Elaeagnus Umbellata frakcijų slopinamasis poveikis melanogenezei -MSH stimuliuojamose B16-F10 melanomos ląstelėse

Santrauka:

Kai oda yra veikiama UV spindulių, melanocitai gamina melaniną. Pernelyg didelė melanino gamyba lemia odos pigmentaciją, kuri sukelia įvairių kosmetinių ir sveikatos problemų. Todėl būtina sukurti saugius, natūralius vaistus, kurie slopina melanino gamybą. Elaeagnus umbellata (ES) jau seniai plačiai naudojamas kaip liaudiškas vaistinis augalas dėl farmakologinių savybių, tarp kurių yra priešuždegiminių, antioksidacinių ir priešuždegiminių savybių.

Šiame tyrime ištyrėme ES frakcijų antioksidacinį aktyvumą ir melanogenezę slopinantį poveikį B16-F10 melanomos ląstelėse. ES frakcijos parodė nuo dozės priklausomą antioksidacinio aktyvumo padidėjimą radikalų šalinimo veikloje. Be to, įvertinome ES frakcijų poveikį tirozinazės aktyvumui ir melanogenezei melanocitus stimuliuojančio hormono sukeltose B16-F10 melanomos ląstelėse. EU nebuvo citotoksiškas 12,5–50 µg/ml. ES frakcijos veiksmingai slopino tirozinazės aktyvumą ir melanogenezę, slopino CREB ir ERK, dalyvaujančių melanogenezės kelyje, fosforilinimą ir sumažino su melanogeneze susijusių baltymų ekspresiją. Įdomu tai, kad anti-melanogenezės poveikis buvo veiksmingiausias esant 50 µg/mL EU koncentracijai, o frakcijų poveikis buvo pranašesnis už ekstrakto poveikį. Todėl mūsų tyrimas rodo, kad ES gali būti saugi priemonė nuo pernelyg didelės pigmentacijos arba kaip natūralus kosmetikos ingredientas.

Sulėtėja žmogaus odos ir naujų ląstelių augimo greitis mūsų organizme, lėtėja odos medžiagų apykaita, senstančios ląstelės negali būti laiku ir sklandžiai metabolizuojamos, melaninui sunku išnykti. Palaipsniui nykstant natūraliems drėkinamiesiems faktoriams odos paviršiuje, storėja ir kaupiasi raginis sluoksnis, daugėja melanino, pamažu ant odos atsiranda blankių tamsių dėmių. Kad ir kiek balinančių odos priežiūros priemonių būtų naudojama, oda sunkiai įsigeria. Todėl atlikdami tyrimą nustatėme, kad bendrieji Cistanche deserticola glikozidai, funkcinis Cistanche tubulosa ingredientas, gali veiksmingai pašalinti įvairius aktyvius deguonies laisvuosius radikalus (O2·-, OH·, H2O2, 1O2) ir apsaugoti nuo DNR pažeidimų, kuriuos sukelia OH·laisvieji radikalai ir Cistanche deserticola polisacharidai gali sulėtinti fiziologinę organų degeneraciją ir morfologinę ląstelių transformaciją. Visi aukščiau išvardyti ingredientai gali turėti antioksidacinį ir senėjimą stabdantį poveikį. Tuo pačiu metu Cistanche deserticola taip pat gali slopinti tirozinazės aktyvumą, kad pasiektų balinimo efektą.

Click cistanche tubulosa ekstrakto miltelių produktas

Raktiniai žodžiai:

Elaeagnus umbellata; odos balinimas; antioksidantas; melanogenezė; -MSH.

1. Įvadas

Žmonių odos spalva priklauso nuo genetiškai esančių melanosomų kiekio ir nuo to, kiek šios melanosomos yra išsklaidytos odoje, taip pat nuo saulės spindulių poveikio ir aplinkos taršos [1]. Melaninas yra didelės molekulinės masės junginys, randamas gyvūnuose ir augaluose ir yra svarbus pigmentas, lemiantis žmonių akių, odos ir plaukų spalvą. Melanogenezė reiškia melanino gamybos procesą, kuris yra pagrindinė žmogaus odos pigmentacijos priežastis. Melaninas gali apsaugoti odą nuo žalingos UV spinduliuotės, tačiau per didelė melanino gamyba gali sukelti estetinių problemų, įskaitant melazmą ir strazdanas, taip pat sveikatos problemų, įskaitant použdegiminę hiperpigmentaciją [2].

Melaninas vaidina lemiamą vaidmenį saugant odą nuo įvairių dirgiklių, tokių kaip UV, reaktyviųjų deguonies rūšių (ROS) ir melanocitus stimuliuojančio hormono (-MSH) [3]. Kai odą veikia UV spinduliai, susidaro ROS, o odos ląstelės gamina melanino perteklių. Ši sukurta ROS sunaikina vienos ir dvigrandę DNR ir atakuoja baltymų ir lipidų molekules [4]. Melaninas ir antioksidaciniai fermentai, tokie kaip peroksidazė, glutationas ir katalazė, neutralizuoja susidariusią ROS, kad išlaikytų tam tikrą lygį [5, 6]. Tačiau nekontroliuojama per didelė ROS gamyba sukelia įvairių problemų, tokių kaip vėžys [7]. Melanocitai yra baziniame epidermio sluoksnyje ir yra moduliuojami tirozinazės. Šios ląstelės gamina melaniną melanogenezės būdu, o šiame procese dalyvauja tokie veiksniai kaip su mikroftalmija susijęs transkripcijos faktorius (MITF) ir su tirozinaze susijęs baltymas (TRP-1) [8]. Tirozinazė dalyvauja procese, per kurį L-tirozinas virsta 3,4-dihidroksifenilalaninu (DOPA), kuris vėliau paverčiamas dopachinonu, iš kurio sintetinamas melaninas. Todėl tirozinazė yra svarbus veiksnys, reguliuojantis melanogenezę odos ląstelėse.

Pastaruoju metu daugelis medicinos ir kosmetikos pramonės šakų, siekdamos išspręsti estetines problemas, kylančias dėl pigmentacijos ir pigmentinių sutrikimų, atsiradusių dėl melanogenezės pertekliaus, sutelkė dėmesį į tirozinazės aktyvumo inhibitorius [9]. Įvairios cheminės medžiagos, tokios kaip arbutinas, kojinė rūgštis, hidrochinonas ir askorbo rūgštis, kurios yra melanino sintezės inhibitoriai, yra naudojamos kaip odos balinimo priemonės [10]. Tačiau šios medžiagos prasiskverbia į odą ir ilgą laiką naudojant gali turėti šalutinį poveikį, pvz., odos sudirginimą, uždegimą, niežėjimą ir pigmentaciją [11]. Todėl reikia sukurti veiksmingas balinimo priemones, kurios galėtų saugiai gydyti ir užkirsti kelią žmogaus odos hiperpigmentacijai be dirginimo.

