Feniletanoidinių glikozidų išskyrimas ir gryninimas iš Cistanche Deserticola naudojant didelės spartos priešsrovės chromatografiją

Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com

Li a, b, Rong Tsao b,*, Raymond Yang b, Chunming Liu a, J. Christopher Young b, Honghui Zhu b

Abstraktus

Penki feniletanoidiniai glikozidai (PhG), echinakozidas, cistanosidas A, akteozidas, izoakteozidas ir 20-acetillakteozidas, buvo išskirti ir išvalyti išCistanche deserticolapirmą kartą didelės spartos priešpriešinės srovės chromatografija (HSCCC), naudojant dvi dvifazes sistemas, kurių viena susideda iš etilo acetato – etanolio – vandens (5:0.5:4,5, v/v/v), o kitą – etilo acetatas – n-butanolis – etanolis – vanduo ({{10}},5:0.5:0,1:1, v/v/v/v). Iš 1412 mg n-butanolio C. dezertolio ekstrakto iš viso buvo išvalyta 28,5 mg echinakozido, 18,4 mg cistanozido A, 14,6 mg akteozido, 30,1 mg izoakteozido ir 25,2 mg 20-acetillakteozido. daugiau kaip 92,5 proc. grynumo, kaip nustatyta HPLC. Struktūros buvo identifikuotos pagal jų sulaikymo trukmę, UV, LC-ESI-MS neigiamų jonų režimu ir patvirtintos BMR eksperimentais. Aptariamas būdingas penkių junginių LC-ESI-MSn fragmentacijos modelis ir nustatyta, kad tai labai specifinė ir naudinga priemonė PhG struktūriniam identifikavimui iš šio svarbaus vaistinio augalo.

Raktiniai žodžiai:Cistanche deserticola; feniletanoidas; Echinakozidas; Cistanosidas A; Akteozidas; izoakteozidas; 20-Acetilakteozidas; HSCCC; LC–ESI-MS; BMR

1. Įvadas

Cistanche deserticola YC Mayra gerai žinomas kinų augalinis vaistas ir plačiai naudojamas tradiciniuose preparatuose, panašiuose į šiandieninius funkcinius maisto ingredientus ar maisto papildus (Wong, Li, Cheng ir Chen, 2006). Pagrindinės C. deserticola biologiškai aktyvios sudedamosios dalys yra feniletanoidiniai glikozidai (PhG), įskaitant echinakozidą, akteozidą, izoakteozidą, 20-acetilaktozidą ir cistanosidą A (Kobayashi, Karasawa ir Miyase, 1984; Kobayashi ir kt., 7). PhG yra plačiai paplitę augalų karalystėje ir buvo plačiai ištirti dėl įvairių biologinių funkcijų, tokių kaip hepatoprotekcinė (Xiong ir kt., 1998), priešuždegiminė, antinociceptinė (Schapoval ir kt., 1998) ir antioksidacinė veikla. Cheng, Wei, Guo, Ni ir Liu, 2005; Jis, Lau, Xu, Li ir But, 2000; Li, Wang ir Wang, 1997; Li, Wang, Zheng, Liu ir Jia, 1993; Wang, Jiang, Wu ir Wang, 2001; Xiong, Kadota, Tani ir Namba, 1996), seksualinės funkcijos gerinimą (Xie ir Wu, 1993; Zong, He, Wu ir Chen, 1996) ir raminamąjį poveikį (Lu, 1998). ).

