Daug fosforo turinti dieta skatina Bmp2 ir Spp1 MRNR ekspresijos reguliavimą žiurkės inkstuose

Išaiškinti vystymosi mechanizmąnefrokalcinozėsukeltas adaug fosforo (P) turinti dieta, mes sutelkėme dėmesį į su kaulais susijusius baltymus, tokius kaip kaulų morfogenetinis baltymas 2 ir osteopontinas. Šiame tyrime buvo tiriamas didelio P dietos poveikis Bmp2 ir Spp1 mRNR ekspresijai žiurkės inkstuose. Wistar žiurkės buvo suskirstytos į dvi grupes ir šeriamos kontroline dieta (kontrolinė grupė) arba didelio P dieta (aukšto P grupė).Inkstų kalcioir P koncentracija buvo žymiai padidinta aukšto P grupėje, palyginti su kontroline grupe. Tiek Bmp2, tiek Spp1 mRNR ekspresija buvo žymiai padidėjusi aukšto P grupėje, palyginti su kontroline grupe. Šie rezultatai rodo, kad didelio P dieta skatina Bmp2 ir Spp1 reguliavimąmRNR inkstuose.

Raktiniai žodžiai:daug fosforo turinti dieta, nefrokalcinozė, Bmp2, Spp1,inkstas, žiurkė

SPAUSKITE ČIA, KAD GAUTI NATŪRALĮ ORGANIŠKŲ CISTANČIŲ EKSTRAKTĄ, SU 25% ECHINAKOZIDU IR 9% AKTEOZIDU, TURINČIŲ INKSTU FUNKCIJĄ

Įvadas

Nefrokalcinozėpasižymi kalcio (Ca) nuosėdomisinkstų parenchima. Dietinis fosforas(P), visų pirma, yra pagrindinis šio sutrikimo vystymosi veiksnys. Nustatyta, kad vartojant didelio P dietą, padidėja Ca koncentracija kraujyjeinkstasir Ca nuosėdos inkstų parenchimoje1-6). Nors vykstančių tyrimų dėmesys buvo skiriamas didelio P dietos poveikiui nefrokalcinozės vystymuisi, mažai žinoma apie mechanizmą, atsakingą už šio sutrikimo vystymąsi. Todėl reikia laiku išspręsti šią problemą.

Pranešėme, kad atlikus histologinį tyrimą naudojant transmisijos elektronų mikroskopiją, žiurkių, šeriamų didelio P dieta, inkstų kanalėliuose buvo pastebėti į hidroksiapatitą panašūs adatos formos kristalai6, 7). Rentgeno spindulių mikroanalizė parodė, kad didelio P dietos sukeltos Ca nuosėdos daugiausia apima Ca ir P7). Šie rezultatai atskleidė, kad didelio P dietos sukeltos Ca nuosėdos yra hidroksiapatito forma. Remdamiesi šia išvada, manome, kad nefrokalcinozės vystymąsi kontroliuoja mechanizmas, panašus į kaulų formavimosi mechanizmą. Todėl šiame tyrime daugiausia dėmesio buvo skiriama su kaulais susijusiems baltymams, tokiems kaip kaulų morfogenetinis baltymas 2 (BMP2). BMP2 yra osteogeninis veiksnys, pasižymintis osteogenezę sukeliančiu aktyvumu, 9). Pažymėtina, kad BMP2 buvo nustatytas kaip veiksnys, skatinantis negimdinio kaulo formavimąsi10, 11). Taigi, mes iškėlėme hipotezę, kad jei BMP2 vaidins svarbų vaidmenį vystant nefrokalcinozę, šio baltymo ekspresija inkstuose būtų sureguliuota laikantis didelio P dietos. Šiuo tyrimu buvo siekiama nustatyti, ar didelio P dieta turi įtakos mRNR ekspresijaiBmp2 inkstuose.

