Mėlynių antocianinų hipoglikeminis ir hipopolipideminis poveikis suaktyvinant AMPK: in vitro ir in vivo tyrimai, 1 dalis

Prašau susisiektioscar.xiao@wecistanche.comDaugiau informacijos

Santrauka:Mėlynėse gausu biologiškai aktyvių antocianinų, kuriuose yra daug malvidino, kuris yra susijęs su antioksidacine nauda, ​​padedančia sumažinti diabeto riziką. Šio tyrimo tikslas buvo ištirti mėlynių antocianino ekstrakto (BAE) hipoglikeminį ir hipolipideminį poveikį.malvidinas(Mv), malvidino-3-gliukozido (Mv-3-GLC) ir malvidino-3-galaktozido (Mv-3-gal) tiek žmogaus hepatokarcinomos ląstelių linijoje HepG2, tiek didelės riebalų dieta, derinanti streptozotocino sukeltas diabetines peles. Gydymas dideliu gliukozės kiekiu žymiai padidino kepenų oksidacinį stresą iki 6- karto ir sumažino HepG2 ląstelių gyvybingumą. Išankstinis apdorojimas BAE, Mv, Mv{9}}glc ir Mlv{10}}gal žymiai sumažino šią žalą, nes reaktyviosios deguonies rūšys (ROS) sumažėjo 87, 80, 76 ir 91 proc. ir padidino ląstelių gyvybingumą. atitinkamai 88,79,73 ir 98 proc. Šie išankstiniai apdorojimai taip pat veiksmingai slopino hiperglikemiją ir hiperlipidemiją, atitinkamai sumažindami fermentų, dalyvaujančių gliukoneogenezėje ir lipogenezėje, ekspresijos lygius ir padidindami glikogenolizėje bei lipolizėje dalyvaujančius fermentus per adenozino monofosfato aktyvuotos baltymų kinazės (AMPK) signalizacijos kelią HepG2 ląstelėse. Nustatyti AMPK vaidmenį BAE sukeltoje gliukozės ir lipidų apykaitos reakcijoje in vivo, 100 mg/kg dozėmis (mėlynių antocianino ekstraktai – maža koncentracija, BAE-L) ir 400 mg/kg (mėlynių antocianino ekstraktai – didelė koncentracija) , BAE-H) buvo skiriami per dieną diabetu sergančioms pelėms 5 savaites. BAE gydymas turėjo reikšmingą poveikį (P<0.05) effect="" on="" body="" weight="" and="" increased="" the="" ampk="" activity,="" achieving="" the="" decrease="" of="" blood="" and="" urine-glucose,="" as="" well="" as="" triglyceride="" and="" total="" cholesterol.="" this="" research="" suggested="" that="">antocianinaiprisidėjo prie mėlynių ekstrakto sukeltohipoglikemijair hipolipideminis poveikis diabetui ir BAE gali būti perspektyvus funkcinis maistas ar vaistas diabetui gydyti.

Norėdami sužinoti daugiau, spustelėkite čia

1. Įvadas

Cukrinis diabetas (DM) yra gerai žinoma liga, kuriai paprastai būdingas nesugebėjimas palaikyti normalaus gliukozės kiekio kraujyje. Šis lėtinis medžiagų apykaitos sutrikimas daro didelę žalą žmonių sveikatai ir užkrauna didelę finansinę naštą pasaulinėms sveikatos priežiūros sistemoms [1]. Ši liga yra suskirstyta į du pagrindinius tipus, atsižvelgiant į gliukozės kiekio kraujyje sutrikimo priežastį. 1 tipo DM sukelia autoimuninis beta ląstelių sunaikinimas, dėl kurio nesugeba gaminti insulino, o 2 tipo diabetui būdingas atsparumas insulinui insulino receptoriai, kurių funkcija yra sumažėjusi ir neleidžia ląstelėms tinkamai reaguoti į didėjantį gliukozės kiekį kraujyje.