Dėl pirmiau minėtų reikšmingų biologinių savybių skubiai reikalingi dideli grynų junginių kiekiai kaip etaloniniai standartai ir įvairiems in vitro ir in vivo tyrimams, susijusiems su tradicinės kinų medicinos vartojimu. Todėl tampa būtini veiksmingi PhG išskyrimo, gryninimo ir struktūros apibūdinimo metodai. Tačiau tokiam darbui paprastai reikia atlikti kelis chromatografinius mėginio valymo ir izoliavimo etapus (Gross, Lahloub, Anklin, Schulten ir Sticher, 1988; Nishimura, Sasaki, Inagaki, Chin ir Mitsuhashi, 1991; Ravn, Nishibe , Sasahara ir Li, 1990; Shoyama, Matsumoto ir Nishioka, 1987), o tai paprastai lemia mažą regeneravimo greitį dėl negrįžtamos PhG adsorbcijos ant kietos atramos atskyrimo metu (Lei ir kt., 2001). Priešingai, didelės spartos priešpriešinės srovės chromatografija (HSCCC) tapo veiksminga alternatyva įprastiems chromatografijos metodams, skirtiems atskirti kai kuriuos PhG iš augalų ekstraktų (Lei ir kt., 2001; Li ir kt., 2005). Lei ir kt. sėkmingai atskyrė akteozidą ir 20-acetillakteozidą nuoCistanches salsa(CA Mey.) G. Beck naudojant HSCCC (Lei ir kt., 2001). Šio straipsnio autoriai anksčiau pranešė, kad HSCCC atskyrė akteozidą ir izoakteozidą nuo Plantago psyllium L. (Li ir kt., 2005). Tačiau nebuvo paskelbta ataskaita apie kelių PhG atskyrimą ir gryninimą iš C. deserticola naudojant HSCCC. Dėl standartų trūkumo LC-MS metodai buvo sukurti ir naudojami kaip galingas analitinis įrankis greitam kai kurių PhG augalų ekstrakte apibūdinimui ir identifikavimui (Li ir kt., 2005; Wang ir kt., 2000).

Šiame darbe pateikiame HSCCC metodą, sukurtą echinakozidui, cistanozidui A, akteozidui, izoakteozidui ir 20-acetilaktezidui iš C. deserticola gaminti. Penkių atskirtų PhG apibūdinimas ir analizė buvo atlikta naudojant LC, sujungtą su tiesiogine ESI masės spektrometrija ir BMR eksperimentais. Šiame dokumente pateikiami ir aptariami penkių PhG sulaikymo laikas, molekulinė masė ir būdingi fragmentų jonai. Šiame tyrime identifikuotų penkių PhG struktūros parodytos 1 pav.

Veiksmingos Cistanche deserticola sudedamosios dalys

2. Eksperimentinis

2.1. Cheminės medžiagos ir reagentai

Akteozidas buvo įsigytas iš Sigma-Aldrich (Oak-Ville, ON), echinakozidas buvo įsigytas iš ChromaDex (Santa Ana, CA). Izoakteozidas buvo išskirtas iš P. psyllium L. (Li ir kt., 2005). C. deserticola buvo įsigyta iš Pekino TongRenTang medicinos parduotuvės (Kinija). Visi tirpikliai buvo HPLC klasės ir įsigyti iš Caledon Laboratories Ltd. (Georgetown, ON).

2.2. Mėginio paruošimas

C. deserticola (20 g) buvo ekstrahuota penkis kartus kambario temperatūroje po 12 valandų su 100 ml 80 procentų vandeninio etanolio. Kiekvieną kartą ekstrahavimo mišinys buvo filtruojamas per Whatman Nr. 1 filtravimo popierių (Whatman International Ltd., Maidstone, Anglija). Sujungtas filtras buvo sukoncentruotas iki 100 ml vakuume, esant < 40="" laipsnių.="" gautas="" vandeninis="" tirpalas="" buvo="" du="" kartus="" nuriebalintas="" po="" 100="" ml="" heksano,="" o="" po="" to="" penkis="" kartus="" iš="" eilės="" ekstrahuojamas="" po="" 100="" ml="" n-butanolio.="" n-butanolio="" sluoksniai="" buvo="" sujungti="" ir="" sukoncentruoti="" iki="" sausumo="" vakuume,="" esant="">< 40="" °c,="" ir="" gauti="" 2,2="" g="" n-butanolio="" ekstrakto.="" ekstraktas="" buvo="" laikomas="" -20="" laipsnių="" temperatūroje="" prieš="" hsccc="">

