Hipertiroidizmo poveikio endoplazminiam tinklelio stresui ir trumpalaikio receptorių potencialo Kanoninis 1 kanalas inkstuose tyrimas
Mar 14, 2022
Norėdami gauti daugiau informacijos:ali.ma@wecistanche.com
Nuriye Ezgi BEKTUR AYKANAT1,*,Erhanas ŞAHİN2, Sedat KAÇAR2, Rıdvan BAĞCI3, Şerife KARAKAYA2,Dilekas BURUKOĞLU DÖNMEZ2, Varol ŞAHİNTÜRK2
1Atılım universiteto Medicinos fakulteto Histologijos ir embriologijos skyrius, Ankara, Turkija2Osmangazi universiteto Medicinos fakulteto Histologijos ir embriologijos katedra, Ankara, Turkija 3IVF skyriaus andrologijos laboratorijos skyrius, Adana miesto švietimo ir tyrimų ligoninė, Adana, Turkija
Fonas / tikslas:Hipertiroidizmasyra susijęs su padidėjusiu glomerulų filtracijos greičiu ir renino-angiotenzino-aldosterono aktyvacija. Ca2 ir homeostazės sutrikimas endoplazminiame tinkle (ER) yra susijęs su daugeliu ligų, įskaitant diabetinę nefropatiją irhipertiroidizmas. Laikinasis receptorių potencialo kanoninis 1 (TRPC1) kanalas yra pirmasis klonuotas TRPC šeimos baltymas. Nors jis išreikštas daugelyje vietųinkstas, jo funkcija neaiški. TRPC1 dalyvauja reguliuojant Ca2 ir homeostazę, o jo reguliavimas padidina ER Ca2 plius lygį, suaktyvina išsiskleidusį baltymų atsaką, dėl kurio pažeidžiamos ląstelės.inkstas. Šis tyrimas ištyrė TRPC1 vaidmenįinkstushipertiroidinių žiurkių pagal ER streso žymenis, kurie yra gliukozės reguliuojamas baltymas 78 (GRP78), aktyvuojantis transkripcijos faktorius 6 (ATF6), (į baltymų kinazę R (PKR) panaši endoplazminė tinklelio kinazė) (PERK), inozitolio reikalaujantis fermentas 1 (IRE1).
Medžiagos ir metodai: 20 žiurkių patinų buvo suskirstyti į kontrolines ir hipertiroidines grupes (n=10).Hipertiroidizmasbuvo sukeltas į žiurkių geriamąjį vandenį įpilant 12 mg/l tiroksino 4 savaites. Buvo išmatuotas T3 ir T4 (fT3, fT4), TSH, kraujo šlapalo azoto (BUN) ir kreatinino kiekis be serumo. Histocheminė analizėinkstasmorfologiniams pokyčiams nustatyti, taip pat imunohistocheminė ir Western blot inkstų sekcijų analizė atlikta GRP78, ATF6, PERK, IRE1, TRPC1 antikūnams.
Rezultatai: TSH, BUN ir kreatinino kiekis sumažėjo, o fT3 ir fT4 kiekis padidėjo hipertiroidinei žiurkei. Morfologinė analizė parodė, kad kapiliarų bazinė membrana sustorėjo glomeruluose ir taip pat Western blot, o imunohistocheminiai rezultatai parodė TRPC1, GRP78 ir ATF6 padidėjimą hipertiroidinei žiurkei (p <>
Išvada: Apibendrinant, savo tyrime pirmą kartą parodėme, kad ryšys tarp ER streso ir TRPC1 bei padidėjusi jų ekspresija sukėlė inkstų pažeidimą hipertiroidinėms žiurkėms.
Raktiniai žodžiai:Hipertiroidizmas, endoplazminio tinklo (ER) stresas, trumpalaikis receptorių potencialo kanoninis 1 (TRPC1),inkstas, žiurkė
1. Įvadas
Trijodtironinas (T3) ir tiroksinas (T4) yra skydliaukės hormonai, būtini normaliam organų vystymuisi ir medžiagų apykaitos funkcijoms [1]. Be to, jie reguliuoja augimo greitį, natrio/kalio pompos funkciją, širdies ritmą, kraujospūdį, kvėpavimą, deguonies suvartojimą, virškinimą, lipidų, angliavandenių ir baltymų apykaitą, centrinės nervų sistemos funkciją, judesius ir kitų endokrininių liaukų metabolines funkcijas [2] .
Hipertiroidizmasturi daug įtakos cholesteroliui, trigliceridams, lipidams, oksidacijai, antioksidantams, malondialdehidui (MDA), katalizatoriniam fermentui katalazei (CAT), kepenų fermentams, šlapimo rūgščiai, karbamidui, kreatininui ir histopatologiniams pokyčiams kepenyse ir inkstuose [3]. Skydliaukės disfunkcija veikia inkstų fiziologiją ir vystymąsi. Esant hipotirozei, kai skydliaukė veikia silpniau, sumažėja inkstų masė (inkstų ir kūno masės santykis), o esanthipertiroidizmaskurioje liauka sunkiai dirba, padidėja inkstų masė [4]. Tačiau sunkus hipertiroidizmas sukelia baltymų degradaciją ir galiausiai inkstų atrofiją. Hipertiroidizmas sukelia inkstų kraujotakos (RBF) ir glomerulų filtracijos (GFR) padidėjimą [5]. Sergant hipertiroidizmu, padidėja natrio reabsorbcija proksimaliniuose kanalėliuose, padidėja bazolaterinis Na plus /K plius ATPazė [6], viršūninis Na plius /H plius modifikatorius [7] ir Na plus /Pi kotransporterio [8] aktyvacija. Be to, skydliaukės hormonas aktyvuoja Na plus /Ca2 plus modifikatorių, galbūt per cAMP susietą kelią, taip padidindamas kalcio absorbcijąinkstus[9].
