Kloto trūkumas sustiprina hipoksijos sukeltą IFN ekspresiją / dėl RIG-I reguliacijos inkstuose
Mar 25, 2022
Abstraktus Hipoksija yra dažnas kelias į galutinės stadijos progresavimąinkstų liga.Retinoinės rūgšties indukuojamas genas I (RIG-I) koduoja RNR helikazę, kuri atpažįsta virusus, įskaitant SARS-CoV2, kuris yra atsakingas už interferono (IFN)-a/ gamybą, kad būtų užkirstas kelias virusinės infekcijos plitimui. Neseniai RIG-l aktyvacija buvo nustatyta hipoksinėmis sąlygomis, ir įrodyta, kad kloto trūkumas sustiprina RIG-I aktyvavimą pelių smegenyse. Tačiau šių funkcijų vaidmuo inkstų uždegime lieka sunkiai suprantamas. Čia, atliekant tyrimą in vitro, RIG-I ir IFN-a/ ekspresija buvo tiriama normaliose žiurkėseinkstas(NRK)-52E ląstelės, inkubuotos hipoksinėmis sąlygomis (1 proc. O2). Tada siRNR, nukreipta į RIG-I arba sumaišyta siRNR, buvo transfekuota į NRK52E ląsteles, kad būtų ištirta RIG-I ir IFN-a / ß ekspresija hipoksinėmis sąlygomis. Mes taip pat ištyrėme RIG-I ir IFN-a / ekspresijos lygius 33 žmogaus organizmeinkstasbiopsijos mėginiai, kuriems diagnozuota lgA nefropatija. In Vivo tyrime sukėlėme inkstų hipoksiją, 10 minučių suspaudę inkstų arteriją laukinio tipo pelėms (WT pelėms) ir Klotho-knockout pelėms (KIT / pelėms). Inkubavimas hipoksinėmis sąlygomis padidino RIG-lI ir IFN-a / ekspresiją NRK52E ląstelėse. Jų reguliavimas buvo slopinamas NRK52E ląstelėse, transfekuotose siRNR, nukreipta į RIG-I. Pacientams, sergantiems IgA nefropatija, imunohistocheminis inkstų biopsijos mėginių dažymas parodė, kad RIG-I ekspresija koreliuoja su IFN-a/ (r=0.57,P).<0.001, and="" r=""><0.001, respectively).="" the="" expression="" levels="" of="" rig-i="" and="" ifn-a/β="" were="" upregulated="" in="">inkstushipoksinių WT pelių, o hipoksinėms pelėms buvo pastebėtas tolesnis reguliavimas. Šie radiniai rodo, kad hipoksija skatina IFN-a/ ekspresiją, padidindama RIG-I reguliavimą, o kloto trūkumas sustiprina šią hipoksijos sukeltą ekspresijąinkstai.
Raktiniai žodžiai:inkstų liga; inkstų ląstelės; inkstų pakeitimas; inkstų pažeidimas; inkstas
CISTANCHE PAGERINS INKSTU/INKSTŲ FUNKCIJĄ
ĮvadasLėtinisinkstų liga(CKD) 2017 m. visame pasaulyje sirgo 697,5 milijono žmonių [1], todėl ji yra gerai žinoma kaip pagrindinė sveikatos problema. Siekiant sulėtinti CKD progresavimą, klinikinėje aplinkoje naudojami renino-angiotenzino-aldosterono sistemos (RAAS) inhibitoriai [2,3]. Tačiau jų teigiamas poveikis yra ribotas ir daugeliui pacientų galiausiai prireikia pakaitinės inkstų terapijos[4]. Patologiškai lėtinis uždegimas ir intersticinė fibrozė yra bendri ŠKL požymiai, nepaisant pirminės ligos [5]. Nors transformuojantis augimo faktorius (TGF){10}} vaidina pagrindinį vaidmenį plėtojant intersticinę fibrozę [6-8], ankstesni tyrimai parodė, kad uždegiminių ląstelių infiltracija yra atsakinga už TGF gamybą{12} } [9]. Šie radiniai rodo, kad uždegimas yra intersticinės fibrozės įvykis ir kad uždegimas yra kandidatas į LŠL gydymo tikslą.
