Kaip Cistanche apsaugo nuo kepenų ligų

Kontaktas:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Abstraktus

Ištirti polisacharidų preliminarias charakteristikas, antioksidacinį ir hepatoprotekcinį aktyvumą.Cistanche deserticola (CDP), trys polisacharidų frakcijos, CDP-A, CDP-B ir CDP-C, buvo gautos paeiliui filtruojant membraną (mikrofiltracija, ultrafiltracija ir nanofiltracija). Buvo analizuojamos trijų frakcijų molekulinės masės, monosacharidų kompozicijos, grynumas ir IR spektrai. Rezultatai parodė, kad CDP-C buvo didesnė galakturono rūgšties (GalUA) dalis nei CDP-B ir CDP-A. Taip pat buvo išanalizuotas antioksidacinis aktyvumas ir rezultatai parodė, kad CDP-C aktyvumas buvo didžiausias. Taigi CDP-C hepatoprotekcinis aktyvumas buvo toliau tiriamas. In vitro tyrimai, CDP-C skatino HepG2 ląstelių gyvybingumą. Tyrimai in vivo CDP-C pagerino alkoholio sukeltus pokyčius, įskaitant serologinius indeksus (alanino transaminazė, rūgštinė fosfatazė, -glutamilo transpeptidazė ir trigliceridas) ir kepenų rodiklius (superoksido dismutazė, malondialdehidas, glutationo S-transferazė ir trigliceridas). gyvūnai. Ryški mikrovezikulinė steatozė ir lengva nekrozė pavyzdinių gyvūnų kepenų histopatologijoje taip pat buvo susilpninta vartojant CDP-C. Šie radiniai parodė, kad CDP-C turėjo hepatoprotekcinį aktyvumą nuo lėtinio alkoholio sukelto kepenų pažeidimo. Pagrindinis mechanizmas gali būti tas, kad CDP-C gali sumažinti MDA ir TG kiekį ir moduliuoti santykinio fermento veiklą. Ši nuosavybė gali būti susieta su GalUA CDP-C.

Dalykinė sąvoka: Cistanche deserticola; polisacharidai; Išankstinės charakteristikos; Antioksidantas; Hepatoprotekcinė veikla.

cistanchebienfaitsdeserticola

1. Įvadas

Cistanche yra daugiametis holoparazitas ir daugiausia paplitęs šiaurės vakarų Kinijos dykumos regione [1, 2]. Cistanche rūšies (Orobanchaceae) stiebas pirmą kartą buvo užfiksuotas Shen Nong kinų Materia Medica. Cistanche jau seniai naudojamas kaip tradicinis augalinis vaistas inkstų nepakankamumui, impotencijai, senatviniam vidurių užkietėjimui, juosmens ir kelių skausmui ir silpnumui bei kraujo trūkumui gydyti [3, 4]. Farmakologiniai tyrimai atskleidė, kad Cistanche pasižymi priešuždegiminiu poveikiu [5, 6], antiosteoporozei [7, 8], raminamuoju poveikiu [9], antinuovargiu [10], neuroprotekciniu poveikiu [11]. Be to, Cistanche deserticola (CDP) polisacharidai turi antihiperglikeminį ir hipolipideminį poveikį [12], imunologinį aktyvumą [13] ir limfocitų proliferacijos poveikį [14].

Alkoholis, visame pasaulyje vartojamas gėrimas ir maisto priedas, kasmet sukelia beveik 2,5 mln. mirčių pasaulyje [15, 16]. Šios mirtys daugiausia susijusios su kepenų liga, sukelta piktnaudžiavimo alkoholiu [17, 18]. Alkoholio sukelta kepenų liga yra sudėtinga daugiapakopė lėtinė progresija, kuri paprastai išsivysto nuo alkoholinės steatozės iki alkoholinio hepatito ir galiausiai iki alkoholinės cirozės [19]. Taigi, aktyvių natūralių produktų nustatymas tiems alkoholio vartotojams, kad būtų užkirstas kelias alkoholiniam kepenų pažeidimui arba sulėtėtų jo progresavimas ankstyvoje stadijoje, yra naudinga valdymo strategija.