Cistanche gali pagerinti imunitetą

Be hiperglikemijos, diabetikams būdingahiperlipidemijaAbi sąlygos gali sukelti organų ir audinių pažeidimus dėl padidėjusio glikoksidacinio streso [2]. Insulino gamyba ir insulino receptorių pažeidimas yra vienas iš veiksnių, sukeliančių hiperglikemiją diabetikams. Kepenyse dėl pernelyg didelės gliukoneogenezės ir glikogenolizės ekspresijos gliukozė vėl išsiskiria į kraują [3], o plonojoje žarnoje dėl per didelės gliukozės transporterio 2 (GLUT2) ekspresijos padidėja gliukozės pernešimas [4]. Hiperlipidemija, kurią sukelia per didelė lipogenezės raiška riebaliniame audinyje [5], taip pat gali sutrikdyti insulino stimuliuojamą gliukozės įsisavinimą ir glikogeno sintezę, dėl kurios atsiranda atsparumas insulinui ir taip prisidedama prie diabeto progresavimo 6]. Ilgalaikės su diabetu susijusios komplikacijos pažeidžia įvairius organus ir apima hipertenziją, aterosklerozę, retinopatiją, nefropatiją, pėdų opas ir periferinę neuropatiją [7].

Šiuo metu diabetas nėra išgydomas, tačiau jo poveikį galima sušvelninti [8]. Žmonėms, kuriems diagnozuotas 1 tipo cukrinis diabetas, įprastas gydymas yra dietos reguliavimas ir tinkamas insulino suvartojimas atsižvelgiant į suvartotus angliavandenius. Dabartiniai 1 tipo cukriniu diabetu sergančių žmonių iššūkiai yra nesugebėjimas arba sunkumai įvertinti bendrą angliavandenių kiekį ir tinkamą insulino dozę; tačiau beveik idealusglikemijoslygiai yra įmanomi atsižvelgiant į technologijų pažangą, įskaitant insulino pompas [9]. Pacientams, sergantiems 2 tipo cukriniu diabetu, gydymas gali būti sudėtingesnis, įskaitant dietos reguliavimo, mankštos, insulino ir kitų vaistų, kurių veikimo mechanizmas yra įvairus, mažinantis gliukozės kiekį kraujyje, derinius[10]. Įprastos mitybos rekomendacijos yra laikytis. mažai angliavandenių turinti dieta [11,12].

Mėlynės yra vienas iš vaisių, kuriuos gali vartoti diabetu sergantys pacientai ir kurie gali sumažinti 2 tipo cukrinio diabeto (T2DM) riziką[13,14]. Mėlynėse gausu įvairių žmonių sveikatai naudingų junginių, įskaitant mineralus, skaidulines organines rūgštis, fenolio rūgštis ir flavonoidus, įskaitant flavonolius ir antocianinus [15,16]. Tačiau tipiški antocianinų profiliai apima delfinidino, malvidino, cianidino, petunidino ir peonidino galaktozidus, gliukozidus ir arabinozidus [17], o malvidinas ir delfinidinai paprastai yra pagrindiniai bendro antocianino kiekio veiksniai [18, 19]. Ankstesniame mūsų tyrime [20] malvidinas buvo gausiausias antocianidinas, randamas triušių mėlynių vaisių ekstrakte kartu su delfinidinu, cianidinu, petunidinu ir peonidinu, o tai sutinka su kitais autoriais, kurie taip pat nustatė, kad malvidinas yra svarbus bendras antocianino kiekis. įvairių rūšių šilauogėse [17,21].