2.3. HSCCC atskyrimo procedūra

Paruošiamasis HSCCC buvo atliktas naudojant modelio CCC{{0}} didelės spartos priešpriešinės srovės chromatografiją (Pharma-Tech Research, Baltimorė, Merilandas, JAV). Šiame aparate buvo trys paruošiamieji ritės, sujungtos nuosekliai (bendras tūris, 325 ml). Aparato apsisukimų greitis gali būti reguliuojamas nuo 0 iki 2000 aps./min. HSCCC sistemoje buvo įrengtas HPLC siurblys (Pharma-Tech Research, Baltimorė, Merilandas, JAV), 450 modelio UV detektorius (Alltech, JAV), modelio L 120 E plokščias įrašymo įrenginys (Linseis Inc., Princeton Jct, JAV), frakcijų rinktuvas (Advantec MFS Inc., JAV) ir mėginio įpurškimo vožtuvas su 10-mL mėginio kilpa.

Etilo acetato-etanolio-vandens mišinys (5:0.5:4,5, v/v/v) buvo stipriai suplaktas dalijamajame piltuvėlyje ir paliekamas stovėti bei atskirti kambario temperatūroje. Dvi fazės buvo naudojamos HSCCC po to, kai jos pasiekė pusiausvyrą. Visa suvyniota kolona pirmiausia buvo užpildyta viršutiniu sluoksniu, kuris tarnauja kaip stacionari fazė. Tada apatinis sluoksnis (mobili fazė) buvo pumpuojamas į kolonėlės galą 1,5 ml/min srauto greičiu. Sukimosi greitis nustatytas 1050 aps./min. Mėginys (kiekvieną kartą apie 230 mg), ištirpintas 8 ml etilo acetato-etanolio-vandens mišinio (5:0,5:4,5, v/v/v), buvo įdėtas į įpurškimo vožtuvą, kai sistema pasiekė hidrodinaminę. pusiausvyra. Ši dvifazė tirpiklių sistema buvo parinkta pagal pasiskirstymo koeficientą (K), kuris buvo atitinkamai 0,87, 1,11 ir 1,32 akteozidui, izoakteozidui ir 20 acetillakteozidui. K reikšmė buvo to paties junginio viršutiniame ir apatiniame sluoksniuose esančių koncentracijų santykis, nustatytas HPLC metodu (2 pav.). Skystis iš kolonėlės išleidimo angos buvo nuolat stebimas UV detektoriumi esant 254 nm ir surenkamas į mėgintuvėlius su frakcijų rinktuvu, kiekvienam mėgintuvėliu nustatyta 4 min.

2.4. LC sąlygos

C. deserticola n-butanolio ekstrakte ir frakcijose, surinktose iš HSCCC atskyrimo, buvo naudojamas statinis automatinis mėginių ėmiklis ir fotodiodų matricos detektorius (DAD). Atskyrimas buvo atliktas Phenomenex ODS-C18 kolonėlėje (250 × 4,6 mm, 5 lm) su C18 apsaugine kolonele. Dvejetainę judriąją fazę sudarė acetonitrilas (tirpiklis A) ir vanduo, kuriame yra 2 procentai acto rūgšties (tirpiklis B). Visi tirpikliai buvo filtruojami per a

{{0}}.45 lm filtruokite prieš naudodami. Srauto greitis buvo palaikomas pastovus 1.{6}} ml/min. bendras veikimo laikas 25 min. Sistema buvo paleista naudojant gradiento programą: 0–20 min: nuo 90 procentų B iki 60 procentų B; 20–22 min.: nuo 60 procentų B iki 0 procentų B; ir 22–25 min., nuo 0 procentų B iki 90 procentų B. Mėginio įpurškimo tūris buvo 10 lL. Dominančios smailės buvo stebimos esant 320 nm DAD detektoriumi.