Hipoksija yra būklė, kai nepakankamas deguonies kiekis patenka į audinius. Kaip ląstelių atsakas į hipoksiją, hipoksijos sukeliami veiksniai (HIF) atlieka svarbų vaidmenį užkertant kelią audinių pažeidimams [10-12]. Tačiau sunki hipoksija sukelia ūmias kraujagyslių ligas, tokias kaip insultas [13], krūtinės angina [14] ir periferinių arterijų liga [15]. Pastaruoju metu buvo pranešta, kad lėtinė hipoksija, tokia kaip miego apnėja, taip pat prisideda prie įvairių ligų išsivystymo [16]. Kalbant apieinkstasPranešama, kad hipoksija sustiprėja progresuojant CKD stadijai ir šiuo metu laikoma įprasta patofiziologija, sukeliančia galutinę stadiją.inkstų liga[17]. Kaip minėta pirmiau, uždegimas laikomas įvykiu prieš srovę, todėl mechanizmas, kuriuo hipoksija sukelia uždegimą, turėtų būti išaiškintas molekuliniu lygiu. Uždegimui būdingas skausmas, karštis, paraudimas, patinimas ir funkcijos praradimas[18]. Tačiau jis iš esmės padeda pašalinti pradinę ląstelių pažeidimo priežastį ir išvalyti nekrozines ląsteles bei pažeistus audinius. Bet kokiu atveju uždegimas nėra specifinis atsakas, todėl manoma, kad įgimtas imunitetas daugiausia dalyvauja pradiniame uždegimo procese gaminant interferoną (IFN)- / [19]. Tarp veiksnių, susijusių su įgimtu imunitetu, retinoinės rūgšties indukuojamas genas I (RIG-I) yra atsakingas už imuninį atsaką į virusines infekcijas[20. Pažymėtina, kad naujausi tyrimai parodė, kad hipoksija padidina RIG-I ekspresijos reguliavimą smegenyse ir kepenyse, todėl susidaro IFN- / [21, 22]. Tačiau hipoksijos vaidmuo RIG-I tarpininkaujant IFN-/B ekspresijaiinkstaslieka nepastebimas.
Pirmiausia buvo pranešta, kad Klotho yra senėjimą stabdantis baltymas [23]. Iš tiesų, pelių, kurioms trūksta kloto, gyvenimo trukmė yra sutrumpinta, kartu su fenotipais, primenančiais žmogaus senėjimą. Priešingai, kloto transgeninių pelių gyvenimo trukmė pailgėja [24]. Kalbant apie renoprotekcinį poveikį, buvo nustatyta, kad eksperimentiniuose inkstų ligų modeliuose kloto trūkumas sustiprina inkstų pažeidimus, o per didelė kloto ekspresija arba kloto baltymo vartojimas jį pagerina [25]. Kloto baltymas egzistuoja trijų formų: membraninis, sekretuojamas ir tarpląstelinis koto. Pranešama, kad tarpląstelinis klotas slopina RIG-I ekspresiją kartu su uždegimu [26], todėl kyla tikimybė, kad kloto trūkumas padidina hipoksijos sukeltą RIG-I ir IFN- / in reguliavimą.inkstai.Šie radiniai leido daryti prielaidą, kad RIG-I ir IFN-/ ekspresija padidėjo hipoksinėmis sąlygomis inkstų kanalėlių ląstelių linijoje ir kad jų hipoksijos sukeltas padidėjęs reguliavimas sustiprėjo pelėms, kurioms buvo išmuštas klotas (KI{4}}). pelėms). Šiame tyrime parodome, kad normalioms žiurkėms hipoksija padidina RIG-I ir IFN-a /inkstasląstelės (NRK{0}}E) ir pelių inkstai. Taip pat parodome, kad RIG-I yra atsakingas už hipooksijos sukeltą IFN-c/B reguliavimą.inkstasmėginių iš pacientų, kuriems diagnozuota IgA nefropatija, nustatyta, kad RIG-I ekspresija teigiamai koreliuoja su IFN- / . Galiausiai, hipoksijos sukeltas RIG-I ir IFN- / reguliavimas buvo sustiprintas KI-/- pelėms. Šie radiniai rodo, kad kloto trūkumas sustiprina hipoksijos sukeltą IFN- / ekspresiją, nes padidėja RIG-I reguliavimas.inkstai.