Tuo tarpu mūsų ankstesniame tyrime buvo pranešta, kad dieta su dideliu P kiekiu padidina osteopontino (OPN) ekspresiją inkstų kanalėliuose, naudojant imunohistocheminę analizę, o tai rodo, kad OPN gali būti susijęs su Ca nuosėdų atsiradimu, kurį sukelia didelė P dieta12. Todėl mes taip pat ištyrėme Spp1 mRNR ekspresijos pokyčius inkstuose.

Šio tyrimo rezultatai gali suteikti vertingų įžvalgų apie mechanizmą, atsakingą už nefrokalcinozės vystymąsi, sukeltą didelio P dietos.

medžiagos ir metodai

Gyvūnai ir dietos. Šį tyrimą patvirtino Tokijo žemės ūkio universiteto Gyvūnų naudojimo komitetas, o visi gyvūnai buvo prižiūrimi pagal universiteto laboratorinių gyvūnų priežiūros ir naudojimo gaires (patvirtinimo Nr. 300049).

Svarbu pažymėti, kad žiurkių patelėms nefrokalcinozė išsivysto lengviau nei žiurkių patinams13, 14). Be to, pranešėme, kad didelio P dieta padidina OPN ekspresiją žiurkių patelių inkstų kanalėliuose12). Tada šiame tyrime kaip eksperimentiniai gyvūnai buvo naudojamos žiurkių patelės. Keturių savaičių Wistar žiurkių patelės (Clea Japan, Tokijas, Japonija) buvo laikomos atskiruose nerūdijančio plieno vielos tinklelio narveliuose. Eksperimentiniu laikotarpiu narvai buvo patalpoje su reguliuojamu apšvietimu 12-h šviesos: tamsos ciklu (šviesa, 0800-2000 h), 22 ± 1 laipsnio temperatūra ir 60% santykinė oro drėgmė. 65 proc.

Eksperimentinių dietų sudėtis parodyta 1 lentelėje. Eksperimentinės dietos buvo paruoštos remiantis AIN-93G dieta15). Eksperimentinėse dietose buvo dvi skirtingos P koncentracijos (kontrolinė dieta, 0,3% ; dieta su dideliu P kiekiu, 1,5%). P koncentracija dietoje su dideliu P kiekiu buvo nustatyta 1, 5%, nes ankstesni tyrimai parodė, kad amaisto P koncentracija1,5 % sukelia sunkią nefrokalcinozę6, 7, 12, 14) ir didelę OPN ekspresiją12). Visose eksperimentinėse dietose Ca koncentracija buvo tokia pati (0,5%). P ir Ca koncentracijos, nustatytos analizuojant eksperimentinius pašarus, pateiktos 1 lentelėje. Prieš pradedant tyrimą, visos žiurkės buvo aklimatizuotos 7 dienas, per tą laiką joms buvo suteikta laisva prieiga prie kontrolinės dietos ir dejonizuoto vandens. . Pasibaigus aklimatizacijos laikotarpiui, žiurkės buvo atsitiktinai suskirstytos į dvi grupes, kurių vidutinis kūno svoris buvo panašus, ir 14 dienų buvo šeriamos kontroline dieta (kontrolinė grupė) arba didelio P dieta (aukšto P grupė). Visą eksperimentinį laikotarpį žiurkėms buvo suteikta nemokama prieiga prie priskirtų eksperimentinių dietų ir dejonizuoto vandens. Pasibaigus eksperimentiniam laikotarpiui, žiurkės buvo numarintos į pilvaplėvės ertmę suleidus anestetinio mišinio (medetomidino, midazolamo ir butorfanolio), o kraujo ir inkstų mėginiai buvo paimti analizei. Kraujo mėginiai buvo centrifuguoti, o supernatantai buvo naudojami kaip serumo mėginiai. Inkstai buvo pašalinti, o inkstų kapsulė buvo išmesta. Theserumo ir inkstų mėginiaibuvo laikomi -80 laipsnių temperatūroje, kol prireiks analizei. Dešinysis inkstas buvo naudojamas kiekybinei Bmp2 ir Spp1 mRNR analizei, o kairysis inkstas buvo naudojamas Ca ir P koncentracijų analizei.