Elaeagnus umbellata (ES) yra augalas, plačiai paplitęs visoje Azijoje ir dėl jo farmakologinio poveikio jau seniai naudojamas kaip liaudies vaistinis augalas. Tradiciškai ES gėlės ir sėklos buvo naudojamos kvėpavimo takų ligoms, įskaitant pažeidžiančias širdį ir plaučius, gydyti, o lapai buvo naudojami kaip tonikas ir žarnyno ligoms gydyti [12,13]. Be to, ES naudojama kaip raumenų relaksantas, analgetikas, nuo opų, diabeto ir karščiavimą mažinantis preparatas [14]. ES ingredientai turi priešvėžinį [15], antioksidacinį ir priešuždegiminį poveikį [16], o ES ekstraktas veikia odos balinimą ir raukšlių gerinimą [17]. Tačiau tyrimai dėl odos balinimo šakomis ir lapais poveikio ES frakcijose dar nebuvo atlikti. Todėl šio tyrimo tikslas buvo stebėti in vitro šakų ir lapų kilmės ES frakcijų antioksidacinį aktyvumą ir melanogenezės slopinimą melaniną gaminančiose pelių B16-F10 melanomos ląstelėse ir patvirtinti šakų ir lapų gautas ES kaip kosmetinė odos balinimo priemonė.

2. Medžiagos ir metodai

2.1. Medžiagos ir reagentai

2.2. ES ekstrakto ir frakcijų bei mėginių paruošimas

ES šakas ir lapus (1:1) suteikė Jeonbuk maisto biopramonės institutas (Jeonju, Jeonbuk, Korėja). EU (50 g) buvo sumaltas naudojant maišytuvą, o ES milteliai ekstrahuojami 70 procentų etanoliu 24 valandas kambario temperatūroje. Tirpiklis buvo steriliai filtruojamas per standartinį sietą (Advantec MFS, Taipėjus, Taivanas) ir išgarinamas sumažintame slėgyje naudojant rotacinį garintuvą (EYELA, N-1110, Tokijas, Japonija). Ekstraktas buvo liofilizuotas naudojant šaldymo džiovyklą (OPERON, FDU{6}}, Gimpo, Korėja), kad būtų pašalintas etanolio likutis ir gauta 2,4 g (išeiga, 4,8 proc.) EU 70 procentų etanolio ekstrakto (EUEE) miltelių. EUEE (2,4 g) buvo suspenduotas distiliuotame vandenyje ir padalintas su etilo acetato (EUEA, 0,19 g) arba butanolio (EUBu, 0,91 g) frakcijomis. Visi ekstraktai ir frakcijos iki naudojimo buvo laikomi 4 ◦C temperatūroje.

2.3. Aukštos kokybės skysčių chromatografijos (HPLC) analizė

Chromatografinės analizės buvo atliktos naudojant Elite Lachrom HPLC-DAD sistemą su UV detektoriumi (Hitachi HighTechnologies Co., Tokijas, Japonija). 260 nm UV detektorius ir analitinė YMC ODS-AM (5 mM, 4,6 × 250 mM) kolonėlė (Kiotas, Japonija) buvo panaudotas kiekybiniam įvertinimui remiantis vidinio standarto metodu. Kolonėlės temperatūra buvo 35 ◦C, o judriosios fazės srautas buvo 1 ml/min. Eliuentas buvo tirpiklio (A)=0,1 procento acto rūgšties vandenyje ir tirpiklio (B)=0,1 procento acto rūgšties acetonitrile gradientas. Vykdymo laikas buvo 35 min., o gradientas buvo toks: (A)/(B)=88/12 (0 min) → (A)/(B)=78/22 (0– 18 min.) → (A)/(B)=72/28 (18–28 min.) → (A)/(B)=62/38 (28–35 min.). HPLC analizė parodyta 1 paveiksle.

2.4. Ląstelių kultūros

Pelės melanomos B16-F10 ląstelių linija (CRL-6475) buvo įsigyta iš American Type Culture Collection (ATCC, VA, JAV). Ląstelės buvo kultivuojamos DMEM, papildytu 10 procentų termiškai aktyvuoto FBS ir 1 procento streptomicino (100 µg/ml)/penicilino (100 vienetų/ml). B16-F10 ląstelės buvo inkubuojamos sudrėkintame 5 procentų CO2 37 ◦C temperatūroje.

2.5. Ląstelių gyvybingumo tyrimas

Mėginių citotoksiškumas buvo įvertintas naudojant MTT tyrimą. B16-F10 melanomos ląstelės (1 × 104 ląstelės duobutėje) buvo kultivuojamos 96-šulinėlių plokštelėje ir inkubuojamos su įvairių koncentracijų ekstraktu ir frakcijomis (12,5, 25, 50 ir 100 µg/mL). arba arbutiną (100 µg/ml) 24 valandas 37 ◦C temperatūroje. Po inkubacijos į duobutes buvo įpilta 500 µg/mL MTT tirpalo, o plokštelė toliau inkubuojama 4 valandas 37 ◦C temperatūroje. Tada kiekvieno šulinėlio terpė buvo pašalinta ir pridėta 200 µL dimetilsulfoksido (DMSO), kad ištirptų formazano kristalai. Plokštelės absorbcija buvo aptikta esant 570 nm mikroplokštelių skaitytuvu (Synergy HTX Multi-Mode Reader, BioTek, Winooski, VT, JAV).

2.6. DPPH radikalų šalinimo veikla

ES ekstrakto ir frakcijų DPPH radikalų šalinimo aktyvumas buvo patvirtintas matuojant DPPH radikalų redukcinę galią kiekviename mėginyje. Į 2 ml 0,15 mM DPPH tirpalo buvo pridėta įvairių koncentracijų (12,5, 25 ir 50 µg/mL) EU ekstrakto ir frakcijų arba 20 µg/mL askorbo rūgšties (teigiama kontrolė) 500 µL. Tirpalas buvo maišomas 10 s, kad būtų užtikrintas kruopštus maišymas, ir inkubuojamas 30 minučių kambario temperatūroje tamsoje. Tada mišinio absorbcija buvo išmatuota esant 517 nm, naudojant mikroplokštelių skaitytuvą (Biotek, Winooski, VT, JAV).

2.7. ABTS radikalų pašalinimo tyrimas

ABTS radikalų šalinimo tirpalas buvo paruoštas sumaišius 7, 4 mM ABTS tirpalo ir 2, 6 mM kalio persulfato santykiu 1: 1 (pH 7, 4) ir reaguojant tirpalu kambario temperatūroje 24 valandas. Tada ABTS tirpalas buvo sureguliuotas iki 0,70 ± 0,03 absorbcijos esant 732 nm. Kiekvienas 10 µL mėginys buvo reaguojamas su 190 µL ABTS tirpalo 10 minučių kambario temperatūroje, o absorbcija buvo matuojama esant 732 nm, naudojant mikroplokštelių skaitytuvą (Biotek, Winooski, VT, JAV).

