3 dalis: Echinakozidas, išskirtas iš Cistanche Tubulosa, tariamai skatina augimo hormono sekreciją aktyvuodamas grelino receptorių

Echinakozidas, išskirtas iš Cistanche tubulosa, tariamai skatina augimo hormono sekreciją aktyvuodamas grelino receptorių

Chieh-Ju Wu 1, Mei-Yin Chien 2, Nan-Hei Lin 1, Yi-Chiao Lin 1, Wen-Ying Chen 3, Chao-Hsiang Chen 2,4* ir Jason TC Tzen 1,*

1 Nacionalinio Chung-Hsing universiteto Biotechnologijos instituto absolventas, Taichung 402, Taivanas; baby159357520@gmail.com (C.-JW); CMNHEI@mohw.gov.tw (N.-HL); s9755702@gmail.com (Y.-CL)

2 Ko Da Pharmaceutical Co. Ltd., Taoyuan 324, Taivanas; rd1@koda.com.tw

3 Nacionalinio Chung-Hsing universiteto Veterinarinės medicinos skyrius, Taichung 402, Taivanas; wychen@dragon.nchu.edu.tw

4 Taipėjaus medicinos universiteto Farmakognozijos instituto absolventas, Taipėjus 110, Taivanas

* Korespondencija: gm@koda.com.tw (C.-HC); TCTZEN@dragon.nchu.edu.tw (JTCT); Tel.: plius 886-4-22840328 (išor. 776) (JTCT); Faksas: plius 886-4-22853527 (JTCT)

Akademinis redaktorius: Pinarosa Avato

Gauta: 2019 m. sausio 22 d.; Priimta: 2019 m. vasario 14 d.; Paskelbta: 2019 m. vasario 17 d

Kontaktas:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Santrauka:Cistanchetradicinėje kinų farmakopėjoje buvo užfiksuota, kad dykumos ženšenis turi daug biologinės veiklos ir buvo naudojamas kaip senėjimą stabdantis vaistas. Trys feniletanoidiniai glikozidai -echinakozidas, tubulozido A ir akteozido – buvo aptikta vandens ekstrakteCistanche kanalėlių(Schenk) R. Wightas ir pagrindinė sudedamoji dalis,echinakozidas, buvo toliau išvalytas.Echinakozidasdidesnės nei 10_6 M koncentracijos aktyvumas, skatinantis augimo hormono sekreciją žiurkės hipofizės ląstelėse. Panašiai kaip augimo hormoną atpalaiduojantis hormonas -6, sintetinis grelino analogas, augimo hormono sekrecijos stimuliavimą echinakozidu slopino [D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7,9, Leu11] medžiaga P. , atvirkštinis grelino receptoriaus agonistas. Molekulinis modeliavimas parodė, kad visi trys feniletanoidiniai glikozidai tinkamai sąveikavo su grelino receptoriaus rišamąja kišene, o echinakozidas parodė šiek tiek geresnę sąveiką su receptoriumi nei tubulozidas A ir akteozidas. Rezultatai rodo, kad feniletanoidiniai glikozidai, ypač echinakozidas, yra aktyvios sudedamosios dalys, tariamai atsakingos už senėjimą stabdantį C. tubulosa poveikį ir gali būti laikomos galimomis sukurti kaip grelino nepeptidiliniai analogai.

Raktiniai žodžiai: cistanchetubulozė;echinakozidas; grelinas; augimo hormono sekrecija;feniletanoidasglikozidai

echinakozidasincistancheturi daug efektų

Pls spustelėkite čia, kad pamatytumėte 2 dalį

4. Medžiagos ir metodai

4.1. Chemikalai ir augalinės medžiagos

Cistanchedeserticola YC Ma buvo gautas iš vietinės rinkos ir patvirtintas dr. Nan-Hei Lin.Cistanchetubulosa (Schenk) R. Wight buvo nupirktas iš Sinopharm Tian-Li Pharmaceutical Co., Ltd. (Hangdžou, Kinija). HPLC kokybės acetonitrilas, skruzdžių rūgštis ir metanolis buvo įsigyti iš ECHO Chemical Co., Ltd (Miaoli, Taivanas). Dulbecco modifikuota Eagle terpė (DMEM), dializuotas galvijų vaisiaus serumas (DFBS) ir Trypsin-EDTA buvo nupirkti iš Invitrogen (Carlsbad, CA, JAV). DNase I pirkta iš Worthington Biochemical (Lakewood, NJ, JAV). Augimo hormoną atpalaiduojantis hormonas -6 (GHRP-6) buvo gautas iš Gen Way Biotech, Inc. (San Diegas, CA, JAV). I tipo kolagenazė ir [D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7,9, Leu11] medžiaga P buvo nupirkta iš Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, JAV). Žiurkių augimo hormono ELISA rinkinys buvo įsigytas iš Sunred Biological Technology Corporation (Šanchajus, Kinija).

