Šeimininko imuninis atsakas į Clostridioides Difficile paviršiaus S-sluoksnio baltymus (SLP)

Santrauka:

Clostridioides difficile, hospitalinis patogenas, yra besiformuojantis žarnyno patobionas, sukeliantis su antibiotikais susijusį viduriavimą. C. difficile infekcija apima žarnyno kolonizaciją ir žarnyno epitelio barjero pažeidimą, dėl kurio atsiranda uždegiminių / imuninių atsakų. Dviejų pagrindinių egzotoksinų, TcdA ir TcdB, ekspresija yra pagrindinė C. difficile patogeniškumo priežastis. Bakterijų gausių ląstelių sienelių baltymų arba paviršiaus S-sluoksnio baltymų (SLP), tokių kaip SlpA, prijungimas prie šeimininko epitelio ląstelių yra labai svarbus virulentiškumui. Įrodyta, kad šie paviršiaus komponentai yra ne tik toksinai, bet ir labai imunogeniški. Naujausi tyrimai rodo, kad C. difficile SLP vaidina svarbų vaidmenį bakterijų sukibime su žarnyno epitelio ląstelėmis, suardant sandarias jungtis ir moduliuojant ląstelių šeimininkų imuninį atsaką. Šie baltymai gali būti nauji vakcinų ir naujų terapinių agentų taikiniai. Ši apžvalga apibendrina mūsų dabartinį supratimą apie imunologinį SLP vaidmenį skatinant šeimininko imunitetą ir jų naudojimą kuriant vakcinas ir naujus gydymo būdus, skirtus kovai su C. difficile infekcija.

cistanche tubulosa - stiprina imuninę sistemą

Spustelėkite čia norėdami pamatyti Cistanche Enhance Immunity produktus

【Klauskite daugiau】 El. paštas:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Raktiniai žodžiai:

su antibiotikais susijęs viduriavimas; ląstelės sienelės baltymai; terapiniai vaistai; S-sluoksnio baltymai; vakcina

1. Įvadas

Clostridioides difficile, toksinus gaminanti anaerobinė bakterija, yra svarbus oportunistinis ir hospitalinis žarnyno patobionas, sukeliantis ligos simptomus dėl sveiko mikrobiomo perturbacijų dėl daugybės veiksnių, įskaitant antibiotikų vartojimą, genetinį, ekspozicijos, mikrobų, ir kiti šeimininko veiksniai [1]. C. difficile selekcija ir dauginimasis sukelia gyvybei pavojingą pseudomembraninio kolito būklę [2,3]. Remiantis naujausiais Ligų kontrolės ir prevencijos centrų 2019 m. ataskaitos apskaičiavimais, 2017 m. C. difficile sukėlė 223 900 infekcijų ir 12 800 mirčių, o vien JAV nuostoliai siekė 1 milijardą dolerių [4]. Pirmojo C. difficile infekcijos (CDI) epizodo gydymas pasiekiamas antibiotikais. Tačiau liga dažnai pasikartoja – 20–30 % po pirmojo gydymo CDI ir daugiau nei 50 % po pirmojo pasikartojimo [5]. Todėl norint kovoti su CDI visame pasaulyje reikia skubios terapinės intervencijos. Vienas iš pagrindinių C. difficile patogenezės molekulinių veiksnių yra dviejų pagrindinių toksinų – TcdA ir TcdB, kuriuos koduoja genai, esantys 196-kb patogeniškumo lokuse (PaLoc) C. difficile, ekspresija ir sekrecija. genomas [6]. Toksinų gamybos reguliavimą ir įvairius transkripcijos veiksnius, susijusius su toksinų gamyba, išsamiai apžvelgė Chandra ir kt. kitur [6].

CDI patogenezė prasideda nuo C. difficile sporų patekimo/sudygimo į vegetatyvines ląsteles, kurios sudygsta žarnyne, kur dauginasi ir kolonizuoja žarnyno gleivinę [1,6]. Žarnyno gleivinės barjeras (IMB) yra pirmoji įgimtos gynybos nuo patobiontų linija. Šeimininko IMB susideda iš įvairių tipų epitelio ląstelių, kurios yra tvirtai sujungtos viena su kita sandariomis jungtimis ir padengtos storu apsauginiu gleivių sluoksniu, kurį išskiria taurinės ląstelės [1]. IMB sutrikdymas leidžia C. difficile prisitvirtinti prie epitelio ląstelių paviršiaus, kur jo virulentiškumo faktoriai sukelia žalą ir C difficile patogeniškumo pasireiškimą [1,6]. Daugelio gramteigiamų ir neigiamų rūšių, įskaitant C. difficile, bakterijų ląstelių sienelė yra susijusi su gausiu paviršiuje esančiu baltymų molekulių, vadinamų paviršinio sluoksnio baltymais (S-sluoksnio baltymais arba SLP), sluoksniu, daugiausia sudarytu iš gausaus baltymas SlpA, susidedantis iš mažos ir didelės molekulinės masės domenų, kurie, kaip matyti elektroniniu mikroskopu, yra išdėstyti kaip parakristalinis reguliarus dvimatis masyvas [7]. Kiti SLP sluoksnio ląstelės sienelės baltymų (Cwp) komponentai yra mažiau gavę ir prastai apibūdinami, tačiau taip pat atlieka svarbų vaidmenį CD patogeniškume. Pastaraisiais metais SLP tyrimams buvo skiriamas vis didesnis dėmesys, nes buvo įrodyta, kad šie baltymai atlieka pagrindinį vaidmenį paviršiaus sukibime, į Toll panašių receptorių aktyvavime, citokinų gamybos indukcijoje ir uždegiminėje aktyvacijoje kaip šeimininko imuninio atsako dalis. vaidmuo bakterijos augimui ir išlikimui [7–9].

Šioje apžvalgoje aptariame šeimininko imuninį atsaką į pagrindinius SlpA komponentus ir kitus mažiau gausius Cwps, atsižvelgdami į naujausias žinias apie C. difficile SLP, ir pabrėžiame jų, kaip naujos vakcinos ir terapinio tikslo, panaudojimo galimybes, labai svarbius CDI patogenezei.