2.8. Grybų tirozinazės slopinimo veikla

Tirozinazės, kuri vaidina lemiamą vaidmenį melanogenezėje, slopinamojo aktyvumo analizei buvo panaudota grybų tirozinazė ir L-DOPA substratas. Pirmiausia paeiliui buvo pridėta 150 µL 0,1 M fosfatinio buferio (pH 6,8), 20 µL 5 mM L-DOPA tirpalo ir 20 µL įvairių koncentracijų EU ekstrakto ir frakcijų bei 100 µL 250 Reakcijai pradėti buvo pridėta U/mL grybų tirozinazės. Mišiniai buvo inkubuojami 37 ◦ C temperatūroje 10 min., o absorbcija matuojama esant 475 nm, naudojant mikroplokštelių skaitytuvą (Biotek, Winooski, VT, JAV). Tirozinazės slopinimo aktyvumas buvo apskaičiuotas pagal šią formulę:

2.9. Ląstelių tirozinazės aktyvumo nustatymas

B16-F10 melanomos ląstelės buvo pasėtos 1 × 105 ląstelių/šulinėlių tankiu į šešių šulinėlių plokšteles, kuriose yra 2 ml DMEM. Sudarytos šešios grupės: kontrolinė grupė, negydytos; -MSH grupė, tik 100 nM -MSH; arbutino grupė, -MSH ir arbutinas (10 mM); EUEE grupė, -MSH ir EUEE ekstraktas (12,5, 25 ir 50 µg/mL); EUEA grupė, -MSH ir EUEA frakcijos (12,5, 25 ir 50 µg/mL); ir EUBu grupė, -MSH ir EUBu frakcijos (12,5, 25 ir 50 µg/ml). Šešių šulinėlių plokštelės buvo inkubuojamos per naktį 37 °C temperatūroje 5 procentų CO2 inkubatoriuje. Tada ląstelės buvo veikiamos -MSH (100 nM) 48 valandas ir 24 valandas apdorotos įvairiomis EUEE, EUEA ir EUBu arba arbutino koncentracijomis (10 mM). Ląstelės tris kartus plaunamos fosfatiniu buferiniu tirpalu (PBS) ir lizuojamos. Lizatas buvo centrifuguojamas 16, 000 × g 20 min.

Tada kiekvieno lizato baltymų kiekis buvo nustatytas naudojant BCA baltymų tyrimo rinkinį (Thermo Scientific, Vantaa, Suomija). Tada visuose mėginiuose baltymų lygis buvo pakoreguotas iki 2{5}} µg. Lizatai (100 µL), turintys 2,5 mM L-DOPA 0,1 M fosfatiniame buferyje, buvo perkelti į šulinėlius 96-šulinėlių plokštelėje ir inkubuoti 1 valandą 37 ◦C temperatūroje. Lizatų absorbcija buvo išmatuota esant 475 nm, naudojant mikroplokštelių skaitytuvą (Biotek, Winooski, VT, JAV). Tarpląstelinis tirozinazės aktyvumas buvo apskaičiuotas pagal šią formulę:

OD reiškia mėginio absorbciją, o ODb – kontrolinės medžiagos absorbciją. Arbutinas buvo naudojamas kaip standartas.

2.10. Melanino kiekio matavimas

Norint nustatyti melanino kiekį B16-F10 ląstelėse, jos buvo pasėtos į 24-šulinėlių plokštelę 2 × 104 ląstelių/šulinėlių tankiu ir 24 valandas inkubuojamos DMEM su 10 procentų FBS. B16-F10 ląstelės buvo iš anksto apdorotos įvairių koncentracijų EUEE, EUEA ir EUBu (12,5, 25 ir 50 µg/mL) ir teigiamu kontroliniu arbutinu (10 mM) 1 val., po to reaguoja su 100 nM MSH papildomai 72 val. Vėliau ląstelės buvo surinktos po plovimo PBS. Nuosėdos, gautos centrifuguojant (12,000 × g, 10 min.), buvo lizuojamos 1 N NaOH, turinčiame 10 procentų DMSO, 90 ◦ C temperatūroje 30 min. Kiekvieno šulinio melanino kiekis buvo matuojamas esant 405 nm, naudojant mikroplokštelių skaitytuvą (Biotek, Winooski, VT, JAV). Norint nustatyti melanino kiekį, bendras eksperimento metu pagamintas kiekis buvo laikomas standartu (100 procentų), o kiekvienos ekstrakto ir frakcijos apdorojimo grupės slopinimo greitis buvo nustatytas proporcingai šiam standartui.

2.11. Western blot analizė

B{{0}}F10 pelių melanomos ląstelės (1 × 106 ląstelės duobutėje) buvo kultivuojamos 6 cm lėkštelėse ir inkubuojamos per naktį 37 ◦C temperatūroje, o ląstelės buvo iš anksto apdorotos -MSH (10 µM) 24 valandas. h. Tada ląstelės 24 valandas buvo apdorotos įvairiomis koncentracijomis (12,5, 25 ir 50 µg/mL) EU ekstrakto ir frakcijų arba 100 µg/mL arbutino. Ląstelės buvo surinktos naudojant PBS ir tada centrifuguojamos 12,000 × g 15 minučių 4 ◦C temperatūroje. Pašalinus supernatantą, ląstelės buvo lizuojamos naudojant ledinį Pro-prep baltymų lizės buferį, pridedant 1 procento proteazės ir fosfatazės inhibitorių, ir laikomos ant ledo 40 min. Frakcionuoti baltymai buvo kiekybiškai įvertinti naudojant Bradfordo baltymų tyrimą. Vienodas kiekis baltymų (25 µg) buvo įkeltas ir atskirtas 8 procentų arba 10 procentų natrio dodecilsulfato-poliakrilamido gelio elektroforeze ir perkeltas į polivinilidenfluorido (PVDF) membraną. PVDF membranos buvo užblokuotos 5 procentų nugriebto pieno tirpalu Tris-buferiniame fiziologiniame tirpale (TBS) su 0,1 procento Tween 20 (TBS-T) buferiu 1 valandą kambario temperatūroje ir inkubuojamos su specifiniais pirminiais antikūnais prieš p-CREB, CREB, p. -ERK, ERK, MITF, TRP-1, TRP-2, tirozinazė ir -aktinas per naktį 4 ◦C temperatūroje.

Po to membranos tris kartus skalaujamos TBS-T buferiu 10 minučių ir 2 valandas reagavo su krienų peroksidaze konjuguotu antriniu antikūnu kambario temperatūroje. Membranos buvo plaunamos TBS-T buferiu penkis kartus, o baltymai buvo aptikti sustiprintu chemiliuminescenciniu tirpalu. Juostos vaizdai buvo gauti naudojant Davinch-In vivo ir Vakarų vaizdo sistemą (Davinch-K, Seulas, Korėja).

2.12. Statistinė analizė

Visos reikšmės pateiktos kaip vidurkiai ± SEM (standartinė vidurkio paklaida) iš mažiausiai trijų nepriklausomų eksperimentų, o GraphPad Prism programinė įranga 5.0 (GraphPad, San Diego, CA, JAV) buvo naudojama statistinei analizei. Statistiniams skirtumams tarp grupių palyginti buvo naudojama vienpusė dispersijos analizė, po kurios buvo atlikta Bonferroni post hoc analizė. P reikšmė mažesnė nei 0.05 (p < 0,05) buvo laikoma statistiškai reikšminga.

