Ilgalaikis vakcinuotų kiaulių Mycoplasma Hyopneumoniae specifinio imuniteto stebėjimas

Abstraktus

Mycoplasma hypopnea mobile yra pagrindinis kiaulių enzootinės pneumonijos sukėlėjas. Siekiant sumažinti šios ligos sukeliamus ekonominius nuostolius, dažniausiai praktikuojama mobilioji M. hypopnea vakcinacija. Tačiau M. hyopneumoniae vakcinos sukelto imuniteto, ypač ląstelių sukelto imuniteto, išlikimas iki skerdimo momento dar netirtas. Todėl dviejuose komerciniuose ūkiuose 25 kiaulės (n=50) 16 dienų amžiaus gavo į raumenis komercinį bakteriną. Kiekvieną mėnesį buvo analizuojamas M. hyopneumoniae specifinių antikūnų buvimas serume ir TNF-, IFN- ir IL-17A gamyba kraujyje skirtingų T ląstelių pogrupių buvo įvertinta naudojant atšaukimo tyrimus. Spėjama, kad abiejuose ūkiuose natūrali infekcija M. hyopneumoniae. Tačiau tirtos kiaulės beveik viso tyrimo metu išliko neigiamos M. hyopneumoniae. Po vakcinacijos serokonversijos nepastebėta, o visos kiaulės tapo seronegatyvios dviejų mėnesių amžiaus. T ląstelių pogrupių dažnių kinetika abiejuose ūkiuose buvo panaši. Abiejų ūkių kiaulių kraujyje buvo aptiktos Mycoplasma hypopnea mobiliesiems specifinės citokinus gaminančios CD4+CD8+ T ląstelės, sulaukusios vieno mėnesio amžiaus, tačiau jų reikšmingai sumažėjo didėjant amžiui. Kita vertus, T ląstelių proliferacija po in vitro M. hyopneumoniae stimuliacijos buvo stebima iki penėjimo laikotarpio pabaigos. Be to, humoralinio ir ląstelių sukelto imuninio atsako skirtumų po M. hyopneumoniae vakcinacijos kiaulėms, turinčioms ir be motininių antikūnų, nepastebėta. Šis tyrimas dokumentuoja ilgalaikius M. hypopnea mobiliosios vakcinos sukeltus imuninius atsakus penimoms kiaulėms lauko sąlygomis. Norint ištirti natūralios infekcijos įtaką šiems atsakams, būtina atlikti tolesnius tyrimus.

cistanche nauda vyrams - stiprina imuninę sistemą

Spustelėkite čia norėdami pamatyti Cistanche Enhance Immunity produktus

【Klauskite daugiau】 El. paštas:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Raktažodžiai

Mycoplasma hyopneumoniae, kiaulės, išilginis tyrimas, vakcinos sukeltas imunitetas, ląstelių sukeltas imunitetas

Įvadas

Vienas iš svarbiausių kiaulių kvėpavimo takų patogenų yra Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae). Tai yra pagrindinis enzootinės pneumonijos sukėlėjas, endeminis daugelyje ūkių ir atsakingas už didelius ekonominius nuostolius kiaulininkystėje visame pasaulyje [1, 2]. Vakcinacija yra dažniausiai naudojama M. hyopneumoniae kontrolės praktika, nes ji gali sumažinti klinikinius požymius ir efektyvumo praradimą bei sumažinti gydymo išlaidas [3]. M. hyopneumoniae vakcinacijos tikslas yra sukelti specifinį patogeno imuninį atsaką, kuris greitai ir efektyviai reaguoja į natūralią M. hyopneumoniae infekciją. Dauguma parduodamų M. hyopneumoniae vakcinų kiaulėms yra registruotos skirti nuo vienos iki trijų savaičių amžiaus [4]. M. hypopnea mobiliesiems specifinio imuniteto atsiradimas svyruoja nuo vienos iki keturių savaičių ir siekiama apsaugoti nuo infekcijų per visą penėjimo laikotarpį iki skerdimo [4]. Apskritai kiaulių vakcinacija arba infekcija skatina atminties B ląstelių ir CD4+CD8+ T ląstelių diferenciaciją, užtikrinant greitą antikūnų ir ląstelių sukeltą imuninį atsaką po antrojo kontakto su patogenu [5] . Vakcinacija nuo M. hyopneumoniae gali sukelti serokonversiją ir padidėti specifinių M. hyopneumoniae antikūnų lokaliai kvėpavimo takuose [6–9]. Paskiepytų gyvūnų organizme buvo pastebėtas didesnis IFN- -produkuojančių limfocitų kiekis ir didesnis limfocitų proliferacijos greitis po M. hyopneumoniae stimuliacijos in vitro, palyginti su neskiepytaisiais gyvūnais [9–11]. Be to, po M. hyopneumoniae vakcinacijos buvo aptiktos polifunkcinės CD4+CD8− ir CD4−CD8+ T ląstelės, gaminančios INF ir TNF- [12]. Tačiau nėra visiškai aišku, kiek laiko išlieka M. hypopnea mobiliosios vakcinos sukeltas imunitetas. Daugumos M. hyopneumoniae vakcinos veiksmingumo tyrimų metu kiaulės jau po kelių savaičių po vakcinacijos tiriamos kosuliui, imuniniams parametrams, patogenų kiekiui ir plaučių pažeidimams [13–16]. Tiriant ilgalaikį veiksmingumą, dažniausiai atliekant lauko bandymus, dažnai buvo tiriami tik gamybos parametrai ir plaučių pažeidimai skerdimo metu, o imuniniai parametrai nebuvo tiriami arba buvo ištirti tik menkai [17–20]. Mūsų žiniomis, M. hyopneumoniae specifinės vakcinos sukeltas ląstelių sukeltas imunitetas nuo vakcinacijos momento iki skerdimo lauko sąlygomis dar nebuvo ištirtas. Be paršelių skiepijimo, veislinių kiaulaičių M. hyopneumoniae vakcinacija yra įprasta aklimatizavimo praktika [21]. Po veislinių gyvūnų vakcinacijos yra Mycoplasma hyopneumoniae specifinių citokinų gaminančių CD4+CD8+ ir polifunkcinių CD4−CD8− T ląstelių [22]. Paršelių, žindančių priešpienį iš imunizuotų paršavedžių, kraujyje yra daug M. hyopneumoniae specifinių motininių antikūnų (MDA) ir ląstelių imuniteto, kuris gali išlikti iki nujunkymo ar net ilgiau [7, 22, 23]. Kai paršeliai vakcinuojami nuo M. hyopneumoniae, kai yra (didelis) MDA, serokonversijos dažnai nevyksta [24–26]. Tačiau limfocitų proliferacijos atsakas po in vitro stimuliacijos buvo reikšmingai didesnis M. hyopneumoniae vakcinuotų paršelių, palyginti su nevakcinuotų paršelių, neatsižvelgiant į MDA lygį [26]. Nors šie autoriai parodė, kad ląstelių sukeltas imunitetas buvo sukurtas po M. hyopneumoniae vakcinacijos esant dideliam MDA lygiui, norint geriau suprasti šiuos ląstelių sukeltus imuninius atsakus, reikia toliau diferencijuoti T ląstelių pogrupius ir jų citokinų gamybą. ir galiausiai natūralios infekcijos įtaka šiems atsakams. Šio tyrimo tikslas buvo ištirti humoralinį ir ląstelių sukeltą imuninį atsaką po M. hyopneumoniae vakcinacijos kiaulėms dviejuose komerciniuose ūkiuose. Šiuo tikslu serumo antikūnai ir skirtingų T ląstelių pogrupių proliferacija bei citokinų gamyba buvo stebimi nuo vakcinacijos momento 16 dienų amžiaus iki skerdimo amžiaus. Taip pat buvo ištirta galima M. hyopneumoniae specifinio motininio imuniteto įtaka humoraliniam ir ląstelių sąlygojamam paršelių vakcinos atsakui.