Mėlynių antocianinai gali pagerinti jautrumą insulinui dėl antioksidacinių savybių ir kitų reguliavimo sąveikų, nes jų poveikis negali būti visiškai paaiškintas pirmuoju [13, 22]. Tyrimai taip pat atskleidė mėlynių antocianinų naudą kitoms su diabetu susijusioms problemoms spręsti. In vitro tyrime Huang ir kt. [23] nustatė, kad mėlynių antocianinai turi priešuždegiminį ir antioksidacinį poveikį žmogaus tinklainės ląstelėms esant dideliam gliukozės kiekiui. Ląstelių, paveiktų daug gliukozės, gyvybingumas buvo 64 proc., o veikiant mėlynių antocianino ekstraktui, malvidinui, malvidino gliukozidui arba malvidinu-galaktozidui, jų gyvybingumas buvo 7-9 proc., 83 proc., 91- proc. arba { atitinkamai {11}} proc. Kita vertus, Song ir kt. [24] nustatė, kad mėlynių antocianinai sumažino oksidacinį stresą ir uždegimą diabetu sergančių žiurkių tinklainėje. Diabetu sergančioms žiurkėms 12 savaičių buvo duota po 20, 40 ir 80 mg/kg mėlynių antocianinų. Žiurkių, vartojusių dideles mėlynių antocianinų dozes, buvo mažesnis gliukozės kiekis kraujyje, didesnis antioksidacinis pajėgumas ir mažesnis tinklainės uždegimas bei mažesnės reaktyviosios deguonies rūšys, palyginti su tomis, kurios neturėjo mėlynių antocianinų.

Nors mėlynių antocianinai teikia naudos sveikatai diabetikų kepenims ir kitiems organams, mėlynių antocianino ekstrakto (BAE) hipoglikeminis ir hipolipideminis poveikis žmogaus kepenų ląstelėse yra neaiškus. Šiame tyrime buvo spėliojama, kad BAE, taip pat Mv, Mv{0}}glc ir Mv-3-gal turi hipoglikeminį ir hipolipideminį aktyvumą žmogaus hepatokarcinomos ląstelėse (HepG2) ir pelėse ir kad jie gali palaikyti gliukolipidų homeostazę ir taip palengvinti diabeto vystymąsi.

2. Medžiagos ir metodai

2.1. Chemikalai ir reagentai

Brightwell rabbiteye mėlynės (Vaccinium ashei buvo paimtos iš Fujiabian Orchard Picking (Nankinas, Kinija), o jų antocianinų ekstraktai buvo gauti ir laikomi tamsoje {{0}} laipsnių temperatūroje. Reagentas 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil-2H-tetrazolio bromidas (MTT) ir standartai malvidinas (Mv), malvidin-3-gliukozė (Mv{) {11}}glc) ir malvidin-3-galaktozė (Mv-3-gal) buvo įsigyti iš Sigma Aldrich (Šanchajus, Kinija). HepG2 pirminės ląstelės, bicinchonino rūgšties (BCA) baltymų tyrimo rinkinys ir patobulintas Chemiliuminescencijos (ECL) Western blotting aptikimo reagentai buvo įsigyti iš CW Biotechnology (Pekinas, Kinija). Jaučio vaisiaus serumas (FBS), Dulbecco modifikuota Eagle terpė (DMEM) ir penicilinas-streptomicinas buvo įsigyti iš Gibco (Oklandas, Naujoji Zelandija). BioFroxx streptozotocinas (STZ) buvo įsigytas iš Saiguo Biotech (Guangdžou, Kinija). Dichlordihidrofluoresceino diacetato (DCFH-DA) aptikimo rinkinys pirktas iš Beyo-time Institute of Technology (Shan). ghai, Kinija). Galvijų serumo albuminas (BSA) buvo įsigytas iš Shyuanye (Šanchajus, Kinija). Labai riebus ir daug cukraus turintis pašaras (riebalai 35,5 proc., baltymai 20 proc., angliavandeniai 36,4 proc., celiuliozė 0,1 proc.) ir įprasti pašarai (riebalai 4,5 proc., baltymai 23 proc., angliavandeniai 31,9 proc., 3,7 proc. fruktozė ir 5 proc. celiuliozė) pelėms buvo gauta iš Xietong Bioengineering Co., Ltd (Nanjingas, Kinija). Insulino, trigliceridų (TG), bendrojo cholesterolio (TCHD, glutationo peroksidazės (GSH-Px) ir superoksido dismutazės (SOD) tyrimų rinkiniai buvo nupirkti iš Jiancheng Bioinžinerijos tyrimų instituto (Nandzingas, Kinija). AndyGene human Forkhead Box O1(FOXO1) , gliukozės -6-fosfatazė (G6Pazė), glikogeno sintazės fosforilinimas (p-GS), glikogeno sintazės kinazės -3 beta fosforilinimas (p-GSK3 ), gliukozės transporteris 2 (GLUT2), acetilkofermento A karboksilas (ACC), hormonams jautrios trigliceridų lipazės (HSL), 3-hidroksi-3-metilglutarilkofermento reduktazės (HMGCR) ir pelės nevalgius su fermentu susieto imunosorbento tyrimo (ELISA) rinkiniai buvo įsigyti iš Bluegene Biotech. (Šanchajus, Kinija) Šiame tyrime naudotos grynos analitinės cheminės medžiagos ir reagentai.

