Ⅰ dalis Europio nanodalelių šoninio srauto imunologinio tyrimo, skirto NGAL aptikimui šlapime ir ūminiam inkstų pažeidimui diagnozuoti, sukūrimas

Abstraktus

1. Fonas

AKI yra susijęs su sunkiais neigiamais rezultatais ir pacientų, sergančių koronavirusine liga 2019 (COVID-19), mirtingumu, todėl anksti diagnozuoti ir įsikišti būtina. Su neutrofilų želatinaze susijęs lipokalinas (NGAL) yra vienas perspektyviausių biologinių žymenų ūminiam inkstų pažeidimui (AKI) nustatyti, tačiau dabartiniai aptikimo metodai yra nepakankami, todėl reikia greitesnių, patogesnių ir tikslesnių metodų, leidžiančių nustatyti NGAL ankstyvai diagnozei nustatyti. iš AKI. Čia mes sukūrėme greitą, patikimą ir tikslų šoninio srauto imuninį tyrimą (LFIA), pagrįstą europio nanodalelėmis (EU-NPS), skirtą NGAL aptikti žmogaus šlapimo mėginiuose.

2. Metodai

Buvo naudojamas dvigubo antikūno sumuštinis imunofluorescencinis tyrimas, naudojant europiu legiruotas nanodaleles, o NGAL monokloninių antikūnų (MAb) konjugatas kaip etiketės buvo sukurtas optimizuojant elektrinės sintezės parametrus. Šio metodo klinikinio taikymo efektyvumui įvertinti buvo panaudoti aštuoniasdešimt trys šlapimo mėginiai.

3. Rezultatai

Kiekybinis NGAL aptikimo diapazonas AKI buvo {{0}} ng/mL, o aptikimo jautrinimas buvo 0,36 ng/mL. Vidinio ir tarpinio tyrimo variacijos koeficientas (CV) buvo atitinkamai 2.57-4.98 proc. ir 4.11-7.83 proc. Tuo tarpu koreliacijos koeficientas tarp europio nanodalelių šoninių fluorescencinių imunologinių tyrimų (EU-NPS-LFIA) ir ARCHITECT analizatoriaus buvo reikšmingas (R2=0.9829, n=83, p < 0,01).

4. Išvados

Taigi, buvo sukurtas greitesnis ir lengvesnis NGAL kiekybinis AKI tyrimas, kuris yra labai svarbus ir prasmingas diagnozuojant ankstyvą AKI, o tai rodo, kad tyrimas gali anksti įspėti apie ligos baigtį.

Raktažodžiai

su neutrofilų želatinaze susijęs lipokalinas (NGAL), monokloninis antikūnas, šoninio srauto imunologinis tyrimas, ūminis inkstų pažeidimas (AKI),Cistanche poveikis.

Spustelėkite čia, kad sužinotumėtekokia yra Cistanche nauda

Įvadas

Koronavirusinė liga 2019 (COVID-19) plačiai išplito visame pasaulyje ir įvyko rimtų nelaimių [1]. Ūminis inkstų pažeidimas (ŪKI) turi didesnį sergamumo ir mirtingumo nuo įprastų kritinių ligų komplikacijų rodiklį ir sudaro apie 5-7 proc. hospitalizuotų pacientų pasaulyje[2]. Keli tyrimai įvertino ŪKI vystymąsi kaip daugiau. glaudžiai susiję su blogesnėmis COVID-19 baigtimis ir mirtingumo rodikliais, apibūdinančiu AKI dažnį, kuris svyruoja nuo 0,5 iki 36,6 proc. COVID{11}} pacientų[3]. Ankstyvas AKI nustatymas ir tikslus gydymas gali įgyvendinti geresnes prevencines strategijas ir užkirsti kelią inkstų funkcijos pablogėjimui bei inkstų nepakankamumui, taip veiksmingai stabdant COVID{13}} hospitalizuotų pacientų progresavimą[4]. Tarp jų, su neutrofilų želatinaze susijęs lipokalinas (NGAL) buvo pripažintas vienu iš perspektyvių biomarkerių kandidatų AKI aptikti. NGAL yra 25 kDa glikoproteinas, susijęs su želatinaze iš neutrofilų ir paprastai yra mažesniu lygiu žmogaus audiniuose, tokiuose kaip skrandis, storoji žarna ir inkstai, tačiau jo ekspresija labai padidėja serume ir šlapime, kai inkstams buvo išeminis ar nefrotoksinis pažeidimas. [5].

