Iš pieno egzosomų gauta mikroRNR-2478 slopina melanogenezę Akt-GSK3 keliu

Kontaktas:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

In-Seon Bae ir Sang Hoon Kim

Santrauka:Egzosomos dalyvauja tarpląsteliniame ryšyje, perkeldamos molekules iš donoro į recipiento ląsteles. Egzosomos randamos įvairiuose kūno skysčiuose, įskaitant kraują, šlapimą, smegenų skystį ir pieną. Pieno egzosomose yra daug endogeninių mikroRNR molekulių. MikroRNR yra mažos nekoduojančios RNR ir atlieka svarbų vaidmenį biologiniuose procesuose. Specifinės pieno egzosomų biologinės funkcijos nėra gerai suprantamos. Šiame tyrime mes ištyrėme poveikįpieno eksosomosapie melanino gamybą melanomos ląstelėse ir melanocituose. Mes tai radomesumažėjo pieno egzosomųmelanino kiekis, tirozinazės aktyvumas ir su melanogeneze susijusių genų ekspresija inmelanomos ląstelėse ir melanocituose. Galvijams specifinis miR-2478 egzosomose slopino melanino gamybą. Mes nustatėme, kad Rap1a yra tiesioginis miR-2478 taikinys melanomos ląstelėse ir melanocituose. Per didelis MiR-2478raiška sumažino Rap1a ekspresiją, todėl sumažėjo melanino gamyba ir su melanogeneze susijusių genų ekspresija. Sumažėjo Rap1a ekspresijos slopinimasmelanogenezėper Akt-GSK3 signalo kelią. Šie rezultatai patvirtina miR-2478, gauto iš milkeksosomų, kaip reguliatoriaus, vaidmenįmelanogenezėper tiesioginį taikymą į Rap1a. Šie rezultatai rodo, kad pieno egzosomos gali būti naudingos kosmetikos sudedamosios dalys, kurias reikia pagerintibalinimas.

Raktiniai žodžiai: melanogenezė;pieno egzosoma; miR-2478; Rap1a

žolelių cistankaiyra melaniną slopinantis ingredientas

1. Įvadas

Kosmeceutical yra sudėtinis žodis, jungiantis kosmetiką ir farmaciją ir reiškia kosmetiką su funkciniais ingredientais, turinčiais medicininį poveikį [1]. Anksčiau oda buvo gerinama atliekant dermatologines procedūras, tačiau pastaruoju metu susidomėjimas kosmetikos gaminiais išaugo dėl vartotojų noro gauti tokį poveikį naudojant kosmetiką. Kosmetikos pramonė pastaraisiais metais taip pat išaugo susidomėjimas naujų kosmetikos ingredientų naudojimu [ 2]. Funkcinė kosmetika apima produktus, kurie padeda balinti odą, užkertant kelią melanino nusėdimui ant odos.

Melaninas, svarbus odos ir plaukų spalvą lemiantis elementas, saugo odą nuo ultravioletinių spindulių [3]. Tačiau per didelis melanino susidarymas sukelia netolygų odos atspalvį, pvz., dėmių ir strazdanų [4]. Mikroftalmijos transkripcijos faktorius (MITF) yra pagrindinis melanocitų vystymosi reguliatorius. Tirozinazė (TYR) yra svarbiausias melanino sintezės fermentas. Melanino sintezės procesą sukelia TYR aktyvinimas per MITF, kuris yra svarbus fermentas, dalyvaujantis pradiniame melanino sintezės proceso etape ir naudoja tirozino L formą arba DOPA kaip substratą melaninui susidaryti [5].

MikroRNR (miR) yra trumpos nekoduojančios RNR, kurios dalyvauja daugelyje biologinių procesų, kontroliuodamos genų ekspresiją po transkripcijos [6]. Tyrimai taip pat atskleidė melanino biosintezės kontrolę mikroRNR. Pavyzdžiui, buvo pranešta, kad miR-143-5p nukreiptas į Tak1 geną ir sumažina MITF ekspresiją, taip slopindamas melanino sintezę [7]. MiR-125b, neigiamas reguliatoriusmelanogenezėbuvo įrodyta, kad jis reguliuoja pigmentacijos geną SH3BP4 [8], o miR-675 iš keratinocitų išskiriamose egzosomose slopinamelanogenezėtaikant MITF [9].