cistanche papildo privalumai - padidina imunitetą

medžiagos ir metodai

Bandos aprašymas ir gyvūnų pasirinkimas

Two commercial farrow-to-finish farms were included in the study based on the willingness of the farmer to participate. On both farms, circulation of M. hyopneumoniae was assumed based on the presence of the pathogen in tracheobronchial swabs (TBS) taken from fattening pigs in the past. Danbred breeding gilts were reared on farm A and purchased on farm B. On-farm A, the breeding gilts were vaccinated once against M. hyopneumoniae four weeks before first insemination with Ingelvac MycoFLEX® (Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Ingelheim am Rhein, Germany). On-farm B, breeding gilts were vaccinated with Stellamune® Mycoplasma (Elanco, Utrecht, The Netherlands) at six months of age upon arrival at the farm and a second time four weeks later. Furthermore, on-farm B gilts were also booster-vaccinated twice shortly before farrowing. On both farms, sows were not vaccinated against M. hyopneumoniae. Farm A practiced a 5-week batch-farrowing system and piglets were weaned and moved to the nursery unit at approximately 22 days of age. The piglets were vaccinated at 16 days of age against M. hyopneumoniae with an inactivated whole cell J strain-based bacterin (Ingelvac MycoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Ingelheim am Rhein, Germany), porcine circovirus type 2 (PCV2) (Ingelvac CircoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH) and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) (UNISTRAIN® PRRS, HIPRA, Amer, Spain). Pigs were moved to the fattening unit at 9 weeks of age. Farm B worked in a 4-week batch-farrowing system and piglets were weaned and moved to the nursery unit at approximately 22 days of age. Tey was vaccinated at 16 days of age against M. hyopneumoniae with the same vaccine as in farm A (Ingelvac MycoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH) and PRRSV (UNISTRAIN® PRRS, HIPRA). The piglets were moved to the fattening unit at 10 weeks of age. On both farms, five breeding animals (two gilts and three sows of mixed parity) were included in the study. The growing process was monitored by the main investigator and from each litter, five healthy piglets (birth weight>1 kg) buvo atrinkti, įpjauta ausis ir kas mėnesį nuo gimimo iki skerdimo stebimi (n=25 paršelių/ūkyje). Paršelių su ausimis išpjova kryžminis auginimas nebuvo leidžiamas, o kiaulės negavo antibiotikų, aktyvių prieš M. hyopneumoniae abiejuose ūkiuose viso tyrimo metu.

cistanche tubulosa - stiprina imuninę sistemą

Tyrimo planavimas ir atranka

Tyrimą patvirtino Gento universiteto Veterinarijos fakulteto ir Biomokslų inžinerijos fakulteto etikos komitetas (patvirtinimo numeris 2020/31). Iš paršavedžių paršiavimosi metu buvo renkamas priešpienis. Per 6 valandas po paršiavimosi iš paršavedžių buvo paimtas TBS (60 cm čiulpimo kateteris, Medinorm GmbH, Spiesen-Elversberg, Vokietija) ir kraujas steriliame serumo mėgintuvėlyje (krešėjęs kraujas). Dviejų dienų amžiaus paršelių kraujas buvo paimtas serumo mėgintuvėliuose. Nuo vieno iki šešių mėnesių amžiaus paršeliams kas mėnesį buvo imamas kraujas steriliame serume ir EDTA (nekrešėjęs kraujas) mėgintuvėliuose bei TBS. A ūkyje kiaulės buvo paskerstos 177 dienų amžiaus, todėl paskutinis mėginys paimtas 5,5 mėnesio amžiaus. B ūkyje kiaulės į skerdyklą buvo išsiųstos 191 dienos amžiaus, taigi paskutinis mėginys buvo paimtas 6 mėnesių amžiaus. Priešpienio ir serumo mėginiai buvo laikomi -20 laipsnio, o TBS mėginiai -80 laipsniu iki tolesnės analizės. Nekrešėjęs kraujas buvo nedelsiant apdorotas ląstelių sukelto imuniteto analizei. Skaitmeninis PGR M. hyopneumoniae DNR aptikimui Norint ištirti M. hyopneumoniae buvimą, DNR buvo išskirta iš TBS mėginių, naudojant komercinį rinkinį (DNeasy® Blood & Tissue rinkinys, Qiagen, Venlo, Nyderlandai) ir skaitmeninį PGR (dPCR). ) protokolas, nukreiptas į P102 geną, buvo atliktas pagal anksčiau aprašytą protokolą [27]. Mycoplasma hyopneumoniae specifiniai antikūnai Mycoplasma hyopneumoniae specifiniai antikūnai serumo ir priešpienio mėginiuose buvo analizuojami naudojant komercinį netiesioginį ELISA (M. hyo Ab testas, IDEXX Laboratories Inc., Westbrook, ME, JAV) pagal gamintojo nurodymus. Mėginiai buvo laikomi teigiamais, jei mėginio ir teigiamo (S/P) santykis buvo didesnis nei 0,40, ir neigiamas, jei S/P santykis buvo lygus arba mažesnis nei 0,40.

T ląstelių citokinų gamyba

Iš šviežio, nesukrešėjusio kraujo, naudojant Lym phoprep™ tankio gradientą (Stemcell technologijos, Van - - couver, Kanada), buvo išskirtos periferinio kraujo mononuklearinės ląstelės (PBMC). PBMC išskyrimas, stimuliavimas ir dažymas buvo atlikti taip, kaip aprašyta anksčiau su kai kuriais nedideliais pakeitimais [22]. Ląstelės buvo stimuliuojamos per naktį (20 val.) namuose pagamintu M. hyopneumoniae J padermės bakterinu ir kiekvienam gyvūnui buvo įtraukta neigiama terpė ir teigiama Concanavalin A (ConA) kontrolė. M. hyopneumoniae J padermės bakterinas buvo pagamintas remiantis M. hyopneumonia F7.2 C bakterino gamybos protokolu [16]. Norint ištirti citokinų gamybą, paskutines 4 stimuliacijos valandas į kiekvieną duobutę buvo pridėta Brefeldin A (eBioscience ™, San Diegas, CA, JAV), kad būtų slopinama baltymų sekrecija. Ekstraląsteliniam dažymui PBMC buvo inkubuojami su anti-CD3 (klonas PPT3), anti-CD4 (klonas 74-12-4) ir anti-CD8 (klonas 11-295-33) monokloniniais antikūnais. Toliau, atitinkami antriniai antikūnai prieš pelės IgG1 APC-Cy7 (Abcam, Kembridžas, JK), antipelės IgG2b FITC (Biolegend, San Diego, CA, JAV) ir anti-pelės IgG2a PE-Cy7 (Abcam, Kembridžas, JK) buvo pridėtos. Vėliau buvo atliktas blokavimo etapas su pelės IgG1 (10 µg / ml). Po paviršiaus dažymo ląstelės buvo fiksuotos ir permeabilizuotos, taip pat atliktas intracelulinis dažymas TNF-, IFN- ir IL-17A [22]. Duomenys buvo gauti naudojant CytoFLEX srauto citometrą (Beckman Coulter, Bea, CA, JAV), o rezultatai buvo toliau analizuojami naudojant CytExpert programinę įrangą (Beckman Coulter). Tvarkos hierarchija rodoma 1 papildomame faile.