3. Rezultatai

3.1. ES HPLC analizė

Galutinis EUEE, EUEA ir EUBu derlius (procentais) buvo atitinkamai 4,8 proc., 0,18 proc. ir 1,82 proc., atsižvelgiant į šviežio produkto svorį. Liuteolino, ES ekstrakto ir frakcijų indikatorinio junginio, kiekiui analizuoti naudotas HPLC. Lyginant su standartinio komponento smaile, liuteolino smailė ES ekstrakte ir frakcijose buvo patvirtinta. Liuteolino koncentracija EUEE, EUEA ir EUBu buvo atitinkamai 499,03, 1948,05 ir 994.{11}} mg/mL (1 pav.).

3.2. ES poveikis antioksidaciniam aktyvumui ir tirozinazės slopinamajam aktyvumui

Įvairių EUEE, EUEA ir EUBu koncentracijų antioksidacinis aktyvumas buvo matuojamas naudojant DPPH/ABTS testą. EUEE, EUEA ir EUBu DPPH ir ABTS radikalų šalinimo veikla padidėjo priklausomai nuo dozės (2A, B pav.), o askorbo rūgštis buvo teigiama kontrolė. DPPH ir ABTS radikalų pašalinimo aktyvumas esant 50 ug/mL ES ekstrakto ir frakcijų buvo didesnis, o rezultatai buvo panašūs į teigiamą kontrolę – askorbo rūgštį. Norint išmatuoti melanogenezės sukeltų fermentų slopinamąjį poveikį ES ekstrakte ir frakcijose, buvo atliktas grybų tirozinazės slopinimo tyrimas (2C pav.) naudojant L-DOPA kaip substratą sąlygomis, kuriose nėra ląstelių. Rezultatai parodė, kad tirozinazės aktyvumą slopina ES ekstraktas ir frakcijos priklausomai nuo dozės. Visų pirma, tirozinazę slopinantis aktyvumas 50 ug/mL EU ekstrakto ir frakcijų parodė panašius rezultatus kaip arbutinas,

Todėl EU tirozinazę slopinantis poveikis yra susijęs su L-DOPA oksidacija į DOPA chinoną melanogenezėje Apskritai ES frakcijos turėjo didesnį antioksidacinį ir tirozinazę slopinantį poveikį nei ekstraktas. Be to, ES frakcijos, ypač EUBu, pradėjo rodyti panašų poveikį teigiamai kontrolinei grupei, kai dozė buvo 25 ug/ml.

2 pav. ES antioksidacinis aktyvumas ir grybų tirozinazės slopinimo aktyvumas. ES ekstrakto ir frakcijų DPPH (A) ir ABTS (B) radikalų šalinimo aktyvumas. Askorbo rūgštis (20 µg/mL) buvo naudojama kaip teigiama kontrolė. Tirozinazę slopinantis poveikis naudojant ES ekstrakto ir frakcijų (C) L-DOPA. Arbutinas (10 mM) buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė. Visose diagramose rodomi kontrolės procentai, o duomenys išreiškiami vidurkiais ± SEM (n=3). Statistinis reikšmingumas nustatytas * p < 0,05, ** p < 0,01 ir *** p < 0,001, lyginant su askorbo rūgšties arba arbutino grupe.

3.3. ES poveikis B16-F10 ląstelių gyvybingumui

Siekiant įvertinti EU ląstelių citotoksiškumą, B16-F10 melanomos ląstelės buvo gydomos įvairios koncentracijos (12,5, 25, 50 ir 100 ug/mL) EU ekstraktu ir frakcijomis 24 valandas, o ląstelių gyvybingumas buvo analizuojamas MTT tyrimas. Rezultatai rodomi kaip ląstelių gyvybingumo procentas, palyginti su kontrole. ES ekstraktas ir frakcijos nebuvo citotoksiški tiriant 12.5 50 ug/mL koncentraciją B16-F10 ląstelėse. Tačiau citotoksiškumas buvo patvirtintas B16-F10 ląstelėse, kai ES frakcijų (EUEA ir EUBu) koncentracija buvo 100 ug/mL (3 pav.). Todėl vėlesni eksperimentai buvo atlikti naudojant 12,5, 25 ir 50 ug/mL ES ekstrakto ir frakcijų koncentracijas.

3.4. ES poveikis melanino sintezei

Siekiant nustatyti antimelanogeninį EU poveikį, B16-F10 ląstelėse buvo tiriamas ES ekstrakto ir frakcijų slopinamasis poveikis melanino sintezei. B16-F10 ląstelės buvo apdorotos EU ekstraktu ir frakcijomis 12,5, 25 ir 50 µg/ml arba 10 mM arbutinu 1 val., po to stimuliuojamos -MSH (100 mM) 72 val. . Melanino kiekis padidėjo 305,44 proc., kai buvo stimuliuojamas -MSH, palyginti su kontroline medžiaga (4A pav.). Tačiau ES gydytose grupėse, kurių koncentracija buvo 50 µg/ml, melanino kiekis gerokai sumažėjo, palyginti su grupe, kurioms buvo tik stimuliuojama -MSH, o rezultatai buvo panašūs į kontrolinės grupės rezultatus. Be to, palyginti su arbutino teigiamu kontroliniu preparatu, ES frakcijos, kurių koncentracija 50 µg/mL, pasižymėjo mažesniu melanino gamybos lygiu. Atsižvelgiant į šiuos rezultatus, didėjant ES ekstrakto ir frakcijų koncentracijai, padidėjo melanino sintezės slopinimo greitis B16-F10 ląstelėse (4B pav.).

Visų pirma, melanino sintezės slopinimo greitis ES frakcijose, kai koncentracija 50 µg/ml, buvo žymiai didesnis nei arbutino. Todėl ES frakcijos turėjo reikšmingą nuo dozės priklausomą slopinamąjį poveikį melanino sintezei B16-F10 melanomos ląstelėse.

3.5. ES poveikis melanino sintezei ir ląstelių tirozinazės aktyvumui

Patvirtinome ES ekstrakto ir frakcijų poveikį tarpląsteliniam tirozinazės aktyvumui, susijusiam su melanogenezės mechanizmu B16-F10 melanomos ląstelėse. Visos grupės, išskyrus kontrolinę, buvo stimuliuojamos a-MSH (100 nM) 48 valandas, o po to apdorojamos įvairios koncentracijos ES ekstraktu ir frakcijomis (12,5, 25 ir 50 ug/ml) arba arbutinu ( 10 mM) 24 valandas. Dėl to ES ekstraktas ir frakcijos reikšmingai slopino MSH sukeltą tirozinazės aktyvumą B16-F10 ląstelėse priklausomai nuo dozės (4C pav.). Intraląstelinės tirozinazės aktyvumas padidėjo 251,00 proc., kai buvo stimuliuojamas a-MSH, palyginti su kontroliniu. Tačiau ES gydytose grupėse, kurių koncentracija buvo 50 ug/ml, tirozinazės aktyvumas žymiai sumažėjo, palyginti su grupe, kuriai buvo stimuliuojama a-MSHonly.