2.2. Antikūnai

Pirminiai antikūnai prieš GS, p-GS (Ser641), sterolius reguliuojančius elementus surišantį baltymą -1c (SREBP-1c) ir fosfoenolpiruvato karboksikinazę (PEPCK) buvo įsigyti iš Abcam (Kembridžas, Jungtinė Karalystė). . Pirminiai antikūnai prieš adenozino monofosfatu aktyvuotą proteinkinazę alfa (AMPKa), p-AMPK a (Thr172), peroksisomų proliferatoriaus aktyvuotą receptorių-y-koaktyvatorių-1 (PGC-1), ACC, p- ACC (Ser79) ir krienų peroksidazės (HRP) konjuguoti antriniai antikūnai buvo įsigyti iš Cell Signaling Technology (Beverly, MA, JAV). Antikūnas prieš gliceraldehido 3-fosfato dehidrogenazę (GAPDH) buvo nupirktas iš Nanjing Beidi Biomed Technology (Nandzingas, Kinija), o antikūnas prieš aktiną buvo nupirktas iš Sigma Aldrich (St. Louis, MO, JAV). Pirminiai antikūnai buvo naudojami 1:1000 praskiedimų, o 1:4000 skiedimai buvo naudojami antriniams antikūnams.

2.3. Mėlynių antocianino ekstrakto (BAE) paruošimas

Mėlynių antocianinų ekstrahavimas buvo atliktas naudojant ankstesnį Huang ir kt. [25]. Šaldytos triušių mėlynės buvo laikomos kambario temperatūroje, kol atitirps. Tada jie buvo plakami 10 000 aps./min. 30 s, naudojant pagrindinį ULTRA-TURRAX homogenizatorių T18 (IKA Works Guangzhou, Kinija). Tada 250 g mėlynių buvo mirkoma 1000 ml metanolio tirpale, kuriame yra 1 procentas HCl, 24 valandas. Tada ekstraktas buvo surinktas po centrifugavimo 5000 x g 15 min. Tirpiklį išgarinus 40 laipsnių temperatūroje vakuume, liekana tris kartus ekstrahuota 1:1 (t/v) etilacetatu. Vandens fazė, turinti antocianinų, buvo surenkama ir sukoncentruota naudojant vakuuminį išgarinimą, kad būtų gautas neapdorotas antocianino ekstraktas. Ekstraktas buvo toliau gryninamas su AB{14}} makroporine derva (Sigma Aldrich, Šanchajus, Kinija). Kad būtų pašalinta fruktozė ir baltymai, ekstraktas buvo 24 val. absorbuojamas chromatografijoje su 1000 g AB-8 makroporingos dervos, o po to eliuuojamas dvigubai distiliuotu vandeniu. Antocianino frakcija buvo išplauta 80 procentų etanoliu, kuriame yra 1 procentas HCl tirpalo, sukoncentruotas vakuume, o po to išdžiovintas naudojant Eyela FDU{20}} šaldymo džiovintuvą (Tokyo Rikakikai, Japonija), kad būtų gautas mėlynių antocianino ekstraktas (BAE). milteliai.

