pelės polinkiu tyrinėti objektus naujose vietose, kad įvertintume hipokampo ir erdvinę atmintį (Barker ir Warburton, 2011; Takahashiet al. ., 2013; Chao ir kt., 2016). Nors buvo pranešta apie cirkadinius ir paros OLM veikimo skirtumus (Takahashi ir kt., 2013; Snider ir kt., 2016), lyties poveikis paros OLM veiklos svyravimams vis dar menkai suprantamas.

Mes nustatėme, kad OLM našumas skiriasi skirtingu paros metu; tačiau paros našumo skirtumo modelis skirtingoms lytims skyrėsi (p=0.023, dvipusė ANOVA sąveika).

Nors patinai veikė geriau naktį, palyginti su dieną, kaip ir tikėtasi (p {0}.028, paprastas pagrindinis poveikis, palyginti su diena ir naktimi patinams; 1D pav.), pelių patelės veikė geriau dieną, palyginti su naktis (p=0.004, paprasti pagrindiniai efektai lyginant dieną ir naktį moterims; 1D pav.). Dienos laikas ar lytis neturėjo įtakos bendram tyrinėjimo laikui (p=0.926 ir 0,936, pagrindiniai dviejų krypčių ANOVA efektai; išplėstiniai duomenys 1-1A pav.). Nebuvo jokio ryšio tarp viso tyrinėjimo ir DI balų (r(52)=0.053, ns p=0.704, Pirsono koreliacija; išplėstiniai duomenys, 1-1B pav.).

LTP dydis naktį yra didesnis nei dieną, nepriklausomai nuo lyties
Ilgalaikė potencija (LTP) laikoma ląstelių mokymosi ir atminties koreliacija. LTP CA3-CA1 sinapsėse yra didesnis naktį, lyginant su dieną malemicijoje (Chaudhury ir kt., 2005; Besing ir kt., 2017; Davis ir kt., 2020), tačiau, mūsų žiniomis, nėra paskelbtos ataskaitos apie paros laiko poveikį LTP dydžio suaugusioms pelių patelėms. Atsižvelgdami į mūsų išvadą, kad nuo hipokampo priklausomo atminties tyrimo paros skirtumai priklauso nuo lyties, toliau siekėme nustatyti, ar lytis turi įtakos dienos LTP skirtumams.

Pirma, norėdami įvertinti bazinio sinapsinio perdavimo stiprumą CA{{0}}CA1 sinapsėse, sugeneravome įvesties/išvesties kreives, matuodami fEPSP nuolydį nuo CA1 sluoksnio radiatum atsako į Schafferio kolateralinę stimuliaciją, kai didėja stimuliacijos intensyvumas ( 0.2–200 mA, D 10 mA) dieną ir naktį pelių patinai ir patelės (2A, B pav.). Nors nei lytis, nei paros laikas neturėjo reikšmingos įtakos baziniam sinapsiniam perdavimui tirtame stimulo diapazone (atitinkamai p=0.552 ir 0,981, LMM pagrindinis efektas), buvo reikšminga lyties stimuliacijos intensyvumo sąveika ( p, 0,001, LMM; 2A, B pav.).

Patinų fEPSP nuolydis buvo didesnis, palyginti su patelėmis, tik 18{7}}, 190 ir 200 mA, nepriklausomai nuo paros laiko (atitinkamai p =0,041, 0,043 ir 0,035; paprasti pagrindiniai efektai, lyginant patinus ir pateles pagal visus stimuliavimo intensyvumus; 2A pav.). Apskritai šie rezultatai rodo, kad paros laikas neturi įtakos baziniam sinapsiniam perdavimui ir kad lytis paveikia atsakus tik esant didžiausiam stimuliacijos intensyvumui.

Tada įvertinome sinapsinį plastiškumą CA3-CA1sinapsėje, matuodami LTP, reaguojant į trumpą aukšto dažnio stimuliaciją (HFS; 2C, D pav.). Kaip buvo pranešta anksčiau, tiek pelių patinų, tiek patelių LTP dydis buvo didesnis naktį, palyginti su dieną (p =0.003, trijų krypčių RM-ANOVA; 2C, D pav.); tačiau reikšmingo sekso poveikio ar sąveikos su juo nebuvo. Kartu šie radiniai rodo, kad paros laikas veikia pelių patinų ir patelių sinapsinį plastiškumą, nedarant įtakos bazinei sinapsinei jėgai.