T-ląstelių proliferacijos tyrimas

Išskirti PBMC buvo stimuliuojami in vitro su viduje pagamintu M. hyopneumoniae J padermės bakterinu, siekiant įvertinti T ląstelių dauginimąsi. Naudotas protokolas buvo išsamiai aprašytas ankstesniame tyrime [22]. Paviršiaus dažymui ląstelės pirmiausia buvo inkubuojamos su anti-CD3, anti-CD4 ir anti-CD8 monokloniniais antikūnais, o vėliau su atitinkamais antriniais antikūnais anti-pelės IgG1 APC-Cy7 (Abcam, Kembridžas, JK), anti-pelės IgG2b. FITC (Biolegend, San Diego, CA, JAV) ir anti-pelės IgG2a AlexaFluor 647 (Biolegend, San Diego, CA, JAV) kartu su propidžio jodidu. Duomenys buvo gauti naudojant CytoFLEX srauto citometrą, o rezultatai toliau analizuojami naudojant CytExpert programinę įrangą. Tvarkos hierarchija rodoma 2 papildomame faile.

cistanche tubulosa - stiprina imuninę sistemą

Duomenų analizės

Statistical analyses were performed using IBM SPSS® Statistics Version 27 (IBM, Chicago, IL, USA) to compare results within farms. A descriptive analysis was performed for M. hyopneumoniae-specific antibody levels and the frequency of different T cell subsets. Kolmogorov-Smirnov and Shapiro-Wilk tests were used as tests for the normality of the residuals. For normally distributed data, repeated measures analyses of variance were used and post-hoc pairwise comparisons were made with a Bonferroni correction to assess possible differences between successive sampling moments. For not mally distributed data, a non-parametric Friedman test was used together with a Wilcoxon signed rank test with Bonferroni correction to compare the different sampling moments. Descriptive results were given to discuss whether the presence (S/P>{{0}}.40) arba MDA nebuvimas (S/P Mažiau arba lygus 0,40) turėjo įtakos humoraliniam ir ląstelių sąlygojamam imunitetui po paršelio vakcinacijos.

Rezultatai

Kiekviename ūkyje penkios kiaulės buvo neįtrauktos į tyrimą dėl mirties arba ausies įsago praradimo. Šių kiaulių duomenys buvo įtraukti į analizę iki paskutinio teisingai dokumentuoto mėginių ėmimo momento.

Natūralios M. hyopneumoniae infekcijos buvimas ūkiuose

A ūkyje visi TBS mėginiai (iš paršavedžių, paršelių ir penimų kiaulių) buvo neigiami dėl M. hyopneumoniae DNR. B ūkyje visi paršavedžių, paršelių ir penimų kiaulių TBS mėginiai buvo neigiami dėl M. hyopneumoniae DNR buvimo iki penkių mėnesių amžiaus. Šešių mėnesių amžiaus keturioms penimoms kiaulėms buvo nustatytas teigiamas M. hyopneumoniae testas su 300, 7, 22 ir 14 M. hyopneumoniae organizmų/µL DNR.

M. hyopneumoniae specifinių antikūnų išlikimas kiaulėse

Abiejuose ūkiuose keturios iš penkių paršavedžių paršiavimosi metu serume ir priešpienyje turėjo M. hyopneumoniae specifinių antikūnų (1A ir C pav.). Dviejų dienų amžiaus paršeliai, žindantys tų paršavedžių priešpienį, turėjo M. hyopneumoniae specifinių motininių antikūnų (buvo MDA), o seronegatyvių paršavedžių paršeliai taip pat buvo seroneigiami (MDA nebuvo) (1B ir D pav.). Nepaisant vakcinacijos 16 dienų amžiaus, abiejuose ūkiuose M. hyopneumoniae specifinių antikūnų kiekis kiaulių serume labai sumažėjo nuo dviejų dienų iki vieno mėnesio, nuo vieno mėnesio iki dviejų mėnesių ir nuo dviejų mėnesių iki trijų mėnesių amžiaus (1E pav.). Reikšmingų skirtumų tarp vėlesnių mėginių ėmimo momentų nepastebėta. Nuo dviejų mėnesių amžiaus visos kiaulės, išskyrus dvi ūkyje A keturių mėnesių amžiaus, buvo M. hyopneumoniae seronegatyvios. M. hyopneumoniae specifinių antikūnų kiekis paršeliuose su MDA laikui bėgant sumažėjo ir dviejų mėnesių amžiaus pasiekė tokį patį lygį kaip ir paršelių be MDA (1F pav.).

T ląstelių pogrupio dažnių kinetika kiaulėse

Kiaulės gyvenimo metu skirtingų T ląstelių pogrupių dažnis kraujyje kinta dėl imuninės sistemos brendimo ir kontakto su mikroorganizmais [28]. Norint ištirti skirtingų T ląstelių pogrupių kinetiką, kraujo PBMC iš nestimuliuojamos terpės kontrolės buvo įvertinti srauto citometrija. Vieno mėnesio amžiaus kiaulėms iš A ir B ūkių CD4−CD8+ T ląstelių dažnis (vidutinis %) buvo atitinkamai 13,6±2,8 % ir 10},5±3,4 %. Šis dažnis abiejuose ūkiuose žymiai padidėjo sulaukus dviejų mėnesių amžiaus ir vėl smarkiai sumažėjo sulaukus trijų mėnesių ūkyje A. Nuo trijų mėnesių amžiaus A ūkyje jis išliko stabilus, o ūkyje B reikšmingas padidėjimas vėl buvo pastebėtas šešiems mėnesių amžiaus (2A pav.). Abiejuose ūkiuose CD4+CD8−T ląstelių dažnis buvo didžiausias sulaukus vieno mėnesio amžiaus – 37,5±60 % (ūkis A) ir 42,3±5,9 % (ūkis B). Šis dažnis žymiai sumažėjo sulaukus dviejų mėnesių amžiaus. A ūkyje dažnis stabilizavosi nuo dviejų mėnesių, o ūkyje B mažėjo laipsniškai (2B pav.). Vieno mėnesio amžiaus CD4/CD8 santykis buvo 2,8 (ūkis A) ir 4.{31}} (ūkis B). Abiejuose ūkiuose santykis sumažėjo sulaukus dviejų mėnesių ir liko mažesnis nei 1.{52}} nuo trijų mėnesių amžiaus. CD4−CD8− T ląstelių dažnis vieno mėnesio amžiaus kiaulėms A ir B ūkiuose buvo atitinkamai 31,1±7,2 % ir 25,6±5,4 %. Abiejuose ūkiuose dažnis išliko panašus sulaukus dviejų mėnesių, bet vėliau žymiai padidėjo ir pasiekė aukščiausią lygį sulaukus penkių mėnesių (2C pav.). CD4+CD8+ T ląstelių dažnis buvo mažiausias vieno mėnesio amžiaus – atitinkamai 3,3±1,1% ir 4.{54}}±1,0% ūkiuose A ir B. Šis dažnis žymiai padidėjo sulaukus dviejų mėnesių amžiaus. A ūkyje po to jis išliko stabilus, o B ūkyje jis palaipsniui didėjo iki keturių mėnesių amžiaus, o penkių mėnesių amžiaus vėl žymiai sumažėjo (2D pav.).