2.5. LC-ESI-MS eksperimentai

LC-MS eksperimentai buvo atlikti naudojant Finnigan LCQ DECA jonų gaudyklės masės spektrometrą (Thermo Finnigan, San Chosė, CA, JAV), aprūpintą elektropurškimo jonizacijos (ESI) šaltiniu. Mėginiai buvo analizuojami tomis pačiomis chromatografinėmis sąlygomis. Duomenims rinkti buvo naudojamas neigiamas modelis. Apvalkalų dujų ir pagalbinio srauto greičiai buvo nustatyti atitinkamai 96 ir 7 (savavališkas vienetas). Kapiliarinė įtampa buvo nustatyta ties 29 V, o temperatūra – 350 laipsnių. Įėjimo objektyvo įtampa buvo nustatyta ties 40 V, o daugiapolių RF amplitudė nustatyta ties 540 V. ESI adatos įtampa buvo valdoma ties 4,5 kV. Vamzdžio lęšio poslinkis buvo 16 V, daugiapolio lęšio 1 poslinkis buvo 8,20 V, o daugiapolio lęšio 2 poslinkis buvo 10,5 V. Elektronų daugiklio įtampa buvo nustatyta 980 V jonų aptikimui.

2.6. BMR identifikavimui

BMR spektrai buvo užfiksuoti Bruker Avance{0}} spektrometru (Bruker BioSpin Ltd., Miltonas, Kanada). Tik su 2 ir 5 junginiais (standartų nėra) buvo atlikti BMR eksperimentai. Mėginiai buvo ištirpinti CD3OD.

Veikliosios cistanche medžiagos: echinakozidas ir akteozidas

3. Rezultatai ir diskusija

Sėkmingas HSCCC atskyrimas daugiausia priklauso nuo tinkamos dviejų fazių tirpiklių sistemos, kuri užtikrina idealų pasiskirstymo koeficientą (K) maždaug 1 norimam junginiui. Tokia dvifazė sistema taip pat turėtų duoti pakankamai trumpą nusistovėjimo laiką (Chen, Games ir Jones, 2003; Foucault ir Chevolot, 1998; Oka, Oka ir Ito, 1991). Savo eksperimente mes pasirinkome keturias tirpiklių sistemų serijas pagal tikslinių junginių tirpumą C. deserticola. Koncentracijai kiekvienoje fazėje matuoti naudota HPLC, iš kurios buvo apskaičiuotos tikslinių junginių K reikšmės. Anksčiau buvo naudojamos dvi sistemos: etilo acetatas – n-butanolis – etanolis – vanduo (4:0,6:0,6:5, v/v/v/v) ir etilo acetatas – vanduo (1:1, t./t.). HSCCC, kad atskirtų akteozidą ir 20-acetilakteozidą

C. salsa ir akteozidas bei izoakteozidas iš P. Psyllium,

atitinkamai (Lei ir kt., 2001; Li ir kt., 2005). Nors pirmosios sistemos nusistovėjimo laikas buvo palyginti trumpas, ji prastai atskyrė C. deserticola PhG dėl mažų 1 ir 2 junginių K verčių ir didelių 3–5 junginių K verčių. Antrosios sistemos 1–4 junginių K vertės buvo labai mažos, o 5 junginio – labai didelės (1 lentelė). Modifikuota sistema, kurioje yra etilo acetatas – etanolis – vanduo (5:0,5:4,5, v/v/v), davė idealią K vertę 3–5 junginiams atitinkamai 0,87, 1,11 ir 1,32, ir lėmė gerą atskyrimą. iš šių trijų junginių (3A ir B pav.). Tačiau ši sistema buvo sukurta

per maža 1 ir 2 junginių K vertė, todėl abu junginiai kartu eliuuoja netoli tirpiklio fronto (1 frakcija 3A pav.). Tolesnis sistemos modifikavimas (etilacetatas–n-butanolis–etanolis–vanduo (0.5:0.5:0.1:1, v/v/v/) v) padidino 1 ir 2 junginių K reikšmes atitinkamai iki 0,52 ir 0,92, todėl buvo visiškai atskirta (3C pav.). 3A pav. parodytas HSCCC atskyrimas mėginys, kuriame yra 230 mg C. deserticola n-butanolio ekstrakto, naudojant etilo acetatą-etanolį-vandenį (5:0.5:4,5, v/v/v). Frakcijos, kurios buvo patvirtintos HPLC, kad juose būtų tik 3, 4 arba 5 junginiai, buvo sujungti atskirai, o tie, kurių sudėtyje yra 3 ir 4 junginių, buvo sujungti, liofilizuoti ir vėl paveikti HSCCC tolesniam atskyrimui (3B pav.). Aukščiau aprašytas HSCCC atskyrimas iš 1412 mg n-butanolio ekstrakto iš viso davė 14,6 mg, 30,1 mg ir 25,2 mg junginių 3–5. 3C pav. parodytas mėginio, kuriame yra 1 junginių, HSCCC atskyrimas. ir 2 (1 frakcija pirmojo atskyrimo metu), naudojant etilo acetatą – n-butanolį – etanolį – vandenį (0,5:0,5:0,1:1, v/v/ v/v). Iš viso 28,5 ir 1 Gauta 8,4 mg 1 ir 2 junginių. Liofilizuotų junginių 1–5 chromatografinis grynumas buvo didesnis nei 92,5 proc., kurie buvo tiesiogiai naudojami LC-ESI-MS ir BMR analizėms.