Cistanche deserticola YC Ma ir Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight yra dvi vaistinės rūšys, įrašytos į Kinijos farmakopėją [3]. Daugelyje straipsnių buvo išaiškintas C. tubulosa [20-24] ir C. deserticola [25, 26] hepatoprotekcinis aktyvumas. Tačiau šie hepatoprotekciniai tyrimai visada buvo skirti ūminiam kepenų pažeidimui, kurį sukelia anglies tetrachloridas (CCl4) arba D-galaktozaminas ir lipopolisacharidas, tačiau nesijaudino dėl lėtinio kepenų pažeidimo, susijusio su piktnaudžiavimu alkoholiu. Be to, šiose ataskaitose daugiausia dėmesio buvo skiriama feniletanoidinių glikozidų (PhG), o ne CDP, mechanizmui. Todėl šiame tyrime buvo ištirtos preliminarios CDP charakteristikos ir jų antioksidacinis aktyvumas (in vitro). Be to, buvo sukurtas baltojo spirito vyno sukeltų ICR pelių kepenų pažeidimo modelis, siekiant ištirti CDP hepatoprotekcinį aktyvumą nuo lėtinio alkoholio sukelto kepenų pažeidimo.

cistanche ir tongkat ali žolelių ekstraktas

2. Medžiagos ir metodai

2.1. Medžiagos

C. deserticola stiebai buvo surinkti iš Alashan League, Kinijos Vidinės Mongolijos,ir nustatė prof. Xiaodong Wang (Biologinio perdirbimo inžinerijos skyrius, Procesų inžinerijos institutas, Kinijos mokslų akademija, Pekinas, PR, Kinija).

Dimetilsulfoksidas (DMSO), 2, 2-azinobis (3-etilbenztiazolino-6-sulfonrūgštis) (ABTS), 3-(4, 5-dimetiltiazolas{ {8}}il)-2, 5-difeniltetrazolio bromidas (MTT) ir 1, 1-difenil-2-pikrilhidrazilas (DPPH) buvo įsigyti iš Sigma Chemical Co. (Sent Luisas, MO, JAV). Dulbecco modifikuota erelio terpė (DMEM) ir vaisiaus galvijų serumas (FBS) buvo įsigyti iš Invitrogen, Inc. Er Guo-tou baltasis spiritas buvo nupirktas iš Beijing Red Star Co., LTD. Biciklolis buvo nupirktas iš Pekino Sąjungos farmacijos gamyklos. Vandeniniai tirpalai buvo paruošti naudojant ypač gryną vandenį iš Milli-Q vandens valymo sistemos (Millipore, Bedford, MA, JAV). Visi kiti reagentai buvo analitinės kokybės.

2.2. CDP ekstrahavimas ir frakcinis filtravimas

Neapdoroti CDP buvo paruošti pagal anksčiau aprašytą mūsų grupės metodą [27] su nedideliais pakeitimais. Trumpai tariant, C. deserticola (50 kg) milteliai (40 tinklelio) buvo ultragarsu (40 kHz ir 6 kW) ekstrahuoti 1000 l vandeninio etanolio tirpalo (50 proc., v/v) 60 °C temperatūroje 120 min. Polisacharidai buvo atskirti nuo ekstrakto makroporine derva (HPD 300). Polisacharido tirpalas buvo koncentruotas sumažintame slėgyje, deproteinizuotas naudojant Sevag metodą [28], o produktas buvo išdžiovintas šaldant, todėl produktas buvo vadinamas neapdorotais CDP.

Tada 50 g neapdorotų CDP buvo ištirpinti 2,5 l itin gryno vandens ir paeiliui atskiriami mikrofiltravimu, ultrafiltravimu ir nanofiltravimu (nominaliosios molekulinės masės ribos buvo 300 kDa, 10 kDa ir 200 Da. Efektyvi membrana plotas buvo 0,625 m2). Išlaikytas mikrofiltravimo tirpalas buvo liofilizuotas ir vadinamas CDP-A. Persmelktas mikrofiltracijos tirpalas buvo filtruojamas ultrafiltruojant, o sulaikytas tirpalas buvo liofilizuotas ir pavadintas CDP-B. Persunktas ultrafiltracijos tirpalas buvo filtruojamas nanofiltravimu, sulaikytas tirpalas buvo liofilizuotas ir pavadintas CDP-C.