1 pav. Mycoplasma hyopneumoniae specifinių antikūnų buvimas paršavedėse ir kiaulėse. A, C

2 pav. Mėnesinis CD3+ T ląstelių pogrupių dažnis (%) kiaulių kraujyje. A

3 pav. Kiaulių cirkuliuojančių proliferuojančių CD3+ T ląstelių išlikimas. A, B

T ląstelių dauginimasis

M. hypopnea moniae stimuliuojami PBMC buvo analizuojami, siekiant ištirti proliferuojančių T ląstelių procentą. Kaip parodyta 3A ir B paveiksluose, proliferuojančių CD3+ T ląstelių buvo kiaulių kraujyje kiekvienu mėginių ėmimo momentu abiejuose ūkiuose po in vitro stimuliacijos M. hyopneumoniae bakterinu, nors kai kurių gyvūnų procentas buvo didesnis. ūkis A. A ūkyje proliferuojančių T ląstelių procentas reikšmingai sumažėjo sulaukus šešių mėnesių, palyginti su procentine dalimi sulaukus penkių mėnesių, o ūkyje B reikšmingo proliferuojančių T ląstelių procento sumažėjimo ar padidėjimo nepavyko. būti stebimas. Te CD4−CD8− T ląstelės buvo dominuojantis CD3+ T ląstelių pogrupis, proliferuojantis reaguodamas į M. hyopneumoniae stimuliaciją abiejuose ūkiuose, po to CD4+CD8− T ląstelių pogrupis (3 pav. C ir D).

4 pav. Abiejų ūkių kiaulių kraujyje cirkuliuojančios Mycoplasma hyopneumoniae specifinės citokinus gaminančios CD4+CD8+ T ląstelės. A

T ląstelių citokinų gamyba

Siekiant geriau suprasti M. hyopneumoniae specifinių T ląstelių buvimą ir išlikimą kiaulėse, TNF-, IFN- ir IL-17A gamyba kraujo PBMC, stimuliuotų in vitro M. hyopneumoniae bakterinu, buvo įvertinta. srauto citometrija. Kaip parodyta 4 paveiksle, abiejuose ūkiuose stimuliuojamos CD4+CD8+ T ląstelės gamino citokinus, kurie buvo ryškesni jaunesnio amžiaus kiaulėms. TNF- + CD4+CD8+ T ląstelių procentas reikšmingai sumažėjo kiaulėms A ūkyje nuo vieno iki dviejų mėnesių amžiaus ir nuo dviejų iki trijų mėnesių amžiaus ūkyje B. A. Buvo pastebėtas reikšmingas IFN- + CD4+CD8+ T ląstelių sumažėjimas abiejų ūkių kiaulėms nuo vieno iki dviejų mėnesių amžiaus, o B ūkyje – nuo ​​dviejų iki trijų mėnesių amžiaus. CD4+CD8+ T ląstelių, gaminančių ir TNF, ir IFN, procentinė dalis reikšmingai sumažėjo kiaulėms nuo vieno iki dviejų mėnesių amžiaus ūkyje A ir nuo dviejų iki trijų mėnesių ūkyje B. Vieną mėnesį amžiaus, IL-17A+ CD4+CD8+ T ląstelių procentas buvo didesnis, palyginti su dviejų mėnesių amžiaus, tačiau šis skirtumas nebuvo statistiškai reikšmingas. Keturių B ūkio gyvūnų, kurių M. hyopneumoniae buvo teigiamas šešių mėnesių amžiaus, CD4+CD8+ T ląstelių citokinų gamyba buvo panaši, palyginti su M. hyopneumoniae neigiamais gyvūnais. Be CD4+CD8+ T ląstelių pogrupio, mes taip pat stebėjome citokinų gamybos skirtumus kituose T ląstelių pogrupiuose ūkyje B. 5 paveiksle pateikti duomenys apie aiškias reakcijas ir reikšmingus citokinų gamybos skirtumus. kitų T ląstelių pogrupių, kurie buvo tik B ūkyje. Kalbant apie kitus parametrus ir ūkyje A, CD4-CD8+, CD4+CD8- arba CD4- citokinų gamybos skirtumų nepastebėta. CD8− T ląstelės. TNF- + CD4+CD8− T ląstelių procentas labai padidėjo, o IFN- + CD4−CD8+ T ląstelių procentas reikšmingai sumažėjo nuo vieno iki dviejų mėnesių. amžiaus. Pažymėtina, kad kiaulė, kuri šešių mėnesių amžiaus buvo teigiama M. hyopneumoniae su 7 M. hyopneumoniae organizmais/µL DNR, turėjo didelį TNF- + CD4+CD8− ir IL-17 procentą. A+ CD4–CD8+ T ląstelės kraujyje. Kitos M. hyopneumoniae teigiamos kiaulės, sulaukusios šešių mėnesių amžiaus, turėjo panašų procentą citokinus gaminančių T ląstelių kaip ir M. hyopneumoniae neigiamos kiaulės.

5 paveikslas B. A ūkyje kiaulių kraujyje cirkuliuojantys Mycoplasma hyopneumoniae specifiniai citokinus gaminantys T ląstelių pogrupiai

Kiekviename ūkyje M. hyopneumoniae specifinio MDA buvo 20 dviejų dienų amžiaus paršelių serume, o penkių paršelių serume nebuvo, nes jie buvo gauti iš paršavedės be M. hyopneumoniae specifinių serumo antikūnų. Norint ištirti, ar MDA turėjo įtakos M. hyopneumoniae specifinės vakcinos sukeltam ląstelių sukeltam imunitetui, buvo atskirti paršeliai su MDA ir be jo, o skirtumai tarp šių dviejų grupių buvo ištirti T ląstelių pogrupiuose, kuriems reikšmingas. buvo pastebėti citokinų gamybos skirtumai (6A–E pav.). B ūkyje TNF- + CD4+CD8+ T ląstelių procentas buvo didesnis vieno mėnesio amžiaus kiaulėse, turinčiose MDA, palyginti su vieno mėnesio amžiaus kiaulėmis. kiaulės be MDA. Kitų citokinus gaminančių CD4+CD8+ T ląstelių vidutinis procentas buvo panašus abiejose vieno mėnesio amžiaus kiaulių grupėse kiekviename ūkyje. Laikui bėgant pastebėta, kad kiaulių kraujyje mažėjo vidutinis citokinus gaminančių CD4+CD8+ T ląstelių procentas, o šešių mėnesių amžiaus skirtumai tarp kiaulių, sergančių ir be jų, skyrėsi tik nedideliais arba visai visai. MDA (6A–C pav.). Tas pats buvo pastebėtas IFN{24}}gaminančių CD8+ T ląsteles kiaulių kraujyje B ūkyje (6D pav.). Vieno ir dviejų mėnesių amžiaus vidutinis TNF- + CD4+CD8− T ląstelių procentas B ūkyje buvo panašus kiaulėms su MDA arba be jos, o šešių mėnesių amžiaus – didesnis procentas. TNF- -gaminančių CD4+CD8−T ląstelių buvo pastebėta kiaulių, neturinčių MDA, kraujyje (6E pav.).