cistanche tubulosa - stiprina imuninę sistemą

2. Šeimininko įgimtas imuninis atsakas prieš CDI

Buvo įrodyta, kad netoksigeninės C. difficile (NTCD) padermės, kolonizavus gyvūnų modelius, apsaugo nuo patogeninių C. difficile padermių. Devintojo dešimtmečio pradžioje Wilsonas ir Sheagrenas pranešė, kad NTCD štamo kolonizuoti žiurkėnai po sterilizacijos antibiotikais cefoksitinu buvo apsaugoti, kai buvo užkrėsti toksiškai sukeliančia C. difficile (TCD) paderme [10]. Tačiau gydymas kitomis rūšimis, tokiomis kaip C. perfringens, C. bifermentans, C. beijerincki, C. sporogenes ir termiškai nužudyta netoksigenine C. difficile NTCD paderme, neapsaugo nuo CDI. Be to, apsauga buvo prarasta, kai prieš užkrėtimą kolonizuojantis NTCD buvo sterilizuotas gydant vankomicinu [11]. Šių išvadų paskatinta, NTCD-M1 padermės sporos buvo sėkmingai naudojamos ribotam skaičiui klinikinių pacientų, kenčiančių nuo pasikartojančio CDI (rCDI), sėkmingai (apie 50 %) [12]. Šiuo metu CDI gydymo galimybės yra ribotos ir labai priklauso nuo antibiotikų, tokių kaip vankomicinas, fidaksomicinas ir metronidazolas, vartojimu [13,14]. Per didelis antibiotikų vartojimas sukelia sveiko mikrobiomo disbiozę ir dar labiau padeda atrinkti patobiontus, tokius kaip C. difficile, kurie vėliau gali atsinaujinti [1,15]. Norint veiksmingai apeiti šias problemas, reikia nedelsiant atkreipti dėmesį į alternatyvius gydymo metodus. Kai kurios iš šių gydymo galimybių apima C. difficile toksinų neutralizavimą naudojant monokloninius antikūnus prieš TcdB, pvz., bezlotoksumabo infuziją, kuri apsaugo nuo toksinų sukeliamo žarnyno epitelio pažeidimo [16]. Kitas įdomus metodas yra sveiko mikrobiomo atkūrimas naudojant išmatų mikrobiotos transplantaciją (FMT) iš sveiko donoro tarp artimiausių šeimos narių. FMT parodė daug žadančius rezultatus prieš pasikartojančius CDI, kurių sėkmės rodikliai siekia iki 90% [17,18]. Deja, šiuose tyrimuose nebuvo nagrinėjamas šeimininko imuninio atsako vaidmuo saugant šiuos pacientus. Todėl galima teigti, kad gyvas NTCD išskiria kai kuriuos antigenus / ląstelės sienelės komponentus, kurie sukelia stiprų imuninį atsaką prieš toksogeninį TCD. Be to, FMT apsauga yra prastai apibrėžta. Todėl supratimas, kaip FMT įvedimas sukelia šeimininko atsakus, gali padėti identifikuoti pagrindinius antigenus, o tai savo ruožtu gali padėti geriau suprasti imuninį atsaką ir kurti naujas vakcinas nuo CDI.

Žarnyne įgimta šeimininko imuninė sistema yra pirmoji gynybos linija nuo įsibrovusio patogeno, kuris atlieka lemiamą vaidmenį formuojant ir stiprinant tvirtą adaptacinį šeimininko imuninį atsaką [1]. Įgimtas atsakas daugiausia susideda iš trijų dalių: (i) žarnyno epitelio ir gleivinės sluoksnio (fizinio barjero), (ii) antimikrobinių peptidų, kurie yra epitelio ląstelių, Paneth ląstelių ir kai kurių žarnyno mikrobiotos narių išskyrimo produktas (cheminis). barjeras) ir (iii) ląstelių atsakas, pritraukiant įgimtas imunines ląsteles, pvz., neutrofilus, eozinofilus, makrofagus, įgimtas limfoidines ląsteles (ILC) ir dendritines ląsteles (DC), kurias organizuoja keli įgimti signalizacijos keliai, siekiant kovoti su įsibrovusiu patogenu. 1]. Ląstelės-šeimininkės savo paviršiuje turi modelio atpažinimo receptorius (PRR), tokius kaip TLR, kurie atpažįsta tam tikrus konservuotus bakterijų parašus ant mikrobų, vadinamų su patogenais susijusiais molekuliniais modeliais (PAMP). Šie PRR taip pat žinomi kaip „Toll-like Receptors“ (TLR). TLR atpažinus šiuos pavojaus signalus (PAMP), ląstelė-šeimininkė sukelia imuninį atsaką. Šiuo atžvilgiu įrodyta, kad Toll-like Receptor 4 (TLR4) atpažįsta C. difficile pavojaus signalus – veiksmą, kuris dalyvauja inicijuojant šeimininko uždegiminį atsaką. Šiame kontekste buvo įrodyta, kad C. difficile SLP sąveikauja su šeimininko TLR-4, o C. difficile flagella sąveikauja per TLR5 [19,20].

cistanche nauda vyrams - stiprina imuninę sistemą

3. S-sluoksnio baltymai (SLP) C. difficile

Pastarąjį dešimtmetį C. difficile paviršinio sluoksnio (S sluoksnio) baltymams buvo skiriamas didelis dėmesys. SLP pirmą kartą nustatė Kawata ir kt. 1984 m. ir sudaro apie 15% visos ląstelių masės [21,22]. SLP randama daugelyje įvairių prokariotų rūšių. Dauguma SLP yra išsidėstę atokiausiame ląstelių paviršiuje kaip vienas baltymas dvimatėje parakristalinėje matricoje [7]. C. difficile S sluoksnį daugiausia sudaro heterodimeriniai SlpA baltymai. SlpA yra heterodimeras, susidedantis iš didelės molekulinės masės (HMW) baltymo ir mažos molekulinės masės (LMW) baltymo, koduojamo vieno slpA geno; LMW SLP sudaro atvirą viršutinį sluoksnį, o HMW SLP sudaro apatinį sluoksnį. LMW SLP yra unikalus C. difficile. C. difficile 630 padermėje slpA lokusas yra 36,6 kb sritis, kurioje yra 11 slpA paralogų. Be to, yra dar 17 paralogų, kurie yra išsibarstę visame genome [23, 24]. Šie paraloginiai genai dabar vadinami klostridijų ląstelės sienelės baltymais (CwpX), kur X reiškia identifikuotą paralogo numerį (X=1–29) ir yra aprašyti 1 lentelėje. Tačiau keturi anksčiau apibūdinti Cwps, žinomi kaip SlpA, Cwp66, Cwp84 ir CwpV buvo pavadinti prieš priimant šią naują pavadinimų konvenciją [23]. Visi Cwps yra tipiški baltymai, kuriuose yra N-galinis signalinis peptidas ir trys numanomi ląstelės sienelę surišantys domenai, labai panašūs į HMW SLP [25, 26]. Įvairios C. difficile padermės parodė slpA lokuso skirtumus ir buvo užfiksuota apie 12 skirtingų S sluoksnio kasečių tipų. Kiti 28 Cwps veikia kaip pagalbiniai komponentai, kurie yra įtvirtinti polimerizuotame parakristaliniame sluoksnyje, kuris sudaro ~ 5–20% S sluoksnio [7].

1 lentelė. Clostridium difficile 630 genomuose rastų 29 taurių genų numanomos funkcijos.

1 lentelė. Tęsinys.