Taigi, tirozinazės aktyvumas buvo slopinamas priklausomai nuo dozės, taikant ES gydymą B16-F10 ląstelėse, o poveikis buvo ypač stiprus esant kon. koncentracija 50 ug/ml. EUEE tirozinazės aktyvumo slopinimas, kai koncentracija yra 50 ug/ml, buvo mažesnis nei arbutino (85,13 proc.), o ES frakcijų (EUEA ir EUBu) tirozinazės aktyvumo slopinimas buvo didesnis nei arbutino (121,99 ir 128,11 proc. , atitinkamai). Atsižvelgiant į šiuos rezultatus, padidėjus ES ekstrakto ir frakcijų koncentracijai, padidėjo tarpląstelinės tirozinazės aktyvumo slopinimo greitis B16-F10 ląstelėse (4D pav.).

4 pav. ES melanino sintezė ir ląstelių tirozinazės aktyvumas. EU ekstrakto melanino kiekis ir frakcijos B16-F10 melanomos ląstelėse (A). ES ekstrakto ir frakcijų melanino sintezės slopinimo greitis B16-F10 melanomos ląstelėse (B). EU ekstrakto ir frakcijų tarpląstelinis tirozinazės aktyvumas B16-F10 melanomos ląstelėse (C). EU ekstrakto ir frakcijų tarpląstelinio tirozinazės aktyvumo slopinimo greitis B16-F10 melanomos ląstelėse (D). Rezultatai (A, C) pateikiami procentais, remiantis -MSH grupe. Rezultatai (B, D) pateikiami procentais, remiantis kontroline grupe. Duomenys išreiškiami kaip vidurkis ± SEM (n=3). Statistinis reikšmingumas buvo nustatytas *** p < 0,001, lyginant su -MSH stimuliuotomis B16-F10 ląstelėmis, o # p < 0,05, ## p < 0,01 ir ### p < 0,001, palyginti su arbutino grupė.

3.6. EU poveikis su melanogeneze susijusiai CREB ir ERK baltymų ekspresijai

Melanogenezė apsaugo žmogaus odą nuo įvairių išorinių dirgiklių, o šiame procese dalyvauja įvairūs mechanizmai. -MSH, hormonas, dalyvaujantis pirmajame melanogenezės etape, skatina melanocitus fosforilinti CREB ir ERK, sukeldamas su melanogeneze susijusių baltymų, susijusių su žemesniu signalu, sintezę [18]. Šiame tyrime mes ištyrėme melanogenezės reguliuojamus baltymus, įskaitant CREB ir ERK, siekdami nustatyti EU melanogenezės slopinimo mechanizmą -MSH sukeltai melanino sintezei B16-F10 melanomos ląstelėse. Dėl to patvirtinome, kad CREB ir ERK fosforilinimas žymiai padidėjo, kai B16-F10 ląstelės buvo stimuliuojamos -MSH. Tačiau, kai ląstelės buvo apdorotos ES ekstraktu ir frakcijomis, -MSH sukeltas fosforilinimas buvo slopinamas priklausomai nuo dozės. Visų pirma, matyti, kad ES ekstraktas ir 50 µg/mL koncentracijos frakcijos yra veiksmingiausios tarp įvairių gydymo koncentracijų (5A–D pav.).

3.7. ES poveikis su melanogeneze susijusiai MITF, TRP-1, TRP-2 ir tirozinazės baltymų ekspresijai

Siekiant ištirti, ar ES ekstraktas ir frakcijos turi įtakos su melanogeneze susijusių baltymų, sukeltų -MSH, ekspresijai, buvo atliktas Western blot tyrimas, siekiant įvertinti MITF, TRP-1, TRP-2 ir tirozinazės baltymų ekspresiją. Visų su melanogeneze susijusių baltymų kiekis buvo žymiai padidintas stimuliuojant -MSH, tačiau ES ekstraktas ir frakcijos veiksmingai slopino MITF, TRP-1, TRP-2 ir tirozinazės baltymų ekspresiją -MSH stimuliuojamame. B16-F10 langeliai (6 pav.). Remiantis ankstesniais rezultatais, ypač naudojant daugumą ES ekstraktų ir frakcijų, kurių koncentracija yra 50 µg/ml, šių baltymų ekspresija buvo labiau slopinama nei nustatyta po gydymo teigiamu kontroliniu arbutinu. Be to, apdorojimas ES frakcijomis sukėlė didesnį poveikį esant tokiai pačiai koncentracijai, palyginti su ES ekstraktu.

6 pav. ES slopinamasis poveikis su melanogeneze susijusiai MITF, TRP-1, TRP-2 ir tirozinazės baltymų ekspresijai. Tipiškas EUEE (A), EUEA (B) ir EUBu (C) MITF, TRP-1, TRP-2 ir tirozinazės Vakarų blotingo juostos vaizdas. Naudojant GelQuantNET programą, santykinis Western bloting juostos intensyvumas rodomas kaip tokia juostinė diagrama; MITF/-aktinas, TRP-1/-aktinas, TRP-2/-aktinas ir tirozinazė/-aktinas. -aktinas buvo naudojamas kaip vidinė Western blot kontrolė. Duomenys išreiškiami kaip vidurkis ± SEM (n=3). Statistinis reikšmingumas nustatytas * p < 0.05, **p < 0,01 ir *** p < 0,001, lyginant su -MSH stimuliuojamu B{ {22}}F10 langeliai.

4. Diskusija

Melanocitai yra pagrindiniame odos sluoksnyje, o melanino sintezės laipsnis melanocituose lemia žmogaus odos spalvą [19]. Melaninas yra odos pigmentas, kuris saugo odą mažindamas žalingų ultravioletinių spindulių sukuriamą ROS kiekį. Odą veikiant UV spinduliuotei, suaktyvėja melanocitus stimuliuojantis a-MSH, melanocitai gamina melaniną (20]), tačiau per didelė melanino gamyba gali sukelti odos pigmentaciją, dėl kurios atsiranda estetinių problemų.

α-MSH prisijungimas prie melanocitų receptoriaus melanocitams specifinio melanokortino -1 receptoriaus (MC1R) aktyvuoja signalinio baltymo adenilato ciklazę ir padidina cAMP 121 koncentraciją ląstelėse]. Didėjant cAMP kiekiui melanocituose, suaktyvėja CREB ir ERK signalizacijos keliai, skatinantys melanogenezėje dalyvaujančių baltymų gamybą. 18,22]. Šis aktyvuotas CREB ir ERK signalizacijos kelias padidina MITF ekspresijos reguliavimą ir vėliau skatina TRP-1, TRP-2 ir tirozinazės ekspresiją (23MITF yra tirozinazės reguliavimo transkripcijos faktorius ir atlieka pagrindinį vaidmenį reguliuojant melanino sintezę, įskaitant melanocitų proliferacijos, diferenciacijos ir išgyvenimo reguliavimą (24). Šis baltymas ne tik reguliuoja melanogenezę reguliuodamas subbaltymus, įskaitant TRP-1, TRP-2 ir tirozinazę, bet taip pat dalyvauja reguliuojant ląstelių ciklo progresavimą (25]. Apibendrinant, išorinės stimuliacijos, pvz., UV spinduliuotės, sukeltas a-MSH-MC1R surišimas daugiausia aktyvuoja CREB ir ERK signalizacijos kelius melanocituose, taip padidindamas MITF, TRP ekspresiją -1, TRP-2 ir tirozinazės baltymai, skatinantys melanino gamybą. Todėl šio proceso slopinimas gali sukelti melanino sintezės melanocituose slopinimą.