Egzosomos yra 30–200 nm dydžio membranomis apribotos pūslelės, kuriose yra DNR, RNR ir peptidų [10]. Vidiniai egzosomų komponentai gali saugiai perduoti informaciją į gretimas ar nutolusias ląsteles, nesuardydami biologinių skysčių fermentų, taip paveikdami mikroaplinką aplink įvairias ląsteles [11].Pieno egzosomosyra pieno kilmės tarpląstelinės pūslelės, kurios yra stabilios žmogaus virškinimo procesuose [12]. Iš galvijų pieno išgautos egzosomos turi ne tik keletą baltymų, tokių kaip kazeinas ir laktoglobulinas, bet ir mikroRNR, kurios veikia kaip krovinys [13–15]. Galvijų piene yra su imunitetu susijusių mikroRNR, tokių kaip miR-15b, miR-27b, miR-34a ir miR-10. Šių mikroRNR ypač daug yra priešpienyje [16].

Kai kurie tyrimai parodė, kad pieno komponentai slopinamelanogenezėmelanocituose; pavyzdžiui, baltymai, tokie kaip -laktoglobulinas ir κ-kazeinas piene, reguliuoja melanogenezę [17,18]. Nustatyta, kad Lactobacillus helveticus NS8-fermentuoto pieno supernatantas slopina UV žalą ir odos hiperpigmentaciją [19]. Tačiau kol kas nėra pranešimo apie tai, ar galvijų piene esančios mikroRNR yra susijusios su odabalinimas, nors egzistuoja 79 mikroRNRpieno egzosomos[13]. Todėl šiame tyrime ištyrėme, ar pieno egzosomos, kuriose yra mikroRNR, slopina melanino sintezę pelių ir žmogaus melanomos ląstelėse ir melanocituose.

2. Medžiagos ir metodai

2.1. Ląstelių kultūros

Pelės melanomos B16F10 ląstelės buvo kultivuojamos Dulbecco modifikuotoje Eagle terpėje (DMEM, Hyclone, Logan, UT, JAV). Žmogaus melanomos MNT-1 ląstelės buvo auginamos minimalioje esminėje terpėje (MEM, Hyclone). Visos terpės buvo papildytos 10 procentų fetalbovine serumo (FBS, Hyclone, JAV) ir 1 procentu penicilino-streptomicino tirpalo. Normalūs žmogaus epidermio melanocitai (NHEM, PromoCell, Heidelbergas, Vokietija) 5 arba 6 praėjimo metu buvo palaikomi melanocitų augimo terpėje (PromoCell). Šios ląstelės buvo inkubuojamos 37 ◦C temperatūroje drėgnoje atmosferoje, kurioje yra 5 procentai CO2.

2.2. Egzosomų valymas

Komercinis pienas (1 ml) buvo centrifuguojamas esant 2000 × g 10 min., po to supernatantas centrifuguojamas 10, 000 × g greičiu 10 min. Pieno supernatantas buvo praleistas per 0,45 µm filtrą, o po to per 0,2 µm filtrą. Gautas tirpalas (300 µL) buvo sumaišytas su fosfatiniu buferiniu fiziologiniu tirpalu (PBS) ir 300 µL Exoquick eksosomų nusodinimo tirpalo (Systems Biosciences, Palo Alto, CA, JAV) ir inkubuojamas 30 min. Mišinys buvo centrifuguojamas 10 000 × g 30 minučių, kad gautų egzosomų nuosėdas, kurios vėliau buvo resuspenduotos PBS. Egzosomų dydžio pasiskirstymas buvo nustatytas Zetasizer Nano ZS 90 (Malvern Instruments, Almelo, Prancūzija). Tolimesniam naudojimui egzosomos buvo laikomos –80 ◦C temperatūroje.