4.2. HPLC/UV ir LC_Cistanche spp. vandens gavybos MSn analizės.

Džiovintas stiebas (25 g).Cistanchedeserticola YC Ma arbaCistanchetubulosa (Schenk) R buvo ekstrahuotas tris kartus su 500 ml distiliuoto vandens 60 min 50 laipsnių vandens vonioje. Tirpalas buvo filtruojamas per 13 mm Sirijos filtrą su 0,45 µm PP membraniniu filtru (Pall Corporation, Glen Cove, NY, JAV) ir buvo atliktas toks tyrimas. Ištirtos cheminės sudedamosios dalys ekstraktuose

naudojant Syncronis C18 kolonėlę (4,6 × 250 mm vidinis skersmuo, 5 um, Thermo Scientific, Waltham, MA, JAV) HPLC sistemoje kartu su 600E modelio fotodiodų matricos detektoriumi (Waters Corporation,

Milfordas, MA, JAV). Mobiliąją fazę sudarė (A) vanduo, turintis {{0}},1 procento skruzdžių rūgšties ir (B) acetonitrilo. Eliuavimo gradientas buvo toks: 0–60 min., tiesinis gradientas nuo 14 procentų B; 0–3 min., nuo 14 procentų iki 17 procentų B; 3–4 min., 17 procentų B; 4–15 min., nuo 17 procentų iki 20 procentų B; 15–20 min., 20 procentų B; 20–50 min., nuo 20 procentų iki 14 procentų B; 50–60

min, 14 procentų B. Ultravioletinės (UV) absorbcijos aptikimo bangos ilgis buvo nustatytas ties 330 nm. Linijinis gaudyklė kvadrupolis (LTQ) tandeminis masės spektrometras (Thermo Electron, San Chosė, CA, JAV), turintis elektropurškimo jonizacijos (ESI) sąsają, buvo prijungtas prie Surveyor LC sistemos (Thermo Electron).

su 5 ul mėginio kilpa. Eliuavimo gradientas buvo toks: 0–90 min., tiesinis gradientas nuo 14 procentų B; 0–24 min., nuo 14 procentų iki 17 procentų B; 24–25 min., 17 proc. B; 25–36 min., nuo 17 procentų iki 20 procentų B; 36–37 min., 20 procentų B; 37–80 min.,

20% to 14% B; 80–90 min, 14% B. The heated capillary temperature was set at 300℃ with a spray voltage of 4.5 kV. Negative ESI mode was firstly scanned ranging from m/z 400–1000. Data-dependent MSN was obtained using the high purity helium (>99,99 proc.), kaip susidūrimo dujos.

4.3. Echinakozido išskyrimas

Vandeninis ekstraktas iš džiovinto C. tubulosa stiebo (25 g) buvo sukoncentruotas sumažintame slėgyje, kad gautų giliai rudą sirupą. Neapdorotas ekstraktas buvo suspenduotas distiliuotu vandeniu ir liofilizuotas šaldymo džiovintuvu. 100 mg milteliai buvo ištirpinti 5 ml distiliuotame vandenyje ir išgryninti naudojant Sephadex LH-20 kolonėlę (100 ml; GE Healthcare Bio-Sciences AB, Švedija), eliuuojama 10 % vandeniniu metanolio tirpalu ir stebima HPLC. . Echinakozido turinčios frakcijos buvo aptiktos nuskaitant absorbciją esant 245 nm ir paimtos naudojant automatinį mėginių ėmimo įrenginį.