cistanche papildo privalumai - padidina imunitetą

Diskusija

Tai pirmasis tyrimas, suteikiantis įžvalgų apie ilgalaikį M. hyopneumoniae specifinės vakcinos sukeltą imuninį atsaką kiaulėms nuo gimimo iki skerdimo lauko sąlygomis. Humoralinio imuninio atsako serume, įvertinto IDEXX ELISA metodu, po vakcinacijos nebuvo, tačiau buvo ląstelių sukeltas imuninis atsakas. T ląstelių proliferacija po in vitro M. hyopneumoniae stimuliacijos buvo stebima iki penėjimo laikotarpio pabaigos. Be to, sulaukus vieno mėnesio amžiaus, po M. hyopneumoniae vakcinacijos, M. hyopneumoniae specifinių citokinus gaminančių CD4+CD8+ T ląstelių, įskaitant atminties T ląsteles, buvo, tačiau jų sumažėjo didėjant amžiui. . Atrodo, kad motinos antikūnai nepaveikė humoralinio ir ląstelių sukelto vakcinos sukelto imuninio atsako per kiaulės gyvenimą, išskyrus TNF- + CD4+CD8+ T ląstelių buvimą. . Norėdami įvertinti M. hyopneumoniae vakcinuotų paršelių imuninio atsako išlikimą ir skirtumus ūkio lygiu, įtraukėme du komercinius ūkius. Nors buvo manoma, kad M. hyopneumoniae cirkuliuoja abiejuose ūkiuose, tirtos kiaulės išliko M. hyopneumoniae neigiamos viso tyrimo metu, išskyrus keturias kiaules ūkyje B tyrimo pabaigoje, o tai leido ištirti vakcinos sukeltos vakcinos išlikimą. imuninis atsakas be natūralių infekcijų įtakos. Keturios M. hyopneumoniae PGR teigiamos kiaulės, sulaukusios šešių mėnesių amžiaus B ūkyje, neturėjo didesnių M. hyopneumoniae specifinių antikūnų lygių, palyginti su PGR neigiamomis kiaulėmis. Išskyrus vieną kiaulę, po in vitro M. hyopneumoniae stimuliacijos jų kraujyje nebuvo didesnio procento citokinus gaminančių T ląstelių. Tai galima paaiškinti tuo, kad M. hyopneumoniae infekcija greičiausiai įvyko prieš pat mėginio paėmimą, o tai neleido imuninei sistemai pakankamai laiko reaguoti į infekciją [29–31]. Trims iš keturių M. hyopneumoniae teigiamų kiaulių patogenų kiekis TBS mėginyje taip pat buvo gana mažas.

6 pav. Vidutinis Mycoplasma hyopneumoniae specifinių citokinus gaminančių T ląstelių pogrupių procentas pagal iš motinos gautų antikūnų lygius. AC

Dviejų dienų kiaulių antikūnų kiekis serume atitiko M. hyopneumoniae specifinių antikūnų kiekį paršavedžių serume ir priešpienyje paršiavimosi metu, o tai patvirtina M. hyopneumoniae specifinio motinos imuniteto perkėlimą per priešpienį [22, 23]. Serokonversija nebuvo pastebėta po M. hyopneumoniae vakcinacijos sulaukus 16 dienų. Priešingai, M. hyopneumoniae specifinių antikūnų lygis laikui bėgant sumažėjo, nes visi gyvūnai tapo seronegatyvūs dviejų mėnesių amžiaus. Yra žinoma, kad šiame tyrime naudota komercinė M. hyopneumoniae vakcina po vienkartinės pavartojimo sukelia ribotą serokonversiją, kuri taip pat buvo pastebėta ankstesniuose tyrimuose [14, 32, 33]. Eksperimentinio tyrimo metu, kai paršeliai buvo skiepijami prieš nujunkymą, 40 % gyvūnų serokonversija pasireiškė praėjus 3 savaitėms po vakcinacijos, o lauko tyrimo metu tik 3 iš 40 kiaulių serokonversija įvyko praėjus 7 savaitėms po vakcinacijos [14, 32]. Tačiau M. hyopneumoniae specifinių serumo antikūnų buvimas (arba nebuvimas) po vakcinacijos neatitinka apsaugos (arba jų nebuvimo) nuo infekcijos [14, 25, 34]. Siekiant apsaugoti šeimininką nuo fakultatyvinių tarpląstelinių ir tarpląstelinių bakterijų patogenų, tokių kaip M. hyopneumoniae, CD4+CD8−T pagalbinės ląstelės, daugiausia T1 ir T17 ląstelės, atlieka svarbų vaidmenį. T1 ląstelės gamina IFN- , kuris aktyvina makrofagus, kad sunaikintų patogeną, o T17 ląstelės gamina IL-17A, kad sustiprintų gleivinės barjerą [35–38]. Neseniai buvo įrodyta, kad mažas procentas M. hyopneumoniae ląstelių taip pat gali būti randamas tarpląstelėje, ir atsižvelgiant į CD4-CD8+ citotoksinių T ląstelių vaidmenį saugant šeimininką nuo tarpląstelinių patogenų, šios citotoksinės T ląstelės. Taip pat gali būti svarbu kontroliuoti M. hyopneumoniae infekcijas [31, 35, 39]. Norint ištirti skirtingų T ląstelių pogrupių dažnių kinetiką ir šių T ląstelių gebėjimą daugintis po M. hyopneumoniae stimuliacijos in vitro, PBMC buvo išskirti iš abiejų ūkių paršelių. T ląstelių pogrupio dažnio modelis šiuose dviejuose ūkiuose buvo panašus. Remiantis kitais tyrimais, CD4+CD8−T ląstelių procentas yra didesnis nei CD4−CD8+ T ląstelių procentas jaunesniame amžiuje. Senstant, CD4+CD8− T ląstelių procentas mažėja, o CD4−CD8+ T ląstelių procentas didėja, todėl laikui bėgant mažėja CD4/CD8 santykis [40–42]. Paršeliai gimsta beveik neturėdami CD4+CD8+ T ląstelių. Šių ląstelių daugėja su amžiumi, kai kiaulės kontaktuoja su mikroorganizmais, nes kai kurios iš šių ląstelių turi patogenui būdingą atminties funkciją [5, 22, 42–44]. Tačiau A ūkyje CD4+CD8+ T ląstelių dažnis išliko toks pat nuo dviejų mėnesių amžiaus. Kaip ir tikėtasi, ūkyje B palaipsniui didėjo iki keturių mėnesių amžiaus, nors vėliau CD4+CD8+ T ląstelių procentas vėl sumažėjo. Palyginti T ląstelių pogrupius su kitais tyrimais išlieka sunku, nes šiame tyrime PBMC nebuvo išmatuoti iškart po kraujo mėginių paėmimo, o pirmiausia inkubuojami 20 valandų prieš išmatuojant T ląstelių subpopuliacijų procentą. Mycoplasma hyopneumoniae specifinis CD3+ T ląstelių proliferacija išliko iki penėjimo laikotarpio pabaigos, patvirtindama M. hyo pneumoniae specifinių T ląstelių buvimą kiaulių, paskiepytų 16 dienų amžiaus, kraujyje. M. hyopneumoniae specifinių proliferuojančių T ląstelių buvimas gali būti koreliuojamas su apsauga nuo enzootinės pneumonijos, nes ankstesni tyrimai parodė, kad PBMC gebėjimas daugintis po in vitro stimuliacijos mitogenu ConA yra susijęs su kiaulių atsparumu ligoms [45]. ]. Te CD4−CD8− T ląstelės buvo pagrindinis T ląstelių pogrupis, daugėjantis abiejuose ūkiuose, po to CD4+CD8− T ląstelės, kurių procentas svyravo laikui bėgant. Kiaulių daugumoje CD4-CD8- T ląstelių yra invariantiniai δ T ląstelių receptoriai, priešingai nei antigenui specifinės T ląstelės [31, 42]. Užkrėtus kiaules kitais patogenais, tokiais kaip PRRSV, δ T ląstelės taip pat buvo pagrindiniai proliferaciniai atsakai po PRRSV viremijos [46]. Šios T ląstelės taip pat vaidina svarbų vaidmenį gaminant neutralizuojančius antikūnus po kiaulių vakcinacijos nuo klasikinio kiaulių maro [47]. Be to, Actinobacillus pleuropneumoniae užkrėstų kiaulių bronchoalveolių plovimo skystyje buvo pastebėtas CD8− δ T ląstelių padidėjimas [48]. Reikia atlikti tolesnius tyrimus, siekiant ištirti δ T ląstelių vaidmenį kontroliuojant ir apsaugant nuo M. hyopneumoniae infekcijų. Atliekant atšaukimo tyrimus, buvo vertinama skirtingų T ląstelių pogrupių TNF-, IFN- ir IL{84}}A gamyba. Sulaukus dviejų mėnesių amžiaus, TNF- -, IFN- - ir TNF-/IFN- -produkuojančių CD4+CD8+ T ląstelių procentas labai sumažėjo. palyginti su vieno mėnesio amžiaus procentais. Vėliau procentai kinta, jie arba toliau mažėjo, arba laikui bėgant išliko stabilūs. Tas pats modelis buvo pastebėtas IL-17A gaminančių CD4+CD8+ T ląstelių atveju, nors statistiškai nereikšmingas. Nuo PRRSV vakcinuotų jauniklių IFN gamyba PBMC taip pat buvo stebima iki 42 dienų po pirminės vakcinacijos, tačiau vėliau sumažėjo iki 147 dienų po vakcinacijos [49]. Anksčiau buvo įrodyta, kad po M. hyo pneumoniae vakcinacijos padidėjo IFN išskiriančių limfocitų skaičius [9, 10].