2.4. Ląstelių kultūra ir gydymas

HepG2 ląstelių linijos, gautos iš specifinės žmogaus kepenų ląstelių karcinomos, turi didelę kepenims specifinių baltymų dalį. Dėl šios priežasties jie dažniausiai naudojami kaip laboratoriniai žmogaus kepenų ląstelių tyrimų modeliai [26]. HepG2 ląstelės buvo auginamos DMEM, turinčioje normalios D-gliukozės (5,5 mM), papildytos 10% FBS ir 1% penicilino-streptomicino, ir laikomos 37 °C temperatūroje ir 5% CO2 atmosferos inkubatoriuje (Thermo Scientific, Waltham, MA, JAV). Pasiekus 70-80 procentų santaką, HepG2 ląstelės buvo subkultūrintos. Likus keturioms valandoms iki eksperimento, HepG2 ląstelės buvo raminamos sumažintoje serumo terpėje. Po 24 valandų išankstinio apdorojimo 5 ug/mLof Mv, Mv-3-glc, Mv-3-gal arba BAE, ląstelės buvo veikiamos normalios (5,5 mM) arba didelės (30 mM) gliukozės koncentracijos. imituoja normalias ir diabetines sąlygas. Ląstelės buvo paruoštos Western Blot analizei, o supernatantai buvo surinkti ELISA analizei.

2.5. Gyvūnai ir eksperimentinis dizainas

C57BL/6J sveiki pelių patinai (20 ± 2 g) iš GemPharmatech (Nanjingas, Jiangsu, Kinija) buvo laikomi standartinėmis laboratorinėmis sąlygomis, įskaitant pastovią 25 laipsnių temperatūrą ir 12-h dienos ir nakties kaitaliojimą. Jiangsu žemės ūkio mokslų akademijos Mokslinių gyvūnų priežiūros ir naudojimo pakomitetis anksčiau buvo patvirtinęs visas eksperimentines su gyvūnais procedūras. Remiantis Islamo ir Lootso metodu, T2DM sukelti gyvūnų modeliuose buvo naudojama riebi dieta ir streptozotocinas (STZ). Visos pelės buvo šeriamos riebia ir daug cukraus turinčia dieta, išskyrus kontrolinę grupę, kuri vartojo įprastą mitybą. Po 4 savaičių pelės buvo nevalgytos 12 valandų ir į pilvo ertmę įšvirkščiama 100 mg/kg STZ, ištirpinto natrio citrato buferiniame tirpale (pH 4.{15}}.5). Praėjus savaitei po STZ indukcijos, buvo paimti kraujo mėginiai iš per naktį nevalgiusių pelių uodegos venų. Pelės, kurioms pasireiškė diabeto simptomai, įskaitant poliuriją, polidipsiją ir hiperglikemiją (gliukozės kiekis kraujyje nevalgius > 11,1 mmol/L), buvo pripažintos T2DM ir panaudotos būsimiems tyrimams. Norint patikrinti modelio T2DM stabilumą, visos pelės vieną savaitę buvo šeriamos įprasta dieta. Įprastos pelės buvo naudojamos kaip kontrolinė grupė. Diabetu sergančios pelės buvo atsitiktinai suskirstytos į tris grupes: modelio, mažos dozės BAE (100 mg / kg) ir didelės dozės BAE (400 mg / kg). 6 dienas iš eilės kontrolinei grupei, pavyzdinei grupei, mažos dozės BAE ir didelės dozės BAE buvo skiriamas į skrandį. atitinkamai. Septintą dieną buvo matuojamas kūno svoris ir gliukozės kiekis kraujyje nevalgius. Tas pats intragastrinis vartojimas tęsėsi 5 savaites. Tada pelės buvo nevalgiamos per naktį, o kraujo mėginiai buvo paimti serumui paruošti iš apatinės tuščiosios venos ir laikomi -20 laipsnių temperatūroje. Po kraujo mėginių paėmimo visos pelės buvo anestezuotos ir paaukotos. Pelių kepenų, blužnies, inkstų ir užkrūčio liaukos audiniai buvo pašalinti, pasverti ir laikomi -80 laipsnių temperatūroje tolesniems eksperimentams.