Kalcis yra antrasis pasiuntinys, reguliuojantis daugumą ląstelių funkcijų, įskaitant genų ekspresiją ir ląstelių homeostazę [10], neurotransmiterių išsiskyrimą ir neuronų funkciją [11], metabolizmą ir ląstelių gyvenimo moduliavimą [12]. Trumpalaikio receptorių potencialo (TRP) kanalų šeima yra viena didžiausių katijonų kanalų šeimų. TRP šeima yra suskirstyta į TRPC (kanoninį), TRPM (melastatiną), TRPP (policistiną), TRPV (vaniloidinį), TRPML (bukolinį), TRPA (ankiriną) ir TRPN (į NOMPC panašų) pogrupius. Yra žinoma, kad TRPC baltymai sudaro Ca2 plius pralaidžius, neselektyvius katijonų kanalus ir todėl vaidina svarbų vaidmenį Ca2 plius signalo perdavime. Žinduolių TRPC šeimą sudaro septyni nariai, vadinami TRPC1-TRPC7 [13]. TRPC šeimos nariai yra išreikšti skirtingose dalėseinkstas. TRPC1, kuris ypač svarbus sergant diabetine nefropatija, yra ekspresuojamas beveik visur – inkstų mezangialinėse ląstelėse, glomeruluose, proksimalinėse kanalėlių ląstelėse ir plonoje besileidžiančioje Henlės kilpos dalyje, tačiau tiksli jo funkcija vis dar nežinoma [14].
Sunkūs Ca2 plius sutrikimai gali sukelti ląstelių pažeidimą, kurį sukelia endoplazminio tinklo (ER) stresas, reaguojant į įvairias patologines sąlygas [5,15]. Ca2 ir homeostazės sutrikimai sergant ER yra susiję su daugeliu ligų [16]. ER yra tarpląstelinė organelė, svarbi reguliuojant Ca2 ir homeostazę bei baltymų sintezę ir lankstymą. Ca2 plius pralaidžių kanalų ekspresijos / funkcijos moduliavimas taip pat turi įtakos intracelulinei Ca2 plius koncentracijai ir atitinkamai Ca2 plius susijusiems procesams, tokiems kaip ląstelių proliferacija, ER stresas, apoptozė ir autofagija. ER stresas yra būklė, kuri sutrikdo redokso pusiausvyrą ir luminalinę Ca2 bei homeostazę, dėl kurios kaupiasi nesusilankstę / netinkamai sulankstyti baltymai. Dėl nesulenkto baltymo atsako (UPR) aktyvavimo padidėja gliukozės reguliuojamo baltymo 78 (GRP78), ER chaperono, kiekis, o tai padidina ER baltymų sulankstymą [17]. ER streso aktyvinimas inicijuoja evoliuciškai konservuotą UPR trimis pagrindiniais ER membranos signalo keitikliais: PERK, IRE1 ir ATF6. Ląstelių disfunkcija ir ląstelių mirtis atsiranda tokiomis sąlygomis, kai ER stresas yra chroniškai užsitęsęs, o baltymų apkrova ER iš esmės viršija. Yra žinoma, kad vienas iš ląstelių mirties būdų, pastebėtų sergant lėtinėmis ligomis, tokiomis kaip hipoksija, išemija / reperfuzijos pažeidimas, neurodegeneracija, širdies ligos ir diabetas, yra dėl ER streso [12].
Atsižvelgdami į visą šią informaciją, siekėme ištirti ryšį tarp TRPC1 signalo perdavimo būdų ir ER streso.inkstus, kurie paprastai yra paveiktihipertiroidizmas.
Spustelėkite norėdamiCistanche vartojamas inkstų ligos simptomams gydyti
2. Medžiagos ir metodai
2.1. Gyvūnai
Mūsų tyrimas buvo patvirtintas Eskišehir Osmangazi universiteto Vietos gyvūnų etikos komiteto (2017-11-30 posėdyje Nr. 634 priimtas sprendimas Nr. 117) ir vadovaujamasi Nacionalinių sveikatos institutų paskelbtu laboratorinių gyvūnų priežiūros ir naudojimo vadovu. Dvidešimt suaugusių (7–8 savaičių amžiaus) Wistar albinosų patinų, gautų iš Medicinos ir chirurgijos eksperimentinių tyrimų centro (TICAM), 12 valandų buvo palaikomi 24 ± 2 laipsniais ir 55 ± 5 procentų drėgnumu šviesioje/tamsioje aplinkoje. eksperimentas. Gyvūnai buvo patalpinti į polikarbonato narvus 2 savaites prieš eksperimentą ir jiems buvo leista prisitaikyti prie aplinkos sąlygų, o po to atsitiktinai suskirstyti į kontrolines ir hipertiroidines grupes. Kontrolinė grupė (eutiroidinė) eksperimento metu buvo šeriama standartiniu žiurkės pašaru ir vandentiekio vandeniu. Hipertiroidinė grupė buvo nustatyta naudojant standartinį žiurkių pašarą 4 savaites ir geriant vandenį iš čiaupo, kuriame yra 12 mg/l tiroksino [18]. Ketvirtosios savaitės pabaigoje žiurkės buvo numarintos į raumenis suleidus ketamino (45 mg/kg) ir ksilazino (5 mg/kg). Iš karto iš visų gyvūnų buvo paimti intrakardiniai kraujo mėginiai. Visasinkstusbuvo pašalintos nefrektomijos būdu. Tada į dešinę ir į kairęinkstusžiurkių buvo išilgai perpjautos į dvi dalis. Tiek dešiniojo, tiek kairiojo inksto gabalėliai buvo naudojami tiek Western blot, tiek šviesos mikroskopijos analizei
2.2. Biocheminės analizės
Kraujo mėginiai buvo centrifuguojami 11, 000 aps./min. greičiu 10 minučių. Serumai buvo dedami į mėgintuvėlius ir laikomi -80 laipsnių temperatūroje iki analizės dienos. Tada pagal gamintojo protokolą ELISA metodu buvo išmatuotas serumo neturintis T3 (fT3), laisvasis T4 (fT4) ir skydliaukę stimuliuojančio hormono (TSH) lygis. Optinio tankio (OD) ekspresijos lygiai buvo nuskaityti esant 450 nm BioTek mikroplokštelių skaitytuvu 800 (BioTek Instruments, Inc., Winooski, VT, JAV), tada buvo apskaičiuoti rezultatai. Komerciniai fT3 (YLA0127RA), fT4 (YLA0239RA) ir TSH (YLA0047RA) rinkiniai buvo įsigyti iš Shanghai YL Biotech, Kinija. Be to, serumo karbamido azoto (BUN) ir kreatinino kiekis buvo išmatuotas absorbcijos fotometrijos metodu naudojant Cobas Integra 400 Plus Roche (Roche Diagnostics Ltd., Šveicarija).