Preliminarus 1, 3 ir 4 junginių identifikavimas buvo pasiektas pagal sutampančius sulaikymo laikus ir UV spektrinius duomenis su autentiško echinakozido, akteozido ir izoakteozido sulaikymo laiku (2 pav.). 2 ir 5 junginiai nebuvo žinomi, tačiau visų penkių junginių UV spektrai buvo labai panašūs, o tai rodo panašias struktūrines savybes.

Norint toliau tirti šių penkių junginių struktūras, buvo bandoma atlikti LC-ESI-MSn eksperimentus, o rezultatai parodyti 4 pav. ir 2 lentelėje. Junginiai, susiję su smailėmis (1-5) 2 pav., demonstravo intensyvius deprotonuotus molekulinius jonus. [MH] – esant m/z atitinkamai 785, 799, 623, 623 ir 665, esant neigiamam režimui. Dimeriniai [2M H] jonai taip pat buvo pastebėti 1–4 smailėse 2 pav. Tai patvirtino, kad 1–5 smailių molekulinės masės yra atitinkamai 786, 800, 624, 624 ir 666. LC-MSN duomenys (2 lentelė) suteikė labai naudingos struktūrinės informacijos apie penkis PhG, pvz., neutralus eksperimentinės procedūros praradimas: maždaug 1 mg kiekvieno mėginio buvo pasverta 10 ml mėgintuvėlyje, į kurį po 1 ml kiekvienos fazės. buvo pridėta iš anksto subalansuotos dvifazės tirpiklių sistemos. Mėgintuvėlis buvo uždengtas ir stipriai purtomas 1 min., ir leidžiama stovėti, kol visiškai atsiskyrė. 100 l kiekvieno sluoksnio alikvotinė dalis buvo paimta ir atskirai išgarinama iki sausumo vakuume<40 °c.="" the="" residue="" was="" dissolved="" in="" 10="" ll="" methanol="" and="" analyzed="" by="" hplc="" for="" determining="" the="" partition="" coefficient="" (k)="" of="" compounds="" 1–5.="" the="" k="" value="" was="" expressed="" as="" the="" peak="" area="" of="" the="" target="" compound="" in="" the="" upper="" phase="" divided="" by="" that="" in="" the="" lower="">

1 smailės LC-ESI-MS parodyta 4A pav. Deprotonuotas molekulinis jonas [MH] – esant m/z 785, didelis gausumas ir dimerinė deprotonuota molekulė.jonas [2M H] – esant m/z 1571, buvo pastebėtas neigiamu režimu, o tai rodo, kad molekulinė masė yra 786, kuri buvo tokia pati kaip ir echinakozido. Tolesnis m/z 785 jonų eksperimento LC–MS2 tyrimas davė vieną pagrindinį dukterinį joną esant m/z 623 (4B pav.), kuris buvo gautas tiesiogiai iš m/z 785 praradus kofeoilo fragmentą arba heksozės fragmentą kaip [M 162 H]—. LC-MS3 spektras m/z 623 parodė du pagrindinius jonus, kai m/z yra 477 ir 461, ir du mažuosius jonus, kai m/z 315 ir 179 (3C pav., 2 lentelė). Masių skirtumai tarp m/z 623 ir fragmento jonų m/z 477 ir 461 buvo atitinkamai 146 ir 162, atitinkantys ramnozės vieneto ir gliukozės dalies arba kofeilo fragmento [M 162 H] praradimą. M/z 623 jonai taip pat prarado kafeoilo ir ramnozės dalį, kad susidarytų m/z 315 jonai. Jonas, kurio m/z yra 179, susidarė skilus kofeoilo daliai, o neigiamas krūvis liko kafeoilo fragmento dalyje. LC-ESI-MSN eksperimentas su autentišku echinakozidu parodė tą patį suskaidymo modelį. Todėl buvo patvirtinta, kad 1 smailė yra echinakozidas.