2.3. Krioelektroninė mikroskopija

3 µL šviežios egzosomų suspensijos alikvotinė dalis buvo adsorbuota į švytėjimo išleidžiamą, perforuotą anglimi dengtą tinklelį (2/2-3 C C plokščias; Protochips, Morrisville, NC, JAV), kuris po to 3 sek. 4 ◦C ir giliai užšaldyti naudojant Vitrobot Mark IV (Thermo FisherScientific, Lafayette, CO, JAV). Tinkleliai buvo laikomi skystame azote, po to perkeliami į Gatan 626 krio mėginių laikiklį (Gatanas, Pleasantonas, CA, JAV). Mėginiai buvo nufotografuoti su vardiniu 29,{11}} × padidinimu krioelektroniniu mikroskopu (FEI Tecnai F20 TEM,FEI, Hillsboro, OR, USA), turinčiu standartinį lauko emisijos pistoletą (s-FEG) ir fotoaparatą K2Summit (Gatan), kurio greitinimo įtampa yra 200 kV.

2.4. Ląstelių gyvybingumo tyrimas (WST tyrimas)

Melanomos ląstelės (B16F10, MNT-1) ir žmogaus melanocitai (NHEM) buvo pasėtos po 4 × 103 ląstelių/šulinėlių į 96-šulinėlių plokšteles ir apdorotospieno egzosomos(20 ir 50 µg/mL) arba mikroRNR imitacija (RNR dvigrandžiai oligonukleotidai) kiekvienam eksperimentui. Nurodytais laiko momentais ląstelių gyvybingumas buvo matuojamas naudojant padidinto ląstelių gyvybingumo tyrimo rinkinį EZ-CyTox (Daeil Lab Service, Seulas, Korėja) pagal gamintojo instrukcijas. Absorbcija buvo matuojama esant 450 nm Vmax mikroplokštelės spektrofotometru (Molecular Devices, San Chosė, Kalifornija, JAV).

2.5. Melanino kiekio matavimas

Melanomos ląstelės ir melanocitai buvo gydomipieno egzosomos(20 ir 50 µg/ml) 48 val. Du kartus nuplovus lediniu PBS, ląstelės buvo centrifuguojamos 2500 x g 10 min. Ląstelių granulės buvo resuspenduojamos 90 °C temperatūroje 30 minučių 1 N NaOH, turinčiame 10 procentų dimetilsulfoksido. Bendras melanino kiekis buvo matuojamas Vmax mikroplokštelės spektrofotometru (Molecular Devices) esant 405 nm.

2.6. Tirozinazės aktyvumo tyrimas

Melanomos ląstelės ir melanocitai buvo inkubuojami supieno egzosomos48 val. Ląstelės du kartus plaunamos PBS ir lizuojamos PBS, turinčiu 1 % Triton X-100 ir 0,1 mMfenilmetansulfonilfluorido. Po centrifugavimo supernatantas buvo surinktas ir perkeltas į 96-šulinėlių plokštelę. Pridėjus 0.1 ML-3,4-dihidroksifenilalanino, mėginiai buvo inkubuojami 37 ◦C temperatūroje 1 val. Tirozinazės aktyvumas buvo matuojamas remiantis absorbcija prie 475 nm, naudojant mikroplokštelės spektrofotometrą (Molecular Devices).

žolelių cistankai

2.7. Žmogaus odos audiniai

Epiderminiai ekvivalentai, turintys melanocitų (MelanoDerm, MEL-300B), buvo gauti iš MatTek (Ashland, MA, JAV) ir buvo laikomi EPI-100-NMM-113-terpėje.Pieno egzosomosbuvo pritaikyti MelanoDerm audiniams 1, 3, 7, 9 ir 12 dienomis. PBS buvo naudojamas kaip neigiama kontrolė. Audiniai buvo fotografuojami 3, 7, 9, 12 ir 14 dienomis. Pigmentacija buvo matuojama lyginant L reikšmės pokyčius (Adobe PhotoshopCC 2015). Melanino kiekis žmogaus odos audinyje buvo išmatuotas 14 dieną Solvablemelanino tyrimu. Trumpai tariant, MelanoDerm audiniai buvo ištirpinti naudojant Solvable (PerkinElmer, Waltham, MA, JAV) ir inkubuojami per naktį 60 ◦ C temperatūroje. Mėginiai buvo maišomi sūkuryje ir centrifuguojami 16 500 × g 5 minutes. Supernatantas buvo perkeltas į 96-šulinėlių plokštelės šulinėlius ir spektrofotometru nuskaitytas esant 490 nm.