Šiuo metu naudojamos įvairios odos balinimo medžiagos, įskaitant hidrochinoną ir hidrokortizoną, dažniausiai yra kenksmingos cheminės medžiagos, o ilgalaikis naudojimas gali sukelti šalutinį poveikį, įskaitant odos sudirginimą ir niežėjimą [1,26–28]. Todėl būtina sutelkti dėmesį į saugių ir veiksmingų natūralių odą balinančių medžiagų, turinčių minimalų šalutinį poveikį, kūrimą, pavyzdžiui, ES [29].

Šiame tyrime ištyrėme, kaip ES frakcijos slopina melanino sintezės procesus ir mažina melanino gamybą, todėl B16-F10 melanomos ląstelėse atsiranda odos balinimo efektas.

Kadangi UV spinduliuotės sukeltas oksidacinis stresas skatina melanino pigmentų nusėdimą, radikalų šalinimo aktyvumas ir ROS aktyvumo slopinimas veiksmingai slopina melanogenezę, o natūralūs produktai, turintys tokį antioksidacinį aktyvumą, gali turėti puikų balinamąjį poveikį [30,31]. Todėl pirmiausia ištyrėme ES ekstrakto ir frakcijų antioksidacinį aktyvumą B16/F10 melanomos ląstelėse naudodami DPPH ir ABTS tyrimus, kurie yra įprasti ir paprasti augalų antioksidacinio aktyvumo analizės metodai in vitro. DPPH yra stabilus laisvasis radikalas ir yra naudojamas analizuoti hidrofobinių junginių radikalų šalinimo aktyvumą, naudojant redukuojančius agentus, tokius kaip askorbo rūgštis ir tokoferolis. ABTS tyrimas gali išmatuoti hidrofobinių ir hidrofilinių junginių, grandines laužančių antioksidantų ir vandenilį dovanojančių antioksidantų radikalų sunaikinimo aktyvumą [24]. Patvirtinome aukštą DPPH ir ABTS radikalų šalinimo aktyvumą ES ekstraktuose ir frakcijose. Visų pirma, poveikis buvo stipriausias, kai koncentracija buvo 50 µg/mL, o ES frakcijos turėjo didesnį antioksidacinį aktyvumą nei ekstraktas.

Tirozinazė yra pagrindinis fermentas, dalyvaujantis melanogenezėje, o daugelis odą balinančių medžiagų pirmiausia yra tirozinazės inhibitoriai. Todėl ištyrėme ES frakcijų poveikį tirozinazės aktyvumui, kuri skatina melanogenezę. Patvirtinome L-DOPA slopinamąjį poveikį ląstelių tirozinazės aktyvumui, kad nustatytume, ar ES ekstraktas ir frakcijos tiesiogiai slopina tirozinazės aktyvumą. Dėl to ES ekstrakto ir frakcijų tirozinazę slopinantis poveikis padidėjo priklausomai nuo dozės. Be to, remiantis aukščiau pateiktais rezultatais, ES buvo veiksmingiausia esant 50 µg/mL koncentracijai, o ES frakcijos turėjo didesnį poveikį nei ekstrakto. Visų pirma, EUBu koncentracija (50 µg/mL) turėjo didesnį poveikį nei arbutino, teigiamos kontrolės.

Toliau ištyrėme ES ekstrakto ir frakcijų odą balinantį poveikį melanogenezei -MSH sukeltose B16-F10 melanomos ląstelėse. Pirmiausia naudojome MTT tyrimą, kad nustatytų koncentracijos diapazoną, kuriame ES ekstraktas ir frakcijos nebuvo citotoksiški B16-F10 ląstelėms. Mūsų rezultatai patvirtino, kad koncentracijos diapazone nuo 12,5 iki 50 µg/mL citotoksiškumo nebuvo.

Stimuliavus B16-F10 ląsteles su -MSH, kad sukeltų melanino sintezę, buvo nustatytas odą balinantis EU ekstrakto ir frakcijų poveikis melanino kiekiui ir tarpląsteliniam tirozinazės aktyvumui. ES ekstrakto ir frakcijų melanino kiekio ir tarpląstelinės tirozinazės aktyvumo modeliai parodė panašius rezultatus. Gydymas visais ES ekstraktais ir frakcijomis parodė, kad melanino kiekis ir tarpląstelinės tirozinazės aktyvumas buvo slopinami priklausomai nuo dozės. Visų pirma, esant 50 µg/mL ES frakcijų koncentracijai, buvo pastebėtas daugiau nei 50 procentų melanino kiekio ir tarpląstelinės tirozinazės aktyvumo sumažėjimas, palyginti su tik -MSH stimuliuojama grupe (4A, C pav.).

CREB ir ERK signalizacijos keliai yra pagrindiniai signalizacijos keliai, kurie aktyvuojami stimuliuojant -MSH melanogenezėje. Todėl CREB ir ERK, dalyvaujantys įvairiuose mechanizmuose, atlieka pagrindinį vaidmenį melanino sintezės procese. -MSH stimuliavimas B16-F10 melanomos ląstelėse padidino MITF ekspresiją ir su melanogeneze susijusių tirozinazės genų šeimą (TRP-1, TRP-2 ir tirozinazę), aktyvinant CREB. ir ERK. Šiame tyrime pateikiame įrodymų, kad ES ekstraktas ir frakcijos slopina melanino sintezę, taip pat susijusius signalizacijos kelius, CREB ir ERK.

Padidėjus TRP-1 ir TRP-2 lygiams dėl reguliuojamos MITF ekspresijos, buvo skatinama tirozinazės ekspresija, o su melanogeneze susiję fermentai gamino melaniną [18,32]. Melanogenezės sąlygotų baltymų ekspresija buvo stebima naudojant Western blot metodą, siekiant nustatyti anti-melanogeninį EU ekstrakto ir frakcijų B16-F10 melanomos ląstelėse poveikį. Mūsų rezultatai patvirtino, kad MITF, TRP-1, TRP-2 ir tirozinazės baltymų ekspresija žymiai padidėjo -MSH stimuliuojamoje grupėje.

Tačiau gydymas ES ekstraktu ir frakcijomis sumažino šių su melanogeneze susijusių baltymų ekspresiją priklausomai nuo dozės. Visų pirma pastebėtas reikšmingas ekspresijos sumažėjimas, kai ES frakcijų koncentracija buvo 50 µg/mL. Mūsų rezultatai rodo, kad 50 µg/mL ES frakcijų slopino MITF, svarbaus transkripcijos faktoriaus, ekspresiją, reikšmingai slopinantį tirozinazės ekspresiją ir taip slopinantį melanino gamybą.