Šoninio srauto imunologiniai tyrimai (LFIA) buvo laikomi pageidaujamais atrankos tyrimais dėl jų paprastumo, analizės in situ ir darbo paprastumo[6]. LFIA su fluorescencinėmis mikrodalelėmis jau buvo naudojama aptikti įvairius mikrobų patogenus ir keletą uždegimo žymenų [7, 8]. Siekiant pagerinti LFIA jautrumą, paprastai buvo pritaikytos kelios naujos nanodalelės, įskaitant anglies nanodaleles, kvantinius taškus, fluorescencinius dažus, magnetines nanožymes ir europio nanodaleles (EU-NPS)[9]. EU-NPS, kaip nešiklis, gali pagerinti 100-karto jautrumo kontrastą su koloidinio aukso nanodalelėmis, pažymėtomis LFIA[10]. EU-NPS yra ilgas fluorescencijos eksploatavimo laikas, taip pat galima įsigyti su 75–100 nm vidutiniu dalelių dydžiu. Didelis Stokso poslinkis, kuris paprastai yra didesnis nei 200 nm, padeda išvengti išsklaidytos šviesos trukdžių, atsirandančių dėl sužadinimo šviesos matavimo. EU-NPS turi plačią sužadinimo juostą, todėl naudinga padidinti sužadinimo energiją, ryškų emisijos piką, žemą foną ir didelę skiriamąją gebą, pastaruoju metu naudojamus medicininės diagnostikos sumuštinio tipo imunologiniuose tyrimuose[11].

Čia mes sukūrėme naują metodą su EU-NPS kaip LFIA etiketėmis, skirtomis greitam, jautriam ir ankstyvam NGAL matavimui šlapime, remiantis dviem monokloniniais antikūnais (MAb) 1G1 ir 2F4, kuriuos aptiko mūsų laboratorija. Šis metodas yra dvigubo antikūno sumuštinis imunofluorescencinis tyrimas, naudojant EU-NPS ir MAb konjugatą kaip etiketes. mAb 1G1 buvo konjuguotas su EU-NPS, o mAb 2F4 buvo naudojamas EU-NPS-1G1-antigeno kompleksui užfiksuoti T linijoje. Mūsų rezultatai parodė, kad EU-NPS-LFIA gali būti naudojamas ankstyvam NGAL aptikimui šlapime ir leisti pagerinti AKI pacientų gydymą.

Cistanche tubulosa

Metodai

1. NGAL ekspresija ir gryninimas

Žmogaus NGAL geno seką iš Genbank (NP{0}}.2) susintetino Pekino genomikos institutas (BGI) ir abiejuose galuose pridėjo restrikcijos fermentus HindIII ir XhoI. Plazmidės buvo suardytos HindIII ir XhoI, o po to klonuotos į pSecTag2A vektorių. Sukonstruotos plazmidės buvo sekvenuotos, kad būtų patvirtintos be mutacijos, ir tada LipofectamineTM2000 transformuotos į Kinijos žiurkėno kiaušidžių (CHO) ląsteles. Po 8 dienų ląstelių supernatantas buvo surinktas išfiltravus 0, 45 μm filtrą. Išreikštas NGAL-6×His baltymas buvo išgrynintas nikelio nitrilotriacto rūgšties (Ni-NTA) kolonėle, o skirtingos frakcijos buvo surinktos ir įvertintos natrio dodecilsulfato-poliakrilamido gelio elektroforeze (SDS-PAGE). Bicinchonino rūgšties (BCA) baltymų kiekio nustatymo rinkinys matavo baltymų koncentraciją.

Išgrynintas rekombinantinis baltymas buvo paveiktas 12 procentų SDS-PAGE, tada adsorbuotas ant polivinilidenfluorido (PVDF) membranos. Po to, kai membrana buvo užblokuota Tris buferyje su 1 procento Tween-20 (TBST) tirpalu, kuriame yra 5 procentai nugriebto pieno kambario temperatūroje (RT), 2 valandas inkubuojama su HRP konjuguotu anti-6×Jo žyma. antikūnas (1:5000) tamsoje 1 valandą kambario temperatūroje, vizualizuotas benzidinu po plovimo TBST ir vizualizuotas Bio-Rad Western blot aptikimo sistema (DNR Bio-Imaging Systems Ltd., Izraelis).