2 smailės atveju LC-ESI-MS parodė m/z 799 kaip deprotonuotą molekulinį joną [MH] – ir m/z 1599 kaip jo dimerinį joną, o tai rodo, kad molekulinė masė yra 800. Atliekant MS2 eksperimentus, m/z 799 jonai suformavo tris dukteris, kurių m/z 637, 623 ir 475 (1 lentelė). Jonas, kurio m/z 637, vėl buvo pagamintas tiesiogiai iš pirminio m/z 799 jono dėl neutralaus kofeoilo [M-162-H] arba gliukozės dalies [M-162-H] praradimo. Jonas, esant m/z 623, atsirado dėl CH2 radikalo praradimo. Jonas, kurio m/z 475, susidarė dėl neutralaus kafioilo fragmento [M 162 H] ir gliukozės dalies praradimo iš pirminio jono. MS3 eksperimentas su m/z 637 sukūrė tris jonus esant m/z 619, 491 ir 475, atitinkančius atitinkamai vieno vandens, ramnozės vieneto ir gliukozės dalies nuostolius. MS3 tyrime m/z 623 dukterinis jonas gamino m/z 461 ir 315, kurie vyko tais pačiais suskaidymo būdais kaip ir echinakozidas, kaip aptarta aukščiau. LC-ESI-MSN duomenys patvirtino preliminarų 2-osios smailės identifikavimą kaip cistanozidą A. Abiejose smailėse buvo toks pat [MH]-jonas esant m/z 623, o dimeras - m/z 1247 esant neigiamam režimui (1 lentelė). jie galbūt yra izomerai, kurių molekulinė masė tokia pati

624, tas pats kaip akteozidas ir izoakteozidas. [MH]- jonų MS2 spektrai taip pat parodė tą patį dukterinį joną, kurio m/z 461, o tai rodė kafioilo dalies praradimą iš pirminio jono m/z 623 (1 lentelė). Dviejų junginių MS3 spektrai buvo panašūs. 3 smailės atveju jono MS3 spektras, esant m/z 461, sudarė tris jonus, esant m/z 315, 161 ir 135. M/z 315 susidaro praradus ramnozę, kaip aptarta anksčiau. Jonas m/z 161 susidarė skilus kaffoilo daliai, o po to buvo prarastas vienas vanduo; krūvis liko ant kofeoilo dalies. Jonas, kurio m/z yra 135 [aglikonus 18 H], atsirado skaidant glikozidinę jungtį C1 padėtyje, papildomai praradus vieną vandenį, todėl aglikono fragmento krūvis liko. 4 smailės MS3 spektras buvo toks pat kaip ir 3 smailės, išskyrus trūkstamą joną, kai m/z 135. Šių dviejų junginių molekuliniai jonai ir fragmentacijos modeliai atitinka literatūros duomenis apie akteozidą ir izoakteozidą (Wang ir kt. ., 2000), nors Wang ir kt. buvo rastas papildomas jonas m/z 153, o cistanozido A ir 20-acetilaktozido protonų BMR duomenys buvo priskirti [aglikonui H]. (Wang ir kt., 2000). Šis jonas galėjo būti nestabilus ir netekęs vandens, kad mūsų eksperimente gautų m/z 135. Remiantis MS duomenimis ir sutampančiomis 3 ir 4 smailių sulaikymo trukmėmis su standartais, jie atitinkamai identifikuojami kaip akteozidas ir izoakteozidas.