2.3. Preliminarus CDP apibūdinimas

CDP molekuliniai dydžiai buvo įvertinti pagal anksčiau pateiktą metodąmūsų grupė [29]. Monosacharidų kompozicijos buvo analizuojamos naudojant P. Zhang ir kt. aprašytą metodą [30]. Grynumas nustatytas fenolio-sieros rūgšties metodu [31]. Baltymų kiekis buvo nustatytas Bradfordo ir Maja Kozarski minėtu metodu [32, 33]. CDP FT-IR spektrai buvo užfiksuoti Furjė transformacijos infraraudonųjų spindulių spektrometru (FT/IR-660 Plus, JASCO) 400–4000 cm{11}} diapazone.

2.4. Antioksidacinė veikla

CDP šalinimo poveikis hidroksilo, superoksido anijonų, DPPH ir ABTS radikalams buvo įvertintas atitinkamai Sun [34], Wang [35], Yap [36] ir Fatiha [37] aprašytais metodais.

cistanche erekcijos disfunkcijadėlinkstas

2.5. CDP-C hepatoprotekcinis aktyvumas in vitro

Remiantis antioksidacinio tyrimo rezultatais, CDP-C buvo pasirinktas tirti hepatoprotekcinį aktyvumą. HepG2 ląstelės (pirktos iš Kinijos tipo kultūrų kolekcijos centro, Pekinas, Kinija) buvo kultivuojamos DMEM, kuriame buvo termiškai inaktyvuotas FBS (10 proc.), streptomicinas (0.1 ug/mL), penicilinas. (100 TV/mL) ir nepakeičiamos aminorūgšties. Ląstelės buvo inkubuojamos drėgnoje 5 procentų CO2 atmosferoje 37 laipsnių temperatūroje, nuimamos eksponentinio augimo fazėje, sėjamos į 96-šulinėlių plokšteles (4 × 104 ląstelės duobutėje, 100 μL) ir inkubuojamas 24 val. Neigiamos grupės ląstelės buvo apdorotos alkoholiu (galutinė koncentracija buvo 3,5 proc., v/v), o naivi grupė buvo apdorota vandeniu. Teigiamos grupės ląstelės buvo apdorotos alkoholiu ir bicikloliu (galutinė koncentracija buvo 200 ug/mL). Keturių tiriamųjų grupių ląstelės buvo apdorotos alkoholiu ir CDP-C (galutinė CDP-C koncentracija buvo 0,11, 0,3333, 1,00 ir 3,00 mg/ml). Visos ląstelės buvo kultivuojamos dar 48 valandas.

HepG2 ląstelių gyvybingumas buvo nustatytas MTT tyrimo metodu, paminėtu J. Tong ir kt. [38] su nedideliais pakeitimais. Trumpai tariant, MTT (5 mg/mL, 20 μL vienoje duobutėje) buvo pridėta į ląsteles pasėtas 96-šulinėlių plokšteles ir ląstelės buvo inkubuojamos 4 valandas. Tirpalai buvo pašalinti ir pridėta DMSO (150 μl / duobutėje). Kiekvieno šulinėlio absorbcija buvo išmatuota esant 492 nm, naudojant 96-šulinėlių plokštelių skaitytuvą (Thermo Scientific, Amerika). Ląstelių gyvybingumas buvo apskaičiuotas pagal šią formulę:

Ląstelių gyvybingumas (procentais)=(Mėginys – tuščias) × 100/ (A naivus – tuščias)

kur A mėginys buvo eksperimentinės grupės absorbcija; Naivus buvo kontrolinės grupės be mėginio absorbcija; Tuščiasis mėginys buvo auginimo terpės absorbcija be jokio mėginio ir pasėtos ląstelės.

2.6. CDP-C hepatoprotekcinis aktyvumas in vivo

2.6.1. Gyvūnai

Buvo panaudotos suaugusios ICR pelių patelės (22-25 g, pirktos iš Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co. Ltd. Gyvūnų licencijos numeris buvo 11400700128). Gyvūnai buvo laikomi ekologiškai kontroliuojamoje patalpoje su pašaru ir vandeniu ad libitum (santykinė oro drėgmė buvo 40-60 proc., 22-26 laipsnis), oro ventiliacija buvo 12-18 k./val. ir šviesos apšvitinimas buvo 12 h šviesos/tamsos ciklas 150-300 liukso. Pelės buvo aklimatizuotos prie gyvūnų kambario sąlygų 7 dienas prieš eksperimentą. Visos procedūros su gyvūnais eksperimentų metu buvo atliekamos griežtai laikantis laboratorinių gyvūnų naudojimo taisyklių, priimtų ir paskelbtų Jungtinių Valstijų nacionalinių sveikatos institutų.