3. Rezultatai

3.1. Iš pieno išskirtų egzosomų apibūdinimas

Norėdami ištirti iš karvės pieno išgaunamų egzosomų ypatybes, pirmiausia išmatavome egzosomų dydį dinamine šviesos sklaida. Dėl to buvo nustatyta, kad iš pieno ekstrahuotų egzosomų skersmuo yra 80–190 nm (1A pav.). Dėlpieno eksosomagryninant, Exoquick-pieno supernatanto mišinys buvo centrifuguojamas, kad gautų pieno egzosomų granules. CD9, TSG101 ir HSP70, kaip egzosominių žymenų, ekspresija buvo aptikta granulėse, tačiau šių baltymų nebuvo supernatante (1A pav.). Be to, sferinė egzosomų morfologija ir dydis buvo patvirtinti krioelektronine mikroskopija (pav. 1B). Nustatyta, kad egzosomos turi apvalią formą iki 200 nm skersmens. Toliau ištyrėme, ar iš pieno išgautas egzosomas pasisavino ląstelės. Pelės B16F10 ląstelės buvo inkubuojamos supieno egzosomospažymėtas lipofiliniu fluorescenciniu dažikliu PKH26. Dėl to mes pastebėjome, kad pažymėtos egzosomos buvo ląstelių viduje (S1 pav.).

3.2. Tirozinazės aktyvumą ir melanino gamybą slopina pieno egzosomos B16F10 ląstelėse

Toliau mes ištyrėme išskirtų egzosomų poveikį ląstelių gyvybingumui. Kaip parodyta 2A paveiksle, mes atskleidėme, kad, nepaisant egzosomų koncentracijos, nebuvo reikšmingo ląstelių gyvybingumo skirtumo.

Ištirti galimas odos ląstelesbalinimaspoveikispieno egzosomos, ląstelės buvo apdorotos pieno egzosomomis. Mes nustatėme, kad tirozinazės aktyvumas ląstelėse, veikiamose 20 arba 50 µg/mL koncentracijos pieno eksosomų, sumažėjo atitinkamai 43 procentais ir 59 procentais (2B pav.). Kadangi tirozinazės fermento aktyvumo sumažėjimas gali slopinti melanino biosintezę, melanino kiekis buvo matuojamas po apdorojimo pieno eksosomomis. Pastebėjome melanino sintezės slopinimą ląstelėse, veikiamosepieno egzosomos(20 arba 50 µg/mL) atitinkamai 45 procentais ir 55 procentais (2C pav.). Be to, MITF mRNR ekspresija sumažėjo ir padidėjo pieno eksosomų koncentracija. MITF mRNR lygis sumažėjo 59 procentais ląstelėse, apdorotose 20 µg/mL egzosomomis, ir 84 procentais ląstelėse, apdorotose 50 µg/mL egzosomomis (2D pav.). Tirozinazės (TYR) mRNR ekspresija taip pat sumažėjo 49 procentais ir 76 procentais ląstelėse, veikiančiose šiose egzosomų koncentracijose (2D pav.). MITF ir tirozinazės baltymų kiekis taip pat sumažėjo, nes koncentracija pieneegzosomospadidėjo (2E pav.). Šie rezultatai rodo, kad pieno egzosomos slopina melanogenezę pelės B16F10 ląstelėse.