2. MAb generavimas ir gryninimas

Pirmosios imunizacijos metu BALB/c pelių patelės (6 savaičių amžiaus, iš viso 10) buvo imunizuotos 50 µg NGAL-6×Jo rekombinantinio baltymo, emulsinto vienodomis pilno Freundo adjuvanto dozėmis. ir pradinis imunizavimas buvo atliktas su baltymu, emulsuotu nepilname Freundo adjuvante. Dvi poodinės injekcijos ant pelių nugaros ir vėlesnės intraperitoninės injekcijos buvo atliekamos 21 dienos intervalu. Serumo mėginiai buvo paimti praėjus savaitei po trečiosios injekcijos, o antiserumo titras buvo nustatytas naudojant netiesioginį su fermentu susietą imunosorbentinį tyrimą (ELISA)[12]. Likus trims dienoms iki suliejimo, pelėms buvo atlikta revakcinacija, naudojant 50 µg NGAL-6×His, praskiesto 0,9 proc. NaCl.

Išskirtos imuninės pelių blužnies ląstelės ir SP2/0 mielomos ląstelės, sumaišytos santykiu 3:1, susilieja platinos elektrodo LF498-3 suliejimo kameroje (BEX Co., Ltd, Japonija), kaip aprašyta literatūroje[13]. Trumpai tariant, sumaišyta ląstelė du kartus plaunama 10 ml elektrofuzijos buferio (0,3 M manitolio, 0,1 mM CaCl2, 0,1 mM MgCl2, pH). 7.2) ir pakartotinai suspenduojamas, kai koncentracija yra 2 × 107 ląstelės/ml. Suliejimas buvo baigtas naudojant kintamąją 50 V srovę esant 0,8 MHz 20 s, nuolatinės srovės impulso įtampą 450 V, 2 kartojimus 0,5 s, o po sintezės buvo 50 V esant 0,8 MHz. 7 s. Galiausiai, elektra apdorota ląstelių suspensija buvo perkelta iš suliejimo kameros į 4,5 ml iš anksto pašildyto RPMI 1640 (20 proc. galvijų vaisiaus serumo) 30 min. 37 laipsnių temperatūroje, tada kultivuojama 96-šulinėlių plokštelėse ir inkubuojama su 5 proc. CO2 37 laipsnių temperatūroje. Po 24 valandų į kiekvieną šulinį buvo pridėta hipoksantino-aminopterino-timidino (HAT). Ląstelių kultūros supernatantai buvo patikrinti ELISA metodu po 9 dienų suliejimo ir apskaičiuotas hibridomos klonų skaičius. BALB / c pelėms, kurioms iš anksto buvo sušvirkštas parafino aliejus, buvo užkrėstos 1 × 106 NGAL hibridomos ląstelės, ascitas buvo išgrynintas baltymų A kolonėlėje.

3. MAb identifikavimas

Imunoglobulino antikūnų poklasiai buvo analizuojami naudojant antikūnų poklasių identifikavimo rinkinį. Netiesioginis ELISA patikrino specifinius MAb, naudojant išgrynintą rekombinantinį NGAL{{0}}×His baltymą ir PCT- 6×His baltymą. Antigeno ir antikūnų sąveika buvo nustatyta naudojant BIAcore T200 sistemą (GE Healthcare, Stokholmas, Švedija) HBS-EP buferyje (0,005 proc. aktyviosios paviršiaus medžiagos P20, 10 mM Hepes, pH 7,4, 3 mM EDTA, 150). mM NaCl). NGAL antigenas buvo adsorbuotas ant CM5 biosensoriaus lustų, pasiekiančių 400–480 atsako vienetų (RU), naudojant aminų sujungimo rinkinį. Antikūnai (2F4 ir 1G1) buvo praskiesti HBS-EP buferiu, lėtai per lustą 50 µL/min. buvo leidžiami atitinkamai 5 min., o vėliau HBS-EP buferis buvo švirkščiamas ant lusto, kad būtų galima stebėti disociacijos fazę 4 min. . Po disociacijos fazės jutiklio lustai buvo regeneruoti glicino tirpalu (pH 3, 0). Kiekvienai analitei, praleistai per lustą, specifiniai atsakai iš antigeno srauto kanalo gali atimti nespecifinius atsakus iš kontrolinio srauto kanalo. Pritaikytos prisotinimo surišimo kreivės buvo nubraižytos remiantis analitės koncentracijomis, kad būtų galima nustatyti pusiausvyros surišimo atsakus, kad būtų galima apskaičiuoti KD.