4.4. Gyvūnai

Eksperimentus patvirtino Nacionalinio Chung{0}}Hsingo universiteto Institucinis gyvūnų priežiūros ir naudojimo komitetas su IACUC 106-079 patvirtinimo numeriu. Sprague _Dawley žiurkių patinai, sveriantys 250_300 g, buvo įsigyti iš BioLASCO, Taiwan Co., Ltd. (Taipėjus, Taivanas). Du gyvūnai viename narve buvo laikomi kontroliuojamoje 23 o2, 60 o 10 procentų drėgmės ir 12 valandų šviesos/tamsos ciklo aplinkoje. Žiurkės buvo šeriamos standartine čiaudo dieta (suteiktos kalorijos

28,7 proc. baltymų, 13,4 proc. riebalų ir 57,9 proc. angliavandenių, 5001 Rodent LabDiet, Sent Luisas, MO, JAV) ir distiliuoto vandens ad libitum.

4.5. Pirminė hipofizės ląstelių kultūra

Hipofizės ląstelės buvo išskirtos pagal modifikuotą fermentinės dispersijos metodą, kurį sukūrė Yamazaki ir kt. [29]. Trumpai tariant, Sprague Dawley žiurkių patinai buvo anestezuoti Zoletil 50 (40 mg/kg, IP; Virbac Laboratories, Carros, Prancūzija), o priekinės hipofizės liaukos buvo pašalintos ir disperguotos į hipofizės ląstelių kultūrą suspensijoje, kaip aprašyta anksčiau [30].

4.6. Augimo hormono sekrecijos tyrimas

Pirminės priekinės hipofizės ląstelės, turinčios 4 × 104 ląstelių / duobutę, buvo kultivuojamos 37 laipsnių temperatūroje, esant 5 procentams CO2, 2 dienas prieš augimo hormono sekrecijos tyrimą pagal anksčiau aprašytą protokolą [30].

Pašalinus auginimo terpę, ląstelės buvo badomos be serumo Dulbecco modifikuotoje erelio terpėje (DMEM) 90 minučių, kad stabilizuotų bazinio hormono sekreciją. Badavimo terpė buvo pakeista šviežia DMEM, turinčia echinakozido (nuo 10_8 iki 10_5 M) arba GHRP-6 (žmogaus grelino receptoriaus agonistas, GHSR, 10_7 M). kaip teigiamą kontrolę, ir ląstelės buvo inkubuojamos 15 ir 30 minučių 37 laipsnių temperatūroje, esant 5 procentams CO2. Norint nustatyti antagonistinį poveikį, ląstelės buvo inkubuojamos su GHSR

atvirkštinis agonistas, [D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7,9, Leu11] - medžiaga P (0,5 uM), o po to apdorojama DMEM, turinčiu echinakozido (10_5 M) arba GHRP-6 (10_7 M) 30 min. Terpė buvo renkama už

augimo hormono sekrecijos nustatymas žiurkės augimo hormono ELISA rinkiniu (Shanghai Sunred Biological Technology Corporation).

4.7. Statistinė analizė

Duomenys pateikti kaip vidutinės reikšmės o SD. Skirtumai buvo išanalizuoti T-Test. Statistinius skaičiavimus atliko GraphPad Prism 6 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, JAV). P lygis < 0,05="" buvo="" laikomas="" statistiškai="">

4.8. Homologijos modeliavimas ir prijungimas

Homologijos modeliavimas ir prijungimas prie žmogaus grelino receptoriaus, augimo hormono sekreciją skatinančio receptoriaus (GHSR, registracijos numeris AAI13548), buvo nustatytas remiantis mūsų ankstesne konstrukcija [21, 24]. Trumpai tariant, 1 ir 2 adrenerginių receptorių (PDB 2YCY ir 3PDS) kristalinės struktūros su surištais ligandais, cianopindololiu ir FAUC50 buvo naudojamos kaip šablonai GHSR struktūrai sukurti [31, 32]. GHSR struktūra su mažiausia bendra PDF energija buvo pasirinkta tolesniam prijungimui prie GHRP-6, echinakozido, tubulozido A ir akteozido. Visi modeliavimo procesai buvo atlikti naudojant Discovery Studio 2.1 platformą (http://accelrys.com/).