Remdamiesi šiais rezultatais, nustatėme, kad 50 µg/mL ES frakcijų slopino -MSH stimuliuojamo melanino gamybą B16-F10 melanomos ląstelėse, sumažindamos su melanogeneze susijusią signalizaciją, pagrįstą puikiu antioksidaciniu poveikiu. Todėl mūsų rezultatai rodo, kad ES frakcija gali būti potencialus balinimo gydymo kandidatas, kuris veiksmingai kontroliuoja melanogenezę.5. Išvados

Šiame tyrime įvertinome antioksidacinį ir anti-melanogeninį poveikį -MSH sukeltai melanogenezei B16-F10 melanomos ląstelėse, kad patvirtintume ES frakcijų, kaip odą balinančių medžiagų, funkciją. Apibendrinant, mes nustatėme, kad ES frakcijos turi stiprų antioksidacinį poveikį ir slopina su melanogeneze susijusius baltymus, tokius kaip TRP-1, TRP-2 ir tirozinazę, reguliuodamos MITF, todėl yra vertingi natūralūs melanogenezės inhibitoriai.

Pažymėtina, kad norint slopinti melanino sintezę -MSH stimuliuojamose B16F10 ląstelėse, reikalinga ES ekstrakto ir frakcijų koncentracija (50 µg/mL). Be to, patvirtinome, kad ES frakcijos turi puikų antioksidacinį ir slopinamąjį poveikį melanino gamybai. Todėl ES galėtų būti naudinga natūralių terapinių priemonių, skirtų odos ligoms gydyti, ir kaip odą balinančios medžiagos kosmetikos pramonėje.

Autoriaus indėlis:

Konceptualizacija, J.-HL ir D.-KK; Duomenų kuravimas, BL; Formali analizė, J.-HL; Finansavimo įsigijimas, Y.-ML; Tyrimas, J.-HL ir Y.-DJ; Metodika, BL, H.-WS ir B.-JS; Projekto administravimas, Y.-ML ir D.-KK; Programinė įranga, D.-KK; Priežiūra, Y.-ML ir D.-KK; Vizualizacija, J.-HL; Rašymas – originalus juodraštis, J.-HL; Rašymas – peržiūra ir redagavimas, J.-HL ir Y.-DJ Visi autoriai perskaitė ir sutiko su paskelbta rankraščio versija.

Finansavimas:

Šį tyrimą parėmė Prekybos, pramonės ir energetikos ministerija (MOTIE), Korėjos technologijų pažangos institutas (KIAT) per Ekonominio bendradarbiavimo regiono pramonės skatinimo programą (P0004749).

Interesų konfliktai:

Autoriai pareiškia, kad neturi konkuruojančių interesų.

Mėginio prieinamumas:

Junginių pavyzdžių autoriai negali gauti.

Santrumpos

-MSH - melanocitus stimuliuojantis hormonas

CREB cAMP atsako elementą surišantis baltymas

DOPA 3,4-dihidroksifenilalaninas

EU Elaeagnus umbellata

EUEE EU 70 procentų etanolio ekstraktas

EUEA ES etilo acetato frakcija

EUBu EU butanolio frakcija

MC1R melanocitams specifinis melanokortino-1 receptorius

MITF su mikroftalmija susijęs transkripcijos faktorius

ROS Reaktyviosios deguonies rūšys

TRP su tirozinaze susijęs baltymas

Nuorodos

1. Desmedtas, B.; Courselle, P.; De Beer, JO; Rogiers, V.; Grosberis, M.; Deconinck, E.; De Paepe, K. Odos balinimo priemonių apžvalga su įžvalga apie nelegalią kosmetikos rinką Europoje. J. Eur. Akad. Dermatolis. Venereol. 2016, 30, 943–950. [CrossRef] [PubMed]

2. Kostinas, GE; Klausa, VJ Žmogaus odos pigmentacija: Melanocitai moduliuoja odos spalvą, reaguodami į stresą. Faseb J. 2007, 21, 976–994. [CrossRef]

3. Linas, YS; Wu, WC; Linas, SY; Hou, WC Glicino hidroksamatas slopina tirozinazės aktyvumą ir melanino kiekį sumažindamas cAMP / PKA signalizacijos kelius. Amino rūgštys 2015, 47, 617–625. [CrossRef]

4. Fernandez-Garcia, E. Odos apsauga nuo UV spindulių naudojant maistinius antioksidantus. Maistas. Funkcija. 2014, 5, 1994–2003. [CrossRef]

5. Kowalska, J.; Banachas, K.; Rokas, J.; Beberokas, A.; Žepka, Z.; Wrze´sniok, D. Fluorochinolonų sukelto fototoksiškumo molekulinis ir biocheminis pagrindas – antioksidacinės sistemos tyrimas žmogaus melanocituose, veikiamuose UV-A spinduliuotės. Tarpt. J. Mol. Sci. 2020, 21, 9714. [CrossRef] [PubMed]

6. MatÉs, JM; Pérez-Gómez, C.; Castro, IND Antioksidaciniai fermentai ir žmonių ligos. Clin. Biochem. 1999, 32, 595–603. [CrossRef]

7. Bickers, DR; Athar, M. Oksidacinis stresas odos ligų patogenezėje. J. Ištirti. Dermatolis. 2006, 126, 2565–2575. [CrossRef]

8. Kim, YJ; Uyama, H. Tirozinazės inhibitoriai iš natūralių ir sintetinių šaltinių: struktūra, slopinimo mechanizmas ir ateities perspektyva. Ląstelė. Mol. Life Sci. 2005, 62, 1707–1723. [CrossRef]

9. Pillaiyar, T.; Manickam, M.; Namasivayam, V. Odos balinimo priemonės: tirozinazės inhibitorių medicininė chemija. J. Enzyme Inhib. Med. Chem. 2017, 32, 403–425. [CrossRef]

10. Šmitas, N.; Vilanova, J.; Pavel, S. Natūralių odos balinimo priemonių medžioklė. Tarpt. J. Mol. Sci. 2009, 10, 5326–5349. [CrossRef]

11. Draelos, ZD Odos šviesinimo preparatai ir ginčas dėl hidrochinono. Dermatolis. Ten. 2007, 20, 308–313. [CrossRef]

12. Anna, MI; Chiara, G.; Marinella, DL; Debora, P.; Fabiano, C.; Nunziatina, DT; Klaudija, M.; Marija, LT; Alessandra, B. Iš Elaeagnus umbellata išskirtų junginių antioksidacinis aktyvumas skatina žmogaus dantenų fibroblastų gerovę. J. Nat. Prod. 2020, 83, 626–637.

13. Sabiras, SM; Dilnawaz, S.; Imtiazas, A.; Hussain, M.; Kaleem, MT Elaeagnus umbellata (Thunb.) vaistinio augalo iš Pakistano antibakterinis aktyvumas. Saudo Arabija. Med. J. 2007, 28, 259–263.

14. Naziras, N.; Zahooras, M.; Nisar, M.; Chanas, I.; Karimas, N.; Abdel-Halimas, H.; Ali, A. Elaeagnus umbellata (Thunb.) fitocheminė analizė ir antidiabetinis potencialas streptozotocino sukeltoms diabetinėms žiurkėms: farmakologinis ir skaičiavimo metodas. BMC papildymas. Altern. Med. 2018, 18, 332. [CrossRef]

15. Wang, SY; Bowman, L.; Ding, M. Laisvųjų radikalų šalinimo pajėgumo ir antiproliferacinio aktyvumo variacijos tarp skirtingų rudeninių alyvuogių (Elaeagnus umbellate) genotipų. Planta. Med. 2007, 73, 468–477. [CrossRef] [PubMed]

16. Naziras, N.; Zahooras, M.; Nisar, M.; Karimas, N.; Latif, A.; Ahmadas, S.; Uddin, Z. Elaeagnus umbellate Thunb neuroprotekcinio ir anamnezinio poveikio įvertinimas. Dėl skopolamino sukelto atminties sutrikimo pelėms. BMC papildymas. Altern. Med. 2020, 20, 143.