Dykumos gyva cistanchekanalėlių

Pastaruoju metu kaupiasi įrodymų, kad polifunkcinės T ląstelės, gaminančios daugiau nei vieną citokiną, atlieka pagrindinį vaidmenį apsaugant ir pašalinant patogenus. Pavyzdžiui, kiaulėms, užsikrėtusioms chlamidijų rūšimis, polifunkcinės CD4+CD8−T ląstelės yra koreliuojamos su apsauga [50]. Paršelių vakcinacija nuo M. hyo pneumoniae taip pat padidino polifunkcinių CD4+CD8− ir CD4−CD8+ T ląstelių procentą [12]. Kito tyrimo metu kiaulių vakcinacija nuo PCV2 lėmė didesnį TNF- +/IFN- + CD4+CD8+ T ląstelių kiekį praėjus 24 dienoms po vakcinacijos ir vėl sumažėjo. tyrimo pabaigoje, praėjus 56 dienoms po vakcinacijos [51]. Savo tyrime taip pat pastebėjome, kad laikui bėgant sumažėjo citokinus gaminančių CD4+CD8+ T ląstelių. Šiame tyrime daugiausia dėmesio buvo skiriama cirkuliuojantiems kraujo limfocitams, tačiau vakcinacija taip pat sukelia vietinį M. hyopneumoniae specifinį ląstelių sukeltą imuninį atsaką plaučiuose ir bronchų limfmazgiuose [8]. Todėl būsimi M. hyo pneumoniae specifinės vakcinos sukelto imuniteto tyrimai taip pat turėtų būti sutelkti į vietinius ląstelių sukeliamus imuninius atsakus. Be to, paršeliams imunizuoti šiame tyrime buvo naudojama tik viena komercinė M. hyopneumoniae vakcina. Vakcinų imuninis atsakas gali skirtis, nes jiems įtakos turi vakcinos formulė (adjuvantas ir antigenas) ir įvedimo būdas [16, 52, 53]. Pavyzdžiui, žinoma, kad karbopolis, naudojamas komercinės M. hyopneumoniae vakcinos adjuvantas, nukreipia imuninį atsaką į T1 atsaką [54]. Kiekviename ūkyje penki paršeliai buvo M. hyopneumoniae seronegatyvūs, o 20 paršelių serume buvo M. hyopneu mobiliesiems specifinės MDA. Nepriklausomai nuo jų MDA statuso, visos kiaulės buvo M. hyopneumoniae seronegatyvios dviejų mėnesių amžiaus, o vėliau serokonversija nebuvo pastebėta. Mūsų išvados atitinka ankstesnį tyrimą, kurio metu septynių dienų amžiaus paršeliai su MDA ir be jo buvo vakcinuoti nuo M. hyopneumoniae [25]. Abiejose grupėse serokonversija po vakcinacijos nepastebėta ir visos kiaulės buvo seronegatyvios praėjus 42 dienoms po vakcinacijos. Kita vertus, kiti nustatė, kad M. hyopneumoniae vakcinacija esant MDA padidino antikūnų kiekį, palyginti su nevakcinuotais paršeliais, tačiau kuo didesnis MDA titras, tuo mažesnis atsakas [24, 26]. Nors po M. hyopneumoniae vakcinacijos ne visada stebimas antikūnų atsakas, sukeliamas specifinis M. hyopneumoniae ląstelių sukeliamas imuninis atsakas [26]. Neatsižvelgiant į MDA lygį, PBMC, išskirtų iš M. hyopneumoniae vakcinuotų kiaulių, proliferacijos skirtumų nepastebėta [26]. Mūsų tyrime, kiekviename ūkyje, citokinus gaminančių T ląstelių skirtumų tarp M. hyopneumoniae vakcinuotų kiaulių su MDA ir be jos vieno mėnesio amžiaus nepastebėta. Tik B ūkyje paršeliai, turintys MDA, turėjo didesnį TNF- + CD4+CD8+ T ląstelių procentą vieno mėnesio amžiaus, palyginti su paršeliais, neturinčiais MDA. Šių išvadų svarba turėtų būti toliau tiriama atliekant tyrimą, kuriame dalyvavo didesnis ir vienodas kiekis paršelių su M. hyopneumoniae specifine MDA ir be jos. Taip pat reikėtų atlikti dešimt statistinę analizę, nes tai nebuvo atlikta šiame tyrime dėl mažo ir nevienodo gyvūnų skaičiaus grupėje be ir su MDA. Apibendrinant, šis tyrimas parodė, kad nors serokonversijos po paršelių vakcinacijos M. hyopneumoniae nebuvo, buvo aptiktas M. hyopneumoniae specifinis ląstelių sukeltas imuninis atsakas. Polifunkcinės citokinus gaminančios CD4+CD8+ T ląstelės buvo iki trijų mėnesių amžiaus, o proliferuojančios T ląstelės buvo stebimos iki penėjimo laikotarpio pabaigos, o tai rodo, kad yra specifinis patogeno ląstelių imunitetas. M. hyopneumoniae vakcinuotų kiaulių. Rezultatai sudaro pagrindą tolesniems tyrimams, vertinantiems natūralios M. hyopneumoniae infekcijos įtaką vakcinos sukeltam imunitetui lauko sąlygomis.

Nuorodos

1. Pieters M, Maes D (2019) Mikoplazmozė. In: Zimmermann JJ, Karriker LA, Ramirez A, Schwartz KJ, Stevenson GW, Zhang J (eds) Diseases of swine, 11th ed. Wiley, Niujorkas

2. Rycroft A (2020) Kiaulių mikoplazmos rūšių bendrosios charakteristikos ir klasifikacija. In: Maes D, Sibila M, Pieters M (eds) Mycoplasmas in Swine. Acco, p. 26–46

3. Maes D, Segalés J, Meyns T, Sibila M, Pieters M, Haesebrouck F (2008) Mycoplasma hyopneumoniae infekcijų kontrolė kiaulėse. Vet Microbiol. 126:297-309

4. Garza-Moreno L, Segalés J, Pieters M, Romagosa A, Sibila M (2018) Acclimation strategijas in gilts to control Mycoplasma hyopneumoniae infekcija. Vet Microbiol 219:23–29 5. Saalmüller A, Werner T, Fachinger V (2002) T pagalbinės ląstelės nuo naivių iki įsipareigojusių. Vet Immunol Immunopathol 87:137-145

6. Ruiz AR, Utrera V, Pijoan C (2003) Mycoplasma hyopneumoniae paršavedžių vakcinacijos poveikis paršelių kolonizacijai nujunkymo metu. J Swine Health Prod 11:131–135