3.3. Galvijams specifinis miR{3}} iš pieno egzosomų slopina melanogenezę

Siekiant nustatyti, ar miR{0}} kilęs išpieno egzosomostiesiogiai veikia melanogenezę, miR-2478 inhibitorius buvo transfekuotas į ląsteles, paveiktas pieno eksosomų (50 µg/mL). Esant pieno egzosomoms, B16F10 ląstelės, transfekuotos themiR-2478 inhibitoriumi, parodė žymiai didesnį tirozinazės aktyvumą, palyginti su kontroliniu (4A pav.). Melanino kiekis taip pat buvo didesnis miR-2478 inhibitoriais apdorotose ląstelėse nei kontrolinėse ląstelėse (4B pav.). MITF mRNR ekspresija buvo –2.{10}}karto didesnė miR 2478 inhibitoriumi apdorotose ląstelėse nei kontrolinėse ląstelėse, o TYR mRNR ekspresija buvo –2-karto didesnė, kai buvo slopinamas miR-2478 (4C pav. ). MITF ir TYR baltymų lygis taip pat atsistatė paveiktose ląstelėsepieno egzosomospo to, kai šios ląstelės buvo transfekuotos miR-2478 inhibitoriumi (4D pav.). Šie rezultatai rodo, kad miR-2478, gautas iš pieno egzosomų, tiesiogiai slopino melanogenezę pelių melanomos ląstelėse.

3.4. Pieno egzosomos slopina melanogenezę per Akt-GSK3 kelią

Toliau mes išnagrinėjome, kaip tai padarytipieno egzosomosreguliuotimelanogenezėnustatyti atitinkamą paveiktą kelią melanomos ląstelėse. Nors nežinoma, ar Rap1a tiesiogiai kontroliuoja melanogenezę, buvo pranešta, kad Rap1a slopina Akt fosforilinimo vėžines ląsteles [20]. Remdamiesi šia informacija, ištyrėme, ar Rap1a moduliuoja Akt kelią.

Su Akt susijusiamemelanogenezėkelias, aktyvuotas Akt sukelia Gsk3 fosforilinimą Ser9 ir taip jį inaktyvuoja; Šis pokytis slopina MITF transkripcijos aktyvumą ir sumažina tirozinazės reguliavimą [21,22]. Šiame tyrime įvertinome Akt ir GSK3 ekspresiją ląstelėse, apdorotose Rap1a siRNR. Šiose ląstelėse padidėjo Akt fosforilinimo aktyvacija, taip pat padidėjo pGSK3 kiekis (7A pav.). GSK3 buvo inaktyvuotas aktyvuojant Akt priklausomai nuo koncentracijos ląstelėse, apdorotose 20 arba 50 µg/mlpieno egzosomos(7B pav.). Baltymų Akt ir GSK3 lygiai ląstelėse, apdorotose miR-2478mimika, atitiko aukščiau pateiktus rezultatus (7C pav.). Tada išbandėme, ar miR-2478iš pieno egzosomų veikia Akt-GSK3 kelią. Esant pieno egzosomoms, baltymų Akt ir GSK3 fosforilinimas buvo mažesnis ląstelėse, apdorotose themiR-2478 inhibitoriumi (7D pav.). Be to, gydymas AKT inhibitoriumi GSK690693 padidino genų, susijusių sumelanogenezėpieno egzosomomis apdorotose ląstelėse. (7E pav.). Šie atradimai reiškė, kad miR-2478 inpieno egzosomossumažina Rap1a reguliavimą ir slopina melanogenezę per Akt-GSK3 kelią.