2.6.2. Eksperimentinis dizainas

ICR pelės buvo atsitiktinai suskirstytos į šešias grupes (naivi grupė, neigiama kontrolinė grupė, teigiama kontrolinė grupė ir trys bandomosios grupės), kurių kiekvienoje grupėje buvo 10 gyvūnų. Naivi grupė buvo vartojama per burną su distiliuotu vandeniu. Neigiamai kontrolinei grupei buvo skiriamas alkoholis (Er Guo-tou vaitspiritas, 56 proc., 6 ml/kg). Teigiamai kontrolinei grupei buvo skiriamas biciklolis (300 mg/kg), o po 5 valandų – alkoholis. Trims tiriamosioms grupėms buvo skiriama 200, 600, 1800 mg/kg CDP-C, o po 5 valandų – alkoholio. Visos pelės buvo skiriamos 31 dieną iš eilės.

2.6.3. Serologinių indeksų nustatymas

Praėjus maždaug 4 valandoms po paskutinio alkoholio vartojimo, kraujas buvo paimtas iš akiduobės ir centrifuguojamas 3000 g 15 minučių. Atskyrus serumą, naudojant diagnostikos rinkinius buvo nustatytas alanino transaminazės (ALT), rūgštinės fosfatazės (ACP), -glutamilo transpeptidazės (-GTP) ir triglicerido (TG) aktyvumas.
2.6.4. Kepenų rodiklių nustatymas

Po kraujo paėmimo visoms pelėms buvo įvykdyta mirties bausmė. Kiekvienos pelės kepenys buvo nedelsiant išpjautos, nuplaunamos fiziologiniu tirpalu. Kepenų audinio gabalas buvo atskirtas nuo kairiosios skilties. Tada audinys buvo sumaltas ir homogenizuotas vandeniniu kalio chlorido tirpalu (1,15 proc., m/t) stikliniame homogenizatoriuje (Potter Elvehjem Teflon) 60 sekundžių, kad būtų gautas kepenų homogenatas (10 proc. m/t). Superoksido dismutazės (SOD), malondialdehido (MDA), glutationo S-transferazės (GST) ir trigliceridų (TG) fermentų aktyvumas buvo matuojamas naudojant diagnostikos rinkinius.

2.6.5. Histopatologiniai tyrimai

Likusi kepenų dalis buvo fiksuota Bouin fiksatoriuje 24 valandas, po dehidratacijos naudojant vandeninį etanolio tirpalą (50-100 proc., v/v), kepenų audinys buvo išvalytas ksilene ir įterptas į parafiną. Kepenų sekcijos (5 mm) buvo nudažytos alūno hematoksilinu ir eozinu (HE). Kepenų pjūvių ir histopatologinių pokyčių vaizdai buvo užfiksuoti šviesos mikroskopu (Nikon-DS-L1-5M).

2.7. Statistinė analizė

Duomenys buvo išreikšti kaip vidurkis ± standartinė vidurkio paklaida (SEM) iš trijų (cheminės sudėties analizė ir antioksidantų tyrimas), penkių (ląstelių gyvybingumas) arba dešimties (in vivo tyrimai) nepriklausomų eksperimentų. Statistiniai skirtumų tarp grupių reikšmingumai buvo išanalizuoti taikant vienpusę dispersijos analizę (ANOVA), po kurios buvo atliktas Studento-Newmano-Keulso kelių diapazonų testas naudojant SPSS 19.0 programinę įrangą. Visose analizėse p<0.05,><0.01, or=""><0.001 indicated="" statistical="">

3. Rezultatai ir diskusija

3.1. CDP charakteristikos

Kaip parodyta 1A pav., CDP-A yra dvi grupės, kurių molekulinės masės yra 4000 kDa ir 3946 kDa. CDP-B ir CDP-C molekulinės masės yra 2400 kDa ir 1300 kDa. Monosacharidų kompozicijos parodytos 1B pav. CDP-A, CDP-B ir CDP-C yra šeši esminiai monosacharidai skirtingomis proporcijomis, įskaitant manozę (Man), ramnozę (Rha), galakturono rūgštį (GalUA), gliukozę (Glc), galaktozę (Gal) ir arabinozę ( Ara). Be aukščiau minėtų šešių monosacharidų, CDP-C taip pat yra ksilozė (ksilas). Be to, CDP-C yra didesnė GalUA dalis nei kitose dviejose frakcijose.