7. Sibila M, Bernal R, Torrents D, Riera P, Llopart D, Calsamiglia M, Segalés J (2008) Paršavedžių vakcinacijos nuo Mycoplasma hyopneumoniae poveikis paršavedžių ir paršelių kolonizacijai ir serokonversijai bei kiaulių plaučių pažeidimams skerdimo metu. Vet Microbiol. 127:165-170

8. Marchioro SB, Maes D, Flahou B, Pasmans F, Del Pozo Sacristán R, Vranckx K, Melkebeek V, Cox E, Wuyts N, Haesebrouck F (2013) Vietinis ir sisteminis imuninis atsakas kiaulėms, kurioms į raumenis buvo sušvirkšta inaktyvuota Mycoplasma hyopne vakcina. Vakcina 31:1305–1311

9. Martelli P, Saleri R, Cavalli V, De Angelis E, Ferrari L, Benetti M, Ferrarini G, Merialdi G, Borghetti P (2014) Sisteminis ir vietinis imuninis atsakas kiaulėms, įšvirkštoms į odą ir į raumenis inaktyvuotomis Mycoplasma hyopneumoniae vakcinomis. Vet Microbiol. 168:357-364

10. Thacker EL, Thacker BJ, Kuhn M, Hawkins PA, Waters WR (2000) Vietinių ir sisteminių imuninių atsakų, sukeltų kiaulėms suleidus Mycoplasma hyopneumoniae bakterino į raumenis, įvertinimas. Am J Vet Res 61:1384–1389

11. Seo HW, Han K, Oh Y, Park C, Choo EJ, Kim SH, Lee BH, Chae C (2013) Ląstelių sukelto imuniteto, sukelto trijų komercinių vienos dozės Mycoplasma hyopneumoniae bakterinų kiaulėms, palyginimas. J Vet Med Sci 75:245–247

12. Matthijs AMF, Auray G, Jakob V, Garcia-Nicolas O, Braun RO, Keller I, Bruggman R, Devriendt B, Boyen F, Guzman CA, Michiels A, Haesebrouck F, Collin N, Barnier-Quer C, Maes D , Summerfield A (2019) Naujų Mycoplasma hyopneumoniae bakterinų vakcinų formulių sistemų emu neologijos apibūdinimas. Front Immunol 10:1087

13. Villarreal I, Meyns T, Dewulf J, Vranckx K, Calus D, Pasmans F, Haesebrouck F, Maes D (2011) Vakcinacijos poveikis Mycoplasma hyopneumoniae plitimui kiaulėms lauke. Vet. J 188:48–52

14. Arsenakis I, Panzavolta L, Michiels A, Del Pozo Sacristán R, Boyen F, Haesebrouck F, Maes D (2016) Efficacy of Mycoplasma hyopneumoniae vakcinacija prieš ir atjunkant nuo eksperimentinės kiaulių infekcijos infekcijos. BMC Vet Res 12:63

15. Park C, Jeong J, Choi K, Chae C (2016) Naujos dvivalentės vakcinos nuo kiaulių cirkoviruso 2 tipo ir Mycoplasma hyopneumoniae (Fostera™ PCV MH) veiksmingumas eksperimentinėmis sąlygomis. Vakcina 34:270–275

16. Matthijs AMF, Auray G, Boyen F, Schoos A, Michiels A, García-Nicolás O, Barut GT, Barnier-Quer C, Jakob V, Collin N, Devriendt B, Summerfield A, Haesebrouck F, Maes D (2019 m.) Trijų naujoviškų bakterinų vakcinų veiksmingumas nuo eksperimentinės Mycoplasma hyopneumoniae infekcijos. Vet Res 50:91

17. Reynolds SC, St Aubin LB, Sabbadini LG, Kula J, Vogelaar J, Runnels P, Peters AR (2009) Sumažėję plaučių pažeidimai kiaulėms, užkrėstoms praėjus 25 savaitėms po vienos Mycoplasma hyopneumo niae vakcinos dozės skyrimo maždaug po 1 savaitės amžiaus. Vet. J 181:312–320

18. Wilson S, Van Brussel L, Saunders G, Taylor L, Zimmermann L, Heinritzi K, Ritzmann M, Banholzer E, Eddicks M (2012) 1 savaitės amžiaus paršelių skiepijimas inaktyvuota Mycoplasma hyopneumoniae vakcina sumažina plaučių ligas ir ligas pagerina vidutinį kūno svorio padidėjimą per dieną. Vakcina 30:7625–7629

19. Del Pozo Sacristán R, Sierens A, Marchioro SB, Vangroenweghe F, Jourquin J, Labarque, Haesebrouck F, Maes D (2014) Ankstyvosios Mycoplasma hyopneumoniae vakcinacijos nuo mišrios kvėpavimo takų ligos veiksmingumas vyresnio amžiaus penimoms kiaulėms. Vet Rec 174:197

20. Cvjetkovíc V, Sipos S, Szabó I, Sipos W (2018) Dviejų vakcinacijos strategijų nuo Mycoplasma hyopneumoniae klinikinis efektyvumas kiaulių bandoje, sergančioje kvėpavimo takų liga. Porc Health Manag 4:19

21. Garza-Moreno L, Segalés J, Pieters M, Romagosa A, Sibila M (2017) Survey on Mycoplasma hyopneumoniae gilt acclimation practices in Europe. Porc Health Manag 3:21

22. Biebaut E, Beuckelaere L, Boyen F, Haesebrouck F, Gomez-Duran CO, Devriendt B, Maes D (2021) Mycoplasma hyopneumoniae specifinio ląstelių sukelto imuniteto perkėlimas naujagimiams paršeliams. Vet Res 52:96

23. Bandrick M, Ariza-Nieto C, Baidoo SK, Molitor TW (2014) Kolostralinis antikūnų ir ląstelių sukeltas imunitetas prisideda prie įgimto ir antigenui būdingo paršelių imuniteto. Dev Comp Immunol 43:114-120

24. Hodgins DC, Shewen PE, Dewey CE (2004) Amžiaus ir motinos antikūnų įtaka naujagimių paršelių, paskiepytų nuo Mycoplasma hyopneumoniae, antikūnų atsakui. J Swine Health Prod 12:10–16

25. Martelli P, Terreni M, Guazzetti S, Cavirani S (2006) Antikūnų atsakas į Mycoplasma hyopneumoniae infekciją vakcinuotoms kiaulėms su motinos antikūnais arba be jų, sukeltas paršavedės vakcinacijos. J Vet Med 53:229–233

26. Bandrick M, Theis K, Molitor TW (2014) Motinos imunitetas sustiprina vakcinacijos nuo Mycoplasma hyopneumoniae sukeltą ląstelių sukeltą imuninį atsaką paršeliams. BMC Vet Res 10:124

27. Beuckelaere L, Haspeslagh M, Biebaut E, Boyen F, Haesebrouck F, Krejci R, Meyer E, Gleerup D, De Spiegelaere W, Devriendt B, Maes D (2022) Skirtingus vietinius, įgimtus ir prisitaikančius imuninius atsakus sukelia du komerciniai Mycoplasma hyopneumoniae bakterinai ir vien tik adjuvantas. Front Immunol 13:1015525

28. Gerner W, Mair KH, Schmidt S (2022) Vietinis ir sisteminis T ląstelių imunitetas kovojant su kiaulių virusinėmis ir bakterinėmis infekcijomis. Annu Rev Anim Biosci 10:349–372

29. Calsamiglia M, Pijoan C, Bosch GJ (1999) Mycoplasma hypopnea mobile profiliavimas ūkiuose, naudojant serologiją ir įdėtą PGR metodą. J Swine Health Prod 7:263–268