CA1 piramidinių ląstelių sinapsinis slopinimas dienos metu yra didesnis nei naktį, nepriklausomai nuo lyties

LTP pokyčiai gali būti siejami su sinapsiniais mechanizmais ir (arba) vidiniais jaudrumo pokyčiais. Todėl pirmiausia siekėme nustatyti, ar paros laikas ir seksas veikia slopinamąjį ir sužadinamą sinapsinį perdavimą į CA1 piramidinius neuronus. Norėdami ištirti sinaptinį slopinimą į CA1 piramidines ląsteles, dieną ir naktį išmatavome spontaniškų IPSC (sIPSC) amplitudę ir dažnį, naudodami visos ląstelės įtampos spaustuką pelių patinams ir patelėms dieną ir naktį (3A pav.). Mes nustatėme, kad sIPSC interevent intervalas (IEI) dieną buvo trumpesnis nei naktį, nepriklausomai nuo lyties (paros laikas: p=0.033, GEE; 3A, C pav.), o tai rodo didesnį dažnį slopinančių įvykių per dieną.

SIPSC amplitudė dieną buvo didesnė nei naktį tiek vyrams, tiek moterims (paros laikas: p=0.008, GEE; 3A, E pav.). Šis padidėjęs sIPSC dažnis dienos metu ir amplitudė rodo stipresnį CA1 piramidinių neuronų slopinimą dienos metu, palyginti su naktimis.

Stipresnis sinapsinis slopinimas dienos metu gali atsirasti dėl padidėjusio presinapsinio GABA išsiskyrimo arba dėl padidėjusios postsinapsinės GABAAR funkcijos. Norėdami atskirti šias galimybes, dieną ir naktį išmatavome miniatiūrinius IPSCS (mIPSC) esant įtampai priklausančiam natrio kanalų blokatoriui tetrodotoksinui (TTX) tiek pelių patinuose, tiek patelėse dieną ir naktį (4A pav.). Nors nustatėme, kad nei lytis (p=0.392,GEE), nei paros laikas (p=0.760, GEE) neturėjo statistiškai reikšmingo poveikio mIPSC IEI, įvykiai iš vyrų buvo linkę rodyti dienos ir nakties skirtumas (p= 0.068, sekso ir dienos laiko sąveika, GEE; 3C pav.).

Dienos ir nakties skirtumų trūkumas moterims rodo, kad paros laiko poveikį sIPSC greičiausiai lemia vietinis interneuronų veikimo potencialo sudegimas. Vyrams vidutinės dienos ir nakties reikšmės skyrėsi; 12 ms (vidurkis ir SEM: vyrų diena, 98.{5}}.05 ms; vyrų naktis, 85.78 6 1.04 ms), o tai rodo, kad veiksmas nuo potencialo nepriklausomas slopinantis pūslelių išsiskyrimas gali būti dažnesnis naktį (3C pav.). Ištyrę mIPSC amplitudę, netikėtai nustatėme reikšmingą sąveiką tarp paros laiko ir lyties (p=0.038, GEE), o moterų amplitudės dienos metu buvo didesnės nei vyrų (p {{16}). }.006, Wald x2 poriniai palyginimai; 4E pav.); tačiau šis;2-pA skirtumas tikriausiai nėra biologiškai svarbus (moters diena: 34.68 6 1.01 pA;vyro diena: 32.67 6 1.02 pA, vidurkis 6 SEM) .

Apibendrinant, šie spontaniški ir miniatiūriniai IPSC duomenys rodo, kad nuo veikimo potencialo priklausomas slopinimas, bet ne savaiminis pūslelių susiliejimas su CA1 piramidinėmis ląstelėmis, yra didesnis dieną, palyginti su naktį, tiek vyrams, tiek moterims.

CA1 piramidinių ląstelių sinapsinis sužadinimas priklauso nuo lyties

Toliau norėjome nustatyti, ar lytis ir paros laikas turėjo įtakos spontaniškam sužadinimo sinapsiniam įvedimui į CA1 piramidinius neuronus. Pirma, mes matavome spontaniškus EPSC (sEPSC), naudodami viso elemento įtampos spaustuko įrašus (5A pav.). Nors reikšmingo pagrindinio paros laiko poveikio sEPSC amplitudei nebuvo (5E pav.), nepaisant lyties (p=0.371, GEE), statistinė tendencija, rodanti reikšmingą pagrindinį laiko poveikį. diena parodė, kad sEPSC IEI, užfiksuotas dieną, gali būti didesnis nei užfiksuotas naktį (p=0.052,GEE), o tai rodo didesnį sužadinimo įvykių dažnį naktį (5C pav.). Apskritai nustatėme, kad moterys turi daugiau sužadinimo sinapsės įvesties, didesnės sEPSCamplitudės ir trumpesnės IEI, palyginti su vyrais (atitinkamai p=0,022 ir 0,020, pagrindinis sekso poveikis, GEE; 5C pav., E).