CDP grynumas ir baltymų kiekis parodytas 1 lentelėje. Iš 1 lentelės matyti, kad CDP-A grynumas yra didžiausias, kuris yra 75,57 proc., o CDP-B ir CDP-C grynumas yra atitinkamai 74,72 proc. ir 68,92 proc. Baltymų kiekis CDP-A, CDP-B ir CDP-C yra atitinkamai 1,27 proc., 1,24 proc. ir 1,05 proc.

1 lentelė.CDP grynumas ir baltymų kiekis. Duomenys yra trijų pakartojimų vidurkiai ± SEM.

Angliavandenių FT-IR spektrai naudojami jų struktūrinėms savybėms nustatyti ir paprastai naudojami organinių funkcinių grupių, ypač OH, CO ir C=O, kokybinei analizei [39]. CDP FT-IR spektrai parodyti 1C pav. Kiekvienas spektras rodo stiprią ir platų tempimo smailę apie 3293 cm-1 OH tempimo vibracijai, taip pat silpną sugerties smailę ties 2939 cm-1 CH tempimo vibracijai. Sugerties juostą ties 1650 cm−1 sukelia C=O asimetrinė tempimo vibracija. Plati sugerties juosta ties 1418 cm−1 yra susijusi su deformuojančia CH jungties vibracija. Kiekvienas konkretus polisacharidas turi specifinę juostą 1000-1200 cm-1 regione, kuriame vyrauja žiedinė vibracija, persidengianti su (C-OH) šoninių grupių tempimo vibracija ir (COC) glikozidinės juostos vibracija. Absorbcija esant 1036 cm−1 rodo piranozės cukraus formą. Absorbcija beveik 829 cm-1 rodo glikozidų ryšį CDP molekulinėje struktūroje. Kaip parodyta 1 C pav., CDP-C sugerties juosta esant 1650 cm−1 yra stipresnė nei CDP-A ir CDP-B, o tai reiškia, kad C=O kiekis CDP-C yra didesnis nei CDP-A ir CDP-B. Šis rezultatas atitinka 1 A pav. rezultatus, kurie rodo, kad GalUA dalis CDP-C yra didesnė nei CDP-A ir CDP-B.

3.2. CDP antioksidacinė veikla

3.2.1. Hidroksilo radikalų tyrimas

Tarp reaktyviųjų deguonies rūšių hidroksilo radikalas yra pats reaktyviausias ir sukelia didelę žalą gretimoms biomolekulėms [40]. Hidroksilo radikalui yra dviejų tipų antioksidaciniai mechanizmai: vienas pašalina jau susidariusį hidroksilo radikalą, o kitas slopina hidroksilo radikalo susidarymą. Pastariesiems hidroksilo radikalas susidaro Fe (II) kompleksui reaguojant su vandenilio peroksidu. CDP antioksidacinis aktyvumas gali susijungti su metalo jonais, kurie nereaguoja su H2O2 ir gamina hidroksilo radikalą, bet sudaro chelatą su CDP ir sudaro metalo kompleksą. Metalo kompleksas negali toliau reaguoti su H2O2 ir sudaryti hidroksilo radikalą [41-43]. Todėl CDP rodo hidroksilo radikalų šalinimo poveikį.

2 pav. A rodomas CDP sugerties ant hidroksilo radikalo pajėgumas priklausomai nuo koncentracijos. CDP-A, CDP-B ir CDP-C valymo rodiklis yra atitinkamai 29,56 proc., 33,44 proc. ir 38,22 proc. CDP-C pasižymi didesniu hidroksilo radikalų šalinimo aktyvumu. Atsižvelgiant į tai, kad CDP-C sudėtyje yra didesnė GalUA dalis nei CDP-A ir CDP-B, CDP antioksidantai gali būti susiję ne tik su metalo jonų susirišimo savybe, bet ir su GalUA, Ara ir Gal turiniu [{{15] }}].

3.2.2. Superoksido anijonų radikalų tyrimas

Superoksido anijonų radikalas yra toksiška rūšis, kuri susidaro dėl daugelio biologinių ir fotocheminių reakcijų ir taip sukelia audinių pažeidimus [47]. Nors superoksido anijonas yra palyginti silpnas oksidatorius, jis vaidina svarbų vaidmenį formuojant kitas stipresnes reaktyvias oksidacines rūšis, tokias kaip deguonis ir hidroksilo radikalas [48]. 2 pav. B parodytas ryšys tarp koncentracijų ir CDP pašalinimo pajėgumų ant superoksido anijonų radikalų. Didėjant koncentracijai, CDP-C turi didesnį šalinimo pajėgumą nei CDP-B ir CDP-A.