3D struktūra GHRP-6 buvo atsisiųsta iš Pub-Chem junginių duomenų bazės NCBI svetainėje (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). Echinakozido, tubulozido A ir akteozido 3D struktūros buvo sukurtos naudojant Chem3D programą (//www.cambridgesoft.com/). GHSR ligandų surišimo vieta buvo apibrėžta kaip sferinė erdvė, kurios spindulys yra 14 Å nuo surišimo kišenės centro. GHRP-6, echinakozido, tubulozido A arba akteozido prijungimas prie GHSR surišimo vietos buvo atliktas in silico, naudojant „Discover Studio 2.1“ pakete esantį „LibDock“ modulį ir dar labiau sumažintas naudojant išmanųjį sumažinimo algoritmą su CHARMm jėgos lauku. Atraskite Studio 2.1 paketą [33]. Norint palyginti santykinius echinakozido, tubulozido A ir akteozido surišimo afinitetus GHSR, prijungimui buvo naudojama aktyvaus centro sritis, sudaryta naudojant GHRP-6 GHSR, o surišimo energiją apskaičiavo GEMDOCK (The Institute of Bioinformatics). , Nacionalinis Chiao Tung universitetas, Taivanas).

Autoriaus indėlis: eksperimentai su gyvūnais, C.-JW, Y.-CL ir W.-YC; Identifikavimas ir valymas: MY.C., N.-HL ir C.-HC; Molekulinis modeliavimas: C.-JW, Y.-CL ir JTCT; Projekto rengimas ir rašymas: C.-HC ir JTCT

Finansavimas: darbas buvo iš dalies paremtas dotacija Jason TC Tzen iš Nacionalinio Chung-Hsing universiteto (NCHU{1}}D604).

Padėka: Autoriai dėkoja Tian-Shun Weng už pasidalijimą savo profesine patirtimi naudojant Cistanche rūšis.

Interesų konfliktai: visi autoriai pareiškia, kad nėra interesų konfliktų.

Nuorodos

1. Vangas, T.; Zhang, X.; Xie, W. Cistanche deserticola YC Ma, „Dykumos ženšenis“: apžvalga. Esu. J. Chinas. Med. 2012,40, 1123–1141. [CrossRef] [PubMed]

2. Vangas, T.; Chen, C.; Yang, M.; Dengas, B.; Kirbis, MG; Zhang, X. Cistanche tubulosa etanolio ekstraktas tarpininkauja žiurkių lytinių hormonų lygiui indukuodamas sėklidžių steroidogeninius fermentus. Pharm. Biol. 2016, 54, 481–487. [CrossRef] [PubMed]

3. Linas, WY; Chun, Y.; Džekas, C.; Kao, ST; Tsai, FJ; Liu, HP Molekuliniai keliai, susiję su Cistanche tubulosa ilgaamžiškumo skatinimu ir pažinimo gerinimu Drosophiloje. Fitomedicina 2017, 26, 37–44. [CrossRef]

4. Wu, CR; Linas, HC; Su, MH Vandeninių Cistanche tubulosa ekstraktų pašalinimas iš elgesio trūkumų į Alzheimerio ligą panašių žiurkių modelio: svarba amiloido nusėdimui ir centrinio neurotransmiterio funkcijai. BMC komplementas. Altern. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef]

5. Siuanas, GD; Liu, CQ Tyrimas apie Cistanche deserticola feniletanoidinių glikozidų (PEG) poveikį senų pelių senėjimui, kurį sukelia D-galaktozė. Zhong Yao Cai 2008, 31, 1385–1388. [PubMed]

6. Jiang, Y.; Tu, PF Cistanche rūšių cheminių sudedamųjų dalių analizė. J. Chromatogr. 2009, 1216, 1970–1979. [CrossRef] [PubMed]

7. Gao, C.; Wang, C.; Wu, G. Cistanche bendrieji glikozidai apie kraujagyslių demencijos žiurkių mokymosi ir atminties įtaką bei mechanizmų tyrimus. Smakras. Žolė. Med. 2005, 36, 1852–1855.

8. Li, F.; Yang, Y.; Zhu, P.; Chen, W.; Qi, D.; Ši, X.; Zhang, C.; Yang, Z.; Li, P. Echinakozidas skatina kaulų regeneraciją padidindamas OPG/RANKL santykį MC3T3-E1 ląstelėse. Fitoterapija 2012, 83, 1443–1450. [CrossRef]

9. Šimoda, H.; Tanaka, J.; Takahara, Y.; Takemoto, K.; Šanas, SJ; Su, MH Hipocholesteroleminis Cistanche tubulosa ekstrakto, tradicinio neapdoroto kinų vaisto, poveikis pelėms. Esu. J. Chinas. Med. 2009, 37, 1125–1138. [CrossRef]