5 smailės LC-ESI-MS duomenys pateikti 2 lentelėje. Deprotonuotas molekulinis jonas [MH]- (m/z 665) buvo vienintelis jonas, rastas esant neigiamam režimui, o tai reiškia, kad molekulinė masė yra 666. Trys dukteriniai jonai MS2 eksperimente buvo stebimi m/z 623, 503 ir 461 (2 lentelė). Dukteriniai jonai, kurių m/z 623 ir 503, susidarė tiesiogiai iš pirminio jono, atitinkamai praradus COCH2 grupę ir kofeoilo fragmentą. Jonas, kurio m/z yra 461, atsirado dėl kofeoilo ir COCH2 fragmento [M 162 42 H] praradimo iš pirminio jono. MS eksperimente m/z 623 davė m/z 461, o m/z 503 davė tris jonus esant m/z 485, 461 ir 315. Dukterinio jono MS3 spektras m/z 461 davė du jonus ties 443 ir 315. Palyginę 5 smailės LC–MSN fragmentacijos modelį su kitais šiame tyrime nurodytais junginiais ir su kitais pranešimais (Li ir kt., 2005; Wang ir kt., 2000), padarėme išvadą, kad 5 smailė buvo struktūriškai labai susijusi. į akteozidą, vienintelis skirtumas yra COCH3 vienetas R3 padėtyje. Todėl preliminarus 5 smailės tapatumas buvo suteiktas kaip 20-acetilaktozidas (1 pav.).

Dviejų preliminariai identifikuotų junginių, smailės 2 (kaip cistanozidas A) ir smailės 5 (kaip 20-acetilakteozidas), struktūros buvo patvirtintos 1H BMR. Visų 2 ir 5 junginių protonų cheminiai poslinkiai ir jungimosi konstantos, kaip parodyta 3 lentelėje, sutapo su atitinkamais cistanozido A ir 20-acetilaktozido BMR duomenimis (Kobayashi ir kt., 1984, 1987). . Šiame tyrime taip pat buvo atlikti 2D BMR eksperimentai (ilgojo nuotolio COSY, ROESY ir CH koreliacija) ir jie dar labiau patvirtino identifikavimą (duomenys nerodomi).

Akteozidas iš Cistanche deserticola

4. Išvados

Šiame darbe HSCCC buvo sėkmingai panaudotas echinakozido, cistanozido A, akteozido, izoakteozido ir 20-acetilaktozido išskyrimui ir gryninimui iš C. deserticola n-butanolio ekstrakto. Todėl tai yra patikrinta priemonė pusiau paruošiamajam bioaktyviųjų medžiagų atskyrimui. Tuo tarpu penkių C. deserticola PhG struktūros buvo ištirtos naudojant LC-ESI-MSN; buvo rasti kai kurie būdingi PhG bruožai, kurie leido nustatyti funkcines grupes struktūrose. Todėl LC-ESI-MSN metodas yra galingas įrankis greitai identifikuoti feniletanoidus ir jų glikozidus C. deserticola ekstraktuose, ypač kai tai pagrįsta BMR duomenimis.

Pripažinimas

Autoriai norėtų padėkoti Jun Gu iš Branduolinio magnetinio rezonanso centro, Gelfo universiteto Ontarijo valstijoje, Kanadoje, už pagalbą atliekant BMR eksperimentus. Šis projektas buvo iš dalies paremtas Kinijos Jilino provincijos (Nr. 20060904) finansavimu.

Nuorodos

Chen, LJ, Games, DE ir Jones, J. (2003). Keturių flavonoidinių sudedamųjų dalių išskyrimas ir identifikavimas iš Oroxylum Indicum sėklų greitosios priešsrovinės chromatografijos būdu. Journal of Chromatography A, 988, 95–105.

Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., Ni, W. ir Liu, CZ (2005). Cistanche deserticola ląstelių suspensijos kultūros: feniletanoidų glikozidų biosintezė ir antioksidacinis aktyvumas. Process Biochemistry, 40, 3119–3124.