3.2.3. DPPH radikalų tyrimas

DPPH, vienas iš stabilių azoto centre esančių junginių, turinčių protonų laisvąjį radikalą, pasižymintį būdinga absorbcija ties 517 nm, žymiai sumažėja veikiant protonų radikalų gaudytojams, todėl jis plačiai naudojamas vertinant antioksidantų laisvųjų radikalų sugėrimo aktyvumą. Visiškai pripažįstama, kad DPPH laisvieji radikalai, kuriuos pašalina antioksidantai, atsiranda dėl jų vandenilio donorystės galimybių. Antioksidantai perneša elektronus arba vandenilio atomus į DPPH radikalą ir susidaro DPPH-H, kuris yra neradikalinis darinys [49].

Ištirtas visų mėginių bendras DPPH pašalinimo poveikis, o rezultatai parodyti 2 pav. C. CDP pašalinimo gebėjimai DPPH radikaluose rodomi priklausomai nuo koncentracijos. Koncentracijai didėjant nuo 1.0 iki 5.{5}} mg/ml, CDP-C sugeriamumas padidėja nuo 52,5 proc. iki 58,7 proc., daugiau nei CDP-B (nuo 34,2 proc. iki 56,8). proc.) ir CDP-A (nuo 12,5 proc. iki 52,8 proc.). CDP-C DPPH šalinimo poveikis gali būti susijęs su karbonilo grupėmis GalUA.

3.2.4. ABTS radikalų tyrimas

ABTS radikalų tyrimas dažnai naudojamas tiriant bandomųjų mėginių stipraus antioksidanto bendrą antioksidacinę galią [50]. Visų mėginių ABTS šalinimo poveikis parodytas 2 pav. D. CDP pašalinimo gebėjimai ABTS radikaluose priklauso nuo dozės. CDP-A, CDP-B ir CDP-C IC50 yra atitinkamai apie 4,0 mg/ml, 2,5 mg/ml ir 1,2 mg/ml. Rezultatai rodo, kad CDP turi ABTS šalinimo aktyvumą.

Apibendrinant galima pasakyti, kad CDP-C antioksidacinis aktyvumas buvo didesnis nei CDP-A ir CDP-B. Ji pranešė, kad kai kurios farmakologinės polisacharidų veiklos buvo susijusios su jo GalUA[51]. Šiame eksperimente GalUA dalis CDP-C buvo didesnė nei CDP-A ir CDP-B, CDP-C buvo pasirinktas siekiant ištirti hepatoprotekcinį poveikį nuo lėtinės kepenų ligos, kurią sukelia alkoholis.

3.3. CDP-C poveikis HepG2 ląstelių gyvybingumui

Ląstelių gyvybingumo matavimas yra įprastas būdas įvertinti natūralių vaistų veiksmingumą [52]. Remiantis rezultatais, kad CDP-C pasižymėjo didžiausiu antioksidaciniu aktyvumu, buvo įvertintas CDP-C poveikis HepG2 ląstelių gyvybingumui. Rezultatai parodyti 3 pav. Gydymo alkoholiu sukeltas ryškus HepG2 ląstelių gyvybingumo sumažėjimas. Tačiau CDP-C gali žymiai pagerinti išgyvenamumą, palyginti su neigiama grupe. Kaip parodyta 3 pav., naudojant CDP-C ląstelių gyvybingumas nėra tiksliai priklausomas nuo koncentracijos. Priešingai, kai CDP-C koncentracija pasiekia 300 mg/ml, HepG2 ląstelių gyvybingumas smarkiai sumažėja. Ląstelių gyvybingumo sumažėjimo priežastis gali būti ta, kad maža CDP-C koncentracija buvo naudinga HepG2 ląstelių išlikimui. Tačiau kai polisacharidų koncentracija auginimo terpėje buvo pakankamai didelė, kad pakeistų ląstelių mikroaplinką, HepG2 ląstelių gyvybingumas buvo slopinamas.

3.4. CDP-C farmakologinis poveikis

3.4.1. CDP-C poveikis serologiniams indeksams

Piktnaudžiavimas alkoholiu siejamas su beveik 4 procentais visų mirčių, o tai tapo rimta socialine problema pasaulyje. Žmogaus organizme alkoholis metabolizuojamas kepenyse, kai jis absorbuojamas per skrandžio ir plonosios žarnos gleivinę [53-55]. Alkoholinės kepenų ligos paprastai atsiranda po daugelio metų piktnaudžiavimo alkoholiu [56]. Su alkoholiu susijusiems kepenų sutrikimams dažniausiai stebimos patologinės būklės, tokios kaip suriebėjusios kepenys, hepatitas, fibrozė ir cirozė [57], arba net vėžinės ligos, tokios kaip kepenų ląstelių karcinoma ir gaubtinės žarnos vėžys [58]. Todėl alkoholis yra tipiškas hepatotoksiškas ir moksliniuose tyrimuose plačiai naudojamas kaip kepenų pažeidimo induktorius [59]. Atsižvelgiant į tai, kad alkoholio sukeltas kepenų ligas dažnai sukelia alkoholiniai gėrimai ir maisto priedai, o ne pramoninis etanolis, todėl šiame tyrime Er Guo-tou baltasis spiritas buvo naudojamas ICR pelių kepenų pažeidimo modeliui nustatyti. Biciklolis yra įprastas agentas, naudojamas lėtiniam kepenų pažeidimui gydyti, todėl jis buvo naudojamas teigiamos kontrolės modeliui nustatyti.

Kepenų ląstelėse yra didesnė ALT koncentracija citoplazmoje ir mitochondrijose. Dėl įvairių kepenų ląstelių pažeidimų, citozolio nutekėjimas padidins ALT kiekį serume. Taigi ALT skatinimas yra ląstelių nutekėjimo ir kepenų funkcinių sutrikimų rodiklis [60]. Taigi ALT lygis serume paprastai nustatomas kaip rodiklis kepenų sveikatai įvertinti [61]. Dėl panašių priežasčių -GTP, ACP ir TG taip pat naudojami kaip rodikliai kepenų sveikatos būklei įvertinti [62].

Šiame tyrime CDP-C hepatoprotekcinis aktyvumas buvo įvertintas nustatant ALT, ACP, -GTP ir TG lygius. Rezultatai parodyti 4 pav. A, B, C ir D. Keturi serumo rodikliai, kuriuos drastiškai skatina gydymas alkoholiu neigiamoje grupėje. Tačiau CDP-C gali susilpninti šiuos alkoholio vartojimo sukeltus pokyčius. Tačiau ne visi serologiniai rodikliai priklauso nuo dozės naudojant CDP-C. 4 A ir B pav. CDP-C esant žemai koncentracijai turi reikšmingą poveikį ALT ir ACP atstatymui, tačiau CDP-C poveikis esant didžiausiai koncentracijai nebuvo reikšmingas. Tiesą sakant, daugelis natūralių produktų yra naudingi sveikatai mažomis dozėmis, o žalingi sveikatai didelėmis dozėmis [60]. Priežastis gali būti ta, kad per didelis polisacharidų suvartojimas paveiks normalią organizmų medžiagų apykaitą, todėlneigiamai paveikti organizmo sveikatą. Tačiau išsamus mechanizmas turi būti toliau tiriamas.

3.4.2. CDP-C poveikis kepenų rodikliams

Organizmai, patyrę oksidacinį stresą, paprastai sukūrė antioksidacinį gynybos mechanizmą, o SOD yra tipiška fermentų pagrindu sukurta antioksidantų sistema [63]. SOD katalizuoja superoksido anijono dismutaciją į O2 ir H2O2 [64]. GST, tirpus baltymas, esantis citozolyje, taip pat vaidina svarbų vaidmenį detoksikuojant kepenis. Dėl aukščiau paminėtų priežasčių SOD ir GST tampa alkoholio sukelto hepatotoksiškumo rodikliais. MDA ir TG kepenyse taip pat naudojami kaip hepatotoksiškumo rodikliai [65].