4. Ląstelių sienelių baltymų ekspresija ir padermės kitimas

Buvo pranešta, kad C. difficile padermėje 630 yra išreikšti apie devynis Cwps koduojančius genus [25]. Nors cwp2, cwp84, cwp6, cwp12, cwpV, cwp24 ir cwp25 genai yra ekspresuojami ląstelės paviršiuje normaliomis augimo sąlygomis [44], cwp66 ir cwp5 genai buvo ekspresuojami, bet jų nerasta ląstelių paviršiaus ekstraktuose. Atskirame tyrime Biazzo ir kt. analizuojami puodeliai, kurie yra išsibarstę po visą C. difficile genomą. Jie pastebėjo, kad cwp13, cwpV, cwp16, cwp18, cwp19, cwp20, cwp22, cwp24 ir cwp25 genai yra išreikšti ir turi gerai išsilaikiusias sekas, tuo tarpu cwp17, cwp26, cwp27, cwp28 ir cwp29 genų ekspresijos lygiai buvo reikšmingi. ribotipų ir buvo mažiau konservuoti [45]. Daugelis slpA lokuso genų rodo reikšmingus skirtumus tarp padermių, ypač paviršiuje esančių sričių. Pavyzdžiui, buvo įrodyta, kad slpA, cwp66, secA2 ir cwp2 slpA lokuse (kuris sudaro 10-kb kasetę) labai skiriasi; iki šiol buvo rasta 12 skirtingų šios kasetės variantų dėl homologinės rekombinacijos tarp skirtingų genotipų [46]. Pasak Karjalainen ir kt., cwp66 rodo tik 33% padermių tapatumą [26]. Cwp2 variantas buvo pakeistas 23,8 kb prognozuojamu S sluoksnio glikozilinimo genų spiečiumi slpA lokuse [46]. SlpA yra gausiausias SLP, randamas C. difficile ląstelių paviršiaus ekstraktuose, ir yra pagrindinė C. difficile SLP sudedamoji dalis. Subrendęs baltymas suskaidomas po sekrecijos į HMW ir LMW baltymų formas veikiant proteazei Cwp84, kad susidarytų heterodimerinis kompleksas H/L kompleksas, kuris polimerizuojasi ir sudaro S sluoksnį [47] (1 pav.). Inaktyvavus cwp84 geną C. difficile 630∆erm, atsirado S sluoksnis, sudarytas tik iš nesubrendusio vienos grandinės SlpA su pakitusia kolonijų morfologija, o tai rodo svarbų Cwp84 vaidmenį formuojant brandų S sluoksnį [32]. SecA2 geno buvimas slpA lokuse yra svarbus SlpA ir kitų Cwps pernešimui per citoplazminę membraną [48].

1 pav. C. difficile SLP tarpininkauja imuninių ląstelių adhezijai ir aktyvacijai. Gimstantį SlpA peptidą proteazė Cwp84 skaido į LMW ir HMW subvienetus, kurie sudaro subrendusį ląstelės sienelės SLP sluoksnio SlpA kompleksą [31–33]. SLP tarpininkauja sukibimui per TLR4 sutrikdo glaudžią žarnyno epitelio ląstelių jungtį ir toliau aktyvina dendritines ląsteles / makrofagus, kurie savo ruožtu gamina įvairius citokinus ir chemokinus, kurie sukelia Th1 / Th2 ir humoralinį atsaką [9, 27]. Interleukinas (IL), dendritinės ląstelės (DC), mažos molekulinės masės (LMW), didelės molekulinės masės (HMW), į rinkliavą panašus receptorius 4 (TLR4).

5. S-sluoksnio baltymų funkcijos

SLP dalyvauja įvairiose C. difficile biologijos funkcijose (žr. 1 lentelę), pvz., ląstelių vientisumą, transportavimą, porų ir inkarų formavimąsi, degradaciją, šeimininko ląstelių adheziją / invaziją, imuninės sistemos vengimą ir apsaugą nuo konkuruojančių mikroorganizmų [22]. . Pechineet al. Clostridium difficile sukelta liga (CDAD) sergančių pacientų serume aptikta antikūnų prieš Cwp66 antigeno N-galą ir C-galinį domenus [49]. Kitame tyrime Wright ir kt. atskyrė Cwps naudojant 2D-PAGE ir nustatė keletą Cwps (SlpA, Cwp2, Cwp5, Cwp84, Cwp18, Cwp19), kurie reagavo su pacientų serumais, užkrėstais C. difficile ribotipo 017 paderme, o tai rodo stipraus imuninio atsako prieš SLP indukciją [50]. Neseniai Kirk ir kt. identifikavo dvi C. difficile padermes, kuriose trūko S sluoksnio ir kurios nebuvo jautrios bakteriocinui, kuris formuoja poras ir depoliarizuoja konkuruojančias bakterijų ląsteles. Tačiau šios C. difficile padermės žymiai padidino jautrumą lizocimui ir antimikrobiniam peptidui LL-37 ir nesukėlė CDI ligos simptomų žiurkėnų infekcijos modelyje [51]. Neseniai atliktame tyrime buvo ištirtas SlpA, išskirtas iš trijų toksikogeninių padermių (RT126, RT001, RT084), poveikis glaudžių jungčių (TJ) baltymų ekspresijai ir priešuždegiminių citokinų indukcijai žmogaus gaubtinės žarnos karcinomos ląstelių linijoje HT-29 . Gydymas SlpA reikšmingai sumažino claudinų šeimos ir JAM-A sandarių jungčių baltymų ekspresijos lygius (1 pav.) [9]. Be to, SlpA baltymas padidino TLR-4 ekspresijos lygį ir paskatino TNF-, IL-1 ir IL-8 sekreciją. Šie rezultatai rodo, kad SlpA baltymo sąlygota patogenezė ir sukeltas uždegiminis atsakas žarnyne [9]. Todėl pagrįsta teigti, kad SLP yra būtini C. difficile patogeniškumui ir imuniniam atsakui.

cistanche tubulosa - stiprina imuninę sistemą

6. Imuninis atsakas į SLP

Naujausi tyrimai parodė svarbų SlpA vaidmenį ne tik bakterijų išgyvenime ir augime, bet ir formuojant šeimininko imuninį atsaką. Imunoproteominiai metodai parodė, kad šešių pacientų, užsikrėtusių C. difficile ribotipu 017, serume yra anti-SLP antikūnų, o tai rodo, kad SLP baltymai yra imunodominuojantys ir ekspresuojami infekcijos metu [50]. Bruxelles ir kt. vadovaujamas tyrimas. parodė padidėjusį anti-SlpA antikūnų kiekį CDI sergantiems pacientams, palyginti su sveikais pacientais [52]. Kitame tyrime Negm ir kt. aptikta IgG antikūnų iš viso 327 asmenų, sergančių CDI, serumuose prieš įvairių C. difficile padermių SLP ekstraktus [53]. Be SlpA, antrojo gausiausio baltymo Cwp66 eksponuotas C-galinis domenas yra labai įvairus, o N-galinis domenas yra gerai konservuotas. Įrodyta, kad kintamieji Cwp66 ir Cwp84 C-galiniai domenai yra imunogeniški žmonėms [49, 54]. Be to, pacientams, sergantiems CDI, vidutinis bendras anti-Cwp66 ir anti-Cwp84 lygis buvo mažesnis nei sveikų kontrolinės grupės, o tai rodo apsauginį antikūnų pobūdį. Todėl SLP, ypač SlpA, ir kiti komponentai atlieka svarbų vaidmenį imuninėje gynyboje ir yra galimi imunoterapijos ir vakcinos kūrimo taikiniai, kaip aprašyta tolesniuose skyriuose.

7. SLP tarpininkauja C. difficile sukibimui

C. difficile inicijuoja infekciją, prilipusi prie žarnyno epitelio ląstelių, o tai sukelia kolonizaciją. Šiuo atžvilgiu bakterinės SLP, tokios kaip SlpA ir Cwp66, vaidina svarbų vaidmenį sukibime. Buvo pranešta, kad SLP, specifiškai SlpA, kitimas izoliuotose C. difficile padermėse parodė sukibimo pokyčius [55]. Įrodyta, kad SLP suriša skirtingas ląstelių linijas, tokias kaip žmogaus virškinimo trakto Hep-2 ir Vero ląstelių linijos bei daugelis tarpląstelinės matricos baltymų. Be to, gydymas anti-HMW-SLP antikūnais slopino C. difficile prilipimą. Be to, iš anksto apdorojus ląsteles šeimininkes išgrynintais SlpA subvienetais arba anti-SlpA antikūnais, taip pat buvo išvengta C. difficile prilipimo [55]. Didžiausias SlpA baltymų šeimos homologas yra CwpV baltymas, ekspresuojamas fazės kintamuoju būdu. Atskirame tyrime buvo parodyta, kad CwpV baltymo C-galo pasikartojantis domenas tarpininkauja C. difficile agregacijai. Be to, šis domenas skiriasi tarp padermių ir buvo nustatyti penki antigeniškai skirtingi pasikartojimo tipai [40].