30. Pieters M, Daniels J, Rovira A (2017) Mėginių tipų ir diagnostikos metodų palyginimas Mycoplasma hyopneumoniae aptikti in vivo ankstyvosiose infekcijos stadijose. Vet Microbiol 203:103-109

31. Tizard IR (2018) Veterinary immunology, 10th edn. Elsevier, Sent Luisas, Misūris

32. Arsenakis I, Michiels A, Del Pozo Sacristán R, Boyen F, Haesebrouck F, Maes D (2017) Mycoplasma hyopneumoniae vakcinacija lauko sąlygomis arba prieš pat nujunkymą: atsitiktinių imčių veiksmingumo tyrimas. Vet Rec 181:19

33. Betlach AM, Fano E, Vanderwaal K, Pieters M (2021) Daugybinių skiepų poveikis kiaulaičių Mycoplasma hyopneumoniae infekcijos perdavimui ir laipsniui. Vakcina 39:767–774

34. Martínez-Boixaderas N, Garza-Moreno L, Sibila M, Segalés J (2022) Motinos gauto imuniteto įtaka imuniniam atsakui, kurį sukelia ankstyva paršelių vakcinacija nuo dažniausiai pasitaikančių patogenų, susijusių su kiaulių kvėpavimo takų ligų kompleksu. Porc Health Manag 8:11

35. Schroder K, Hertzog PJ, Ravasi T, Hume DA (2004) Interferon-: signalų, mechanizmų ir funkcijų apžvalga. J Leukoc Biol 75:163-189

36. Dobbs NA, Odeh AN, Sun X, Simecka JW (2009) Daugialypis T ląstelių sukelto imuniteto vaidmuo patogenezėje ir atsparumui Mycoplasma kvėpavimo takų ligai. Curr Trends Immunol 10:1–19

37. Ge Y, Huang M, Yao Y (2020) Interleukino biologija-17 ir jo patofiziologinė reikšmė sepsiui. Front Immunol 11:1558

38. Summerfeld A (2020) Imuninis atsakas prieš kiaulių mikoplazmos infekcijas. In: Maes D, Sibila M, Pieters M (eds) Mycoplasmas in Swine. Acco, p. 110–125

39. Raymond BBA, Turnbull L, Jenkins C, Madhkoor R, Schleicher I, Uphof CC, Whitchurch CB, Rohde M, Djordjevic SP (2018) Mycoplasma hyopneumoniae gyvena tarpląstelėje kiaulių epitelio ląstelėse. Sci Rep 8:17697

40. Borghetti P, De Angelis E, Saleri R, Cavalli V, Cacchioli A, Corradi A, Mocchegiani E, Martelli P (2006) Periferiniai T limfocitų pokyčiai naujagimių paršeliuose: ryšys su augimo hormonu (GH), prolaktinu (PRL) ir kortizolio pokyčiai. Vet Immunol Immunopathol 110:17–25

41. Brown DC, Maxwell CV, Erf GF, Davis ME, Singh S, Johnson ZB (2006) T limfocitų ontogeniškumas ir žarnyno morfologinės charakteristikos naujagimių kiaulėse įvairiais amžiais postnataliniu laikotarpiu. J Anim Sci 84:567–578

42. Stepanova H, Samankova P, Leva L, Sinkora J, Faldyna M (2007) Ankstyvas postnatalinis paršelių imuninės sistemos vystymasis: T limfocitų pogrupių perskirstymas. Cell Immunol 249:73-79

43. Hernández J, Garfas Y, Nieto A, Mercado C, Montaño LF, Zenteno E (2001) Lyginamasis CD4 + CD8 + ir CD4 + CD{{5} } limfocitai imuniniame atsake į kiaulių rubulavirusą. Vet Immunol Immunopathol 79:249–259

44. Blanc F, Prévost-Blondel A, Piton G, Bouguyon E, Leplat J, Adréoletti F, Egidy G, Bourneuf E, Bertho N, Vincent-Naulleau S (2020) Cirkuliuojančių leukocitų sudėtis skiriasi priklausomai nuo amžiaus ir melanomos pradžios MeLiM kiaulių biomedicinos modelis. Front Immunol 11:291

45. Jeon RL, Gilbert C, Cheng J, Putz AM, Dyck MK, Plastow GS, Fortin F, Canada P, Dekkers JC, Harding JCS (2021) Periferinio kraujo mononuklearinių ląstelių dauginimasis iš sveikų paršelių po mitogeno stimuliacijos kaip ligos rodiklis atsparumas. J Anim Sci 99:skab084

46. ​​Kick AR, Amaral AF, Cortes LM, Fogle JE, Crisci E, Almond GW, Käser T (2019) T-ląstelių atsakas į 2 tipo kiaulių reprodukcinio ir kvėpavimo sindromo virusą (PRRSV). Virusai 11:796

47. Petersen B, Kammerer R, Frenzel A, Hassel P, Dau TH, Becker R, Breithaupt A, Ulrich RG, Lucas-Hahn A, Meyers G (2021) TRDC išmuštų kiaulių, neturinčių δT ląstelių, generavimas ir pirmasis apibūdinimas. Sci Rep 11:14965

48. Faldyna M, Nechvatalova K, Sinkora J, Knotigova P, Leva L, Krejci J, Toman M (2005) Experimental Actinobacillus pleuropneumoniae infekcija paršeliuose su skirtingų tipų ir lygių specifine apsauga: imuninė-genotipinė limfocitų pogrupių analizė kraujotakos ir kvėpavimo takų gleivinės limfoidinis audinys. Vet Immunol Immunopathol 107:143-152

49. Sánchez-Matamoros A, Camprodon A, Maldonado J, Pedrazuela R, Miranda J (2019) Saugumas ir ilgalaikis imunitetas, kai kartu skiriama modifikuotos gyvos virusinės vakcinos nuo kiaulių reprodukcinio ir kvėpavimo sindromo viruso 1 ir inaktyvuotos vakcinos prieš kiaulių parvovirusą ir Erysipelothrix rhusiopathiae veislinėms kiaulaitėms. Porc Health Manag 5:11

50. Käser T, Pasternak JA, Delgado-Ortega M, Hamonic G, Lai K, Erickson J, Walker S, Dillon JR, Gerdts V, Mearens F (2017) Chlamydia suis ir Chlamydia trachomatis kiaulėse sukelia daugiafunkcines CD4 T ląsteles. Vakcina 35:91–100

51. Koinig HC, Talker SC, Stadler M, Ladinig A, Graage R, Ritzmann M, Hennig Pauka I, Gerner W, Saalmüller A (2015) PCV2 vakcinacija skatina IFN ir TNF kartu gaminančias T ląsteles, kurios gali turėti įtakos apsauga. Vet Res 46:20

52. Xiong Q, Wei Y, Xie H, Feng Z, Gan Y, Wang C, Liu M, Bai F, Xie F, Shao G (2014) Įvairių adjuvantų formulių poveikis gyvos Mycoplasma hyopneumoniae imunogeniškumui ir apsauginiam poveikiui vakcina po injekcijos į raumenis. Vakcina 32:3445–3451

53. Maes D, Boyen F, Devriendt B, Kuhnert P, Summerfield A, Haesebrouck F (2021) Kiaulių Mycoplasma hyopneumoniae vakcinų tobulinimo perspektyvos. Vet Res 52:67

54. Gartlan KH, Krashias G, Wegmann F, Hillson WR, Scherer EM, Greenberg PD, Eisenbarth SC, Moghaddam AE, Sattentau QJ (2016) Karbopolio sukeltas sterilus uždegimas sukelia tvirtus adaptyvius imuninius atsakus, jei nėra su patogenais susijusių molekulinių modelių . Vakcina 34:2188–2196