2.3. Histologinis įvertinimas
Inkstasgabalai, paimti ištirti šviesos mikroskopo lygiu, buvo fiksuoti 10 procento formaldehido tirpale 48 valandas. Po įprasto audinių apdorojimo buvo gauti parafino blokai. Tada buvo paimtos 5 µm serijos pjūviai ir nudažyti Periodic acid-Schiff technika (PAS). Mikroskopinis glomerulų ir kanalėlių įvertinimas buvo atliktas naudojant Olympus BX-51 mikroskopą (Olympus America, Inc., Niujorkas, JAV). Sekcijos buvo vertinamos aklu būdu, pusiau kiekybiniu būdu, naudojant nustatytą balų skalę. Kiekvienai žiurkei grupėse buvo ištirta bent 10 didelės galios (×1000) laukų. Glomerulų, kuriuose buvo glomerulų bazinės membranos sustorėjimas, procentas buvo vertinamas taip: 0=nėra, 1 Mažiau arba lygus 25 proc., 2=25 proc. iki 50 proc., 3 =50 proc. iki 75 proc. , 4 Didesnis arba lygus 75 procentams [19]. Glomerulų bazinės membranos storis (µm) buvo matuojamas ZEISS ZEN 3.0 Microscope Software (Carl Zeiss Microscopy GmbH ZEISS Group, Miunchenas, Vokietija).
2.4. Imunohistocheminis įvertinimas
Parafino blokelių sekcijos iš kiekvienosinkstasaudiniai buvo paimti ant teigiamai įkrautų stiklelių. Po deparafinavimo stikleliai buvo perkelti per suskaidytą etanolio seriją, o po to ksilolį. Sekcijos buvo inkubuojamos su 3 procentų vandenilio peroksidu, kad būtų išvengta endogeninio peroksidazės aktyvumo. Paėmus antigeną citratiniu buferiu, sekcijos buvo atskirtos pap-pen, plaunamos 3 × 5 min fosfatu buferiniu fiziologiniu tirpalu (PBS), o po to 1 valandą kambario temperatūroje užblokuotos Ultra V bloku. Pjūviai buvo inkubuoti su triušio polikloniniu ATF6 antikūnu (ab203119, Abcam Inc., Kembridžas, JAV), triušio polikloniniu IRE1 antikūnu (YID5384, Shanghai YL Biotech Co., Ltd, Kinija), pelės monokloniniu PERK antikūnu (sc377400, Santa Cruz Biotechnology Inc. ., Heidelbergas, Vokietija) ir pelės monokloninis TRPC1 antikūnas (sc133076, Santa Cruz Biotechnology Inc.) per naktį plius 4 laipsnių temperatūroje drėgnomis sąlygomis. Po plovimo 3 × 5 min PBS, sekcijos buvo inkubuojamos su atitinkamais antriniais antikūnais (sc2359, sc2781, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) 1 valandą kambario temperatūroje. Tada jie vėl plaunami 3 × 5 min PBS ir nudažyti hematoksilinu. Skaidrės buvo padengtos dengiamuoju stikleliu, naudojant vandens pagrindu pagamintą terpę. Mikroskopinis tyrimas buvo atliktas naudojant Olympus BX51 mikroskopą ir kompiuterinę vaizdo gavimo sistemą (Olympus America, Inc., Niujorkas, JAV).
Visas imuniniu būdu dažytas sekcijas užkoduotu būdu įvertino pagrindinis autorius, kuris buvo aklas nuo eksperimentų grupės pavadinimo. TRPC1, ATF6, IRE1 ir PERK ekspresijos buvo aptiktos daugiausia kanalėliuose ir (arba) glomeruluose. Išraiškos buvo pusiau kiekybiškai nustatytos pagal teigiamų procentąinkstasskyriuose. Dažymo intensyvumas buvo suskirstytas į keturis laipsnius: jokio ({0}}), silpną (1), vidutinį (2) ir stiprų (3). Teigiamų inkstų histologinių pjūvių procentas buvo suskirstytas į 4 laipsnius: 0 (0 proc.), 1 (1 proc. –10 proc.), 2 (11 proc. –49 proc.) ir 3 (50 proc. –100 proc.). Bendras rezultatas buvo dviejų balų sandauga, o galutinis vieno mėginio rezultatas buvo 10 mikroskopinių laukų vidurkis. TRPC1, ATF6, IE1 ir PERK buvo įvertinti pagal pateiktą metodą [20].
Cistanche-inkstų funkcija
2.5. Western blot analizė
Nustatyti specifinio baltymo kiekio pokyčiusinkstasaudiniųhipertiroidizmasir kontrolinės grupės, inkstai buvo supjaustyti į mažus gabalėlius, o homogenizacija buvo atlikta į 2 ml granuliuotus mėgintuvėlius pridedant lizės buferio RIPA. Po homogenizavimo mėgintuvėliai buvo inkubuojami 4 laipsnių temperatūroje mažiausiai 3 0 min., o po to audinių lizatai centrifuguojami 4 laipsniais, 15, 000 g 20 min. Supernatantas, kuriame yra viso baltymo, buvo perkeltas į naują mėgintuvėlį. Baltymų nustatymas buvo atliktas iš supernatanto naudojant Qubit 2.0 prietaisą (Invitrogen Inc., Waltham, MA, JAV). Į kiekvieną šulinėlį buvo įdėta 50 µg baltymų, atlikta elektroforezė naudojant SDS-PAGE Bio-Rad MiniTrans Blot (Bio-Rad Laboratories, Inc., Kalifornija, JAV), o po to perkelta į PVDF membraną naudojant Bio-Rad Trans Turbo įrenginį. Membranos buvo blokuojamos 5 procentų galvijų serumo albuminu (BSA) 1 valandą kambario temperatūroje, o po to inkubuojamos su pelės monokloniniu GRP78 antikūnu (sc166490, Santa Cruz Biotechnology Inc.), triušio polikloniniu ATF6 antikūnu (ab203119, Abcam Inc., Cam). tiltas, JAV), triušio polikloninis IRE1 antikūnas (YID5384, Shanghai YL Biotech Co. Ltd., Kinija), pelės monokloninis PERK antikūnas (sc377400, Santa Cruz Biotechnology Inc.), pelės monokloninis TRPC1 antikūnas (sc133076, Santa Cruz Biotechnology, Inc. ) ir pelės monokloninio aktino antikūno (sc47778, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) (pakrovimo kontrolei) per naktį 4 laipsnių temperatūroje. Po to membranos buvo plaunamos 3 × 10 min plovimo tirpalu (TBST), po to inkubuojamos su atitinkamais antriniais antikūnais (sc2005, sc2030, Santa Cruz Biotechnology Inc.). Po to, kai membranos buvo plaunamos 3 × 10 minučių TBST, baltymų ekspresijos lygiai imunoreaktyviose juostose buvo stebimi vaizdo gavimo sistema (C-Digit, Licor, Cambridge, JK). Vaizdo rezultatai buvo analizuojami Image J 1.49v programa.