Išgryninti anti-NGAL MAb buvo analizuojami 12 procentų SDS-PAGE neredukuojančiomis ir redukuojančiomis sąlygomis. Trumpai tariant, mėginys buvo sumaišytas su 5 x neredukuojančiu buferiu arba 5 x baltymų įkrovimo buferiu ir įkeltas į 12 procentų SDS-PAGE. Anti-NGAL MAb specifiškumas buvo nustatytas Western Blot metodu. NGAL baltymai buvo pagaminti iki 12 procentų SDS-PAGE, tada adsorbuoti ant PVDF membranos, kuri buvo aktyvuota mirkant metanolyje 15 s, o po to 2 valandas veikiama elektroforezės sąlygomis 100 V įtampa. Užblokavus Tris-HCl buferį 1 % Tween-20 tirpalu (TBST), turinčiu 5 % nugriebto pieno kambario temperatūroje 2 valandas, membrana buvo inkubuojama su pelių anti-NGAL MAb kaip pirminiais antikūnais 4 laipsnių temperatūroje. Kitą dieną membrana buvo plaunama TBST ir inkubuojama su anti-pelės konjuguotu HRP IgG tamsoje 1, 5 valandos kambario temperatūroje. Galiausiai membrana buvo vizualizuota naudojant sustiprintos chemiliuminescencijos (ECL) Western blot aptikimo sistemą.

4. Konkurencingi su fermentu susiję imunosorbento tyrimai (ELISA)

Du MAb buvo išbandyti dėl gebėjimo atpažinti unikalius epitopus NGAL naudojant cELISA. MAb buvo konjuguotas su HRP, naudojant HRP antikūnų žymėjimo rinkinį (Shanghai YSRIBIO industrial co., LTD), kurio darbinė koncentracija buvo išbandyta tiesioginiu ELISA būdu. {{0}}šulinėliai Mikrotitro plokštelės buvo padengtos 2 µg/mL NGAL antigeno per naktį 4 laipsnių temperatūroje, tada nepažymėtas MAb (0,2 µg/šulinėlyje, 2 µg/šulinėlyje) buvo konkurencingai surištas optimaliu praskiedimo santykiu. HRP pažymėtas MAb ir inkubuojamas 1 valandą 37 laipsnių temperatūroje. Fermentinė reakcija atsirado su vandenilio peroksidu substratu 3,3',5,5'-Tetrametilbenzidinu (TMB) ir sustabdyta 2 M sieros rūgštimi į visus šulinius. Absorbcija (OD450 nm) buvo nustatyta Bio-Rad mikroplokštelių skaitytuvu (Bio-Rad Laboratories, Inc). MAb blokuojantis poveikis buvo apskaičiuotas naudojant šią lygtį: 100×[1-OD_{450 nm}(HRP-MAb plius MAb)/OD450 nm HRP-MAb]. Du MAb atpažino skirtingus epitopus, jei blokuojantis poveikis buvo pastebėtas daugiau nei 40 proc.

Cistanche ekstraktas

5. EU-NPS konjugacija

Anti-NGAL monokloniniai antikūnai 1G1 ir 2F4 buvo kovalentiškai konjuguoti su EU-NPS taikant standartinę Bangs Laboratories procedūrą. Trumpai tariant, 100 µL EUNPS buvo pridėta prie 900 µL 0.05 M MES (pH 7.{{ 31 }}Dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimido hidrochloridas (EDC). Suaktyvintas EUNPS buvo plaunamas sukabinimo buferiu (0,05 mM H3BO3, 0,04 mM Na2B4O7, pH 7,5) ir 2,5 valandos kambario temperatūroje reaguoja su 0,3 mg antikūno. Su europiu konjuguotas junginys buvo inkubuojamas 1000 µl blokuojančiame buferyje (10 proc. BSA, 20 proc. tween-20, 0,05 M Tris-HCl) 1 val., pridedamas prie 1000 µL pradinių tirpalų (10 proc. BSA, 20 proc. trehalozės). procentų tween-20, 0,05 M Tris-HCl) laikyti 4 laipsnių temperatūroje.