17. Parkas, SH; Jhee, KH; Yang, SA Apsauginis Elaeagnus umbellata lapų etanolio ekstrakto poveikis -MSH sukeltai melanino gamybai B16-F0 ląstelėse ir UVB sukeltam pažeidimui CCD-986sk ląstelėse. J. Life Sci. 2019, 29, 555–563.

18. Qian, W.; Liu, W.; Zhu, D.; Cao, Y.; Tangas, A.; Gongas, G.; Su, H. Natūralūs odos balinimo junginiai melanogenezės gydymui (Apžvalga). Exp. Ten. Med. 2020, 20, 173–185. [CrossRef]

19. Gillbro, JM; Olsson, MJ. Odą šviesinančių medžiagų melanogenezė ir mechanizmai – esami ir nauji metodai. Tarpt. J. Kosmetas. Sci. 2011, 33, 210–221. [CrossRef]

20. Saba, E.; Kim, SH; Lee, YY; Parkas, CK; O, JW; Kim, TH; Kimas, HK; Roh, SS; Rhee, MH Korėjos raudonojo ženšenio ekstraktas pagerina melanogenezę žmonėms ir sukelia senėjimą stabdantį poveikį ultravioletiniais spinduliais apšvitintoms beplaukėms pelėms. J. Ženšenis. Res. 2020, 44, 496–505. [CrossRef] [PubMed]

21. Bertolotto, C.; Abbe, P.; Hemesath, TJ; Bilė, K.; Fisher, DE; Ortonne, JP; Ballotti, R. Microphthalmia geno produktas kaip signalo keitiklis cAMP sukeltame melanocitų diferenciacijoje. J. Cell. Biol. 1998, 142, 827–835. [CrossRef]

22. Lee, HJ; Lee, WJ; Chang, SE; Lee, GY Hesperidinas, populiarus antioksidantas, slopina melanogenezę per erk1/2 tarpininkaujantį MITF skaidymą. Tarpt. J. Mol. Sci. 2015, 16, 18384–18395. [CrossRef]

23. Kaina, ER; Horstmann, MA; Wells, AG; Weilbaecher, KN; Takemoto, CM; Landis, MW; Fisher, DE alfa-melanocitus stimuliuojančio hormono signalizacija reguliuoja mikroftalmijos, geno, kuriam trūksta Waardenburg sindromo, ekspresiją. J. Biol. Chem. 1998, 273, 33042–33047. [CrossRef]

24. Vensas, KW; Goding, CR Transkripcijos tinklas, reguliuojantis melanocitų vystymąsi ir melanomą. Pigmentas. Ląstelė. Res. 2004, 17, 318–325. [CrossRef]

25. Bondurand, N.; Pingault, V.; Goerich, DE; Lemortas, N.; Kojinė, E.; Le Caignec, C.; Wegneris, M.; Goossens, M. SOX10, PAX3 ir MITF, trijų genų, pakeistų Waardenburg sindromo, sąveika. Hum. Mol. Genet. 2000, 9, 1907–1917. [CrossRef]

26. McGregor, D. Hidrochinonas: jo kancerogeninių ir mutageninių savybių žmogui keliamos rizikos įvertinimas. Krit. Rev. Toxicol. 2007, 37, 887–914. [CrossRef]

27. Kolbė, L.; Kligmanas, AM; Šreineris, V.; Stoudemayer, T. Kortikosteroidų sukelta atrofija ir barjero pažeidimas, išmatuotas neinvaziniais žmogaus odos metodais. Oda. Res. Techn. 2001, 7, 73–77. [CrossRef] [PubMed]

28. Huangas, HC; Chang, SJ; Wu, CY; Ke, HJ; Chang, TM [6]-Shogaol slopina -MSH sukeltą melanogenezę, pagreitindamas ERK ir PI3K/Akt sukeltą MITF skaidymą. Biomed. Res. Tarpt. 2014, 2014, 842569. [CrossRef]

29. Ozenas, T.; Jenigunas, S.; Altun, M.; Demirtas, I. Fitocheminės sudedamosios dalys, ChE ir ureazės slopinimas, Elaeagnus umbellata Thunb. antiproliferacinės ir antioksidacinės savybės. Šukos. Chem. Aukštas. Pralaidumas. Ekranas. 2017, 20, 559–578. [CrossRef]

30. Flėgelis, A.; Kim, DO; Chung, SJ; Koo, SI; Chun, OK ABTS/DPPH tyrimų, skirtų antioksidaciniam pajėgumui išmatuoti populiariuose JAV maisto produktuose, kuriuose gausu antioksidantų, palyginimas. J. Maisto kompozicijos. Anal. 2011, 24, 1043–1048. [CrossRef]

31. Hseu, YC; Chenas, XZ; Gowrisankar, YV; jena, HR; Chuang, JY; Yang, HL Odą balinantis ektoino poveikis slopinant MSH stimuliuojamą melanogenezę ir suaktyvinant antioksidantų Nrf2 kelius UVA apšvitintuose keratinocituose. Antioksidantai, 2020, 9, 63. [CrossRef] [PubMed]

32. Jang, EJ; Blizgantis.; Parkas, HJ; Kim, D.; Jungas, C.; Honkongas, JY; Kim, S.; Lee, SK Anti-melanogeninis fitosfingozino aktyvumas moduliuojant su mikroftalmija susijusį transkripcijos faktoriaus signalizacijos kelią. J. Dermatol. Sci. 2017, 87, 19–28. [CrossRef] [PubMed]

Ji-Hyun Lee 1,†, Bori Lee 2,†, Yong-Deok Jeon 3, Hyun-Woo Song 2, Young-Mi Lee 2, Bong-Joon Song 4 ir Dae-Ki Kim 1,*

1 Department of Immunology and Institute of Medical Science, Jeonbuk National University Medical School, 20, Geonji-ro, Deokjin-gu, Jeonju-si 54907, Jeollabuk-do, Korea; jihyunsh1211@naver.com

2 Rytų farmacijos departamentas, Farmacijos koledžas ir Wonkwang-Oriental Medicines Research Institute, Wonkwang University, Iksan 54538, Jeonbuk, Korėja; leebori1004@naver.com (BL); cristblack@naver.com (H.-WS); ymlee@wku.ac.kr (Y.-ML)

3 Korėjos farmacijos katedra, Woosuk universitetas, 443 Samnye-ro, Samnye-up, Wanju-Gun 55338, Jeollabuk-do, Korėja; ydjeon1211jh@woosuk.ac.kr

4 Department of Food Science and Biotechnology, Wonkwang University, Iksan 54538, Jeonbuk, Korea; twinf1@hanmail.net

Korespondencija: daekim@jbnu.ac.kr; Tel.: plius 82-63-2703080

Šie autoriai vienodai prisidėjo prie šio darbo.

For more information:1950477648nn@gmail.com