2.6. Statistinė analizė
Visos statistinės analizės buvo atliktos naudojant IBM SPSS 21.{1}} statistinio paketo programą (IBM Corp., Armonk, NY, JAV). Western blot eksperimentas buvo pakartotas tris kartus kiekvienai grupei. Reikšmingumo lygis priimtas kaip p < 0.05.="" shapiro-wilk="" testas="" buvo="" naudojamas="" normaliam="" duomenų="" pasiskirstymui="" nustatyti.="" dispersijos="" homogeniškumo="" testas="" (levene="" testas)="" buvo="" naudojamas="" įvertinti,="" ar="" grupių="" dispersijos="" buvo="" vienodos.="" duomenims,="" rodantiems="" normalųjį="" pasiskirstymą,="" buvo="" atliktas="" nepriklausomų="" mėginių="" t="" testas.="" duomenims,="" rodantiems="" nenormalų="" pasiskirstymą,="" buvo="" atliktas="" mann-whitney="" u="">
3. Rezultatai
3.1. Biocheminiai rezultatai
Žiurkių grupių fT3, fT4 ir TSH koncentracijos serume, serumo BUN ir kreatinino lygiai parodyti 1 paveiksle. Rezultatai rodo, kad fT3 ir fT4 lygiai reikšmingai padidėjo hipertiroidinėje grupėje, palyginti su kontroline grupe (abiejų p < {{5)="" }}.05).="" be="" to,="" nustatytas="" reikšmingas="" tsh="" koncentracijos="" sumažėjimas="" hipertireozės="" grupėje,="" palyginti="" su="" kontroline="" grupe="" (p="">< 0,05)="" (1a="" pav.).="" serumo="" bun="" (1b="" pav.)="" ir="" kreatinino="" (1c="" pav.)="" lygis="" reikšmingai="" sumažėjo="" hipertireozės="" grupėje,="" palyginti="" su="" kontroline="" grupe="" (abiejų="" p=""><>
3.2. Histocheminiai rezultatai
Histologiniai pakitimaiinkstusžiurkių grupių skaičius parodytas 2 paveiksle. Inkstų histologija (glomerulų, kanalėlių ir kraujagyslių struktūros) buvo tipiška kontrolinei grupei (2A pav.). Tačiauhipertiroidizmassukėlė kapiliarinės bazinės membranos sustorėjimą glomeruluose (2B pav.). Glomerulų bazinės membranos storis reikšmingai padidėjo hipertiroidinėje grupėje, palyginti su kontroline grupe (3-4 pav.), (p < 0,05).="" nebuvo="" akivaizdaus="" skirtumo="" tarp="" kontrolinės="" ir="" hipertiroidinių="" grupių="" pagal="" kanalėlių="">
1 pav. Laisvo trijodtironino (fT3), laisvo tiroksino (fT4) ir skydliaukę stimuliuojančio hormono (TSH) lygiai žiurkių grupėse (a). * Skirtingai nuo kontrolinės grupės (p < 0.05).="" žiurkių="" grupių="" bun="" (b)="" ir="" kreatinino="" (c)="" lygiai="" serume.="" *skirtingai="" nuo="" kontrolinės="" grupės="" (p="">< 0,001),="" buvo="" atliktas="" nepriklausomų="" mėginių="" t="">
2 pav. Mikrografijosinkstaskontrolinės (A) ir hipertiroidinės (B) grupės audinių. Kontrolinėje grupėje stebima tipinė inkstų histologija (A). Hipertiroidinėje grupėjehipertiroidizmassukėlė kapiliarinės bazinės membranos sustorėjimą glomeruluose. Pastebėtas kapiliarinės bazinės membranos sustorėjimas glomeruluose (rodyklė) (B). Abiejų žiurkių grupių inkstų smegenyse akivaizdžių skirtumų nėra. (Periodinės rūgšties-Šifo (PAS) dažymas). Strypai yra 20 µm ir 50 µm.
3.3. Imunohistocheminiai rezultatai
TRPC1, GRP78, ATF6, IRE1, PERK imunohistocheminės reakcijos ir jų išraiškos yra pusiau kiekybiškai nustatomos pagal teigiamų procentąinkstusžiurkių grupių (5–9 pav.). Be to, jų vidutinis pokytis parodytas lentelėje. Lyginant su kontroline grupe, TRPC1, GRP78, ATF6, IRE1 ir PERK baltymų ekspresija reikšmingai padidėjo hipertiroidinėje grupėje glomeruluose ir kanalėliuose (5–9 pav.) (p < 0,="" 000).="" rezultatai="" parodė,="" kad="" trpc1="" buvo="" išreikštas="" tiek="" glomerulų,="" tiek="" kanalėlių="" struktūrose="" kontrolinėje="" grupėje="" (5-1ab="" pav.),="" o="" jo="" ekspresija="" padidėjo="" hipertiroidinėje="" grupėje="" (5-2ab="" pav.).="" grp78="" nebuvo="" išreikštas="" kontrolinėje="" grupėje="" (6-1ab="" pav.),="" o="" jo="" teigiama="" reakcija="" buvo="" stebima="" tiek="" kanalėliuose,="" tiek="" glomeruluose="" hipertiroidinėje="" grupėje="" (6-2ab="" pav.);="" kadangi="" atf6="" nebuvo="" išreikštas="" kontrolinėje="" grupėje="" (7-1ab="" pav.),="" jo="" išraiškos="" teigiamai="" reagavo="" tiek="" kanalėliuose,="" tiek="" glomeruluose="" hipertiroidinėje="" grupėje="" (7-2ab="" pav.).="" ire1="" nebuvo="" išreikštas="" kontrolinėje="" grupėje="" (8-1ab="" pav.),="" o="" jo="" teigiama="" reakcija="" buvo="" stebima="" tiek="" kanalėliuose,="" tiek="" glomeruluose="" hipertiroidinėje="" grupėje="" (8-2ab="" pav.).="" nors="" perk="" nebuvo="" išreikštas="" kontrolinėje="" grupėje="" (9-1ab="" pav.),="" perk="" raiška="" apsiribojo="" hipertiroidinės="" grupės="" kanalėliais="" (9-2ab="">
3 pav. Glomerulų bazinės membranos storio palyginimas tarp kontrolinių ir hipertiroidinių grupių. * Skirtingai nuo kontrolinės grupės (p < 0.05),="" buvo="" atliktas="" nepriklausomų="" mėginių="" t="">
4 pav. Glomerulų bazinės membranos storio balų palyginimas tarp kontrolinių ir hipertiroidinių grupių. * Skirtingai nuo kontrolinės grupės (p < 0.05),="" buvo="" atliktas="" mann-whitney="" u="">
3.4. Western blot rezultatai
Western blot rezultatai (1 pav IRE1 padidėjimas buvo statistiškai reikšmingas, nors ir ne toks, kaip kitų baltymų kiekis (p <>Hipertiroidizmassukėlė GRP78 (2,16 karto), ATF6 (2,82 karto), PERK (1,95 karto), IRE1 (1,60 karto) ir TRPC1 (1,53 karto) ekspresijos padidėjimą, palyginti su kontroline grupe.