6. LFIA plėtra

LFIA juosteles sudarė nitroceliuliozės membrana, konjugato pagalvėlė, mėginio padėklas ir sugeriantis padėklas. Stiklo pluošto membranos buvo mirkomos blokuojančiame buferyje (20 proc. trehalozės, 10 proc. BSA, 20 proc. tween-20, 0,05 M Tris, 3,2 mM EDTA.Na2, pH 8,6) 1,5 val. 1 mg/ml koncentracijos MAb (2F4 arba 1G1) buvo padengta nitroceliuliozės membranos bandymo linija (TL), o ožkų antipelės IgG 1 mg/ml buvo padengta ant tos pačios NC membranos 4 mm atstumu iki formuojant kokybės kontrolės liniją (CL), buvo nustatytas 1 µL/cm dozatoriaus purškimo tūris. Prieš bandymą membrana ir stiklo pluošto kilimėlis buvo džiovinami 48 valandas 45 laipsnių temperatūroje. Skirtingos EU-NPS-1G1 ir EU-NPS-2F4 konjuguotos dalelės buvo padengtos konjugato padėklu, o fluorescencinis signalas buvo matuojamas imunofluorescenciniu analizatoriumi (Guangzhou Labsim Biotech Co., Ltd).

7. Šlapimo mėginių paėmimas ir pacientai

Iš viso 83 žmogaus šlapimo mėginiai iš AKI pacientų buvo paimti iš Jilin medicinos universiteto dukterinės ligoninės. Eksperimento metu buvo griežtai laikomasi etikos gairių ir jas pateikė Jilin medicinos universiteto filialo ligoninė (Nr.{1}}LW029). Visi tiriamieji gavo žodinį ir raštišką sutikimą kinų kalba tirti šlapimo mėginius. Visi eksperimentai buvo atlikti pagal Helsinkio etinių principų deklaraciją. Vidutinis 62 metų pacientų amžius svyravo nuo 20 iki 80 metų, kurie nebuvo užsikrėtę COVID{6}}, o AKI 1–3 stadijos buvo klasifikuojamos pagal inkstų ligą gerinančių visuotinių rezultatų AKI kriterijus[14]. Šlapimo mėginiai buvo renkami NGAL analizei iki 12 valandų prieš diagnozuojant AKI ir dažnai po operacijos įvairiais laiko momentais (12, 24, 48 val.). Siekiant sumažinti galimus klaidinančius veiksnius, šlapimo mėginiai buvo greitai tiriami klinikinės chemijos laboratorijoje, įskaitant šlapimo biochemiją (bendra baltymų koncentracija < 1 g/dl, karbamidas < 12 g/dl, gliukozė < 1 g/dl, šlapimo kreatininas < 1 g/dl , albumino < 2,5 g/dL, pH 4.{21}}.0) ir atliekami dviem egzemplioriais. Per 30 minučių nuo mėginių paėmimo jie buvo centrifuguojami 3000 aps./min 4 laipsnių kampu 15 min. Mažiausiai 100 µL supernatanto buvo išpilstytas į sterilius indus ir laikomas -80 laipsnių temperatūroje, kad būtų galima atlikti tolesnę analizę, kad būtų išvengta pasikartojančių užšaldymo ir atšildymo ciklų.

NGAL lygių matavimas buvo atliktas naudojant ARCHITECT šlapimo NGAL reagentų rinkinį (Lisnamuck, Longford, Co. Longford, Airija), naudojant nekonkurencinį sumuštinį formatą su chemiliuminescencinio signalo aptikimu. Šlapimo NGAL buvo atpažintas pagal priešgrybelinį antikūną, kuris kovalentiškai buvo prijungtas prie paramagnetinių dalelių mikrodalelių reagente, ir antrojo anti-NGAL antikūno, susieto su akridiniu, konjugato. Vadovaujantis gamintojo instrukcijomis, buvo atliktas kalibravimo tyrimas 0- 1500 ng/mL diapazone ir išmatuota NGAL koncentracija.

8. Klinikinių mėginių tyrimas ir analizė

Serijinės NGAL standartinių antigenų koncentracijos (10, 50, 100, 200, 400, 800, 1500, 2000 ir 3000 ng/mL) buvo paruoštos naudojant FBS, siekiant sustiprinti specifines biokonjugato reakcijas, kiekviena koncentracija buvo atlikta po tris pakartojimus. Pridėjus klinikinius mėginius ant mėginių padėklų, skaitytuvas užregistravo fluorescencijos intensyvumo rezultatus ant T linijos (HT) ir C linijos (HC). Kiekybinis aptikimas buvo užbaigtas naudojant HT/HC santykį, siekiant veiksmingai pašalinti juostelių (T ir C) skirtumus ir matematinio mėginio standartinės matricos efektus[15]. Standartinė kreivė buvo nubrėžta pagal kiekvieną NGAL ir HT/HC santykio koncentraciją.