Įrodyta, kad kitas imunogeninis baltymas, pavadintas Cwp66, turi sukibimo savybių. Išgrynintas Cwp66 ir antikūnai prieš N-galinį ir C-galinį domenus slopino C. difficile prilipimą prie kultivuotų Vero ląstelių, o tai rodo Cwp66 adhezijos savybes [29].

8. Uždegiminių reakcijų sukėlimas

Bianco ir kt. parodė SLP vaidmenį uždegimo procese. Tame tyrime hipervirulentinių ir epideminių (H/E) arba ne H/E C. difficile padermių SLP buvo išgryninti ir tirti žmogaus monocituose ir monocitų kilmės dendritinėse ląstelėse (MDDC) imunomoduliuojančių citokinų [interleukinų] indukcijos požiūriu. (IL)-1, IL-6 ir IL- 10] [56]. Tyrimas parodė, kad SLP ne tik paskatino MDDC brendimą, padidindami antigenų pateikimo aktyvumą, bet ir paskatino didelio IL-10 sekreciją. Tačiau reikšmingų skirtumų monocitų ir MDDC aktyvavime SLP preparatais iš H/E ir ne H/E padermių nenustatyta, o tai rodo, kad SLP neprisideda prie padidėjusio ligos sunkumo [56]. Kitame tyrime Ausiello ir kt. išskyrė SLP iš klinikinio izoliato C253 ir parodė, kad SLP paskatino padidėjusių IL-1 ir IL-6 priešuždegiminių citokinų sekreciją ramybės būsenos monocituose ir paskatino žmogaus MDDC brendimą bei sustiprintą T proliferaciją. ląstelės [57]. Be to, šie gydyti MDDC taip pat išskirdavo padidėjusį IL-10 ir IL-12p70 kiekį ir sukėlė mišrų Th1/Th2 imuninį atsaką. TLR-4 atliko svarbų vaidmenį suaktyvinant DC su SLP. Buvo įrodyta, kad SLP negalėjo aktyvuoti DC, išskirtų iš TLR4-mutantinių C3H/HeJ pelių, ir nesugebėjo sukelti vėlesnio Th imuninio atsako, o tai rodo, kad SLP aktyvuoja įgimtą ir adaptyvų imunitetą, kurį sąlygoja TLR4 receptorius [19]. Kitame tyrime su makrofagais buvo įrodyta, kad C. difficile SLP sukėlė klirenso atsaką priešuždegiminių citokinų ir chemokinų, kurių makrofagų migracija ir fagocitozinis aktyvumas padidėjo, sekrecijos požiūriu [58]. Gydymas p38 inhibitoriumi pakeitė šiuos atsakus, o tai rodo signalinių molekulių vaidmenį SLP tarpininkaujamuose atsakuose [58]. Neseniai atliktas tyrimas parodė, kad C. difficile SLP sukelia uždegiminį aktyvumą priklausomai nuo dozės. Be to, buvo įrodyta, kad daug cholesterolio turintys mikrodomenai (lipidų plaustai) ląstelių membranose padėjo SLP prisijungti prie ląstelės membranos. Tai buvo pagrįsta fluorescencine mikroskopija, kurios metu buvo įrodyta, kad gydymas metil- -ciklodekstrinu (M CD), mažinančiu cholesterolio kiekį membranoje, sumažino SLP surišimą, o tai rodo, kad SLP įtraukia lipidų plaustus, kurie yra labai svarbūs C. difficile kolonizacijai ir uždegimo aktyvacijai [59] ]. Šie tyrimai teigia, kad C. difficile SLP gali suaktyvinti įgimtą ir adaptyvų imuninį atsaką, kurį iš dalies tarpininkauja TLR4, o tai rodo svarbų SLP vaidmenį skatinant imuninį atsaką. Todėl šie rezultatai taip pat rodo, kad SLP gali būti kandidatai į vakciną nuo CDI.

9. Antikūnų atsakai prieš CDI

Keletas imunologinių tyrimų rodo, kad C. difficile infekcija ir baigtis priklauso nuo šeimininko imuninio atsako intensyvumo, kuris yra pagrindinis CDI patogeniškumo veiksnys. Taigi, nesugebėjimas sukurti tvirto antikūnų atsako gali būti ligos sunkumo ir pasikartojimo prognozė [60]. Šiuo atžvilgiu antikūnų prieš pagrindinius toksinus lygis buvo koreliuojamas su ligos pasikartojimu ir sunkumu [61, 62]. Ankstesniuose tyrimuose taip pat buvo pranešta apie antikūnus prieš C. difficile paviršiaus komponentus CDI pacientų serume [63]. Drudy ir kt. įvertino humoralinį imuninį atsaką į C. difficile SLP ekstraktus 146 pacientų grupėje, kurią sudarė 55 pacientai, sergantys su C. difficile susijusiu viduriavimu (CDAD), 34 pacientai, sergantys besimptomiais nešiotojais, ir 57 kontroliniai asmenys [64]. Tyrimo metu buvo išskirta didelės ir mažos MW frakcijų ekstrahavimas iš SLP, kuriose daugiausia buvo gausus baltymas SlpA. Jie išmatavo serumo antikūnus, naudodami su fermentu susietą imunosorbentinį tyrimą (ELISA) šioje grupėje ir nerado jokių reikšmingų serumo IgM, IgA ar IgG antikūnų lygio skirtumų. Įdomu tai, kad pacientams, sergantiems pasikartojančiais CDAD epizodais, IgM anti-SLP lygis buvo žymiai mažesnis nei pacientams, kuriems buvo vienas epizodas. Tyrime padaryta išvada, kad reikia atlikti tolesnius tyrimus, siekiant nustatyti specifinius anti-SLP antikūnų atsakus ir apsaugos tyrimus naudojant C. difficile SLP [64].

Pasyvi ir aktyvi imunizacija naudojant izoliuotus HMW ir LMW SLP ekstraktus parodė vilčių teikiančius rezultatus ir padidino išgyvenamumo rodiklius mirtinų žiurkėnų užkrėtimo modeliuose. O'Brien ir kt. parodė apsauginį anti-SLP antikūnų atsaką į žiurkėnų C. difficile infekciją, kur išgyvenamumas buvo žymiai pailgėjęs anti-SLP gydytose grupėse, palyginti su kontrolinėmis grupėmis [65]. Nustatyta, kad apsauginis antiserumo poveikis pasireiškia dėl C. difficile fagocitozės stiprinimo [65]. Eidhin ir kt., naudodami aktyvią imunizaciją, ištyrė neapdorotą SLP ekstraktą, turintį ekvimolinius kiekius SlpA komponentų LMW ir HMW peptidų, kaip vakciną su skirtingais sisteminiais ir gleivinės adjuvantais auksinių sirų žiurkėnų ir BALB/c pelių modeliuose. Tyrimo metu buvo pranešta apie nuosaikią ar prastą antikūnų stimuliaciją taikant skirtingus režimus, o pelių modeliai parodė stipresnį antikūnų atsaką į SLP, palyginti su žiurkėnais [66]. Kitame tyrime Brunet al. ištyrė dviejų peptidų, sudarytų iš receptorius surišančio toksino A domeno (TxA (C314)) ir SLP-36 kDa fragmento iš C. difficile padermės C253, adjuvantinį aktyvumą in vivo prieš fibronektiną surišantį baltymą A (FnbpA). ), apsauginis vakcinos antigenas nuo Staphylococcus aureus [67]. Jie įvertino atsaką naudodamiesi intranazaliniu ir poodiniu būdu ir nustatė, kad abu fragmentai padidino cirkuliuojančio anti-FnbpA IgG ir IgA gamybą. Jie padarė išvadą, kad šie fragmentai, naudojami kaip adjuvantai, skirtingai veikia ir poliarizuoja imuninę sistemą [67]. Kitame tyrime Shirvan ir kt. sukūrė ir išreiškė specifinius rekombinantinius antikūnus prieš SLP, tokius kaip Cwp66 ir SlpA iš C. difficile 630 baltymų, naudodami fago ekraną, ir parodė, kad šie rekombinantiniai antikūnai reagavo į SLP ir jų komponentus padermei būdingu būdu ir labai specifiškai [68].