4. Diskusija
Šiame tyrime pirmą kartą pasiūlėme, kaip paveikiamas inkstų audinyshipertiroidizmasKalbant apie ER streso ir TRPC1 kanalo vaidmenį šiame procese. Mūsų tyrime padidėjusi TRPC1 ekspresija sukėlė Ca2 plius koncentracijos padidėjimą ląstelėje, ypač kapiliarų bazinės membranos sustorėjimą ir padidino GRP78 ekspresiją kanalėliuose, ypač glomeruluose. Manome, kad ER stresas vaidina aktyvų vaidmenį šiame ląstelių pažeidimo procese, ypač per ATF6 ir PERK signalo keitiklį UPR (išskleisto baltymo atsako) kelyje.
Kaip matyti daugelyje tyrimų, kaip ir mūsų tyrime [18], hipertiroidizmo atveju fT3 ir fT4 reikšmės didėja, o TSH lygis mažėja. Bet koks skydliaukės funkcijos sutrikimas gali turėti įtakos fT3 ir fT4 gamybai, kuri gali būti susijusi su įvairiomis patologijomis visame kūne [21]. Theinkstusvaidina gyvybiškai svarbų vaidmenį pašalinant atliekas ir toksinus, tokius kaip šlapalas, kreatininas ir šlapimo rūgštis. Inkstų funkcijos įvertinimas yra svarbus gydant pacientus, sergančius inkstų liga arba patologija, turinčia įtakos inkstų funkcijai. Inkstų funkcijos tyrimai yra naudingi nustatant inkstų ligos buvimą, stebint inkstų atsaką į gydymą ir nustatant inkstų ligos progresavimą. Sergant hipertiroidizmu kreatinino kiekis serume sumažėja ne tik dėl padidėjusio GFR, bet ir dėl raumenų destrukcijos padidėjimo. Taip pat BUN koncentracijos sumažėjimashipertiroidizmasManoma, kad tai yra dėl sumažėjusios akvaporino 1 ir 2 ekspresijos. Todėl daugelyje tyrimų [22], kaip ir mūsų tyrime, sumažėjo BUN ir kreatinino kiekis. Esant patologinėms sąlygoms, ląstelės gali prarasti proteostazę, todėl ER susikaupia nesusilankstę ir netinkamai susilankstę baltymai, o tai sukelia UPR arba ER stresą [23].
5 pav. Imunohistocheminis TRPC1 dažymas kontrolinėse (1A-B) ir hipertiroidinėse (2A-B) grupėseinkstasaudinių. TRPC ekspresija padidėjo hipertiroidinėje grupėje, palyginti su kontroline grupe (rodyklės). Strypai yra 50 µm. * Skirtingai nuo kontrolinės grupės (p < 0.000),="" buvo="" atliktas="" mann-whitney="" u="">
6 pav. GRP78 imunohistocheminis dažymas kontrolinėse (1A-B) ir hipertiroidinėse (2A-B) grupėseinkstasaudinių. GRP78 ekspresija padidėja hipertiroidinėje grupėje (rodyklės). Strypai yra 50 µm. * Skirtingai nuo kontrolinės grupės (p < 0.000),="" buvo="" atliktas="" mann-whitney="" u="">
7 pav. Imunohistocheminis ATF6 dažymas kontrolinėse (1A-B) ir hipertiroidinėse (2A-B) grupėseinkstasaudinių. ATF6 ekspresija padidėja hipertiroidinėje grupėje (rodyklės). Strypai yra 50 µm. * Skirtingai nuo kontrolinės grupės (p < 0.000),="" buvo="" atliktas="" mann-whit="" ney="" u="">
8 pav. Imunohistocheminis IRE1 dažymas kontrolinėse (1A-B) ir hipertiroidinėse (2A-B) grupėseinkstasaudinių. IRE1 ekspresija padidėja hipertiroidinėje grupėje (rodyklės). Strypai yra 50 µm. * Skirtingai nuo kontrolinės grupės (p < 0.000),="" buvo="" atliktas="" mann-whitney="" u="">
9 pav. Imunohistocheminis PERK dažymas kontrolinėse (1A-B) ir hipertiroidinėse (2A-B) grupėseinkstasaudinių. PERK ekspresija padidėja hipertiroidinėje grupėje (rodyklės). Strypai yra 50 µm. * Skirtingai nuo kontrolinės grupės (p < 0.000),="" buvo="" atliktas="" mann-whitney="" u="">
ER ir citozolinio Ca2 ir homeostazės sutrikimai yra susiję su daugeliu ligų, įskaitantinkstas. ER Ca2 ir homeostazės sutrikimas sukelia UPR, kuris neleidžia tolesniam naujai susintetintų baltymų kaupimuisi ER. Taigi tai rodo išgyvenimo apsaugos mechanizmą, sumažinant ER naštą [24].