CISTANCHE PAGERINS INKSTŲ/INKSTŲ NEAPTARKIMĄ
Medžiagos ir metodai GyvūnaiC57BL/6J laukinio tipo (WT) pelių patinai (8 savaičių amžiaus ir sveriantys 20-25 g) buvo gauti iš Charles River Laboratories Japan (Jokohama, Japonija). Pelių patinai (6 savaičių amžiaus ir maždaug 15 g svorio) buvo įsigyti iš CLEA Japan, Inc. Pelės buvo laikomos Hirosimos universiteto Laboratorinių gyvūnų mokslo institute (Hirošima, Japonija), kaip aprašyta anksčiau [27]. Visi eksperimentai buvo patvirtinti Hirosimos universiteto Institucinis gyvūnų priežiūros ir naudojimo komitetas (leidimų numeriai: A19-158 ir 2019-156) ir buvo atlikti pagal Nacionalinių sveikatos institutų (NIH) laboratorinių gyvūnų naudojimo gaires. WT ir KI-'pelės buvo suskirstytos į kontrolinę grupę arba hipoksijos grupę (n=5kiekvienoje grupėje). Hipoksinės sąlygos buvo sukeltos užspaudus kairiąją inkstų arteriją 1 0 min. taikant bendrąją nejautrą (0,3 mg/kg medetomidino, 4 mg/kg midazolamo ir 5 mg/kg butorfanolio)[28]. Kontrolinės grupės pelėms buvo atlikta fiktyvi operacija, kuri buvo tokia pati kaip ir hipoksijos grupės pelėms, išskyrus arterijų perrišimo trūkumą. Po 10 minučių hipoksijos pelėms buvo atlikta širdies punkcija ir jų mirtis.inkstusbuvo nuimti. Hipoksijainkstasbuvo patvirtinta Western blot metodu eritropoetino ekspresijai nustatyti (S1 pav.).
Ląstelių kultūrosNormali žiurkėinkstas(NRK)-52E ląstelės buvo įsigytos iš Amerikos tipo kultūros rinkinio (Manassas, VA, JAV). galvijų serumas (FBS) (Nichirei Bioscience, Tokijas, Japonija) ir penicilinas / streptomijos cinas (Nacalai Tesque, Kiotas, Japonija). Šie cll buvo sėjami į 10 cm kultūrinius indus. Išaugusios iki subkonfluencijos ląstelės buvo inkubuojamos 1 procento O2 modulinėje inkubatoriaus kameroje (MIC 101; Billups-Rothenberg, San Diego, CA, JAV) 30, 60, 90 ir 120 min. Buvo paruošti ir paveikti visų ląstelių lizatai. į Western blot analizę. NRK-52E ląstelių hipoksija buvo patvirtinta HIF-1 ekspresijos Western blot metodu (S2 pav.).
RIG-I siRNR transfekcijaNRK52E ląstelės buvo transfekuotos 20 nM siRNR, nukreipta į RIG-I (RSS311418: Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, JAV) arba neigiamą kontrolinę siRNR (4390843; Applied Biosystems, Waltham, MA, JAV), naudojant Lipofectamine 2000 ReagentThe Transfection. , pagal gamintojo instrukcijas. Po 43-45 val. kai kurios iš šių ląstelių buvo inkubuojamos hipoksinėmis sąlygomis (1 proc. O) 30 min., kad būtų įvertintas RIG-I. Kitos ląstelės buvo pakeistos į šviežią terpę. Po 24 valandų šios ląstelės buvo inkubuojamos hipoksinėmis sąlygomis (1 proc. O2) 60 ir 120 min., siekiant patvirtinti IFN-a/ . Viso ląstelių lizatai buvo paruošti ir jiems buvo atlikta Western blot analizė.