10. Tangas, F.; Hao, Y.; Zhang, X.; Qin, J. Echinakozido poveikis inkstų fibrozei slopinant TGF- 1/Smads signalizacijos kelią DB/DB pelių diabetinės nefropatijos modelyje. Drug Des. Devel. Ten. 2017, 11 2813–2826. [CrossRef]

11. Xiong, WT; Gu, L.; Wang, C.; Saulė, HX; Liu, X. Antihiperglikeminis ir hipolipideminis Cistanche tubulosa poveikis 2 tipo diabetu sergančioms DB/DB pelėms. J. Ethnopharmacol. 2013, 150, 935–945. [CrossRef] [PubMed]

12. Bao, XX; Ma, HH; Dingas, H.; Li, WW; Zhu, M. Preliminarus Kinijos vaistažolių formulės optimizavimas, pagrįstas neuroprotekciniu poveikiu rotenono sukeltos Parkinsono ligos žiurkės modeliui. J. Integr. Med. 2018, 16, 290–296. [CrossRef] [PubMed]

13. Kojima, M.; Hosoda, H.; Data, Y.; Nakazato, M.; Matsuo, H.; Kanagawa, K. Ghrelin yra augimo hormoną atpalaiduojantis acilintas peptidas iš skrandžio. Gamta 1999, 402, 656–660. [CrossRef] [PubMed]

14. Zigmanas, JM; Jones, JE; Lee, CE; Saper, CB; Elmquist, JK. Grelino receptoriaus mRNR ekspresija žiurkės ir pelės smegenyse. J. Comp. Neurol. 2006, 494, 528–548. [CrossRef] [PubMed]

15. Castaneda, TR; Tong, J.; Datta, R.; Culler, M.; Tschop, MH Ghrelin reguliuojant kūno svorį ir medžiagų apykaitą. Priekyje. Neuroendokrinolis. 2010, 31, 44–60. [CrossRef] [PubMed]

16. Rudmanas, D.; Feller, AG; Nagras, HS; vokiečiai, GA; Lalitha, PY; Goldbergas, AF; Šlenkeris, RA; Cohn, L.; Rudmanas, IW; Mattson, DE Žmogaus augimo hormono poveikis vyresniems nei 60 metų vyrams. N. Engl. J. Med. 1990, 323, 1–6. [CrossRef] [PubMed]

17. Liu, H.; Bravata, DM; Olkinas, I.; Najakas, S.; Robertsas, B.; Garberis, AM; Hoffman, AR Sisteminė apžvalga: augimo hormono saugumas ir veiksmingumas sveikiems pagyvenusiems žmonėms. Ann. Stažuotojas. Med. 2007, 146, 104–115. [CrossRef] [PubMed]

18. Džordanas, R.; Bonelli, L.; Marinazzo, E.; Gigo, E.; Arviat, E. Gydymas augimo hormonu senstant: nauda ir rizika. Hormonai 2008, 7, 133–139. [CrossRef] [PubMed]

19. Sattler, FR Senstančio vyro augimo hormonas. Geriausia praktika. Res. Clin. Endokrinolis. 2013, 27, 541–555. [CrossRef]

20. Štai, YH; Chen, YJ; Chang, CI; Linas, YW; Chen, CY; Lee, MR; Lee, VS; Tzen, JTC Teaghrelins, unikalūs acilinti flavonoidiniai tetraglikozidai Chin-shin oolong arbatoje, yra galimi geriamieji grelino receptorių agonistai.

J. Agrič. Food Chem. 2014, 62, 5085–5091. [CrossRef]

21. Hsieh, SK; Štai, YH; Wu, CC; Chung, TY; Tzen, JTC Teaghrelins ir teaghrelinlike junginių biosintetinių tarpinių produktų identifikavimas oolong arbatose ir jų molekulinis prijungimas prie grelino receptoriaus.

J. Maisto vaistų anal. 2015, 23, 660–670. [CrossRef]

22. Hsieh, SK; Chung, TY; Li, YC; Štai, YH; Linas, NH; Kuo, PC; Chen, WY; Tzen, JTC Ginkgoghrelins, unikalūs acilinti flavonoidiniai glikozidai folium Ginkgo sudėtyje, skatina augimo hormono sekreciją aktyvindami grelino receptorius. J. Ethnopharmacol. 2016, 193, 237–247. [CrossRef]