Yra žinoma, kad įvairūs veiksniai sukelia ER stresą ir sukeliainkstasžalą. ER stresas inkstuose gali sukelti kanalėlių epitelio ląstelių diferenciaciją dėl mezenchiminio perėjimo iš epitelio, inkstų kanalėlių epitelio ląstelių praradimą dėl apoptozės ir galiausiai inkstų patologiją, įskaitant nefrono praradimą, dėl kurio sumažėja inkstų filtravimo pajėgumas. Dickhout ir kt. tyrime buvo parodytas ER streso sukeltas epitelio-mezenchiminio perėjimo procesas inkstų proksimalinių kanalėlių ląstelių linijoje HK-2 dėl lėtinės inkstų ligos [25]. Be daugelio tyrimų [9], kaip matyti mūsų tyrime,hipertiroidizmassukėlė kapiliarinės bazinės membranos sustorėjimą glomeruluose. Buvo pasiūlyta, kad padidėjęs kapiliarinės bazinės membranos sustorėjimas glomeruluose susidarė dėl epitelio-mezenchiminio perėjimo proceso dėl padidėjusios GRP78 ir ER-streso signalo keitiklių ekspresijos. ER streso svarba buvo įrodyta lėtiniuinkstasdaugelio patologinių būklių liga. Taikant streptozotocino sukeltą diabeto modelį C57BL/6 pelėms, išsivystė ER stresas, o dvidešimt antrą mėnesį pasireiškusi sunki nefropatija buvo susijusi su CHOP/GADD153, vieno iš ER streso sukeltos apoptozės kelio komponentų, reguliavimu [26]. ]. Pacientams, sergantiems nefroziniu sindromu, IgA nefropatija, pirminiu mezangialiniu proliferaciniu glomerulonefritu ir membranine nefropatija, įskaitant minimalius simptomus turinčius pacientus, GRP78 ir indukuojamo endoplazminio tinklo (ER) chaperono molekulės, deguonies reguliuojamo baltymo 150 (ORP150), imunohistocheminė ekspresija padidėjo, palyginti su kontroline imunohistochemine ekspresija. CHOP / GADD153 ekspresija taip pat padidėjo ir buvo pastebėta branduolio lokalizacija nefrozinių pacientų proksimaliniame kanalėlių epitelyje. Žmogaus inkstų ląstelėse, veikiamose dideliu serumo albumino kiekiu, buvo pastebėta ER streso indukcija ir įrodyta, kad ji sukelia apoptozę per CHOP/GADD153 kelią [25]. Tubulointersticinis ER streso atsakas buvo nustatytas sergant glomerulų ligomis su kanalėlių ląstelių apoptoze, susijusia su puromicino aminonukleozido nefroze, baltymų pertekliumi ir proteinurija, susijusia su eksperimentine ar žmogaus diabetine nefropatija [27]. Lorz ir kt. pranešė, kad paracetamolis, analgetikas ir karščiavimą mažinantis agentas, sukelia inkstų kanalėlių pažeidimą ir apoptozę dėl ER streso [28]. Paracetamolis sukelia ER streso reakciją, įskaitant CHOP indukciją ir kaspazės skilimą-12. Per didelis sekrecinių baltymų kaupimasis sukelia ER stresą, sukeldamas podocitų pažeidimą [29]. Komplemento ataka taip pat sukelia ER stresą ir suaktyvina PERK kelią, dėl kurio pažeidžiamos glomerulų epitelio ląstelės. Visos šios išvados rodo, kad ER stresas yra viena iš pagrindinių inkstų pažeidimo priežasčių, o ER streso atsakas yra gynybos mechanizmas.inkstasžala [30]. Savo tyrime manome, kad 12 mg/l tiroksino sukeltas hipertiroidizmas sukelia ER stresą inkstų audiniuose ir žalą, kurią sukeliahipertiroidizmasinkstų audinyje yra susijęs su ATF6 ir PERK reguliavimu.
Pirmasis klonuotas žinduolių TRP kanalas, TRPC1 jonų kanalas, randamas ER ląstelėje, plazmos membranoje, tarpląstelinėse pūslelėse ir pirminėje ciliarijoje. Jis išreiškiamas beveik visur žmogaus ir graužikų audiniuose. TRPC1 sąveikauja su įvairiomis baltymų grupėmis, įskaitant jonų kanalų subvienetus, receptorius ir citozolinius baltymus, kad tarpininkautų jo poveikiui Ca2 ir signalui. Jis veikia kaip neselektyvus katijonų kanalas keliuose, kurie kontroliuoja Ca2 ir antplūdį reaguojant į ląstelės paviršiaus receptorių aktyvavimą. Dėl šios funkcijos taip pat pasiekiami proliferacija, išgyvenimas, diferenciacija, sekrecija ir ląstelių migracija, taip pat tokios savybės kaip neuronų augimo kūgiai ir chemotropinių ląstelių specifinių funkcijų mioblastų susiliejimas [12].
Yra daug tyrimų apie TRPC1 ekspresijos pokyčius daugelyje patologinių būklių, sukeliančių ER stresą. Sukumaran ir kt. parodė, kad yra ryšys tarp ER streso ir TRPC1 ekspresijos, galinčios pakeisti ląstelių išlikimą seilių liaukoje. Jie išreiškė, kad TRPC1 ekspresija sumažėjo ER streso sąlygomis, o ląstelių mirtis dėl ER streso priklausė nuo CHOP ekspresijos. Pastebėtas padidėjęs ER stresas ir infiltracija TRPC1-/- išmuštų pelių seilių liaukų ląstelėse [16].
10 pavinkstasGRP78, ATF6, TRPC1, IRE1 ir PERK baltymų ekspresijos lygiai ir kartos pokyčio grafikas. Visų baltymų padidėjimas buvo statistiškai reikšmingas (*p < 0,05),="" atliktas="" nepriklausomų="" mėginių="" t="">
KadainkstusIštirta diabetinių žiurkių modelių, buvo pranešta, kad sumažėjo TRPC1 mRNR ekspresija [31]. Pacientams, sergantiems diabetine nefropatija arba Zucker diabetinėmis žiurkėmis, palyginti su kontrolinėmis žiurkėmis, sumažėjusi TRPC1 ekspresija rodo, kad TRPC1 paveikė diabetinės nefropatijos vystymąsi [32]. TRPC1 vaidina gyvybiškai svarbų vaidmenį palaikant ER Ca2 ir homeostazę, o sumažėjusi funkcija sukelia užsitęsusį UPR kelio aktyvavimą ir sutrikdo AKT aktyvavimą, o tai sukelia neurodegeneraciją. TRPC1 ekspresijos sumažėjimas buvo pastebėtas neurotoksinų sukeltos pelės Parkinsono ligos modelyje. Padidėjusi TRPC1 ekspresija padidina neuronų išgyvenimą reguliuojant AKT / mTOR kelią, nepaisant ER streso ir UPR, kurį sukelia neurotoksinas [33]. Li ir kt. pranešė, kad TRPC1 ekspresija taip pat padidėjo dėl Namptino sukeltos kardiomiocitų hipertrofijos, priklausomai nuo laiko. Kai TRPC1 genas buvo nutildytas, jis slopino nikotinamido fosforibozilo transferazės sukeltą širdies hipertrofiją. Tačiau buvo manoma, kad dėl pernelyg didelio TRPC1 ekspresijos nikotinamido fosforiboziltransferazė sukelia kardiomiocitų hipertrofiją ER streso sukeltu keliu. Šiuo požiūriu TRPC1 geno nutildymas gali atlikti apsauginį vaidmenį užkertant kelią širdies hipertrofijai [34]. Mūsų tyrime taip pat žymiai padidėjo ER stresas ir TRPC1. Tai rodo, kad kapiliarų bazinės membranos sustorėjimas, kurį sukelia padidėjęs ER stresas inkstų audinyje dėlhipertiroidizmasyra dėl padidėjusios TRPC1 ekspresijos.