Mineralinė analizė.

Eksperimentinės dietos ir inkstų mėginiai buvo 48 valandas 550 laipsnių temperatūroje mufelinėje krosnyje, o mineralai buvo ekstrahuoti 1 mol/L HCl analizei. Ca koncentracijos eksperimentinėse dietose ir inkstuose buvo nustatytos atominės absorbcijos spektrofotometrija16). P koncentracijos eksperimentinėse dietose ir inkstuose buvo analizuojamos naudojant Gomori metodą17).

Kiekybinė Bmp2 ir Spp1 mRNR analizė.

Visa RNR buvo išskirta iš homogenizuoto inksto naudojant TRIzol reagentą (Life Technologies, CA, JAV) pagal gamintojo specifikacijas. RNR kiekis ir grynumas buvo įvertinti naudojant NanoDrop 2000c (Thermo Fisher Scientific, MA, JAV). cDNR buvo susintetinta naudojant SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix, skirtą qRT-PCR (Life Technologies), o po to buvo atlikta kiekybinė realaus laiko RT PGR naudojant SYBR Select Master Mix (Life Technologies). Konkretūs pradmenys18-20) buvo naudojami Bmp2 (pirmyn, 5'-ACCGTGCTCAGCTTCCATCAC-3'; atvirkštinė, 5'-TTCCTGCATTTGTTCCCGAAA-3'), Spp1 (pirmyn, 5'-) analizei. TGAGACTGGCAGTGGTTTGC-3' ; atgal, 5'-CCACTTTCACCGGGAGACA-3') ir Gapdh (pirmyn, 5'-TGGGAAGCTGGTCATCAAC-3' ; atgal, 5'-GCAT} CACCCCAT{{TTGATG} '). Realaus laiko PGR reakcija buvo atlikta naudojant StepOne Real-Time PGR sistemą (Applied Biosystems, CA, JAV), o mRNR ekspresijos lygiai buvo normalizuoti iki Gapdh mRNR lygių. Kontrolinės grupės reikšmė buvo laikoma 1,00.

Statistinė analizė.

Rezultatai pateikiami kaip vidurkis ± SEM kiekvienai 6 žiurkių grupei. Atlikus F testą dispersijų homogeniškumui nustatyti, reikšmingiems skirtumams tarp dviejų grupių nustatyti buvo naudojamas Stjudento t testas. Jei dispersijų homogeniškumas buvo nevienodas, vietoj Stjudento t-testo buvo naudojamas Welcho t testas. Skirtumai buvo laikomi reikšmingais, kai p ＜ 0.05

Rezultatai

Kūno svorio, maisto suvartojimo ir serumo analizė.

Galutinis kūno svoris ir suvartojamo maisto kiekis buvo žymiai mažesnis aukšto P grupėse, palyginti su kontroline grupe (2 lentelė).

Inkstų svoris ir mineralų koncentracija.

Inkstų šlapimas ir sausas svoris reikšmingai padidėjo aukšto P grupėse, palyginti su kontroline grupe (3 lentelė). Inkstų Ca ir P koncentracijos taip pat buvo žymiai padidėjusios aukšto P grupėse, palyginti su kontroline grupe.

Inkstų Bmp2 ir Spp1 mRNR ekspresija. Bmp2 mRNR lygis aukšto P grupėje buvo žymiai padidėjęs, palyginti su kontroline grupe (1A pav.). Spp1 mRNR ekspresija taip pat žymiai padidėjo aukšto P grupėje, palyginti su kontroline grupe (1B pav.).

„Wecistanche“ – didžiausio cistansų eksportuotojo Kinijoje – pagalbinė tarnyba:

El. paštas:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp / Tel:+86 15292862950

Įsigykite daugiau specifikacijų:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop