Cistanche Deserticola polisacharidai turi neuroprotekcinį poveikį

Norėdami gauti daugiau informacijos:Ali.ma@wecistanche.com

Yue Liu ir kt

Santrauka:

Išeminis insultas yra liga, kuriai būdingas didelis sergamumas ir mirtingumas.Cistanchedeserticolapolisacharidai(CDP) turi platų teigiamą poveikį, įskaitant hepato apsaugą ir imuninę homeostazę. Kiek mums žinoma, apsauginis CDP poveikis(Cistanchedeserticolapolisacharidai)neuronų, pažeistų dėl deguonies ir gliukozės trūkumo / reperfuzijos (OGD / RP), nebuvo ištirtas. Šiame tyrime OGD / RP sužeidė PC12 ląstelių modelį. Trumpai, CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)({0}},05, 0,5 ir 5 ug/ml) buvo suleista prieš reperfuziją. Apsauginis CDP poveikis(Cistanchedeserticolapolisacharidai)Tada buvo įvertintas ląstelių gyvybingumas, laktatdehidrogenazės (LDH) nutekėjimas, [Ca2 plius] I, mitochondrijų membranos potencialas (MMP) ir ląstelių apoptozė, andredokso būklė po reperfuzijos buvo įvertinta tiriant reaktyviąsias deguonies rūšis (ROS), katalazę ( CAT), glutationo peroksidazę (GSH-Px) ir bendrą antioksidacinį pajėgumą. Remiantis tuo, kad su Parkinsono liga susijęs baltymas DJ-1 dalyvauja endogeninėje antioksidacijoje ir atliekaneuroprotekcinispoveikį po išemijos, ištyrėme CDP sąveiką(Cistanchedeserticolapolisacharidai)ir DJ{{0}}. DJ-1 ekspresija buvo aptikta ELISA ir Western blot analize, o DJ-1 translokacija buvo įvertinta imunofluorescencijos būdu. Rezultatai parodė, kad CDP (0,05, 0,5 ir 5 ug/ml) susilpnino PC12 ląstelių mirtį, išsaugojo MMP ir kalcio homeostazę; slopina oksidacinį stresą ir sumažino ląstelių apoptozę. Be to, CDP (5 ug/ml) labai skatino DJ{10}} sekreciją ir raišką. Apskritai rezultatai rodo, kad CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)daro aneuroprotekcinispoveikis prieš OGD/RP sukeltą žalą, nes slopina oksidacinį stresą ir reguliuoja DJ-1 kelią

Raktiniai žodžiai:Cistanche deserticola, polisacharidai, neuroprotekcija, deguonies trūkumas / reperfuzija, oksidacinis stresasDJ{0}}

Spustelėkite, kad pamatytumėte Cistanche UK produktus

1. Įvadas

Išeminis insultas yra antra pagrindinė mirtingumo priežastis ir pagrindinė ilgalaikės negalios priežastis visame pasaulyje [1]. Manoma, kad 2030 m. mirčių nuo insulto skaičius išaugs iki 7,8 mln. Kinijoje kasmet nuo insulto miršta nuo 58 iki 142 iš 100{9}} žmonių. Taigi, turi būti sukurtos veiksmingos išemijos-reperfuzijos pažeidimo pakeitimo strategijos. Daugybė įrodymų patvirtina, kad oksidacinis stresas yra pagrindinis veiksnys, skatinantis smegenų infarkto vystymąsi ir progresavimą reperfuzijos metu [3,4]. Todėl atrandant veiksmingąneuroprotekcinisAgentai, galintys sumažinti ROS ir slopinti oksidacinį stresą, sulaukė didelio susidomėjimo moksliniais tyrimais. Su Parkinsono liga susijęs baltymasDJ-1 tarpininkauja neuroprotekcijai, skatindamas antiapoptozinį ir antioksidacinį genų ekspresiją [4,5]. DJ-1 gali būti perkeltas į mitochondrijas oksidacinio streso ir mitogeno stimuliacijos būdu ir gali būti išskiriamas į ekstraląstelinę matricą esant patologinėms sąlygoms, tokioms kaip krūties vėžys, melanoma ir OGD/RP pažeidimas [6]. Be to, DJ-1 yra naudingas išeminės neurodegeneracijos gydymui, nes jis atlieka svarbų vaidmenį antioksidacijoje [4,7]. Per pastaruosius 10 metų kelios grupės patvirtino, kad DJ{12}}neuroprotekcinispoveikis in vivožidininės smegenų išemijos modeliams ir in vitro OGD/RP modeliams [6–9]. Tuo tarpu kai kurie vaistai, įskaitant ciklosporiną A ir natrio fenilbutiratas, panaikina neuronų ląstelių mirtį per DJ-1 padidintą ininchemijos insultą [9,10] ].

Cistanchedeserticola, neatsiejamas džiovintas augalasCistanchedeserticolaYCMa ir Cistanche tubulosa Wight daugiausia gaminamas Šiaurės ir Šiaurės Vakarų Kinijos dykumose [11]. C. deserticola yra valgoma ir buvo pagerbta kaip „dykumų ženšenis“. Išrašant akupunktūrą, jis naudojamas kaip lėtinės inkstų ligos, seksualinės impotencijos, moterų nevaisingumo, leukorėjos, metroragijos ir senatvinio vidurių užkietėjimo gydymas [12].C. deserticola polisacharidai, pagrindinis aktyvus komponentas, išskirtas išCistanche deserticola. CDP, moduliuoja imuninę funkciją ir lipidų pusiausvyrą bei apsaugo nuo senėjimo, oksidacijos ir kepenų pažeidimo. Be to, CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)apsaugo nuo išemijos-reperfuzijos pažeidimo širdyje ir kepenyse [13,14]. Naujausi tyrimai parodė, kad CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)yra netoksiški[12,15,16], o kitos fitocheminės medžiagos, ekstrahuotos iš C. Deserticola, įskaitant echinakozidą, izoakteozidą, akteozidą ir salidrosidą, yraneuroprotekcinispadariniai [11,12]. Tačiau iki šiol nebuvo pranešta apie galimą CDP naudojimą išeminio insulto pažeidimams palengvinti.

Šiame tyrime iškeliame hipotezę, kad CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)slopina oksidacinį stresą, kad apsaugotų nuo neuronų. Galimas apsauginis CDP poveikis(Cistanchedeserticolapolisacharidai)ischemijos insulto pažeidimai buvo ištirti naudojant OGD / RP sužeistas PC12 ląsteles. Tada buvo ištirtos pagrindinės sąveikos, susijusios su DJ-1.

2. Metodai

2.1. Ląstelių kultūra ir OGD/RP modelis

PC12 ląstelės buvo kultivuojamos RPMI 1640 terpėje, kurioje yra 10 procentų FBS, 37 laipsnių temperatūroje normoksiniame inkubatoriuje, kuriame yra 5 procentai CO2. Terpė buvo keičiama kas 48 val. Parengtas OGD/RP modelis. PC12 ląstelės buvo nuplaunamos ir veikiamos Earle subalansuotu druskos tirpalu. Tada ląstelės buvo perkeltos į anaerobinę kamerą, kurioje yra 5 procentai CO2 ir 95 procentai N2, 37 laipsnių temperatūroje 4 val., tada leista pakartotinai prisotinti deguonimi. Šio etapo metu į ląsteles buvo pridėtas toks pat auginimo terpės tūris. Po reoksigenacijos ląstelės 24 valandoms buvo dedamos į normoksinį inkubatorių.

2.2. Vaistų administravimas

CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)buvo įsigytas iš Yuanye Biological Technology Co., Šanchajus, Kinija (C23J7Y18405, > 98 proc. grynumo). Nimodipinas, pirmos eilės prevencinis vaistas nuo išeminio insulto, buvo naudojamas kaip teigiamas kontrolinis junginys [17–19]. Nimodipino injekcija buvo iš Bayer Company. Ląstelės buvo atsitiktinai suskirstytos į šešias grupes, būtent į kontrolinę, vehicle (OGD/RP), Nimo (5 ug/ml), CDP.(Cistanchedeserticolapolisacharidai)(0.05 ug/ml), CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)(0,5 ug/ml) ir CDP (5 ug/ml). Nimodipinas ir CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)buvo pridėta prieš reperfuziją. Kontrolinė grupė buvo auginama įprastoje terpėje ir inkubuojama normaliomis sąlygomis.

2.3. Ląstelių gyvybingumas: MTT ir NRU tyrimai

PC12 ląstelės (6 × 103 vienoje duobutėje) buvo pasėtos į 96-šulinėlių auginimo plokštelę. Ląstelės buvo apdorotos pagal kiekvienos grupės reikalavimus. MTT (Solarbio, Kinija) buvo pridėta prie ląstelių 5 mg / ml koncentracija ir inkubuojama 4 valandas 37 laipsnių temperatūroje. Formazanas yra sukcinato dehidrogenazės redukcinis produktas gyvose ląstelėse [20]. DMSO buvo pridėta susidariusiam mėlynam formazanui ištirpinti. Sugertis esant 490 nm bangos ilgiui buvo aptikta naudojant Microplate Reader (Thermo, JAV) po to, kai ląstelės buvo purtomos 10 minučių 25 laipsnių temperatūroje. Ląstelių gyvybingumo rezultatai buvo išreikšti kontrolinės grupės procentais [21].

Neutralaus raudonojo įsisavinimo (NRU) tyrimas buvo atliktas pagal anksčiau paskelbtą protokolą [22]. Pasibaigus reperfuzijos laikotarpiams, į ląsteles buvo pridėta neutralios raudonos spalvos (Solarbio, Kinija), kurios koncentracija buvo 50 ug/ml. Mišinys buvo inkubuojamas 3 valandas. Tada ląstelės buvo greitai nuplaunamos tirpalu, kuriame yra 0,5 procento formaldehido ir 1 procento kalcio chlorido. Vėliau ląstelės buvo supilamos į mišinį, kuriame yra 1% etilo rūgšties ir 50% bevandenio etanolio. Plokštelės buvo nuskaitytos esant 540 nm absorbcijai po to, kai ląstelės buvo sukratytos 20 minučių 37 laipsnių temperatūroje. Ląstelių gyvybingumo rezultatai pasireiškė kontrolinės grupės procentais.

Cistanche deserticola polisacharidaiturėkNeuroprotekcinis poveikis

2.4. Citotoksiškumo įvertinimas

LDH yra citoplazminis fermentas, katalizuojantis laktato topiruvato oksidaciją. Pažeidus ląstelės membraną, LDH greitai išsiskiria į tarpląstelinį skystį. Todėl LDH aptikimas paprastai atliekamas citotoksiškumo įvertinimui. [23]. Eksperimentinė procedūra buvo vykdoma pagal komercinio rinkinio instrukcijas, pateiktas LDH tyrimo rinkinyje (Jiancheng, Kinija). Kiekvieno mėginio absorbcija buvo aptikta esant 440 nm mikroplokštelių skaitytuvu. Ląstelių mirties procentas buvo apskaičiuotas pagal šią formulę: Gyvybingumas (procentai)=(OD gydymas – ODTreatment tuščias)/(OD maks. LDH aktyvumas – OD maks. LDH aktyvumas tuščias) × 100 procentų.

2.5. Viduląstelinio Ca2 plius koncentracijos nustatymas

Viduląstelinė Ca2 plius koncentracija buvo matuojama naudojant Fluo-3/AM [15]. PC12 ląstelės tris kartus plaunamos PBS ir inkubuojamos su 2 μM Fluo-3/AM (Beyotime, Kinija) 30 min. 37 laipsnių temperatūroje tamsoje. Tada ląstelės tris kartus buvo plaunamos PBS, kad būtų pašalintas ekstraląstelinis dažiklis. Fluo-3/AM fluorescencijos intensyvumas buvo nustatytas lazeriniu skenuojančiu konfokaliniu mikroskopu (Olympus, Japonija). Programinės įrangos paketas Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer ir ImageJ buvo naudojami pilkos spalvos reikšmėms apskaičiuoti

2.6. MMP matavimas

JC-1 (5,5′,6,6′-tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraetilimidakarbocianinas; Beyotime, Kinija) yra patogus įtampai jautrus zondas, dažniausiai naudojamas dažymui ląstelėse ir įvertinant MMP [24]. PC12 ląstelės buvo du kartus plaunamos šaltu PBS ir tada inkubuojamos su mišiniu, kuriame yra 50 procentų terpės ir 50 procentų darbinio skysčio, 15 minučių 37 laipsnių temperatūroje tamsoje. Tada mišinys buvo išmestas ir pakeistas nauja terpe. Raudoni ir žali fluorescenciniai vaizdai buvo užfiksuoti naudojant lazerinę skenuojančią konfokalinę mikroskopiją. MMP matavimui buvo naudojama santykinė raudonų ir žalių fluorescencinių signalų proporcija [25]. Pilkos spalvos reikšmėms apskaičiuoti buvo naudojamas programinės įrangos paketasOlympus FV10-ASW 4.1 Viewer ir ImageJ.

2.7. Apoptozės aptikimo tyrimas, Hoechest33342 ir srauto citometrijos analizė

Ląstelių apoptozei tirti buvo naudojamas Hoechst33342, DNR surišantis dažiklis [26]. Po reperfuzijos PC12 ląstelės tris kartus plaunamos PBS ir inkubuojamos su Hoechst33342 (Beyotime, Kinija), kurios koncentracija buvo 5 ug/ml 15 minučių 37 laipsnių temperatūroje tamsoje. Tada ląstelės buvo stebimos lazeriniu skenuojančiu konfokaliniu mikroskopu. Apoptotinės ląstelės pasižymėjo intensyvia mėlyna fluorescencija ir branduolio kondensacija. Kiekvienam dažymo eksperimentui buvo užfiksuoti ir kiekybiškai įvertinti trys atsitiktiniai laukai. „Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer“ ir „ImageJ“ buvo naudojami pilkos spalvos reikšmėms apskaičiuoti. Apoptozinių ląstelių procentas buvo apskaičiuotas pagal šią formulę: apoptozinis kiekis / bendras kiekis × 100 procentų [27].

2.8. ROS generacijos matavimas

Fluorescencinis zondas 2′, 7′-dichlorfluoresceino diacetatas (DCFH-DA; Jiancheng, Kinija) gali prasiskverbti pro ląstelių membranas ir gali būti hidrolizuotas į nefluorescencinį DCFH. DCFH yra oksiduojamas tarpląstelinio ROS iki fluorescencinio DCF [29]. Po reperfuzijos ląstelės du kartus plaunamos PBS, o po to inkubuojamos su DCFH-DA galutine koncentracija 10 μM 45 minutes 37 laipsnių temperatūroje tamsoje. Fluorescencija buvo stebima afluorescenciniu spektrofotometru, kurio sužadinimo bangos ilgis buvo 485 nm, o emisijos bangos ilgis – 535 nm.

Cistanche deserticola polisacharidaiturėkNeuroprotekcinis poveikis

2.9. Oksidacinio streso rodiklių nustatymas: CAT, GSH-Px ir T-AOC lygiai

Ląstelės buvo subraižytos ir resuspenduotos PBS. Gautos ląstelių suspensijos 45 kartus ultragarsu apdorojamos ant ledo ir centrifuguojamos 1000 aps./min. greičiu 10 min 4 laipsnių temperatūroje. Supernatantai buvo išsaugoti ir naudojami aptikimui [24]. Bendras baltymų kiekis ląstelių supernatante buvo išmatuotas naudojant BCA baltymų tyrimo reagentų rinkinį (KeyGEN, Kinija). CAT, GSH-Px ir T-AOC lygių aktyvumas buvo matuojamas pagal gamintojų instrukcijas (Jiancheng, Kinija). Kiekvieno mėginio absorbcija buvo aptikta mikroplokštelių skaitytuvu.

2.10. Tarpląstelinės DJ-1 koncentracijos matavimas

PC12 ląstelės (6 × 103 duobutėje) buvo pasėtos į 96-šulinėlių auginimo plokšteles. Po reperfuzijos ląstelių supernatantas buvo surinktas ir analizuojamas naudojant DJ-1/PARK-7 ELISA rinkinį (Raybio, JAV). ) pagal gamintojo instrukciją [9]. Kiekvieno mėginio absorbcija buvo aptikta naudojant Microplate Reader, esant dvigubam 450 nm arba 540 nm bangos ilgiui.

2.11. Western blot analizė

Ląstelių baltymai buvo ekstrahuoti lediniu lizės buferiu pagal gamintojų instrukcijas (KeyGEN, Kinija). Baltymų koncentracija buvo nustatyta naudojant BCA baltymų tyrimo reagentų rinkinį. Vienodai kiekiai baltymų lizatų (20 ug) iš kiekvienos grupės buvo ištirpinti 12 procentų natrio dodecilsulfato-poliakrilamido gelio elektroforeze ir vėliau perkelti ant nitroceliuliozės membranos. Membrana buvo inkubuojama su PBS, turinčiu 5 procentų nugriebto pieno, 2 valandas kambario temperatūroje, o po to zonduojama anti-PARK7/DJ-1 antikūnais (ab76008, Abcam; praskiedimas 1:1000) per naktį 4 laipsnių temperatūroje. Tada membrana tris kartus plaunama PBST ir inkubuojama su antriniu antikūnu ožkos anti-triušio IgG (SA00001-2, Proteintech Group; praskiedimas 1:5000) kambario temperatūroje 2 valandas. Antikūnas anti- -Tubulinas (10759-1-AP, Proteintech Group; praskiedimas 1:1000) buvo laikomas kontroline medžiaga. Baltymų juostos buvo vizualizuotos sustiprintos chemiliuminescencijos (ECL) reakcijos reagentais. Juostos tankis buvo matuojamas QuantityOne Analysis programine įranga v.4.6.9.

2.12. Imunocitocheminė analizė

PC12 ląstelės buvo fiksuotos 4 procentų paraformaldehidu 15 minučių kambario temperatūroje po reperfuzijos apdorojimo [9]. Pašalinus perteklinį paraformaldehidą, ląstelės 10 minučių kambario temperatūroje buvo inkubuojamos PBS, kuriame yra 0,3 proc. Triton X-100. Tada ląstelės tris kartus buvo plaunamos PBS, prieš jas 1 valandą inkubuojant su 5 procentų normaliu ožkos serumu. Tada ląstelės buvo inkubuojamos su triušių pelių monoklonine anti-ATP sintazės grandine (MABS1304, EMD Millipore, praskiedimas 1:200), kad būtų nudažytos mitochondrijos, o vėliau inkubuojamos su anti-PARK7/DJ-1 antikūnu (1 skiedimas: 100) baltymų DJ zondavimui-1. Ląstelės buvo plaunamos ir inkubuojamos su ožkos anti-triušio IgG-Alexa 488 (žalia; A11034, Invitrogen; praskiedimas 1:1000) ir ožkos anti-pelės IgG-Alexa 594 (raudona; A11032; Invitrogen; praskiedimas 1:19000). min. Galiausiai ląstelės tris kartus plaunamos PBS ir montuojamos ant stiklinių stiklelių su tvirtinimo terpe, kurioje yra DAPI. Imunofluorescenciniai vaizdai buvo vizualizuoti naudojant lazerinį skenuojantį konfokalinį mikroskopą.

Cistanche deserticola polisacharidaiturėkNeuroprotekcinis poveikis

2.13. Duomenų/statistinė analizė

Visos vertės buvo parodytos kaip vidurkis ± SD. Reikšmė buvo nustatyta naudojant vienpusę dispersijos analizę (ANOVA), po kurios buvo atliktas Dunnett daugialypis palyginimo testas. p < .05="" buvo="" laikomas="" statistiniu="" reikšmingumu.="" eksperimentiniai="" duomenys="" buvo="" analizuojami="" naudojant="" spss="" 17.0="" statistinę="" programinę="">

3. Rezultatai

3.1. CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)slopino OGD/RP sukeltą ląstelių pažeidimą

PC12 ląstelių, paveiktų OGD / RP, skaičius žymiai sumažėjo. Ląstelių forma buvo pakeista ir ląstelės membrana buvo pažeista. MTT tyrime ląstelių gyvybingumas CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)grupėse ({{0}},05, 0,5 ir 5 ug/ml) buvo atitinkamai 58,91 proc. ± 5,40 proc., 61,13 proc. ± 3,81 proc. ir 68,57 proc. ± 3,24 proc., p < 0,05="" (1a="" pav.)="" o="" su="" transporto="" priemone="" –="" 51,68="" proc.="" ±="" 3,89="" proc.="" šios="" vertės="" parodė,="" kad="">(Cistanchedeserticolapolisacharidai)apsaugojo ląsteles nuo OGD / RP sužalojimo ir sumažino ląstelių mirtį. Be to, ląstelių gyvybingumas Nimo grupėje buvo 77,02 proc. ± 5,22 proc., o tai beveik prilygsta 5 ug/ml CDP.(Cistanchedeserticolapolisacharidai)gydoma grupė.

NRU tyrime ląstelių gyvybingumas CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)grupėse ({{0}},05, 0,5 ir 5 ug/ml) buvo atitinkamai 52,03 proc. ± 4,72 proc., 58,49 proc. ± 2,50 proc. ir 69,17 proc. ± 3,91 proc. (1B pav.) su transporto priemone turėjo 47,14 proc. ± 2,88 proc. Vertės parodė nuo koncentracijos priklausomą CDP apsauginį poveikį.

Skirtingai nuo nešiklio (44,73 proc. ± 3,30 proc.), LDH išsiskyrimas CDP buvo žymiai sumažintas.(Cistanchedeserticolapolisacharidai)grupės. CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)grupėse ({{0}},05, 0,5 ir 5 ug/ml), LDH nutekėjimo rodikliai buvo atitinkamai 32,41 proc. ± 3,70 proc , 27,13 ± 2,79 proc. ir 23,13 proc. ± 4,59 proc., p < ,01="" (pav.="" 1c).="" be="" to,="" ldh="" nutekėjimo="" dažnis="" nimo="" grupėje="" buvo="" 21,99="" proc.="" ±="" 4,02="" proc.,="" o="" tai="" buvo="" beveik="" lygus="" 5="" ug/ml="" cdp="" gydytoje="">

3.2. CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)susilpnėjęs OGD/RP sukeltas [Ca2 plus]i padidėjimas

Priešingai nei kontrolinėje grupėje, tarpląstelinis Ca2 plius kiekis PC12 ląstelėse buvo padidintas iki 4146,60 ± 195,97 po OGD/RP pažeidimo. CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)grupės ({{0}},05, 0,5 ir 5 ug/ml), priklausomai nuo dozės, gali sumažinti intracelulinį Ca2 plius lygį atitinkamai iki 2921,25 ± 222,19, 2015,85 ± 230,53 ir 1768,43 ± 426,12 A (C) ). Be to, Ca2 plius lygis 5 ug/ml CDP gydytoje grupėje sumažėjo iki tokio lygio, kaip ir Nimo grupėje (1591,19 ± 213,21).

3.3. CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)susilpnino OGD / RP sukeltą MMP išsklaidymą

Palyginti su kontroline grupe (1,67 ± 0,89), nešiklio grupė (0,48 ± 0,10) rodė daugiau žalios FL fluorescencijos nei raudonos FL fluorescencija (2B ir D pav.). Santykis tarp raudonos ir žalios FL fluorescencijos buvo sumažintas iki 1,11 ± 0,26 ir 1,18 ± 0,16 0,5 ir 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)atitinkamai gydytų grupių, p < .01.="" žalioji="" fl="" fluorescencija="" buvo="" žymiai="">

3.4. CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)užkirto kelią OGD / RP sukeltai ląstelių apoptozei

Ląstelės, kuriose yra kondensuotų chromatinų arba fragmentuotų branduolių, buvo vertinamos kaip apoptotinės ląstelės [30]. Hoechst33342 tyrimo rezultatai atskleidė kondensuotų branduolių atsiradimą po OGD/RP (3A ir C pav.). Transporto priemonių grupės branduoliuose buvo pastebėtas didelis FL fluorescencijos intensyvumas. Branduolių FL fluorescencijos intensyvumas susilpnėjo esant 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)gydoma grupė. Mes išanalizavome apoptozės greitį PC12 ląstelėse kolegų citometrijos metodu, naudojant FITC-Annexin V/PI dvigubą dažymą (3B ir D pav.). Kontrolinės grupės ląstelių apoptozės dažnis buvo 4,16 proc. ± 0,24 proc., o nešiklio grupėje – 22,98 proc. ± 0,66 proc. 5 ug/ml CDP gydytų grupėje ląstelių apoptozės dažnis buvo 7.86 proc. ± 1,16 proc.

3.5. CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)susilpnėjęs OGD / RP sukeltas intracelulinis ROS kaupimasis ir išsaugota redokso būsena

CDP poveikis(Cistanchedeserticolapolisacharidai)Oksidacinis stresas buvo įrodytas remiantis ROS susidarymu, GSH-Px, CAT aktyvumu ir T-AOC lygiais. ROS lygis OGD/RP pažeistose PC12 ląstelėse padidėjo ir tapo žymiai didesnis nei kontrolinėje grupėje (p < 0,01).="" tuo="" tarpu="" ros="" lygiai="">(Cistanchedeserticolapolisacharidai)grupių ({{0}},05, 0,5 ir 5 ug/ml) sumažėjo priklausomai nuo dozės (p < ,01;="" 4a="" pav.).="" be="" to,="" cdp="" taip="" pat="" žymiai="" padidino="" t-aoc="" (p="">< 0,05;="" 4b="" pav.),="" cat="" (p="">< 0,05;="" 4c="" pav.)="" ir="" gsh-px="" (p="">< 0,05;="" 4d="" pav.)="" lygius,="" palyginti="" su="" transporto="" priemone.="" grupė.="" endogeninių="" antioksidantų="" veikla="">(Cistanchedeserticolapolisacharidai)grupės padidėjo.

3.6. CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)paskatino didžėjaus sekreciją-1 ir sustiprino didžėjaus išraišką-1

Buvo aptikti DJ-1 koncentracijos pokyčiai ląstelių supernatante ir atskleidė galimą ryšį tarp DJ-1 ir CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai). Buvo pastebėtas DJ-1 išsiskyrimas iš OGD/RP pažeistų PC12 ląstelių (5 pav.). DJ-1 buvo gerokai padidintas 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)-gydytoje grupėje (38,66 ± 8,44 pg/ml) ir žymiai padidėjo nei nešiklio grupėje (18,33 ± 3,80 pg/ml, p < 0,01) ir kontrolinėje grupėje (9,67 ± 3,96 pg/ml, p < 0,01). .

Ištirti CDP poveikį(Cistanchedeserticolapolisacharidai)DJ-1 tarpląstelinėje ekspresijoje išmatavome DJ-1 baltymų lygį Western blot metodu. DJ-1 baltymų ekspresijos lygis žymiai padidėjo praėjus 24 valandoms po reperfuzijos. Priešingai, 5 ug/ml CDP po apdorojimo žymiai padidino DJ-1 per didelę ekspresiją, palyginti su nešiklio grupe (p < 0,01,="" 6="">

3.7. CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)pagerintas DJ{0}} perkėlimas į mitochondrijas

PC12 ląstelės buvo nudažytos anti-PARK7/DJ-1 ir anti-ATP sintazės grandinės antikūnais (7 ir 8 pav.). Anti-ATP sintazės - grandinės antikūnų jungtys su mitochondrijų kompleksu I, o rišantis antigenas buvo lokalizuoti mitochondrijų vidinėje membranoje. Rezultatai atskleidė, kad po OGD/RP pažeidimo DJ{10}} persikėlė į mitochondrijų vidinę membraną (8 pav.). Tuo tarpu DJ-1 ir mitochondrijų dvigubo dažymo rezultatai atskleidė, kad CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)palengvinta DJ- 1 mitochondrijų translokacija ir bendroji lokalizacija (8 pav.). Šie rezultatai parodė tiesioginę sąveiką tarp DJ-1 irneuroprotekcinisCDP poveikis(Cistanchedeserticolapolisacharidai)(9 pav.).

4. Diskusija

Šiame tyrime iš pradžių pranešėme, kad CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)efektyviai sumažina OGD/RP sukeltą PC12 ląstelių pažeidimą padidindamas DJ-1 baltymo reguliavimą. CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)pagerino ląstelių gyvybingumą, sumažino ląstelių membranų pažeidimus, išlaikė intracelulinį Ca2 ir homeostazę, užkirto kelią MMP praradimui, sumažino ląstelių apoptozę, slopino oksidacinį stresą, paskatino DJ-1 ekspresiją ir sustiprino DJ-1 perkėlimą į mitochondrijas. DJ-1 neseniai buvo įtrauktas į reguliavimąneuroprotekcinispoveikis ir mitochondrijų vientisumas. Šie rezultatai suteikė įtikinamų įrodymų, kadneuroprotekcinisCDP poveikis(Cistanchedeserticolapolisacharidai)prieš išemiją. Be to, CDP ir DJ{0}} sąveika atlieka aneuroprotekcinisvaidmenį OGD / RP sukeltame PC12 ląstelių pažeidime. Aukščiau pateikti rezultatai gali pagerinti mūsų supratimą apie teigiamą CDP poveikį ir gali suteikti naudingos informacijos insulto gydymui ateityje.

Išeminis insultas buvo priskiriamas daugeliui biocheminių ir molekulinių mechanizmų, įskaitant eksitotoksiškumą, kalcio perteklių ir oksidacinį stresą [31]. OGD/RP plačiai naudojamas kaip in vitro išemijos-reperfuzijos modelis ir naudojamas neurologiniams bei biocheminiams pokyčiams tirti. PC12 ląstelių linija yra jautri OGD/RP pažeidimams [2]. Jis pasižymi daugybe simpatinių neuronų savybių ir charakteristikų [32], todėl plačiai naudojamos neuronų ląstelių linijos tyrimams, susijusiems su neurologinio pažeidimo dėl insulto mechanizmais [33,34]. Daugybė tyrimų parodė, kad oksidacinis stresas vaidina gyvybiškai svarbų vaidmenį insulto ir smegenų išemijos pažeidimams [35–37]. Su Parkinsono liga susijęs baltymas DJ-1 gali slopinti išeminę neurodegeneraciją ir elgesio sutrikimus, sumažindamas ROS sukeltą neuronų pažeidimą [7]. Todėl, norėdami ištirti, naudojome OGD / RP sužalojimo PC12 ląstelių modelįneuroprotekcinisCDP poveikis(Cistanchedeserticolapolisacharidai).

OGD/RP sukelto PC12 ląstelių pažeidimo laipsnis buvo įvertintas MTT, NRU ir LDH išsiskyrimo tyrimais. CDP administravimas(Cistanchedeserticolapolisacharidai)({0}},05, 0,5 ir 5 ug/ml) pagerino ląstelių išgyvenimą ir sumažino LDH išsiskyrimą. Teigiamas CDP gydymo poveikis taip pat apėmė intracelulinio kalcio pertekliaus sumažėjimą ir MMP išsaugojimą. Viduląstelinio Ca2 plius koncentracijos sutrikimai, ypač mitochondrijų kalcio perteklius, buvo susiję su neuronų apoptoze ir mirtimi, kurią sukelia išeminis insultas [38]. MMP gali atspindėti elektronų transportavimo grandinės efektyvumą ir buvo nurodytas kaip šios sistemos patologinio sutrikimo indeksas [39]. Tiek intracelulinio Ca2 plius koncentracijos padidėjimas, tiek MMP praradimas gali destabilizuoti neuronų struktūrą ir galiausiai sukelti ląstelių pažeidimą arba ląstelių mirtį [21,40]. Šio tyrimo rezultatai parodė, kad CDP reikšmingai slopino tarpląstelinį Ca2 ir perkrovą ir padidino MMP lygį OGD / RP pažeidimo PC12 ląstelėse. Apoptozė vaidina gyvybiškai svarbų vaidmenį sudėtingoje smegenų išemijos-reperfuzijos pažeidimo patofiziologijoje. Vis daugiau duomenų rodo, kad apoptozė buvo susijusi su mitochondrijų disfunkcija; MMP išsisklaidymas yra ankstyvas įvykis, sukeliantis ląstelių apoptozę [8, 39]. Apoptozė yra nuo energijos priklausomos užprogramuotos ląstelių mirties procesas, siekiant pašalinti perteklines ląsteles. Daugelis neuronų, sergančių išeminiu insultu, patirs apoptozę [41]. Šiame tyrime atlikome Hoechst33342 ir aneksino V-FITC/PI dažymą, kad ištirtume CDP poveikį apoptozei [23, 28]. Rezultatai parodė, kad CDP palaiko branduolio vientisumą ir sumažina ląstelių apoptozės greitį. Visi šie rezultatai parodė, kad CDP anti-apoptotinis aktyvumas prisidėjo prie teigiamo poveikio neuronų pažeidimams PC12 ląstelėse.

Ląstelės patiria išemijos pažeidimą, kurį sukelia per didelis ROS kaupimasis, dėl kurio gali atsirasti lipidų peroksidacija, ląstelių membranų pažeidimas, kalcio perteklius ir mitochondrijų disfunkcija, galiausiai sukelianti ląstelių apoptozę ir mirtį [42]. Endogeninių antioksidantų, tokių kaip SOD, CAT ir GSH-Px, vartojimas taip pat parodė įvykį. 9 pav. Galimi CDP apsauginio poveikio mechanizmai.(Cistanchedeserticolapolisacharidai)nuo OGD/RP sukelto PC12 ląstelių pažeidimo. CDP gydymas slopina oksidacinį stresą, stabilizuoja Ca2 plius koncentraciją ir MMP, sustiprina DJ-1 ekspresiją ir lokalizaciją mitochondrijose. Y. Liu ir kt. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 678 dėl oksidacinio streso išemijos ir reperfuzijos metu. Šiame tyrime OGD/RP grupėje reikšmingai padidėjo ROS ir sumažėjo CAT, GSH-Px ir T-AOC, palyginti su 5 ug/ml CDP gydyta grupe. Tačiau CDP grupėse pastebėjome reikšmingą ROS susidarymo ir endogeninių antioksidantų (CAT, GSH-Px ir T-AOC) vartojimo sumažėjimą. Teigiamas poveikis 5 ug/ml CDP grupėje buvo artimas Nimo grupės poveikiui. Rezultatai rodo, kad CDP slopina ROS susidarymą ir atkuria fermentinę antioksidacinę apsaugą.

DJ-1 yra pagrindinis redokso reaktyvusneuroprotekcinisbaltymas, susijęs su oksidacinio streso reguliavimu insulto metu. Teigiamas DJ-1 per didelės raiškos poveikis apima ląstelių išlikimą po išemijos ir reperfuzijos bei mitochondrijų funkcijos ir morfologijos išsaugojimą, pvz., mitochondrijų pralaidumo pereinamųjų porų atsivėrimą [39, 43]. Ankstesni tyrimai parodė, kad apsauginis DJ-1 poveikis ląstelėse, veikiamose OGD/RP, yra susijęs su jo antioksidacinėmis savybėmis ir mitochondrijų perkėlimu [43–45]. DJ-1 atlieka veiksmingą endogeninę neuroprotekciją, sumažindamas mitochondrijų defektus per translokaciją [46]. Keletas tyrimų parodė, kad DJ{10}} translokacija gali turėti įtakos mitochondrijų judėjimui, sustiprinti ląstelių sąveiką ir skatinti kitus ląstelių išlikimo procesus.

DJ-1 veikia kelis procesus, tokius kaip ląstelių migracija ir adhezija, chemotaksė, proliferacija ir apoptozė tiek in vitro, tiek in vivo modeliuose [6,9,47,48]. Naudodami OGD / RP sužeistų PC12 ląstelių insulto modelį, ištyrėme galimą ryšį tarp CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)ir DJ-1. DJ- 1 per didelė ekspresija buvo nustatyta ELISA ir Western blot metodu. Kartu su šia funkcija, pagrindinis eksperimentų atradimas parodė, kad reikšminga DJ-1 per didelė išraiška įvyko, kai CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)(5 ug/ml) buvo suleidžiama prieš reperfuziją. Tai pasiūlė galimąneuroprotekcinispoveikis CDP ir DJ santykiams-1. Be to, pastebėjome, kad DJ-1, esantis mitochondrijose, esant OGD/RP sąlygoms ir gausiai DJ-1 ekspresijai, sumažino ląstelių jautrumą ROS ir slopino oksidacinį stresą [45]. Rezultatai reiškė, kad CDP reguliuoja ir sustiprina DJ-1, kuris veikia kaip molekulinis ryšys tarp mitochondrijų disfunkcijos ir oksidacinio streso ir skatina antrinės ląstelių mirties progresavimą, būdingą insultui [5,47,49–51]. Kartu su DJ-1 stabilizavimu mitochondrijose, CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)Gydymas padidino ląstelių išgyvenamumą, stabilizavo Ca2 ir homeostazę, pagerino MMP sklaidą ir užkerta kelią su mitochondrijomis susijusiai apoptozei [43]. Apskritai, mūsų rezultatai parodė, kad CDP yra naujasneuroprotekcinisišeminio insulto gydymo mechanizmas.

5. Išvada

Mūsų rezultatai parodė, kad CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)apsaugo PC12 ląsteles nuo OGD/RP sukeltų pažeidimų dėl savo antioksidacinio poveikio, kuris iš dalies priskiriamas DJ-1 tarpininkaujančiam keliui. Šie poveikiai apima ląstelių membranų pažeidimo greičio sumažėjimą, [Ca2 plius] I homeostazės išsaugojimą, MMP išsklaidymo pagerinimą, ląstelių apoptozės slopinimą, intracelulinės ROS susilpnėjimą ir DJ-1 lygio moduliavimą. Rezultatai taip pat parodė, kad CDP ir DJ -1 sąveika sustiprina neuroprotekciją ir palaiko mitochondrijų vientisumą. Todėl pažeidžiamus neuronus gali apsaugoti CDP(Cistanchedeserticolapolisacharidai)didinant DJ-1 raišką išeminio insulto metu.

Padėkos

Šį tyrimą rėmė Kinijos nacionalinis gamtos mokslų fondas (subsidija 81360649), Nacionalinė mokslo ir technologijų pagrindinė programa (subsidija 2015BAK45B01) ir Ningxia Hui autonominio regiono mokslo ir technologijų paramos programa (dotacija 2016BZ07).

Cistanche deserticola polisacharidaiturėk Neuroprotekcinis poveikis

Nuorodos

[1] HD Tsai, JS Wu, MH Kao, JJ Chen, GY Sun, WY Ong, TN Lin, Clinacanthus nutans apsaugo žievės neuronus nuo hipoksijos sukelto toksiškumo sumažindami HDAC1/6, Neuromol reguliavimą. Med. 18 (2016) 274–282.

[2] J. Zhao, R. Liu, Insultas 1-2-0: greito reagavimo į insultą programa Kinijoje, Lancet Neurol. 16 (2017) 27–28.

[3] PM George, GK Steinberg, Nauji insulto terapijos metodai: insulto patofiziologijos atskleidimas ir jos poveikis klinikiniam gydymui, Neuron 87 (2015) 297–309.

[4] H. Yao, T. Ago, T. Kitazono, T. Nabika, su NADPH oksidaze susijusi patofiziologija eksperimentiniuose insulto modeliuose, Int. J. Mol. Sci. (2017) 18.

[5] J. Cao, M. Ying, N. Xie, G. Lin, R. Dong, J. Zhang, H. Yan, X. Yang, Q. He, B. Yang, DJ oksidacijos būsenos{{ 1}} diktuoja ląstelės likimą reaguojant į oksidacinį stresą, kurį sukelia 4-hpr: autofagija ar apoptozė? Antioksidacinis redokso ženklas. 21 (2014) 1443–1459.

[6] Y. Kaneko, H. Shojo, J. Burns, M. Staples, N. Tajiri, CV Borlongan, DJ-1 pagerina išeminę ląstelių mirtį in vitro, galbūt per mitochondrijų kelią, Neurobiol, Dis. 62 (2014) 56–61.

[7] D. Yanagisawa, Y. Kitamura, M. Indian, K. Takata, T. Taniguchi, S. Morikawa, M. Morita, T. Inubushi, I. Tooyama, T. Taira ir kt., DJ{{ 1}} apsaugo nuo neurodegeneracijos, kurią sukelia židininė smegenų išemija ir reperfuzija žiurkėms, J. Cereb. Kraujotaka. Met. 28 (2008) 563–578.

[8] Y. Kaneko, N. Tajiri, H. Shojo, CV Borlongan. Deguonies stokojančios žiurkės pirminės nervinės ląstelės demonstruoja DJ-1 perkėlimą į sveikas mitochondrijas: stiprus insulto gydymo tikslas, CNS Neurosci. Ten. 20 (2014) 275–281.

[9] N. Tajiri, CV Borlongan, Y. Kaneko, Gydymas ciklosporinu A panaikina išemijos sukeltą neuronų ląstelių mirtį išsaugodamas mitochondrijų vientisumą padidindamas su Parkinsono liga susijusio baltymo DJ-1, CNS Neurosci reguliavimą. Ten. 22 (2016) 602–610.

[10] RX Yang, J. Lei, BD Wang, DY Feng, L. Huang, YQ Li, T. Li, G. Zhu, C. Li, FF Lu ir kt., Išankstinis apdorojimas natrio fenilbutiratu palengvina smegenų išemiją/ reperfuzijos pažeidimas padidinus DJ-1 baltymo reguliavimą, priekis. Neurol. 8 (2017) 256.

[11] C. Gu, X. Yang, L. Huang, Cistanches Herba. Neurofarmakologijos apžvalga, Front. Pharmacol. 7 (2016) 289.

[12] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Viena geriausių tradicinės kinų medicinos farmacijos dovanų, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41.

[13] Q. Liu, J. Li, J. Wang, J. Li, JS Janicki, D. Fan, Kinų vaistažolių medicinos poveikis ir mechanizmai gerinant miokardo išemijos-reperfuzijos pažeidimą, Evid.- Based Compl. Alt. (2013) (2013) 925625.

[14] HS Wong, KM Ko, Herba Cistanches stimuliuoja ląstelių glutationo redokso ciklą reaktyviosiomis deguonies rūšimis, susidarančiomis iš mitochondrijų kvėpavimo H9c2 kardiomiocituose, Pharm. Biol. 51 (2013) 64–73.

[15] T. Wang, X. Zhang, W. Xie,Cistanchedeserticola YC Ma, „Dykumos ženšenis“: apžvalga, Am. J. Chinas. Med. 40 (2012) 1123–1141.

[16] L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Sun, GF Li, X. Liu,Cistanchedeserticolanuoviras sumažina hidroksikarbamido sukeltą toksinį poveikį sėklidėms pelių patinams, Azijos J. Androl. 15 (2013) 838–840.

[17] E. Herzfeld, C. Strauss, S. Simmermacher, K. Bork, R. Horstkorte, F. Dehghani, C. Scheller, Tyrimasneuroprotekcinisnimodipino poveikis Neuro2a ląstelėms naudojant į chirurginį streso modelį, Int. J. Mol. Sci. 15 (2014) 18453–18465.

[18] G. Vahabzadeh, N. Rahbar-Roshandel, SA Ebrahimi, M. Mahmoudian,Neuroprotekcinisnoskapino poveikis smegenų deguonies ir gliukozės trūkumo pažeidimui, Pharmacol. Rep. 67 (2015) 281–288.

[19] CP Wang, LZ Zhang, GC Li, YW Shi, JL Li, XC Zhang, ZW Wang, F. Ding, XM Liang, Mulberroside A apsaugo nuo išeminio pažeidimo pirminėje žiurkių žievės neuronų kultūroje po deguonies ir gliukozės trūkumo. reperfuzijos būdu, J. Neurosci. Res. 92 (2014) 944–954.

[20] X. Qi, R. Zhou, Y. Liu, J. Wang, WN Zhang, HR Tan, Y. Niu, T. Sun, YX Li, JQ Yu, trans-cinnamaldehidas apsaugojo PC12 ląsteles nuo deguonies ir gliukozės trūkumo /reperfuzijos (OGD/R) sukeltas sužalojimas dėl antiapoptozės ir antioksidacinio streso, Mol. Ląstelių Biochem. 421 (2016) 67–74.

[21] R. Chang, R. Zhou, X. Qi, J. Wang, F. Wu, W. Yang, W. Zhang, T. Sun, Y. Li, J. Yu, Apsauginis aloino poveikis deguoniui ir gliukozės trūkumo sukeltas pažeidimas PC12 ląstelėse, Brain Res. Bull. 121 (2016) 75–83.

[22] M. Agrawal, V. Kumar, AK Singh, MP Kashyap, VK Khanna, MA Siddiqui, AB Pant, Trans-resveratrolis apsaugo išemines PC12 ląsteles slopindamas su hipoksija susijusius transkripcijos faktorius ir padidindamas antioksidantų gynybos fermentų, ACS, lygį. Chem. Neurosci. 4 (2013) 285–294.

[23] KW Zeng, LX Liao, MB Zhao, FJ Song, Q. Yu, Y. Jiang, PF Tu, Protosappanin B apsaugo PC12 ląsteles nuo deguonies ir gliukozės trūkumo sukeltos neuronų mirties, palaikydamas mitochondrijų homeostazę indukuodamas nuo ubikvitino priklausomą p53 baltymo degradacija, Eur. J. Pharmacol. 751 (2015) 13–23.

[24] NT Ma, R. Zhou, RY Chang, YJ Hao, L. Ma, SJ Jin, J. Du, J. Zheng, CJ Zhao, Y. Niu ir kt., Apsauginis aloperino poveikis naujagimių žiurkėms kultivuoti hipokampo neuronai, pažeisti dėl deguonies ir gliukozės trūkumo ir reperfuzijos, J. Nat. Med. 69 (2015) 575–583.

[25] Y. Wang, W. Ma, A. Jia, Q. Guo, Parekoksibas apsaugo pelių žievės neuronus nuo OGD/R sukelto neurotoksiškumo, reguliuodamas Bcl-2, Neurochem. Res. 40 (2015) 1294–1302.

[26] MP Ponnusamy, P. Seshacharyulu, A. Vaz, P. Dey, SK Batra, MUC4 stabilizuoja HER2 ekspresiją ir palaiko vėžio kamieninių ląstelių populiaciją kiaušidžių vėžio ląstelėse, J. Ovarian Res. 4 (2011) 7.

[27] R. Wang, L. Peng, J. Zhao, L. Zhang, C. Guo, W. Zheng, H. Chen, A. Gardenamidas, apsaugo RGC-5 ląsteles nuo H(2)O( 2) sukeltas oksidacinio streso įžeidimas aktyvuojant PI3K/Akt/eNOS signalizacijos kelią, Int. J. Mol. Sci. 16 (2015) 22350–22367.

[28] LP Sun, X. Xu, HH Hwang, X. Wang, KY Su, YL Chen, propolio dichlormetano ekstraktai apsaugo ląstelę nuo deguonies ir gliukozės trūkumo sukelto oksidacinio streso Y. Liu ir kt. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 679mažinant apoptozę, Food Nutr. Res. 60 (2016) 30081.

[29] L. Wang, Y. Zhang, T. Asakawa, W. Li, S. Han, Q. Li, B. Xiao, H. Namba, C. Lu, Q. Dong,Neuroprotekcinisneuroserpino poveikis deguonies ir gliukozės trūkumo ir reoksigenacijos gydytiems žiurkių astrocitams in vitro, PLoS One. 10 (2015 m.) e0123932.

[30] Z. Zhiwen, W. Haitao, S. Fu, Z. Lihua, JL Peter, Q. Remi, Z. Wenhua, ličio jonai susilpnina serumo trūkumo sukeltą apoptozę PC12 ląstelėse, reguliuodami Akt/FoxO1 signalizaciją. būdai, Psychopharmacology (Berlis), 12 (2015) 625–633.

[31] EJB Dariush Mozaffffarian, S. Alan ir kt., 2016 m. širdies ligų ir insulto statistikos santrauka. Amerikos širdies asociacijos ataskaita, Circulation 133 (2016) 447–454.

[32] JE Jumblatt, TA, Muskarininių ligandų surišimo vietų reguliavimas nervų augimo faktoriumi PC12 feochromocitomos ląstelėse, Nature 297 (1982) 152–154.

[33] S. Afrazi, S. Esmaeili-Mahani, V. Sheibani, M. Abbasnejad, Neurosteroidas alopregnanolonas susilpnina didelės gliukozės sukeltą apoptozę ir apsaugo nuo eksperimentinio diabetinio neuropatinio skausmo: in vitro ir in vivo tyrimai, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 139 (2014) 98–103.

[34] X. Liu, X. Zhu, M. Chen, Q. Ge, Y. Shen, S. Pan, Resveratrolis apsaugo PC12 ląsteles nuo OGD/R sukeltos apoptozės per mitochondrijų sukeltą signalizacijos kelią, Acta Biochem Biophys Sin . 48 (2016) 342–353.

[35] PW Kleikers, K. Wingler, JJ Hermans, I. Diebold, S. Altenhofer, KA Radermacher, B. Janssenas, A. Gorlach, HH Schmidt, NADPH oksidazės kaip oksidacinio streso šaltinis ir molekulinis taikinys išemijos / reperfuzijos atveju sužalojimas, J. Mol. Med. (Berlis) 90 (2012) 1391–1406.

[36] FC Liu, HI Tsai, HP Yu, Raudonojo vyno ekstrakto, resveratrolio, organus apsaugantis poveikis, oksidacinio streso sukeltas reperfuzijos pažeidimas, Oksidas. Med. Ląstelė Longev. (2015) 568634.

[37] LK Seidlmayer, V. V. Juettner, S. Kettlewell, EV Pavlov, LA Blatter, EN Dedkova, Skirtingi mPTP aktyvavimo mechanizmai išemijos reperfuzijoje: Ca2 plius plius indėlis, ROS, pH ir neorganinis polifosfatas, Cardiovasc. Res. 106 (2015) 237–248.

[38] F. Su, AC Guo, WW Li, YL Zhao, ZY Qu, YJ Wang, Q. Wang, YL Zhu, mažos dozės etanolio kondicionavimas apsaugo nuo deguonies ir gliukozės trūkumo / pakartotinio deguonies sukelto neuronų pažeidimo, suaktyvindamas didelį laidumą , Ca2 plus plus -aktyvintas K plus plius kanalai In vitro, Neurosci. Bull. 33 (2017) 28–40.

[39] Y. Li, M. Wang, S. Wang, Mitochondrijų dalijimosi slopinimo poveikis energijos apykaitai žiurkių hipokampo neuronuose išemijos / reperfuzijos pažeidimo metu, Neurol. Res. (2016) 1–8.

[40] C. Rui, L. Yuxiang, H. Yinju, Z. Qingluan, W. Yang, Z. Qipeng, W. Hao, M. Lin, L. Juan, Z. Chengjun ir kt., Apsauginis poveikis Lycium barbarum polisacharidas ant naujagimių žiurkių pirminės kultivuotos hipokampo neuronų, sužalotų dėl deguonies ir gliukozės trūkumo ir reperfuzijos, J. Mol. Histol. 43 (2012) 535–542.

[41] BR Broughton, DC Reutens, CG Sobey, Apoptotiniai mechanizmai po smegenų išemijos, Insultas 40 (2009) e331–339.

[42] Jordan M. Willcox, AJS Summerlee, Relaxin apsaugo astrocitus nuo hipoksijos in vitro, PLoS One. 9 (3) (2014) e90864.

[43] X. Zhang, D. Yuan, Q. Sun, L. Xu, E. Lee, AJ Lewis, BS Zuckerbraun, MR Rosengart, nuo kalcio / kalmodulino priklausoma baltymų kinazė reguliuoja PINK1 / Parkin ir DJ{3} } mitofagijos keliai sepsio metu, FASEB J. 31 (2017) 4382–4395.

[44] S. Vasseur, S. Afzal, J. Tardivel-Lacombe, DS Park, JL Iovanna, TW Mak, DJ-1/ PARK7 yra svarbus hipoksijos sukeltų ląstelių atsakų tarpininkas, Proc. Natl. Akad. Sci. USA 106 (2009) 1111–1116.

[45] Z. Xianghong, Y. Du, S. Qian, X. Li, L. Emma, ​​J. Anthony, Brian Lewis, S. Zuckerbraun, Matthew R. Rosengart, nuo kalcio / kalmodulino priklausoma baltymų kinazė reguliuoja PINK1/ Parkin ir DJ-1 mitofagijos keliai sepsio metu, FASEB J. (2017). [

46] MS Choi, T. Nakamura, SJ Cho, X. Han, EA Holland, J. Qu, GA Petsko, JR Yates 3rd, RC Liddington, SA Lipton, Transnitrozilinimas iš DJ-1 į PTEN susilpnina neuronų ląstelių mirtį Parkinsono ligos modeliuose J. Neurosci. 34 (2014) 15123–15131.

[47] RK Dongworth, UA Mukherjee, AR Hall, R. Astin, SB Ong, Z. Yao, A. Dyson, G. Szabadkai, SM Davidson, DM Yellon, DJ Hausenloy, DJ-1 apsaugo nuo ląstelių mirties po ūminio širdies išemijos-reperfuzijos pažeidimo, ląstelių mirtis. 5 (2014 m.) e1082.

[48] ​​A. Di Cello, M. Di Sanzo, FM Perrone, G. Santamaria, E. Rania, E. Angotti, R. Venturella, S. Mancuso, F. Zullo, G. Cuda, F. Costanzo, DJ{ {1}} yra patikimas serumo biomarkeris, skirtas didelės rizikos endometriumo vėžiui atskirti, Tumor Biol. 39 (2017 m.) 1010428317705746.

[49] H. Aleyasin, MW Rousseaux, PC Marcogliese, SJ Hewitt, I. Irrcher, AP Joselin, M. Parsanejad, RH Kim, P. Rizzo, SM Callaghan ir kt., DJ-1 saugo nigrostrialą ašies nuo neurotoksino MPTP moduliuojant AKT kelią, Proc. Natl. Akad. Sci. USA 107 (2010) 3186–3191.

[50] RM Canet-Aviles, MA Wilson, DW Miller, R. Ahmad, C. McLendon, S. Bandyopadhyay, MJ Baptista, D. Ringe, GA Petsko, MR Cookson, Parkinsono ligos baltymo DJ-1 yraneuroprotekcinisdėl cisteino-sulfino rūgšties sukeltos mitochondrijų lokalizacijos, Proc. Natl. Akad. Sci. USA 101 (2004) 9103–9108.

[51] M. Liu, B. Zhou, ZY Xia, B. Zhao, SQ Lei, QJ Yang, R. Xue, Y. Leng, JJ Xu, Z. Xia, Hiperglikemijos sukeltas DJ slopinimas-1 ekspresija pakenkė išeminės pokondicioninės kardioprotekcijos veiksmingumui žiurkėms, Oxid. Med. Ląstelė Longev. (2013) (2013) 564902.