cistanche žolėbalinamasis poveikis odai iki antioksidacijos

3.8. Pieno egzosomos slopino melanogenezę žmogaus melanomos ląstelėse, melanocituose ir melanodermos audiniuose

Turint omenyjepieno egzosomosslopinamasmelanogenezėpelių ląstelėse toliau nustatėme, ar pieno egzosomos buvo vienodai veiksmingos žmogaus ląstelėse. Pirma, MNT{0}} žmogaus melanomos ląstelių ir NHEM žmogaus melanocitų gyvybingumas buvo ištirtas po inkubacijos su 20 arba 50 ug/ml pieno egzosomų. Kaip parodyta 8A paveiksle, gyvybingumas nesiskyrė. Tirozinazės aktyvumas buvo slopinamas atitinkamai 43 proc. ir 85 proc. MNT-1 ląstelėse, veikiamose 20 ug/ml arba 50 ug/ml pieno egzosomų (8B pav.). NHEM taip pat sumažėjo atitinkamai 34 procentais ir 66 procentais apdorojant 20 ug/mL arba 50 ug/mL pieno egzosomų (8B pav.). Be to, melanino kiekis buvo matuojamas MNT-1 ląstelėse ir NHEM, veikiamose pieno eksosomų. Dėl to melanino sintezė MNT{16}} ląstelėse, veikiamose 20 ug/mL arba 50 ug/mLpieno egzosomosbuvo slopinamas atitinkamai 37 proc. ir 58 proc., o NHEM ląstelėse pieno eksosomos gydymas melanino sintezei trukdė atitinkamai 36 proc. ir 62 proc. (8C pav.). Be to, odą šviesinantis poveikispieno egzosomosbuvo toliau patvirtintas naudojant žmogaus odos audinius. Po gydymo pieno egzosomomis žmogaus audiniuose, giminbalinimas poveikis buvo pastebėtas 3, 9, 12 ir 14 dienomis. Dėl to mes nustatėme, kad odos spalva pieno eksosomų paveiktuose audiniuose buvo ryškesnė nei kontrolinių audinių (8D pav.). Pigmentacijos laipsnis buvo apskaičiuotas kaip L vertė, kuri yra ryškumo vertė. Pieno eksosoma apdorotuose odos audiniuose pigmentacija progresavo lėčiau nei kontroliniuose odos audiniuose (8D pav.). Eksperimentinė grupė, gydomapieno egzosomosparodė mažesnį melanino dalelių dydį ir mažą melanino pigmento kiekį, palyginti su kontroline grupe (8E pav.). Išmatavus melanino kiekį po 14 dienų pieno egzosomos slopino melanino sintezę žmogaus audiniuose (8F pav.). Todėl padarėme išvadą, kad milkeksosomos slopinamelanogenezėžmogaus ląstelėse ir audiniuose.

4. Diskusija

Egzosomų reguliavimo tyrimaimelanogenezėpranešė, kad iš keratinocitų gautos egzosomos turi balinamąjį poveikį. Melanocitai ir juos supantys keratinocitai yra funkciškai sujungti ir sudaro melanino vienetus odos epidermyje [23, 24]. Iš keratinocitų gaunami tirpūs faktoriai reguliuoja gretimų melanocitų melanogenezę. Iš normalių keratinocitų išskiriamos egzosomos skatina melanogenezę, padidindamos jo ekspresijos reguliavimąmelanogenezėsu susijusiais baltymais [23–25]. Be to, abalinimastyrime, kuriame naudojamos iš ląstelių išskirtos egzosomos, neseniai buvo pranešta, kad egzosomos, išskirtos iš žmogaus riebalinio audinio kamieninių / stromos ląstelių, parodė odos šviesinimo veiksmingumą pelės melanomos ląstelėse [26]. Taip pat buvo pranešta, kad iš augalų išgautos eksosomos turi balinamąjį poveikį. Tarpląstelinės pūslelės, išskirtos iš D. morbifera augalų lapų ir stiebų, turėjo anti-melanogeninį poveikį pelių melanomos ląstelėms ir sveikai žmogaus odai [27]. Mūsų tyrime buvo tiriamas iš pieno gautų egzosomų balinamasis poveikis.

Palyginti su egzosomomis, išskirtomis iš kraujo plazmos ar kultūros skysčio, iš pieno gautos eksosomos turi ne tik didelius egzosomų kiekius, kuriuos galima išgauti iš tūrio vieneto, bet ir mažą kainą [26, 27]. Nespieno egzosomosJų cheminė sudėtis yra panaši į ląstelių membranų, jos pasižymi mažesniu imunogeniškumu ir citotoksiškumu bei turi didelį biologinį suderinamumą [28, 29]. Neseniai, kai pieno egzosomos buvo maitinamos DSS (dekstrano sulfato natrio druskos) sukelto kolito modelio pelėms, priešuždegiminių citokinų IL-6 ir TNF ekspresija sumažėjo, palyginti su kontroline grupe, todėl sumažėjo uždegimas ir pagerėjo nekrozinis enteritas [30, 31]. Be to, pieno egzosomų patekimas į osteoporozės ligos modelį pagerino artritą, padidindamas kaulų tankį ir sumažindamas priešuždegiminius citokinus [32, 33]. Iki šiol pieno egzosomų poveikis buvo sutelktas į imunologinius reiškinius, mažinančius priešuždegiminius citokinus, ir į kaulų vystymąsi, tokius kaip enterito palengvinimas ir osteoporozės gerinimas. Šiame tyrime, be paėmimo būdopieno egzosomos, buvo patvirtinta, kad užtepus ant odos jis buvo veiksmingas odaibalinimas. Tai rodo, kad ateityje jis gali būti taikomas įvairių ligų gydymui, didinant fiziologinį aktyvumą naudojant pieno egzosomas.