Western blot analizėMėginių paėmimas ir Western blot buvo atlikti pagal anksčiau aprašytus metodus[29]. Triušio monokloninis anti-RIG-I antikūnas (#3743S; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, JAV), triušio polikloninis anti-IFN- 11 antikūnas (bs-7023R; Bioss Anti-bodies, Woburn, MA, JAV), triušio polikloninis anti-IFN-antikūnas (GTX37658; GeneTex, Irvine, CA, JAV), triušio monokloninis anti-RIG-I antikūnas (=700366; Invitrogen, Carlsbad, CA, JAV), triušio polikloninis antikūnas anti-IFN- 2 antikūnas (ab193055; Abcam, Kembridžas, JK), triušio polikloninis anti-IFN antikūnas (PA5-20390; Invitrogen), žiurkių monokloninis antikūnas prieš žmogaus kloto (KO603; TransGenic, Fukuoka) , Japonija), buvo naudojami pelių monokloniniai anti- -aktino antikūnai (A5316; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, JAV) ir pelių monokloniniai anti- -tubulino antikūnai (T9026; Sigma-Aldrich). kaip pirminiai antikūnai. Kaip antriniai antikūnai buvo naudojami krienų peroksidaze konjuguotas ožkos anti-triušio imunoglobulinas G (Dako, Glostrup, Danija) ir ožkos anti-pelės imunoglobulinas G (Dako). Signalams aptikti buvo naudojama SuperSignal West Dura ir Pico sistema (Thermo Fisher Scientific). Kiekvienos juostos intensyvumas buvo matuojamas ImageJ programine įranga (1.47y versija; Nacionalinis sveikatos institutas, Bethesda, MD, JAV) ir normalizuotas iki -aktino arba -tubulino lygio.
CISTANCHE PAGERINS INKSTŲ/INKSTŲ LIGĄ
Pelės inkstų audinio imunohistocheminė analizėImunohistocheminis dažymas buvo atliktas pagal anksčiau aprašytus metodus [27]. Kaip pirminiai antikūnai buvo naudojami šie produktai: triušio monokloninis anti-RIG-I antikūnas (#700366; Invitrogen), triušio polikloninis anti-IFN- 2 antikūnas (ab193055; Abcam), triušio polikloninis anti-IFN-antikūnas ( PA5-20390; Invitrogen) ir žiurkės monokloninis antikūnas prieš žmogaus kloto antikūnus (KO603; TransGenic).RIG-I-, IFN-a/ - ir klototeigiamos sritys buvo kiekybiškai įvertintos kaip 20 atsitiktinai atrinktų laukų su vidurkiu. ImageJ programinė įranga.
Klinikinių mėginių paėmimas ir etikos pareiškimasInkstų mėginiai buvo paimti atliekant inkstų biopsiją Hirosimos universitetinėje ligoninėje nuo 2014 m. rugpjūčio mėn. iki 2016 m. lapkričio mėn. iš 33 pacientų, kuriems buvo diagnozuota IgA nefropatija. Šis tyrimas atitiko Helsinkio deklaracijoje nurodytus principus ir buvo patvirtintas Hirosimos universiteto (E-1718) etikos komiteto. Informuotas sutikimas buvo gautas atsisakius svetainėje (httns:/inzounaika). Hirosima-uaciplresearchl atsisakymas.html).
Žmogaus inkstų audinio imunohistocheminė analizėImuninis dažymas buvo atliktas pagal anksčiau aprašytus metodus [27]. Buvo naudojami šie pirminiai antikūnai: triušio monodoninis anti-RIG-I antikūnas (#700366; Invitrogen), pelės monokloninis anti-IFN antikūnas (sc-373757; Santa Cruz Biotechnology, Dalasas, Teksasas, JAV) ir triušis. polikloninis anti-IFN-antikūnas (PA5-20390; Invitrogen), RIG-I ir IFN-a/-teigiamos sritys buvo kiekybiškai įvertintos kaip penkių atsitiktinai atrinktų laukų vidurkis naudojant Image] programinę įrangą.