Šiame tyrime CDP-C poveikis kepenų funkcijai parodytas 5 pav. A, B, C ir D paveiksluose parodytas CDP-C poveikis atitinkamai SOD, MDA, GST ir TG. Šios keturios nuotraukos rodo, kad pelės, gydomos alkoholiu, žymiai sumažina SOD ir GST lygį bei padidina MDA ir TG lygį, tačiau CDP-C akivaizdžiai gali susilpninti šį pokytį. Panašiai kaip 3.4.1 skirsnyje aprašyti reiškiniai, naudojant CDP-C kepenų rodikliai taip pat nebuvo priklausomi nuo dozės. To priežastis gali būti panaši į mechanizmą, pavaizduotą 3.4.1 skirsnyje. Ankstesni tyrimai pranešė, kad polisacharidų poveikis SOD ir katalazei gali būti susijęs su SOD ir katalazės genų ekspresijos indukcija [66]. Tačiau vis dar reikia atlikti tolesnius tyrimus, siekiant išsiaiškinti CDP-C hepatoprotekcinį mechanizmą ir ryšį tarp jo struktūros ir funkcijos.

3.5. Histopatologinis CDP-C poveikis alkoholio sukeltoms pelėms

Remiantis histopatologiniais kepenų pjūvių stebėjimais, naivi grupė pasižymėjo normalia ląstelių struktūra su skirtingomis kepenų ląstelėmis ir be histologinių anomalijų (6 pav. A). Palyginimui, alkoholio vartojimas sukėlė rimtą kepenų pažeidimą neigiamos grupės pelėms. Kepenų pjūviuose buvo nustatytas hepatocitų riebalų nusėdimas, hepatocitų nekrozė ir patinimas, ląstelėse susidarė vakuolės, išnyko ir ląstelių ribos (6 pav. B). Pelių, kurioms buvo suteiktas biciklolis (6 C pav.) su skirtingomis CDP-C dozėmis (6 pav. DF), kepenų dalyse buvo akivaizdžiai atstatyti tie iškraipymai, kurie atsirado neigiamos kontrolinės grupės grupėje. Šie rezultatai patvirtino, kad alkoholis sukėlė tam tikrą neigiamos kontrolinės grupės hepatocitų iškraipymą. Tačiau CDP-C atkūrė šiuos pakeitimus.

Visiškai pripažįstama, kad polisacharidų hepatoprotekcinis poveikis yra susijęs su jų antioksidaciniu aktyvumu [67, 68]. Įrodyta, kad didelis urono rūgšties kiekis yra naudingas polisacharidų antioksidaciniam poveikiui [44, 45]. Taip pat buvo patvirtinta, kad polisacharidai, kuriuose gausu Gal ir Ara, turi didesnį antioksidacinį poveikį [46]. Tačiau stambiamolekuliniams polisacharidams sunku tiesiogiai patekti į žarnyno epitelio ląsteles. CDP-C (kurio molekulinė masė 1300 kDa) nėra lengva tiesiogiai patekti į organizmą ir atlikti hepatoprotekcinį vaidmenį. Paskelbtos ataskaitos atskleidė, kad polisacharidų molekulinė masė sumažėjo po virškinimo skrandžio ir žarnyno [69]. Taigi, mes manėme, kad CDP-C gali būti suskaidytas į mažos molekulinės masės polisacharidus ir absorbuojamas žarnyno epitelio ląstelėse. Redukuojantys polisacharidų galai gali padidėti dėl glikozidinių jungčių irimo [69, 70]. Pagal CDP-C monosacharidų sudėtį tuose suskaidytuose mažos molekulinės masės polisachariduose turėtų būti GalUA, Ara ir Gal. Taigi šie mažos molekulinės masės polisacharidai, turintys redukuojančius galus ir turintys GalUA, Ara ir Gal, gali atlikti kepenų apsaugos vaidmenį organizme. Tačiau išsamus mechanizmas turi būti toliau tiriamas.

4. Išvados

Remiantis monosacharidų sudėties analize ir FT-IR spektrais, visose trijose CDP frakcijose buvo Man, Rha, GalUA, Glc, Gal ir Ara. CDP-C buvo didelė GalUA dalis. CDP-C turėjo didžiausią antioksidacinį aktyvumą. In vitro ir Vivo tyrimų rezultatai parodė, kad CDP-C turėjo hepatoprotekcinį aktyvumą nuo lėtinio alkoholio sukelto kepenų pažeidimo. Pagrindinis mechanizmas buvo susijęs su santykinio fermentų aktyvumo moduliavimu, MDA ir TG mažinimu kepenyse. Fiziologinis CDP-C aktyvumas gali būti susijęs su GalUA. Šios išvados suteikia naujų įžvalgų apie C. deserticola farmakologinius tikslus alkoholinių kepenų ligų prevencijai.

Cistanche žolėsaugokepenysirgerina imunitetą.

Norėdami gauti daugiau informacijos, spustelėkite čia.