Šis tyrimas turi tam tikrų apribojimų. Vietoj tiroksino sukeltos hipertiroidizmo žiurkės modelio galėjo būti naudojamos genetiškai modifikuotos pelės. Su šlapimu, surinktu naudojant metabolinius narvus, kai kurieinkstasfunkciniai tyrimai galėjo būti matuojami ir šlapime. ER streso lygio pokyčius galima ištirti naudojant TRPC1 inhibitorių.
Remiantis mūsų literatūros apžvalga, šiame tyrime pirmą kartą buvo įrodytas hipertiroidizmo poveikis ryšiui tarp ER streso ir TRPC1 kanalo inkstų audinyje. Buvo nustatyta, kadhipertiroidizmassukėlė TRPC1 ekspresijos padidėjimą, kuris sukelia ER stresą. Siūlome, kad TRPC1 ekspresijos mažinimas gali būti galima terapinė strategija hipertiroidizmo sukeltam gydymuiinkstasir galbūt kitų organų pažeidimų.
Nuorodos
1. Kim D, Kim W, Joo SK, Bae JM, Kim JH ir kt. Subklinikinė hipotirozė ir silpna skydliaukės funkcija yra susiję su nealkoholiniu steatohepatitu ir fibroze. Klinikinė gastroenterologija ir hepatologija 2018 m.; 16 (1): 123-131. DOI: 10.1016/j.cgh.2017.08.014
2. Bolkiny Y, Toulson E, El-Atrsh A, Akela M, Farg E. Costus šaknies ekstraktas palengvina kraujo biocheminius sutrikimus eksperimentiškai sukeltų hipo- irhipertiroidizmaspelėse. Metinis biologijos tyrimas ir apžvalga 2019 m.; 31 (5): 1-10. DOI: 10.9734/arb/2019/v31i530063
3. Sakr S, Abdel-Ghafar FR, Abo-El-Yazid SM. Selenas pagerina karbimazolo sukeltą hepatotoksiškumą ir oksidacinį stresą žiurkėms albinosams. Žurnalas Coastal Life Medicine 2015; 3 (2): 930-936. DOI: 10.1016/j.jtemb.2010.07.002
4. Vargas F, Moreno JM, Rodríguez-Gómez I, Wangensteen R, Osuna A ir kt. Kraujagyslių ir inkstų funkcija esant eksperimentiniams skydliaukės sutrikimams. Europos endokrinologijos žurnalas, 2006 m.; 154 (2): 197-212. DOI: 10.1530/tee.1.02093
5. Rhee CM. Sąveika tarp skydliaukės irinkstasliga: įrodymų apžvalga. Dabartinė nuomonė endokrinologijoje 2016 m.; 23 (5): 407-415. DOI: 10.1097 / Med.0000000000000275
6. Wijkhuisen A, Djouadi F, Vilar J, Merlet-Benichou C, Bastin J. Skydliaukės hormonai reguliuoja energijos apykaitos fermentų vystymąsi žiurkės proksimaliniuose vingiuotuose kanalėliuose. American Journal of Physiology-Renal Physiology 1995; 268 (4): 634-642. DOI: 10.1152/ajprenal.1995.268.4.F634
7. Baum M, Dwarakanath V, Alpern RJ, Moe OW. Skydliaukės hormono poveikis naujagimių inkstų žievės Na plus / H plus antiporteriui. Kidney International 1998; 53 (5): 1254-1258. DOI: 10.1046/j.{7}}.1998.00879.x
8. Alcalde AI, Sarasa M, Raldúa D, Aramayona J, Morales R ir kt. Skydliaukės hormono vaidmuo reguliuojant inkstų fosfatų transportavimą jaunoms ir senoms žiurkėms. Endokrinologija 1999; 140 (4): 1544-1551. DOI: 10.1210/endo.140.4.6658
9. Iglesias P, Bajo MA, Selgas R, Díez JJ. Skydliaukės disfunkcija ir inkstų liga: atnaujinimas. Apžvalgos apie endokrininius ir medžiagų apykaitos sutrikimus 2017 m.; 18 (1): 131-144. DOI:
10.1007/s11154-016-9395-710. Selvaraj S, Watt JA, Singh BB. TRPC1 slopina apoptotinę ląstelių degeneraciją, kurią sukelia dopaminerginis neurotoksinas MPTP / MPP plus. Ląstelių kalcis 2009; 46 (3): 209-218. DOI: 10.1016/j.ceca.2009.07.008
11. Goda Y, Südhof TC. Neuromediatorių išsiskyrimo kalcio reguliavimas: patikimai nepatikimas? Dabartinė nuomonė apie ląstelių biologiją 1997; 9 (4): 513-518. DOI: 10,1016/s0955-0674(97)80027-0
12. Sukumaran P, Schaar A, Sun Y, Singh BB. Funkcinis TRP kanalų vaidmuo moduliuojant ER stresą ir autofagiją. Ląstelių kalcis 2016; 60 (2): 123-132. DOI: 10.1016/j.ceca.2016.02.012
13. Goel M, Sinkins WG, Zuo CD, Estacion M, Schilling WP. TRPC kanalų identifikavimas ir lokalizavimas žiurkėjeinkstas. American Journal of Physiology-Renal Physiology 2006; 290 (5): 1241-1252. DOI: 10.1152/ajprenal.00376.2005
14. Chubanov V, Kubanek S, Fiedler S, Mittermeier L, Gudermann T ir kt. TRP kanalų inkstų funkcijos sveikatai ir ligoms. In: Emir TLR (redaktorius). TRP kanalų neurobiologija. 1-asis leidimas Boca Raton, Florida, JAV: CRC Press/Taylor & Francis; 2017. p. 187-212.