Tada pakartojome šiuos eksperimentus, naudojant nuo įtampos priklausomą natrio kanalų blokatorių tetrodotoksiną (TTX) ir išmatavome miniatiūrines spontanines sužadinimo sinapsines sroves (mEPSC) ant CA1 piramidinių neuronų (6A pav.). MEPSC amplitudė nesiskyrė priklausomai nuo lyties ar laiko. dienos (p= 0.227 ir p= 0.150, pagrindinis lyties ir paros laiko poveikis, atitinkamai, GEE; 6E pav.); tačiau dienos ir nakties mEPSC IEI kitimas priklausė nuo lyties (p= 0.021, sekso sąveika dienos metu, GEE; 6C pav.). Patinų mEPSC IEI buvo trumpesnis naktį nei dieną (p= 0.002, Wald x2 poros palyginimai), o tai rodo didesnį sužadinimo įvykių dažnį naktį pelių patinams ir todėl tikėtina, kad padidės presinapsinio išsiskyrimo tikimybė; tačiau reikšmingo dienos ir nakties skirtumo tarp patelių nebuvo (p= 0.765, Wald x2 palyginimai pagal poras; 6C pav.).

Visi šie rezultatai rodo, kad nakties sEPSC dažnio padidėjimo tendencija (ypač moterims) priklauso nuo veikimo potencialo. Tačiau vyrams blokuojantis veikimo potencialas atskleidžia nakties dažnio padidėjimą, kuris nebuvo pastebėtas šiuose EPSC.

CA1 piramidiniai neuronai yra labiau sujaudinti naktį

Apskritai, mūsų stebėjimai rodo, kad sinapsinis slopinimas yra didesnis naktį, o sinapsinis sužadinimas yra didesnis dieną; taigi, toliau norėjome nustatyti, ar šis priešingas paros sinapsinio sužadinimo ir slopinimo svyravimas sukelia CA1 piramidinio neurono sužadinimo per parą kitimą. Šiuo tikslu mes užtaisėme CA1 piramidines ląsteles dabartiniu spaustuko režimu, kai grandinė nepažeista (ty nesant sinaptinių antagonistų) ir be suspaudimo ląstelių membranos potencialo. Į piramidinius neuronus įpurškėme vis didesnius depoliarizuojančios srovės kiekius (0–500 pA, D 20 pA, 1000- ms trukmės) ir išmatavome sukeltų veikimo potencialų skaičių.

Duomenys buvo renkami iš neuronų visoje hipokampo priekinėje ir užpakalinėje ašyje. Anksčiau paskelbtuose tyrimuose buvo nustatyta elektrofiziologinė CA1 piramidinių neuronų įvairovė, kuri priklauso nuo padėties tarp ašių (Spruston, 2008; Marcelin ir kt., 2012; Dougherty ir kt., 2012, 2013; Hönigsperger ir kt., 2015, 201 Kim ir Johnston; Malik ir kt., 2016; Milior ir kt., 2016); taigi, mes nusprendėme atsižvelgti į šį veiksnį, klasifikuodami visus neuronus į „priekinius“ arba „užpakalinius“ pagal vainikinės dalies anatomiją (Allen Reference Atlas iš https://atlas.brain-map.org/; 7A pav.).

Kai įtraukėme priekinę ir užpakalinę ašį kaip veiksnį į savo pradinį ANOVA modelį, įvertinantį kelis veikimo potencialus per dabartinį veiksmą, nustatėme, kad didžiausias veiksnys buvo regionas (p= 0.005, pagrindinis efektas, keturių krypčių RM-ANOVA). Be to, nustatyti reikšmingi regioniniai skirtumai tarp įvesties varžos (A: 64.27 6 1.95 MX, P:75.90 6 2.47 MX, p, 0.001, trijų krypčių ANOVA), reobazės (A). : 146.69 6 7.50 pA, P: 112.32 6 6}.10 pA, p, 0,001, trijų krypčių ANOVA) ir Imax arba srovė, kuria neuronai suveikia didžiausiu dažniu (A: 417.{101} {23}}.29 pA. P: 386.90 610.82 pA, p= 0.047, trijų krypčių ANOVA).

Šie skirtumai tarp priekinių ir užpakalinių neuronų yra suderinti su anksčiau paskelbtais tyrimais, kuriuose buvo nustatyta nugaros ir ventralinių CA1 piramidinių neuronų įvairovė. Nors mūsų vainikinio pjūvio paruošimas neleido mums visiškai izoliuoti ventralinio CA1, užpakalinėse dalyse labiau tikėtina, kad yra kai kurie ventraliniai CA1 piramidiniai neuronai. nustatė, kad užpakalinių neuronų savybės atitinka anksčiau paskelbtus duomenis apie ventralCA1 piramidinius neuronus, o priekiniai neuronai buvo panašūs į nugaros piramidinius neuronus (Dougherty ir kt., 2012; Malik ir kt., 2016).

For more information:1950477648nn@gmail.com