Imuninis atsakas ir apsauga žiurkėnų modelyje, naudojant Cwp84 proteazę kaip antigeną, buvo įvertintas keliais imunizacijos būdais [69]. Tyrimo metu buvo nustatyti skirtingi antikūnų titrai, pagrįsti imunizacijos būdais. Pastebėta, kad geriausia apsauga buvo skiepijant rektaliniu būdu. Be to, imunizuotų žiurkėnų grupių C. difficile žarnyno kolonizacija po C. difficile buvo 26 % silpnesnė ir lėtesnė, o išgyvenamumas buvo žymiai didesnis (33 % didesnis) nei neimunizuotų grupių [69].

cistanche augalą stiprinanti imuninė sistema

10. SLP pagrindu sukurta anti-C. difficile Therapeutics

Veiksminga strategija gali būti specifiniai antikūnų pagrindu pagaminti vaistai, skirti neutralizuoti C. difficile. Kandalaft ir kt. naudojo vieno domeno antikūnus, nukreiptus į SLP [70]. Grupė parengė SLP specifinių vieno domeno antikūnų (VHH) grupę iš hipervirulentinės C. difficile padermės QCD-32g58 (027 ribotipas). Jų rezultatai parodė, kad nemažai VHH su dideliu afinitetu prisijungė prie QCD-32g58 epitopų, esančių SLP LMW subvienete. Be to, jie pranešė, kad šie VHH buvo specifiški 001 ir 027 ribotipams, o šių VHH antikūnų pogrupis iš esmės kryžmiškai reagavo su 012, 017, 023 ir 078 ribotipais. Taip pat buvo įrodyta, kad šie VHH in vitro slopina C. difficile QCD{17}}g58 judrumą [70].

Kito tikslaus antibakterinio agento Av-CD291.2 sukūrimas, kurį sukūrė Kirk ir kt. buvo pranešta, kad jis specifiškai naikina C. difficile ir neleidžia pelėms kolonizuotis [51]. Įrodyta, kad Av-CD291.2 naikina įvairius C. difficile izoliatus, remiantis SLP sekų buvimu C. difficile padermėse. Autoriai teigia identifikavę SLP nulinius mutantus, turinčius taškinę slpA geno mutaciją, kurie yra atsparūs Av-CD291.2 agentams. Šie mutantai taip pat turėjo sporuliacijos defektų, tačiau sugebėjo kolonizuoti žarnyno traktą, nepaisant virulentiškumo susilpnėjimo žiurkėnų modelyje [51]. Be to, jie sukonstravo Avidocin-CD grupę, kuri naikina įvairias C. difficile padermes priklausomai nuo SLP sekos, o tai rodo svarbų šių antibakterinių preparatų, pagrįstų SLP, vaidmenį užkertant kelią CDI [51].

11. Baigiamosios pastabos ir kritiniai neatsakyti klausimai

Šeimininkas sukuria tvirtą specifinį imuninį atsaką prieš C. difficile toksinus ir paviršiaus komponentus. Įrodyta, kad SLP turi įtakos ląstelių adhezijai, įvairių citokinų indukcijai per TLR4 aktyvavimą ir tiek įgimto, tiek humoralinio imuninio atsako aktyvavimui. Tačiau norint dar labiau išsiaiškinti CD4 ir CD8 ląstelių vaidmenį, reikia atlikti SLP aktyvavimo T-ląstelių atsakus tyrimus. Remiantis humoralinio atsako aktyvavimu, šie neutralizuojantys antikūnai prieš toksinus ir paviršiaus komponentus gali užkirsti kelią klinikiniams CDI požymiams. Tyrimai, naudojant aktyvią arba pasyvią imunizaciją nuo SLP, parodė daug žadančių rezultatų, rodančių, kad strategija gali būti toliau plėtojama į naujus vaistus nuo CDI patogeniškumo. Daug dėmesio buvo skirta SlpA kaip kandidatui į vakciną; tačiau dėl didelio SlpA sekos kintamumo tarp padermių vakcina gali būti neveiksminga nuo visų ribotipų. Todėl, norint išvengti šios problemos, gali prireikti skiepų epitopų pagrindu. Šiuo atžvilgiu vieno domeno antikūnai (VHH) prieš SLP yra perspektyvūs variantai, kurie labai specifiškai suriša C. difficile LMW-SLP subvienetą ir, kaip įrodyta, slopina C. difficile padermių judrumą. Šiuo metu supratimas apie mechaninį SLP ir jų paralogų vaidmenį CDI patogenezėje, adhezijoje ir T-ląstelių atsake vis dar yra pradiniame etape ir iš esmės lieka neištirtas. Reikia atlikti tolesnius tyrimus, kad būtų išaiškintos SLP molekulinės funkcijos ir specifiniai imuniniai atsakai, kad būtų skatinamas greitas naujų vakcinų/vaistų taikinių ir gydymo priemonių, skirtų kovai su C. difficile infekcijomis, kūrimas.

Nuorodos

1. Čandra, H.; Šarma, KK; Tuovinen, OH; Saulė, X.; Shukla, P. Pathobionts: Išgyvenimo, išsiplėtimo ir sąveikos su šeimininku mechanizmai, daugiausia dėmesio skiriant Clostridioides difficile. Gut Microbes 2021, 13, 1979882. [CrossRef] [PubMed]

2. Lawson, PA; Citrina, DM; Tyrrell, KL; Finegold, SM Clostridium difficile perklasifikavimas į Clostridioides difficile (Hall ir O'Toole 1935) Prévot 1938. Anaerobe 2016, 40, 95–99. [CrossRef] [PubMed]

3. Orenas, A.; Garrity, GM Pranešimas apie taksonominės nuomonės pokyčius, anksčiau paskelbtus ne IJSEM. Tarpt. J. Syst. Evol. Microbiol. 2018, 68, 2137–2138. [CrossRef]

4. Ligų kontrolės ir prevencijos centrai. Atsparumo antibiotikams grėsmės Jungtinėse Valstijose, 2019 m. 2019 m. Prieiga internete: https://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/threats-report/2019-ar-threats-report-508.pdf (žiūrėta 2022 m. rugsėjo 8 d.).