Statistinė analizėRezultatai pateikiami kaip vidurkis ± standartinis nuokrypis (SD). Koreliacijos buvo apskaičiuotos naudojant vienamatę regresinę analizę. Daugkartiniams palyginimams naudojome vienpusę dispersijos analizę (ANOVA), po kurios buvo atliktas Stjudento t testas su Bonferroni korekcija. Skirtumai tarp dviejų grupių buvo analizuojami Stjudento t-testu.P<0.05 was="" considered="" as="" statistically="">
Rezultatai:Hipoksija padidina RIG-I ir IFN-a/ reguliavimą inkstų epitelio ląstelių žiurkės ląstelių linijojeNorėdami nustatyti hipoksijos poveikį RIG-I ir IFN-a/ ekspresijai in vitro, atlikome šių baltymų Western blot analizę NRK-52E ląstelėse, kultivuotose hipoksinėmis sąlygomis. RIG-I baltymų kiekis pasiekė aukščiausią lygį po 30 min., o po to palaipsniui mažėjo NRK-52E ląstelėse, veikiant hipoksinei stimuliacijai (1A pav.). IFN-/ß kiekis padidėjo ir aukščiausią tašką pasiekė atitinkamai po 120 ir 60 min. -52E ląstelės su hipoksiniu stimuliavimu (Eig 1Band1C). RIG-I numušimas sumažina IFN-a/ ekspresiją NRK52E ląstelėse, kuriose yra hipoksija. Norėdami įvertinti, ar RIG-I dalyvauja IFN-/raiškoje hipoksinėmis sąlygomis, ištyrėme jų ekspresiją NRK-52E ląstelėse, transfekuotose RIG-I siRNR arba neigiamas
kontroliuoti siRNR. Pirmiausia patvirtinome RIG-siRNR numušimo efektą NRK-52E ląstelėse. RIG-I Western blot atskleidė, kad RIG-I siRNR sumažino RIG-I ekspresiją NRK-52E ląstelėse su hipoksine stimuliacija arba be jos (Eig 2A). Toliau ištyrėme hipoksijos sukelto RIG padidėjimo vaidmenį. -I IFN-/B ekspresijoje NRK{10}}E ląstelėse naudojant RIG-I siRNR arba neigiamą kontrolę. RIG-siRNR slopino IFN- / ekspresiją NRK-52Eląstelėse (Eig2Band2C).
RIG-I koreliuoja su IFN ekspresijos lygiais / žmogaus inkstų mėginiuose su IgA nefropatijaIštyrėme, ar RIG-I ekspresijos lygis yra susijęs su IFN-a/ inkstų biopsijos mėginiuose, paimtuose iš pacientų, sergančių IgA nefropatija (n=33). Išsamios šių pacientų klinikinės charakteristikos pateiktos S1 lentelėje. Imunohistocheminis RIG-I ir IFN- / dažymas atskleidė jų ekspresiją glomeruluose ir inkstų kanalėliuose (3A pav.) ir parodė, kad RIG-I teigiamai koreliuoja su IFN-o/ (r=0.57,P).<0.001, and="" r=""><0.001, respectively)(eig="">
Hipoksija nekeičia kloto ekspresijos lygio WT ir K{0}}/ pelėseNorėdami nustatyti hipoksinės stimuliacijos poveikį kloto ekspresijai in vivo, ištyrėme jo ekspresiją WT ir K- / pelėse su 10 minučių hipoksine stimuliacija arba be jos. Western blot ir imunohistocheminis dažymas atskleidė, kad kloto ekspresija nesiskyrė tarp WT pelių su hipoksija ir be jos ir kad kloto ekspresija nebuvo pastebėta KIT/pelėse, nepaisant hipoksinės stimuliacijos buvimo ar nebuvimo (Eig 4A ir 4B). WT pelėms klotho. baltymas buvo nudažytas kanalėlių ląstelių citoplazmoje (4B pav.).RIG-I ekspresija sustiprėja hipoksinėmis sąlygomis K ~ pelėms.Pranešama, kad tarpląstelinis klotas suteikia galimybę slopinti RIG-I sukeltą uždegimą, todėl ištyrėme RIG-I ekspresijos lygį ir lokalizaciją hipoksijos metu.inkstusWT ir Kl−/− pelių. Western blot atskleidė, kad RIG-I ekspresija padidėjo WT pelėms esant hipoksinei stimuliacijai ir kad ji buvo sustiprinta Kl - / - pelėms (5A pav.). Imunohistochemija parodė, kad RIG-I teigiamas plotas padidėjo Kl - / - pelėms, o tai buvo panašu į rezultatus, gautus atliekant Western blot (5B pav.).
Hipoksinėmis sąlygomis KI--pelėms IFN yra sureguliuotasNorėdami nustatyti hipoksijos poveikį a ekspresijai wvo, ištyrėme jo ekspresijos lygį ir lokalizaciją hipoksinėse WT ir KI pelėse. Western blot atskleidė, kad IFN ekspresija padidėjo WT pelėms esant hipoksinei stimuliacijai ir kad ji buvo toliau reguliuojama pelėms (6A pav.). Imunohistocheminis dažymas taip pat atskleidė, kad IFN- -teigiamas plotas daugiausia buvo stebimas kanalėlių ląstelėse ir kad IFN ekspresijos lygis parodė tokią pačią tendenciją kaip ir Western bloting (6B pav.).