Foucault, AP ir Chevolot, L. (1998). Priešpriešinės srovės chromatografija: prietaisai, tirpiklio parinkimas ir kai kurie naujausi natūralaus produkto valymo pritaikymai. Journal of Chromatography A, 808, 3–22.

Gross, G.-A., Lahloub, MF, Anklin, C., Schulten, H.-R. ir Sticher, O. (1988). Teukriozidas, fenilpropanoido glikozidas iš Teucrium Chamaedrys. Fitochemija, 27, 1459–1463.

Jis, ZD, Lau, KM, Xu, HX, Li, PC ir Butas, PPH (2000). Antioksidacinis feniletanoidinių glikozidų aktyvumas iš Brandisia. Etnofarmakologijos žurnalas, 71, 483–486.

Kobayashi, H., Karasawa, H. ir Miyase, T. (1984). Cistanchis Herba sudedamųjų dalių tyrimai. III. Naujų fenilpropanoidinių glikozidų išskyrimas ir struktūros, Cistanosidas A ir B. Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 32, 3009–3014.

Kobayashi, H., Oguchi, H., Takizawa, N., Miyase, T., Ueno, A., Usmanghani, K. ir kt. (1987). Nauji feniletanoidiniai glikozidai iš Cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. FI. Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 35, 3309–3314.

Lei, L., Yang, FQ, Zhang, TY, Tu, PF, Wu, LJ ir Ito, Y. (2001). Paruošiamasis akteozido ir 2'-acetilo akteozido išskyrimas ir gryninimas iš Cistanches salsa (CA Mey) G. Beck naudojant priešsrovės chromatografiją. Journal of Chromatography A, 912, 181–185.

Li, L., Tsao, R., Liu, ZQ, Liu, SY, Yang, R., Young, JC ir kt. (2005). Akteozido ir izoakteozido išskyrimas ir išgryninimas iš Plantago psyllium L. didelės spartos priešsrovės chromatografija. Journal of Chromatography A, 1063, 161–169.

Li, LL, Wang, XW ir Wang, XF (1997). Antilipidų peroksidacija ir antiradikalinis glikozidų veikimas žolelėse Cistanches. China Journal of Chinese Materia Medica, 22, 364–367.

Li, J., Wang, PF, Zheng, RL, Liu, ZM ir Jia, ZJ (1993). Fenilpropanoidinių glikozidų apsauga nuo Pedicularis nuo oksidacinės hemolizės in vitro. Planta Medica, 59, 315–317.

Lu, MC (1998). Cistanche deserticola raminamojo poveikio tyrimai. Etnofarmakologijos žurnalas, 59, 161–165.

Nishimura, H., Sasaki, H., Inagaki, N., Chin, M. ir Mitsuhashi, H. (1991). Devyni fenetilo alkoholio glikozidai iš Stachys szeboldzz. Fitochemija, 30, 965–969.

Oka, F., Oka, H. ir Ito, Y. (1991). Sisteminga tinkamų dviejų fazių tirpiklių sistemų paieška didelės spartos priešpriešinės srovės chromatografijai. Journal of Chromatography, 538, 99–108.

Ravn, H., Nishibe, S., Sasahara, M. ir Li, X. (1990). Fenoliniai junginiai iš Plantago Asiatica. Fitochemija, 29, 3627–3631.

Schapoval, EES, Winter de Vargas, MR, Chaves, CG, Bridi, R., Zuanazzi, JA ir Henriques, AT (1998). Stachytarpheta cayennensis ekstraktų ir išskirtų junginių priešuždegiminis ir antinociceptinis poveikis. Etnofarmakologijos žurnalas, 60, 53–59.

Shoyama, Y., Matsumoto, M. ir Nishioka, I. (1987). Fenoliniai glikozidai iš sergančių Rehmannia glutinosa Var. Purpurea. Fitochemija, 26, 983–986.

Wang, XW, Jiang, XY, Wu, LY ir Wang, XF (2001). Cistanche deserticola glikozidų šalinamasis poveikis laisviesiems radikalams ir jo apsauga nuo OH sukeltų DNR pažeidimų in vitro. Kinijos farmakologijos žurnalas, 36, 29–31.