5. Skydai, K.; Araujo-Kastiljas, RV; Theethira, TG; Alonso, CD; Kelly, CP Pasikartojanti Clostridium difficile infekcija: nuo kolonizacijos iki gydymo. Anaerobe 2015, 34, 59–73. [CrossRef] [PubMed]

6. Čandra, H.; Sorg, JA; Hassett, didžėjus; Sun, X. Clostridioides difficile patogenezės reguliavimo transkripcijos veiksniai, daugiausia dėmesio skiriant toksinų reguliavimui. Krit. Rev. Microbiol. 2022 m. [CrossRef]

7. Lanzoni-Mangutchi, P.; Banerji, O.; Wilsonas, J.; Barwinska-Sendra, A.; Kirkas, JA; Vaz, F.; O'Beirne, S.; Baslé, A.; El Omari, K.; Vagneris, A.; ir kt. C. difficile S sluoksnio sandara ir surinkimas. Nat. Komun. 2022, 13, 970. [CrossRef]

8. Mori, N.; Takahashi, T. Clostridium difficile paviršinio sluoksnio baltymų charakteristikos ir imunologiniai vaidmenys. Ann. Lab. Med. 2018, 38, 189–195. [CrossRef] 9. Noori, M.; Azimiradas, M.; Eslami, G.; Looha, MA; Jadegaras, A.; Ghalavandas, Z.; Zali, MR Paviršiaus sluoksnio baltymas A iš hipervirulentinių Clostridioides difficile ribotipų sukelia reikšmingus tankių jungčių genų ekspresijos pokyčius ir uždegiminį atsaką žmogaus žarnyno epitelio ląstelėse. BMC Microbiol. 2022, 22, 259. [CrossRef]

10. Wilsonas, KH; Sheagren, JN. Toksogeninio Clostridium difficile antagonizmas, kurį sukelia netoksigeninis C. difficile. J. Užkrėsti. Dis. 1983, 147, 733–736. [CrossRef]

11. Borriello, SP; Barclay, FE Žiurkėnų apsauga nuo Clostridium difficile ileokolito prieš tai kolonizuojant su nepatogeninėmis padermėmis. J. Med. Microbiol. 1985, 19, 339–350. [CrossRef]

12. Seal, D.; Borriello, SP; Barclay, F.; Welch, A.; Piper, M.; Bonnycastle, M. Recidyvuojančio Clostridium difficile viduriavimo gydymas naudojant netoksigenišką padermę. Euras. J. Clin. Microbiol. 1987, 6, 51–53. [CrossRef] [PubMed]

13. Johnsonas, S.; Lavergne, V.; Skinner, AM; Gonzales-Luna, AJ; Garey, KW; Kelly, CP; Wilcox, MH Amerikos infekcinių ligų draugijos (IDSA) ir Amerikos sveikatos priežiūros epidemiologijos draugijos (SHEA) klinikinės praktikos gairės: 2021 m. atnaujintos suaugusiųjų Clostridioides difficile infekcijos valdymo gairės. Clin. Užkrėsti. Dis. 2021, 73, e1029–e1044. [CrossRef] [PubMed]

14. van Prehn, J.; Reigadas, E.; Vogelzang, EH; Bouza, E.; Hristėja, A.; Guery, B.; Krutova, M.; Norenas, T.; Allerbergeris, F.; Coia, JE; ir kt. Europos klinikinės mikrobiologijos ir infekcinių ligų draugija: 2021 m. atnaujintas suaugusiųjų Clostridioides difficile infekcijos gydymo rekomendacijų dokumentas. Clin. Microbiol. Užkrėsti. 2021, 27 (2 priedas), S1–S21. [CrossRef] [PubMed]

16. Vardakas, KZ; Polyzos, KA; Patouni, K.; Rafailidis, PI; Samonis, G.; Falagas, ME Gydymo nesėkmė ir Clostridium difficile infekcijos pasikartojimas po gydymo vankomicinu arba metronidazolu: sisteminga įrodymų apžvalga. Tarpt. J. Antimikrobinis. Agentai 2012, 40, 1–8. [CrossRef]

16. Navalkelė, BD; Chopra, T. Bezlotoxumab: nauja monokloninių antikūnų terapija, skirta pasikartojančios Clostridium difficile infekcijos prevencijai. Biologija 2018, 12, 11–21. [CrossRef]

17. Li, YT; Cai, HF; Vangas, ZH; Xu, J.; Fang, JY Sisteminga apžvalga su metaanalize: ilgalaikiai išmatų mikrobiotos transplantacijos rezultatai dėl Clostridium difficile infekcijos. Maitinimas. Pharmacol. Ten. 2016, 43, 445–457. [CrossRef]

18. Quraishi, MN; Widlak, M.; Bhala, N.; Moore, D.; Kaina, M.; Šarma, N.; Iqbal, TH Sisteminė apžvalga su metaanalizė: išmatų mikrobiotos transplantacijos veiksmingumas gydant pasikartojančią ir atsparią Clostridium difficile infekciją. Maitinimas. Pharmacol. Ten. 2017, 46, 479–493. [CrossRef]

19. Ryanas, A.; Lynchas, M.; Smithas, SM; Amu, S.; Nel, HJ; McCoy, CE; Dowling, JK; Draper, E.; O'Reilly, V.; McCarthy, C.; ir kt. TLR4 vaidmuo Clostridium difficile infekcijoje ir paviršiaus sluoksnio baltymų atpažinimas. PLoS Patogas. 2011, 7, e1002076. [CrossRef]

20. Batah, J.; Denève-Larrazet, C.; Jolivot, PA; Kuehne, S.; Collignon, A.; Marvaud, JC; Kansau, I. Clostridium difficile flagella epitelio ląstelėse daugiausia aktyvina TLR5-susietą NF-κB kelią. Anaerobe 2016, 38, 116–124. [CrossRef]

21. Kawata, T.; Takeoka, A.; Takumi, K.; Masuda, K. Įprasto masyvo Clostridium difficile ląstelės sienelėje demonstravimas ir preliminarus apibūdinimas. FEMS Microbiol. Lett. 1984, 24, 323–328. [CrossRef]

22. Sára, M.; Sleytr, UB S-Layer baltymai. J. Bacteriol. 2000, 182, 859–868. [CrossRef] [PubMed]

23. Faganas, RP; Janoir, C.; Collignon, A.; Mastrantonio, P.; Pokstonas, IR; Fairweather, NF Siūloma Clostridium difficile ląstelių sienelių baltymų nomenklatūra. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1225–1228. [CrossRef]

24. Monotas, M.; Boursaux-Eude, C.; Thibonnier, M.; Valenet, D.; Moszer, I.; Medigue, C.; Martin-Verstraete, I.; Dupuy, B. Clostridium difficile padermės 630 genomo sekos reanotacija. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1193–1199. [CrossRef] [PubMed]

25. Calabi, E.; Ward, S.; Wren, B.; Pakstonas, T.; Panico, M.; Morris, H.; Dell, A.; Douganas, G.; Fairweather, N. Clostridium difficile paviršiaus sluoksnio baltymų molekulinė charakteristika. Mol. Microbiol. 2001, 40, 1187–1199. [CrossRef]

27. Karjalainenas, T.; Waligora-Dupriet, AJ; Cerquetti, M.; Spigaglia, P.; Maggioni, A.; Mauri, P.; Mastrantonio, P. Clostridium difficile ant paviršiaus pritvirtintus baltymus koduojančių genų molekulinė ir genominė analizė. Užkrėsti. Imunitetas. 2001, 69, 3442–3446. [CrossRef]

27. Valio, SE; Candela, T.; Shaw, HA; Seager, Z.; Mesnage, S.; Faganas, RP; Fairweather, NF Clostridium difficile paviršiaus baltymai pritvirtinami prie ląstelės sienelės naudojant CWB2 motyvus, atpažįstančius anijoninį polimerą PSII. Mol. Microbiol. 2015, 96, 596–608. [CrossRef]