23. Han, L.; Mavis, BY; Liu, E.; Zhang, Y.; Li, W.; Daina, X.; Fu, F.; Gao, X. Feniletanoidinių glikozidų iš Cistanches deserticola YC Ma struktūrinis apibūdinimas ir identifikavimas UHPLC/ESI-QTOF-MS/MS. Phytochem. Anal. 2012, 23, 668–676. [CrossRef]

24. Lu, D.; Zhang, J.; Yang, Z.; Liu, H.; Li, S.; Wu, B.; Ma, Z. Kiekybinė Cistanches Herba analizė naudojant aukštos kokybės skysčių chromatografiją kartu su diodų matricos aptikimu ir didelės skiriamosios gebos masių spektrometrija kartu su chemometriniais metodais. J. Sep. Sci. 2013, 36, 1945–1952. [CrossRef]

25. Mėnulis, M.; Kimas, HG; Hwang, L.; SEO, JH; Kim, S.; Hwang, S.; Kim, S.; Lee, D.; Chung, H.; O, MS; ir kt. Neuroprotekcinis grelino poveikis 1-metil-4-fenil-1, 2, 3, 6-tetrahidropiridino Parkinsono ligos pelės modelyje, blokuodamas mikroglijos aktyvaciją. Neurotox. Res. 2009, 15, 332–347. [CrossRef]

26. Lupienas, SJ; Izabelė, OM; Hupbachas, A.; Tu, MT; Autobusas, C.; Walkeris, D.; Pruessner, J.; Mcewen, BS Be streso koncepcijos: alostatinė apkrova – vystymosi biologinė ir pažinimo perspektyva. Vystymosi psichopatologijoje: Antrasis tomas: raidos neuromokslai; John Wiley & Sons, Inc.: Niujorkas, NY, JAV, 2015 m.; 578–628 p.

27. Rizzo, M.; Rižvi, AA; Sudaras, E.; Soskič, S.; Obradovičius, M.; Montalto, G.; Boutjdir, M.; Michailidis, DP; Isenovic, ER Grelino širdies ir kraujagyslių bei antiaterogeninio poveikio apžvalga. Curr. Pharm. Des. 2013, 19, 4953–4963. [CrossRef]

28. Holstas, B.; Langas, M.; Brandtas, E.; Bachas, A.; Howardas, A.; Frimurer, TM; Beck-Sickinger, A.; Schwartz, TW Ghrelin receptorių atvirkštiniai agonistai: aktyvaus peptido šerdies ir jo sąveikos epitopų ant receptoriaus identifikavimas. Mol. Pharmacol. 2006, 70, 936–946. [CrossRef]

29. Yamazaki, M.; Nakamura, K.; Kobayashi, H.; Matsubara, M.; Hayashi, Y.; Kanagawa, K.; Sakai, T. Grelino reguliavimo poveikis augimo hormono sekrecijai iš perfuzuotų žiurkės priekinės hipofizės ląstelių. J. Neuroendokrinolis. 2002, 14, 156–162. [CrossRef]

30. Štai, YH; Chen, YJ; Chung, TY; Linas, NH; Chen, WY; Chen, CY; Lee, MR; Chou, CC; Tzen, JTC Emoghrelin, unikalus emodino darinys Heshouwu mieste, skatina augimo hormono sekreciją aktyvindamas grelino receptorių. J. Ethnopharmacol. 2015, 159, 1–8. [CrossRef]

31. Moukhametzianovas, R.; Warne'as, T.; Edwardsas, kompiuteris; Serrano-Vega, MJ; Leslie, AG; Tate, CG; Schertler, GF Dvi skirtingos 6 spiralės konformacijos, pastebėtos su antagonistais susietose beta1-adrenerginio receptoriaus struktūrose. Proc. Natl. Akad. Sci. JAV, 2011, 108, 8228–8232. [CrossRef]

32. Rosenbaum, DM; Zhang, C.; Lionas, JA; Hollas, R.; Aragao, D.; Arlow, DH; Rasmussen, SG; Choi, HJ; Devree, BT; Sunahara, RK; ir kt. Negrįžtamo agonisto-beta (2) adrenoreceptorių komplekso struktūra ir funkcija. Gamta 2011, 469, 236–240. [CrossRef]

33. Bruksas, BR; Bruccoleri, RE; Olafsonas, BD; Valstijos, DJ; Swaminathan, S.; Karplus, M. CHARMM – stambiamolekulinės energijos, minimizavimo ir dinamikos skaičiavimų programa. J. Kompiuteris. Chem. 1983, 4, 187–217. [CrossRef]