9. Statistinė analizė

Passing-Bablok regresijos analizė ir BlandAltman grafikas buvo atlikti naudojant MedCalc ir SPSS 17.{2}} programinės įrangos dispersijos analizę (ANOVA). Visi duomenys buvo parodyti kaip vidutinės vertės su standartiniu nuokrypiu (vidurkis ± SD).

Cistanche tabletės

Nuorodos

1. Zheng X, Zhao Y, Yang L: Ūmus inkstų pažeidimas COVID-19: Kinijos patirtis. Nefrologijos seminarai 2020, 40(5):430–442.

2. Mandelbaum T, Scott D, Lee J, Mark R, Malhotra A, Waikar S, Howell M, Talmor D: Rezultatai kritiškai sergančių pacientų, patyrusių ūminį inkstų pažeidimą, naudojant ūminio inkstų pažeidimo tinklo kriterijus. Kritinės priežiūros medicina, 2011, 39(12): 2659–2664.

3. Al-Hwiesh A, Mohammed A, Elnokeety M, Al-Hwiesh A, Al-Audah N, Esam S, Abdul-Rahman I: sėkmingai gydomi trys pacientai, patyrę ūminį inkstų pažeidimą dėl COVID{5}} taikant peritoninę dializę : Atvejo ataskaita ir literatūros apžvalga. Tarptautinė peritoninė dializė, 2020 m., 40(5):496–498.

4. Shabaka A, Rovirosa-Bigot S, Guerrero Márquez C, Alonso Riaño M, Fernández-Juárez G: Ūminis inkstų pažeidimas ir nefrozinis sindromas, atsirandantis dėl COVID{3}}susijusios židininės segmentinės glomerulosklerozės. Nefrologija 2021 m.

5. Gabbard W, Milbrandt E, Kellum J: NGAL: nauja priemonė AKI sunkumui nuspėti lengvai aptinkama klinikiniu tyrimu. Critical care, 2010, 14(4): 318.

6. Zuk R, Ginsberg V, Houts T, Rabbie J, Merrick H, Ullman E, Fischer M, Sizto C, Stiso S, Litman D: Fermentų imunochromatografija – kiekybinis imunologinis tyrimas, kuriam nereikia jokių instrumentų. Clinical Chemistry, 1985, 31(7): 1144–1150.

7. Juntunen E, Myyryläinen T, Salminen T, Soukka T, Pettersson K: Fluorescuojančių europio (III) nanodalelių ir koloidinio aukso reporterių veikimas šoninio srauto biologinio giminingumo tyrime. Analitinė biochemija 2012, 428(1):31–38.

8. Swanson C, D'Andrea A: Šoninio srauto tyrimas su beveik infraraudonųjų spindulių dažais multipleksiniam aptikimui. Klinikinė chemija, 2013, 59(4):641–648.

9. Chen Y, Fu Q, Xie J, Wang H, Tang Y: Didelio jautrumo kvantiniu tašku pagrįsto fluorescencinio gesinimo šoninio srauto tyrimo sukūrimas zearalenonui aptikti. Analitinė bioanalitinė chemija 2019, 411(10): 2169–2175.

10. Zhang F, Zou M, Chen Y, Li J, Wang Y, Qi X, Xue Q: Lantanidu pažymėtos imunochromatografinės juostelės, skirtos greitai aptikti Pantoea stewartii subsp. Stiuartas. Biosensors bioelectronics 2014, 51:29–35.

11. Nankoberanyi S, Mbogo G, LeClair N, Conrad M, Tumwebaze P, Tukwasibwe S, Kamya M, Tappero J, Nsobya S, Rosenthal P: ligazės aptikimo reakcijos fluorescencinės mikrosferos tyrimo patvirtinimas, skirtas Plasmodium falphimormarians atsparumo mediagoms aptikti Ugandoje. Maliarijos žurnalas 2014, 13:95.

12. Xu H, Dong Y, Guo J, Jiang X, Liu J, Xu S, Wang H: Monokloninių antikūnų gamyba ir netiesioginio konkurencingo su fermentu susieto imunosorbento tyrimo, skirto T-2 toksino piene atrankai, sukūrimas. Toxicon 2018, 156:1–6.

Moli Yin1, Yuanwang Nie2, Hao Liu2, Lei Liu1, Lu Tang1, Yuan Dong2, Chuanmin Hu1 ir Huiyan Wang1

1 Jilin Collaborative Innovation Center for Antibody Engineering, Jilin Medical University, 132013 Jilin, PR China.

2 Laboratorijos akademija, Jilin medicinos universitetas, 132013 Jilin, PR, Kinija.