15. Jeschke MG, Gauglitz GG, Song J, Kulp GA, Finnerty CC ir kt. Kalcis ir ER stresas tarpininkauja kepenų apoptozei po nudegimo. Žurnalas „Cellular and Molecular Medicine“, 2009 m.; 13 (8b): 1857-1865. DOI: 10.1111/j.{7}}.2009.00644.x
16. Sukumaran P, Sun Y, Zangbede FQ, Nascimento da Conceicao V, Mishra B ir kt. TRPC1 ekspresija ir funkcija slopina ER stresą ir ląstelių mirtį seilių liaukų ląstelėse. FASEB BioAdvanc es 2019; 1 (1): 40-50. DOI: 10.1096/fab.1021
17. Zhao Y, Yan Y, Zhao Z, Li S, Yin J. Endoplazminio tinklelio streso kelio žymenų GRP78 ir CHOP dinaminiai pokyčiai diabetinių pelių hipokampe. Smegenų tyrimų biuletenis 2015 m.; 111: 27-35. DOI: 10.1016/j.brainresbull.2014.12.00618. Araujo A, Schenkel P, Enzveiler A, Fernandes T, Partita W ir kt. Redokso signalizacijos vaidmuo širdies hipertrofijoje, kurią sukelia eksperimentinishipertiroidizmas. Molekulinės endokrinologijos žurnalas 2008 m.; 41 (6): 423-430. DOI: 10.1677 / JME-08-002419. Wang Z, Carmo JM, Aberdein N, Zhou X, Williams JM ir kt. Sinergetinė hipertenzijos ir diabeto sąveika skatinant inkstų pažeidimą ir endoplazminio retikulinio streso vaidmenį. Hipertenzija 2017; 69 (5): 879-891. DOI: 10.1161 / hipertenzija.116.08560
20. Zhang LY, Zhang YQ, Zeng YZ, Zhu JL, Chen H ir kt. TRPC1 slopina estrogenų receptorių teigiamo krūties vėžio proliferaciją ir migraciją ir suteikia geresnę prognozę slopindamas PI3K / AKT kelią. Krūties vėžio tyrimai ir gydymas 2020 m.; 182 (1): 21-33. DOI: 10,1007/s{10}}
21. Aldubayan MA. Vynuogių sėklų proantocianidinas sumažina oksidacinį stresą ir apoptozę, susijusią su hipertiroidinių pelių kepenimis. Metiniai biologijos tyrimai ir apžvalga, 2019 m.: 1-11. DOI: 10.9734/arb/2019/v33i630138
22. Sonmez E, Bulur O, Ertugrul DT, Sahin K, Beyan E ir kt.Hipertiroidizmasturi įtakos inkstų funkcijai. Endokrininė 2019 m.; 65 (1): 144-148. DOI: 10,1007/s12020-019-01903-2
23. Yan M, Shu S, Guo C, Tang C, Dong Z. Endoplazminis tinklelio stresas sergant išeminiu ir nefrotoksiniu ūminiuinkstassužalojimas. Medicinos metraštis 2018; 50 (5): 381-390. DOI: 10.1080/07853890.2018.1489142
24. Bezprozvanny I, Mattson MP. Neuronų kalcio netinkamas valdymas ir Alzheimerio ligos patogenezė. Trends in Neurosciences 2008; 31 (9): 454-463. DOI: 10.1016/j.tins.2008.06.005
25. Dickhout JG, Carlisle RE, Austin RC. Širdies hipertrofijos, širdies nepakankamumo ir lėtinės inkstų ligos tarpusavio ryšys: endoplazminis tinklelio stresas kaip patogenezės tarpininkas. Tiražinis tyrimas 2011; 108 (5): 629-642. DOI: 10.1161/circresaha.110.226803
26. Wu J, Zhang R, Torreggiani M, Ting A, Xiong H ir kt. Cukrinio diabeto sukėlimas senoms C57B6 pelėms sukelia sunkią nefropatiją: ryšį su oksidaciniu stresu, endoplazminiu retikuliniu stresu ir uždegimu. „The American Journal of Pathology“, 2010 m.; 176 (5): 2163-2176. DOI: 10.2353/ajpath.2010.090386
27. Cybulsky AV. Endoplazminis retikulinis stresas sergant proteinurine inkstų liga.InkstasTarptautinė 2010 m.; 77 (3): 187-193. DOI: 10.1038/ki.2009.389
28. Lorz C, Justo P, Sanz A, Subirá D, Egido J ir kt. Paracetamo sukeltas inkstų kanalėlių pažeidimas: ER streso vaidmuo. Amerikos nefrologijos draugijos žurnalas 2004; 15 (2): 380-389. DOI: 10.1097/01.asn.0000111289.91206.b0
29. Inagi R, Nangaku M, Onogi H, Ueyama H, Kitao Y ir kt. Endoplazminio tinklo (ER) streso įtraukimas į podocitų pažeidimą, kurį sukelia per didelis baltymų kaupimasis.InkstasTarptautinis 2005; 68 (6): 2639-2650. DOI: 10.1111/j.{6}}.2005.00736.x
30. Yoshida H. ER stresas ir ligos. FEBS žurnalas 2007; 274 (3): 630-658. DOI: 10.1111/j.{7}}.2007.05639.x
31. Nesinas V, Ciokas L. TRPC1. In: Nilius B, Flockerzi V (redaktoriai). Žinduolių trumpalaikių receptorių potencialo (TRP) katijonų kanalai. 24-asis leidimas Berlynas, Heidelbergas, Vokietija: Springer; 2014. p. 15-51.
32. He F, Peng F, Xia X, Zhao C, Luo Q ir kt. MiR-135a skatina inkstų fibrozę sergant diabetine nefropatija, reguliuodamas TRPC1. Diabetologia 2014; 57 (8): 1726-1736. DOI: 10,1007/s00125-014-3282-0
33. Selvaraj S, Sun Y, Watt JA, Wang S, Lei S ir kt. Neurotoksino sukeltas ER stresas pelių dopaminerginiuose neuronuose apima TRPC1 reguliavimą ir AKT / mTOR signalizacijos slopinimą. The Journal of Clinical Investigation 2012; 122 (4): 1354-1367. DOI: 10.1172 / JCI61332
34. Li J, Wu W, Zhao M, Liu X. TRPC1 įtraukimas į Nampt sukeltą kardiomiocitų hipertrofiją aktyvinant ER stresą. Ląstelių ir molekulinė biologija 2017 m.; 63 (4): 33-37. DOI: 10.14715/CMB/2017.63.4.6