K1T-/pelėms IFN padidėja hipoksinėmis sąlygomisBe IFN-c, mes ištyrėme IFN-Bin hipoksinio WT ir pelių ekspresijos lygį ir lokalizaciją. Remiantis Western blotting rezultatais, IFN ekspresija padidėjo WT pelėms esant hipoksinei stimuliacijai, o tolesnis padidėjimas buvo pastebėtas KIT / pelėms (7A pav.). Kiekybiškai įvertinus IFN- -teigiamą plotą, IFN ekspresijos lygis padidėjo KI-/- pelėse, palyginti su WT' pelių (7B pav.).
stebimas Kl-/- pelėms, nepaisant hipoksinės stimuliacijos. Mes parodėme, kad inkstų hipoksija padidino RIG-I ir IFN- / ekspresiją ir kad jų ekspresija dar labiau sustiprėjo Kl-/- pelėse. Šie radiniai leido manyti, kad kloto trūkumas sustiprino hipoksijos sukeltą RIG-I ekspresiją, todėl padidėjo IFN- / reguliavimas. Mes nustatėme, kad hipoksijos sukelta RIG-I ir IFN- / ekspresija tiek in vitro, tiek in vivo tyrimuose. Kad prisitaikytų prie hipoksinių sąlygų, HIF stabilizuojamas ir veikia kaip transkripcijos faktorius [30]. Ankstesniame tyrime buvo pranešta, kad RIG-I dalyvauja HIF indukuojamose molekulėse. Tačiau mes negalėjome nustatyti, kad RIG-I yra HIF efektorius. Be virusinės infekcijos, hipoksinėmis sąlygomis padidėja RIG-I ekspresija [31]. Nors ankstesni tyrimai pranešė, kad hipoksija paveikia kanalėlių epitelio ląsteles, endotelio ląsteles, pericitus, fibroblastus, uždegimines ląsteles ir progenitorines ląsteles inkstuose [32, 33], mes parodome, kad RIG-I reguliavimas daugiausia buvo stebimas pelių kanalėlių epitelio ląstelėse. su hipoksine stimuliacija, taip pat pacientams, sergantiems IgA nefropatija. Kadangi inkstų kanalėliai yra laikomi transuretrinių patogenų patekimo vieta [34], RIG-I gali atlikti pagrindinį vaidmenį kanalėlių epitelio ląstelių imuniniame atsake hipoksinėmis sąlygomis. Įgimtą imuninį atsaką suaktyvina ne tik mikroorganizmai, bet ir pavojaus signalai iš pažeistų, sužalotų ar įtemptų ląstelių [35]. Šiame tyrime parodėme, kad hipoksijos sukelta RIG-I ekspresija dalyvavo gaminant IFN- / žiurkių inkstų kanalėlių ląstelių linijoje. Pateikti duomenys rodo, kad RIG-I ekspresija veikia kaip įgimta citozolio imuninė sistema, reaguojant į hipoksinį stresą ir virusinę infekciją. Ankstesniuose tyrimuose buvo aprašyta, kad hipoksija sustiprėja LŠL išsivystymo metu, nepaisant pirminės ligos, ir kad hipoksija prisideda prie inkstų pažeidimo progresavimo [17]. Klinikiniame tyrime, naudojant nuo kraujo deguonies lygio priklausomą magnetinio rezonanso tomografiją, inkstų hipoksija ne tik sustiprėjo progresuojant LIL, bet ir prognozavo tokį progresavimą [36]. Taigi, hipoksija šiuo metu laikoma įprastu galutinės stadijos progresavimo keliuinkstų liga, todėl hipoksijos sukeltas uždegimas turėtų būti terapinis tikslas slopinti CKD progresavimą.