2.6. Ląstelių gyvybingumo nustatymas

Ląstelių gyvybingumas buvo nustatytas MTT metodu. 5 ug/mL Mv, Mv{0}}glc, Mv-3-gal arba BAE buvo naudojami pirminiam ląstelių apdorojimui 24 valandas. Tada ląstelės buvo apdorotos 5 mMor 30 mM gliukoze 24 valandas ir į ląsteles buvo pridėta 10 μL 0,5 procento (5 mg/mL) MTT, kurios vėl buvo auginamos. Po 4 valandų MTT tirpalas buvo pašalintas ir buvo pridėta 100 μL dimetilsulfoksido (DMSO), prieš tai mišinys lėtai kratomas 10 minučių, kad ištirptų ląstelių kristalas. Absorbcija ties 490 nm buvo išmatuota StatFax-2100 mikroplokštelių skaitytuvu (Awareness Tech-nology Inc., Plam, FL, JAV), kad būtų gautos optinio tankio (OD) reikšmės. Ląstelės, kultivuotos su normaliu gliukozės kiekiu (5,5 mmol/l), buvo naudojamos kaip kontrolinė grupė, o šuliniai be ląstelių buvo naudojami kaip tuščiasis mėginys. Ląstelių gyvybingumui nustatyti buvo naudojama ši formulė: Ląstelių gyvybingumas (procentai )=(mėginio grupės OD vertė-tuščios grupės OD vertė)/(kontrolinės grupės OD vertė-tuščios grupės OD vertė)x 100 procentų .

2.7. ROS fluorescencijos vizualizacija

Reaktyviosios deguonies rūšys (ROS) HepG2 ląstelėse buvo įvertintos naudojant DCFH-DA aptikimo rinkinį. Po pradinio gydymo 5 ug/ml Mv, Mv-3-glc, Mv-3-gal arba BAE 24 valandas, vėliau 24 valandas 5 mM arba 30 mM gliukoze, ląstelės buvo plaunamos PBS, po to į kiekvieną šulinėlį buvo pridėta 10 μM DCFH-DA ir leista reaguoti 20 minučių 37 laipsnių temperatūroje. Ląstelės vėl buvo kruopščiai nuplaunamos PBS, o po to šių ląstelių grupė buvo nedelsiant stebima IX53 apverstu fluorescenciniu mikroskopu (Olympus, Tokijas, Japonija) esant 530 nm emisijai ir 485 nm sužadinimo filtrams. Vaizdai pateikiami 200 × padidinimu. Po disociacijos buvo surinkta kita ląstelių grupė ir jų fluorescencija buvo užfiksuota Synergy H4 kelių režimų mikroplokštelių skaitytuvu (BioTek Instruments Inc., Winooski, VT, JAV). Buvo pažymėtas bendras ląstelių fluorescencijos intensyvumas kiekviename šulinyje, o ROS susidarymas buvo matuojamas kaip kontrolės raukšlės.