Nors šis tyrimas parodė, kadpieno egzosomosslopintimelanogenezė, jau žinoma, kad išrūgų baltymai, tokie kaip kazeinas, -laktoglobulinas ir -laktalbuminas, turi balinamąjį poveikį. -laktoglobulinas mažina tirozinazės aktyvumą žmogaus melanocituose [18], o k-kazeinas slopina melanogenezę pelės B16 melanomos ląstelėse [17]. Įdomu tai, kad daugelio šių komponentų yra ir pieno egzosomose. Pagal pieno egzosomų proteomerezultinius kazeinas, -laktoglobulinas ir -laktalbuminas pasiskirsto egzosomose [15,34,35]. Pieno egzosomose yra ir mikroRNR, ir baltymų. Izumi ir kolegų miRNR mikromasyvas, naudojant pieno egzosomas, miR-2478, miR-1777b, miR-1777a, let-7b ir miR{{16 }} buvo labai pasiskirstę pieno egzosomose [13]. Šiame tyrime, išskyrus miR-2478, tarp šių mikroRNR miR-1777b, miR-1777a, let-7b ir miR-1224 parodė tirozinazės aktyvumas nesiskiria nuo kontrolinės grupės (S2 pav.). miR-2478 buvo gausiausiapieno egzosomosir sumažėjęs tirozinazės aktyvumas. Tačiau su balinimu susijusių MITF ir TYR genų ekspresija labiau sumažėjo ląstelėse, apdorotosepieno egzosomosnei ląstelėse, apdorotose vien miR{0}}mimika. Šie rezultatai rodo, kad keli komponentai, įskaitant mikroRNR pieno eksosomose, yra susijębalinimasveiksmas.

Dauguma pieno egzosomų mikroRNR atlieka biologines funkcijas, slopindamos tikslinių genų ekspresiją recipiento ląstelėse. Šiame tyrime miR{0}} taip pat slopino melanino sintezę, taikydamas Rap1a kaip tikslinį geną. Nors tai nebuvo iš pieno gautos mikroRNR, apie mikroRNR, kurios kontroliuoja su balinimu susijusių genų ekspresiją, jau buvo pranešta. Kai žmogaus miR-27a-3p imitacija buvo pritaikyta pelių melanocitams, ji slopino Wnt3a ekspresiją ir taip slopino melanino sintezę [36], o negimdinis miR-218 slopino TYR aktyvumą, sumažindamas MITF ekspresiją. pelių melanomos melanocituose [37]. miR{10}} reklamuojamelanogenezėper CREB1/MITF/Rab27ataką, nukreipiant Kif5b sergant melanoma [38]. Pieno egzosomose yra 79 mikroRNR

mikroRNR vidujepieno egzosomosgauta iš karvių [13]. Todėl reikalingi tolesni pieno egzosomų fiziologinio aktyvumo tyrimai.

5. Išvados

Mūsų išvados rodo, kadpieno egzosomosyra kandidatai į anti-melanogenines medžiagas, kurios mažina pigmentaciją slopindamos su melaninu susijusių genų ekspresiją (10 pav.). Melanomos ląstelėse ir melanocituose pieno eksosomos parodė TYR slopinimą ir melanino kiekio sumažėjimą, palyginti su neigiama kontrole. Be to, šiuos efektus tarpininkavo miR-2478 išpieno egzosomos. Todėl pieno egzosomos gali būti naudingos funkciniam vystymuisibalinimaskosmetika su mažu citotoksiškumu.

cistanchebalinamasis poveikis odai iki antioksidacijos