28. Bradshaw, WJ; Kirby, JM; Robertsas, AK; Shine, CC; Acharya, KR Cwp2 iš Clostridium difficile pasižymi išplėstine trijų domenų raukšle ir ląstelių adhezija in vitro. FEBS J. 2017, 284, 2886–2898. [CrossRef]

29. Waligora, AJ; Hennequin, C.; Mulani, P.; Bourlioux, P.; Collignon, A.; Karjalainen, T. Clostridium difficile ląstelės paviršiaus baltymo, pasižyminčio lipniomis savybėmis, apibūdinimas. Užkrėsti. Imunitetas. 2001, 69, 2144–2153. [CrossRef]

30. Zhou, Q.; Rao, F.; Chen, Z.; Cheng, Y.; Zhang, Q.; Zhang, J.; Guanas, Z.; Jis, Y.; Yu, W.; Cui, G.; ir kt. Cwp66 genas veikia Clostridioides difficile ląstelių adheziją, atsparumą stresui ir atsparumą antibiotikams. Microbiol. Spektr. 2022, 10, e0270421. [CrossRef] [PubMed]

31. Dang, TH; de la Riva, L.; Faganas, RP; Storkas, EM; Išgydyk, WP; Janoir, C.; Fairweather, NF; Tate, EW Cheminiai paviršinio sluoksnio biogenezės zondai Clostridium difficile. ACS Chem. Biol. 2010, 5, 279–285. [CrossRef]

32. Kirbis, JM; Ahernas, H.; Robertsas, AK; Kumaras, V.; Freemanas, Z.; Acharya, KR; Shone, CC Cwp84, su paviršiumi susijusi cisteino proteazė, vaidina Clostridium difficile paviršinio sluoksnio brendimą. J. Biol. Chem. 2009, 284, 34666–34673. [CrossRef] [PubMed]

33. Janoir, C.; Péchiné, S.; Grosdidier, C.; Collignon, A. Cwp84, su paviršiumi susijęs Clostridium difficile baltymas, yra cisteino proteazė, suardanti ekstraląstelinės matricos baltymus. J. Bacteriol. 2007, 189, 7174–7180. [CrossRef] [PubMed]

34. Usenikas, A.; Renko, M.; Miheliˇc, M.; Lindiˇc, N.; Borišek, J.; Perdihas, A.; Pretnaras, G.; Miuleris, U.; Turk, D. CWB2 ląstelių sienelės tvirtinimo modulį atskleidžia Clostridium difficile ląstelių sienelės baltymų Cwp8 ir Cwp6 kristalinės struktūros. Struktūra 2017, 25, 514–521. [CrossRef]

35. Eddy, SR Tikimybinis lokalios sekos derinimo modelis, kuris supaprastina statistinio reikšmingumo įvertinimą. PLoS kompiuteris. Biol. 2008, 4, e1000069. [CrossRef] [PubMed]

36. Luo, Y.; Frey, EA; Pfuetzner, RA; Creagh, AL; Knoechelis, GD; Haynes, CA; Finlay, BB; Strynadka, NC Enteropatogeninio Escherichia coli intimin-receptorių komplekso kristalinė struktūra. Gamta 2000, 405, 1073–1077. [CrossRef] [PubMed]

37. de la Riva, L.; Valingas, SE; Tate'as, EW; Fairweather, NF Cisteino proteazių Cwp84 ir Cwp13 vaidmenys Clostridium difficile ląstelės sienelės biogenezėje. J. Bacteriol. 2011, 193, 3276–3285. [CrossRef]

38. Mayer, BJ SH3 domenai: sudėtingumas saikingai. J. Cell Sci. 2001, 114, 1253–1263. [CrossRef]

39. Sipeki, S.; Koprivanacz, K.; Takács, T.; Kurilla, A.; László, L.; Vas, V.; Buday, L. Nauji SH2 ir SH3 domenų vaidmenys lipidų surišime. Cells 2021, 10, 1191. [CrossRef]

40. Reinoldsas, CB; Emersonas, JE; de la Riva, L.; Faganas, RP; Fairweather, NF Clostridium difficile ląstelės sienelės baltymas CwpV yra antigeniškai įvairus tarp padermių, tačiau pasižymi konservatyvia agregaciją skatinančia funkcija. PLoS Patogas. 2011, 7, e1002024. [CrossRef]

41. Bradshaw, WJ; Kirby, JM; Robertsas, AK; Shine, CC; Acharya, KR Clostridium difficile Cwp19 glikozido hidrolazės domeno molekulinė struktūra. FEBS J. 2017, 284, 4343–4357. [CrossRef]

42. Žu, D.; Bullock, J.; Jis, Y.; Sun, X. Cwp22, naujas peptidoglikaną sujungiantis fermentas, atlieka pleiotropinį vaidmenį Clostridioides difficile. Aplinka. Microbiol. 2019, 21, 3076–3090. [CrossRef] [PubMed]

43. Finnas, RD; Coggill, P.; Eberhardtas, RY; Eddy, SR; Mistris, J.; Mitchell, AL; Poteris, SC; Punta, M.; Qureshi, M.; Sangrador-Vegas, A.; ir kt. Pfam baltymų šeimų duomenų bazė: tvaresnės ateities link. Nucleic Acids Res. 2016, 44, D279–D285. [CrossRef] [PubMed]

44. Wright, A.; Palauk, R.; Begumas, S.; Crossett, B.; Nagy, J.; Brownas, K.; Fairweather, N. Clostridium difficile ląstelių paviršiaus baltymų proteominė analizė. Proteomics 2005, 5, 2443–2452. [CrossRef] [PubMed]

45. Biazzo, M.; Cioncada, R.; Fiaschi, L.; Tedė, V.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Pica, M.; Barocchi, MA; Scarselli, M.; Galeotti, CL Cwp lokusų įvairovė klinikiniuose Clostridium difficile izoliatuose. J. Med. Microbiol. 2013, 62, 1444–1452. [CrossRef]

46. ​​Dinglis, KE; Didelot, X.; Ansari, MA; Eyre, DW; Vaughanas, A.; Griffiths, D.; Ip, CL; Batty, EM; Golubčikas, T.; Bowdenas, R.; ir kt. Rekombinacinis Clostridium difficile S sluoksnio ir naujo glikozilinimo genų klasterio perjungimas, atskleistas didelio masto viso genomo sekos nustatymu. J. Užkrėsti. Dis. 2013, 207, 675–686. [CrossRef]

47. Faganas, RP; Albesa-Jové, D.; Qazi, O.; Svergun, DI; Brownas, KA; Fairweather, NF Struktūrinės įžvalgos apie Clostridium difficile S sluoksnio molekulinę organizaciją. Mol. Microbiol. 2009, 71, 1308–1322. [CrossRef]

48. Faganas, RP; Fairweather, NF Clostridium difficile turi dvi lygiagrečias ir esmines Sec sekrecijos sistemas. J. Biol. Chem. 2011, 286, 27483–27493. [CrossRef]

49. Péchiné, S.; Gleizes, A.; Janoir, C.; Gorges-Kergot, R.; Barc, MC; Delmee, M.; Collignon, A. Clostridium difficile paviršiaus baltymų imunologinės savybės. J. Med. Microbiol. 2005, 54, 193–196. [CrossRef]