2.8. ELISA

ELISA rinkiniai buvo naudojami baltymų, dalyvaujančių gliukoneogenezėje (FOXO1, G6Pase, p-GS), glikogenolizės (p-GSK3), gliukozės transporterio (GLUT2), lipogenezės (ACC ir HMGCR) ir lipolizėje (HSL) HepG2 supernatantuose, kiekiui nustatyti. ląstelės. Taip pat buvo nustatytas GLUT2 kiekis pelių kepenyse. BCA baltymų tyrimo rinkinys buvo naudojamas bendram supernatanto ląstelių baltymui nustatyti. Absorbcija ties 450 nm buvo išmatuota esant 37 laipsniams StatFax{10}} mikroplokštelių skaitytuvu (Awareness Technology Inc., Plam, FL, JAV), siekiant nustatyti baltymų kiekį.

2.9. Western blot analizė

Western blotting buvo atliktas HepG2 lizatuose, siekiant išmatuoti AMPK, p-AMPK baltymų kiekį, gliukoneogenezę (PGCl, PEPCK, glikogenolizę (GS, p-GS)) ir lipolizę (ACC, p-ACC, SREBP{{4}). }c) ląstelėse. Taip pat buvo atliktas Western blot tyrimas, siekiant nustatyti AMPK,p-AMPK kiekį diabeto sukeltų pelių kepenyse. GAPDH arba -Actin buvo naudojamas kaip įkrovos kontrolė. LAS-3000 vaizdavimas Baltymų juostoms stebėti buvo naudojama sistema (Fuji, Tokijas, Japonija), o jų tankis buvo kiekybiškai įvertintas naudojant Bio Profile 1D plus plus (Vilbert Lour-mat, Marne La Vallee, Prancūzija) programinę įrangą. Visi duomenys buvo išreikšti kartotiniu pokyčiu kontrolė.

2.10. Gliukozės kiekis kraujyje nevalgius ir gliukozės tolerancijos tyrimas

Gliukozės kiekis kraujyje nevalgius buvo matuojamas kartą per savaitę 5 savaites po 12-val. badavimo laikotarpio. Gliukozės tolerancijos tyrimui atlikti pelės buvo nevalgiusios 16 valandų ir šeriamos 2 g/kg 20 procentų gliukozės (200 μL) į skrandį (ig), kad būtų nustatytas gliukozės kiekis kraujyje esant 0 ,0,5, 1, 1,5 ir 2 val. Kraujas buvo paimtas iš uodegos venos, o gliukozės kiekis buvo matuojamas naudojant gliukometrą (Sinocare, Changsha, Kinija). Gliukozės lygis pelių, gavusių ig, šlapime taip pat buvo matuojamas penkias savaites.

2.11.Serumo biocheminių indeksų ir fermentų aktyvumo įvertinimas pelių kepenyse

Buvo išmatuotas insulino, trigliceridų ir bendro cholesterolio kiekis serume, o SOD ir GSH-PX fermentų aktyvumas buvo įvertintas naudojant komercinius rinkinius pagal gamintojo protokolą. Trigliceridų (TG) ir bendro cholesterolio (TCH) absorbcija ties 500 nm, o kitų (insulino, SOD ir GSH-PX) – 450 nm, buvo išmatuota 37 laipsnių kampu StatFax-2100 mikroplokštelių skaitytuvu (Awareness Technology). Inc., Plam, FL, JAV).

2.12. Statistinė analizė

Visi duomenys pateikiami kaip mažiausiai trijų nepriklausomų eksperimentų vidutinė vertė ± standartinis nuokrypis (SD). Skaičiai buvo gauti naudojant GraphPad Prism 8 versiją (GraphPad Software, Inc., CA, JAV). Siekiant nustatyti skirtingų grupių statistinius skirtumus, buvo atlikta vienpusė dispersijos analizė (ANOVA), t testai arba Sidako kelių palyginimų testas. Skirtumai buvo laikomi reikšmingais P<>

Šis straipsnis ištrauktas iš https://doi.org/10.1016/j.redox.2021.102100 Gauta 2021 m. liepos 21 d.; Patikslinta forma gauta 2021 m. rugpjūčio 9 d.; Priimta 2021 m. rugpjūčio 11 d