Mes parodėme, kad hipoksija skatina IFN- / gamybą, kuri priskiriama 1 tipo interferonams. 1 tipo interferonai iš esmės slopina viruso replikaciją [37] ir priešinasi hipoksijos sukeltai imunosupresijai [21, 22]. Tačiau iki šiol atlikti tyrimai parodė, kad 1 tipo interferonai skatina natūralių žudikų ląstelių aktyvavimą, vaidina svarbų vaidmenį ne tik pašalinant virusu užkrėstas ląsteles, bet ir pažeidžiant audinius [38]. Tiesą sakant, ankstesniuose tyrimuose buvo pranešta, kad RIG-I prisideda prie įvairių organų, tokių kaip plaučiai, uždegimo [39],inkstas[40] ir nervų sistemai [21]. Šiame tyrime taip pat parodėme, kad hipoksijos sukeltas RIG-I reguliavimas yra atsakingas už IFN- / gamybą. Taigi 1 tipo interferonai gali apsaugoti nuo infekcijos hipoksijos būsenoje, tačiau jie būtų žalingi neužkrėstomis sąlygomis. Be to, ankstesniame tyrime buvo pranešta, kad, be 1 tipo interferonų, RIG-I dalyvauja įvairių citokinų, tokių kaip IL-1, IL- 6 ir TNF-, gamyboje [41]. Kadangi šie citokinai sukelia audinių pažeidimus, hipoksijos sukeltas RIG-I reguliavimas gali dalyvauti CKD progresavime. Mes parodėme, kad kloto trūkumas sustiprina hipoksijos sukeltą RIG-I ekspresiją, kurią lydi IFN- / reguliavimas. Pranešama, kad Klotho ekspresija mažėja senstant ir progresuojant CKD [42,43]. Todėl RIG-I ekspresija gali būti labiau reguliuojama vyresnio amžiaus žmonėms ir pacientams, sergantiems lėtine inkstų liga, esant hipoksinėms sąlygoms, todėl gali susidaryti IFN- / . Kaip minėta pirmiau, klotas egzistuoja trijų formų – membranos, išskiriamo ir tarpląstelinio kloto – pastaroji yra atsakinga už RIG-I sukeltos uždegiminių citokinų gamybos slopinimą [26]. Kalbant apie lokalizaciją, mes parodėme, kad kloto ekspresija daugiausia pasireiškia inkstų kanalėlių ląstelėse, ir yra įrodymų, kad RIG-I ekspresija daugiausia sustiprėja inkstų kanalėlių ląstelėse hipoksinėmis sąlygomis. Šie radiniai rodo, kad sumažėjęs kloto ekspresijos lygis prisideda prie padidėjusios RIG-I tarpininkaujamos 1 tipo interferonų gamybos hipoksinėmis sąlygomis.
CISTANCHE PAGERINS INKSTU/INKSTŲ SKAUSMĄ
Apibendrinant, mes parodėme, kad hipoksinės stimuliacijos sukeltas RIG-I ir IFN- / pelių inkstuose ir žiurkės inkstų kanalėlių ląstelių linijoje ir kad RIG-I dalyvavo hipoksijos sukeltame IFN- / in vitro eksperimentų reguliavime. Inkstų biopsijos mėginiuose iš pacientų, sergančių IgA nefropatija, RIG-I ekspresija koreliavo su IFN-/ reguliavimu. Galiausiai, hipoksijos sukelta RIG-I ekspresija buvo sustiprinta pelėms, kurios buvo išmuštos iš kloto, kartu su IFN- / reguliavimu. RIG-I tarpininkaujama 1 tipo interferono ekspresija padidėjo hipoksinėmis sąlygomis, o tolesnis reguliavimas buvo stebimas esant kloto slopinimo būsenai. Remiantis klinikiniais tyrimais, hipoksija paūmėja pažengus LIL stadijai [36] ir prognozuoja ilgalaikį ŠKL progresavimą [36]. Be to, kloto ekspresija mažėja sumažėjus inkstų funkcijai, o kloto ekspresijos sumažėjimas yra susijęs su inkstų pažeidimu [44]. Šiame tyrime parodome, kad kloto trūkumas sustiprina hipoksijos sukeltą IFN- / ekspresiją, padidindamas RIG-I reguliavimą inkstuose ir kad RIG-I ekspresija yra susijusi su IFN- / faktiniais pacientams, sergantiems IgA nefropatija. Apibendrinant šiuos duomenis, LIL progresavimo metu skatinama ir hipoksija, ir kloto sumažėjimas, todėl LIL sergantiems pacientams suaktyvėja įgimtas imunitetas.