50. Wright, A.; Drudy, D.; Kyne, L.; Brownas, K.; Fairweather, NF Imunoreaktyvūs Clostridium difficile ląstelių sienelės baltymai, nustatyti žmogaus serumu. J. Med. Microbiol. 2008, 57, 750–756. [CrossRef]

51. Kirkas, JA; Gebhartas, D.; Buckley, AM; Lokas, S.; Scholl, D.; Douce, GR; Govoni, GR; Fagan, RP Nauja tikslių antimikrobinių medžiagų klasė iš naujo apibrėžia Clostridium difficile S sluoksnio vaidmenį virulentiškumui ir gyvybingumui. Sci. Vertimas Med. 2017, 9, eaah6813. [CrossRef]

52. Bruxelles, JF; Mizrahi, A.; Hoysas, S.; Collignon, A.; Janoir, C.; Péchiné, S. Clostridium difficile paviršinio sluoksnio pirmtako imunogeninės savybės ir vakcinacijos tyrimai gyvūnų modeliuose. Anaerobe 2016, 37, 78–84. [CrossRef]

53. Negm, OH; Hamedas, MR; Dilnot, EM; Shine, CC; Maršalovska, I.; Lynchas, M.; Loscher, CE; Edvardsas, LJ; Tighe, PJ; Wilcox, MH; ir kt. Humoralinio imuninio atsako į Clostridium difficile specifinius antigenus profiliavimas atliekant baltymų mikrogardelių analizę. Clin. Vakcina Imunol. 2015, 22, 1033–1039. [CrossRef] [PubMed]

54. Péchiné, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Clostridium difficile paviršiaus baltymų kintamumas ir specifinis serumo antikūnų atsakas pacientams, sergantiems su Clostridium difficile susijusia liga. J. Clin. Microbiol. 2005, 43, 5018–5025. [CrossRef] [PubMed]

55. Merriganas, MM; Venugopal, A.; Roxas, JL; Anwar, F.; Mallozzi, MJ; Roxas, BA; Gerding, DN; Visvanatanas, VK; Vedantam, G. Paviršinio sluoksnio baltymas A (SlpA) yra pagrindinis Clostridium difficile prisirišimo prie šeimininko ląstelių veiksnys. PLoS ONE 2013, 8, e78404. [CrossRef]

56. Bianco, M.; Fedele, G.; Quattrini, A.; Spigaglia, P.; Barbanti, F.; Mastrantonio, P.; Ausiello, CM Paviršinio sluoksnio baltymų, gautų iš epideminių ir hipervirulentinių Clostridium difficile padermių, imunomoduliacinė veikla. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1162–1167. [CrossRef]

57. Ausiello, CM; Cerquetti, M.; Fedele, G.; Spensieri, F.; Palazzo, R.; Nasso, M.; Frezza, S.; Mastrantonio, P. Paviršiaus sluoksnio baltymai iš Clostridium difficile sukelia uždegiminius ir reguliuojančius citokinus žmogaus monocituose ir dendritinėse ląstelėse. Mikrobai užkrečia. 2006, 8, 2640–2646. [CrossRef]

58. Collins, LE; Lynchas, M.; Maršalovska, I.; Kristek, M.; Rochfortas, K.; O'Connell, M.; Windle, H.; Keleheris, D.; Loscher, CE Paviršinio sluoksnio baltymai, išskirti iš Clostridium difficile, sukelia makrofagų klirenso atsaką. Mikrobai užkrečia. 2014, 16, 391–400. [CrossRef] [PubMed]

59. Chen, Y.; Huangas, K.; Čenas, LK; Wu, HY; Hsu, CY; Tsai, YS; Ko, WC; Tsai, PJ Membraninis cholesterolis yra labai svarbus Clostridium difficile paviršinio sluoksnio baltymams surišti ir uždegimo aktyvavimui. Priekyje. Immunol. 2020, 11, 1675. [CrossRef] [PubMed]

60. Kelly, CP Ar galime nustatyti pacientus, kuriems yra didelė pasikartojančios Clostridium difficile infekcijos rizika? Clin. Microbiol. Užkrėsti. 2012, 18 (6 priedas), 21–27. [CrossRef]

61. Wullt, M.; Norenas, T.; Ljunghas, A.; Åkerlund, T. IgG antikūnų atsakas į toksinus A ir B pacientams, sergantiems Clostridium difficile infekcija. Clin. Vakcina Imunol. 2012, 19, 1552–1554. [CrossRef]

62. Atostogos, BA; Blairas, B.; Leney, M.; Knauberis, M.; Reilis, C.; Lowy, I.; Gerding, DN; Kelly, CP; Katčaras, K.; Baksteris, R.; ir kt. Serumo antikūnas prieš toksiną B koreliuoja su apsauga nuo pasikartojančios Clostridium difficile infekcijos (CDI). Vakcina, 2010, 28, 965–969. [CrossRef] [PubMed]

63. Pantosti, A.; Cerquetti, M.; Viti, F.; Ortisis, G.; Mastrantonio, P. Serumo imunoglobulino G atsako į Clostridium difficile paviršiaus baltymus imunoblotinė analizė pacientams, sergantiems su antibiotikais susijusiu viduriavimu. J. Clin. Microbiol. 1989, 27, 2594–2597. [CrossRef] [PubMed]

64. Drudy, D.; Calabi, E.; Kyne, L.; Sougioultzis, S.; Kelly, E.; Fairweather, N.; Kelly, CP Žmogaus antikūnų atsakas į paviršinio sluoksnio baltymus sergant Clostridium difficile infekcija. FEMS imunol. Med. Microbiol. 2004, 41, 237–242. [CrossRef] [PubMed]

65. O'Brajenas, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; McDonald, GS; DB, NE; Kelleher, DP Pasyvi žiurkėnų imunizacija nuo Clostridium difficile infekcijos naudojant antikūnus prieš paviršinio sluoksnio baltymus. FEMS Microbiol. Lett. 2005, 246, 199–205. [CrossRef]

66. DB, ŠV; O'Brienas, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; Kelleher, DP Aktyvi žiurkėnų imunizacija nuo Clostridium difficile infekcijos naudojant paviršinio sluoksnio baltymą. FEMS imunol. Med. Microbiol. 2008, 52, 207–218. [CrossRef]

67. Brunas, P.; Scarpa, M.; Grillo, A.; Palù, G.; Mengoli, C.; Zecconi, A.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Castagliuolo, I. Clostridium difficile TxAC314 ir SLP{2}}kDa sustiprina imuninį atsaką į kartu vartojamą antigeną. J. Med. Microbiol. 2008, 57, 725–731. [CrossRef]

68. Širvanas, AN; Aitken, R. Rekombinantinių antikūnų, nukreiptų prieš Clostridium difficile paviršiaus baltymus, išskyrimas. Braz. J. Microbiol. 2016, 47, 394–402. [CrossRef]

69. Péchiné, S.; Denève, C.; Le Monnier, A.; Hoysas, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Žiurkėnų imunizavimas nuo Clostridium difficile infekcijos naudojant Cwp84 proteazę kaip antigeną. FEMS imunol. Med. Microbiol. 2011, 63, 73–81. [CrossRef]

70. Kandalaft, H.; Hussack, G.; Aubry, A.; van Faassen, H.; Guanas, Y.; Arbabi-Ghahroudi, M.; MacKenzie, R.; Loganas, SM; Tanha, J. Taikymas į paviršinio sluoksnio baltymus vieno domeno antikūnais: galimas terapinis metodas prieš su Clostridium difficile susijusią ligą. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2015, 99, 8549–8562. [CrossRef]