Feniletanoidiniai oligoglikozidai ir acilinti oligocukrai, turintys kraujagysles atpalaiduojantį poveikį iš Cistanche Tubulosa

Norėdami gauti daugiau informacijos:ali.ma@wecistanche.com

Masayuki Yoshikawa ir kt

Abstraktus

Metanolinis ekstraktas iš džiovintų stiebųCistanche tubulosa(Schrenk) Nustatyta, kad R. Wightas izoliuotose žiurkės aortos juostelėse slopina noradrenalino sukeltus susitraukimus. Iš ekstrakto kartu su 14 žinomų junginių buvo išskirtos naujos feniletanoido aminoglikozidų sudedamosios dalys – kankanosidai F ir G bei acilintas oligo cukrus – kankanozė. Šių naujų junginių struktūros buvo nustatytos remiantis jų cheminiais ir fizikiniais bei cheminiais įrodymais. Be to, pagrindinės sudedamosios dalys, kankanosidas F, kankanozė, echinakozidas, akteozidas ir cistanozidas F, parodė kraujagysles atpalaiduojantį poveikį, ir buvo paaiškinti keli veiklos struktūriniai reikalavimai. 2006 Elsevier Ltd. Visos teisės saugomos.

Spustelėkite norėdami gauti Cistanche efekto produktus

Įvadas

Orobanchaceae parazitinis augalas,Cistanche tubulosa(Schrenk) R. Wight, yra plačiai paplitęs Šiaurės Afrikoje, Arabijoje ir Azijos šalyse, o stiebaiCistanche tubulosa, taip pat C. salsa ir C. deserticola, tradiciškai buvo naudojami kaip kraujotaką skatinanti priemonė ir impotencijos, nevaisingumo, lumbago, kūno silpnumo ir tonizuojanti priemonė. vaistai, 1,4–14 pranešėme apie penkių iridoidų, kankanosidų A–D ir kankanolio bei monoterpenglikozido kankanozido E, išskyrimą ir struktūros išaiškinimą kartu su 16 žinomų junginių iš kamieno stiebų.Cistanche tubulosa1 Tęsiant šio augalinio vaisto tyrimą, buvo nustatyta, kad metanolio ekstraktas slopina noradrenalino sukeltus susitraukimus izoliuotose žiurkės krūtinės ląstos aortos juostose. Iš šio metanolio ekstrakto papildomai išskyrėme feniletanoidinius oligoglikozidus, kankanozidus F (1) ir G (2) ir anacilintą oligocukrų, kankanozę (3) ir 14 žinomų junginių, echinakozidą (4), akteozidą (5), izoakteozidą (6). ),20-acetilaktezidas (7), tubulozidai A (8) ir B (9), cistanosidas F (10), salidrosidas (11), (2R,3R)-butanas-2,{{18 }}diolis 2-ObD-gliukopiranozidas,Meso-butanas-2, 3-diolis2-ObD-gliukopiranozidas, etil-bD-gliukopiranozidas,3-metilbutanolis bD-gliukopiranozidas, (plius)-pinorezinolis40-ObD -gliukopiranozidas ir (plius)-siringarezinolis 40-ObD-gliukopiranozidas. Šiame darbe nagrinėjama naujų junginių (1–3) struktūra, taip pat pagrindinių sudedamųjų dalių (1, 3–6, 10 ir 11) kraujagyslių atpalaiduojantis poveikis susitraukimams, kuriuos sukelia noradrenalino izoliuotos žiurkės aortos juostelės, remiantis tradiciniu kraujotaka (1 pav.).

Rezultatai ir DISKUSIJA

2.1. Kraujagysles atpalaiduojantis metanolinio ekstrakto iš stiebų poveikisCistanche tubulosadėl noradrenalino sukelto susitraukimo izoliuotoje žiurkės krūtinės aortoje

Kaip parodyta 1 lentelėje, metanolinis ekstraktas iš stiebųCistanche tubulosa(įsigytas Urumči, Sindziango provincijoje, Kinijoje), buvo nustatytas kraujagysles atpalaiduojantis poveikis izoliuotų žiurkės aortos juostelių noradrenalino sukeltiems susitraukimams, priklausomai nuo laiko ir koncentracijos (30–3{{10}} 0 lg/mL). Metanolinis ekstraktas toliau buvo gryninamas normalios ir atvirkštinės fazės kolonėlės chromatografija ir galiausiai HPLC, kad gautų 1 (0.016 proc.), 2(0).{31} }25 proc. ), 3 (0.020 proc. ), 4 (3.09 proc. ), 3 5 ({{64} },68 proc. ),3 6(0.096 proc. ),3 7 (0,017 proc. ),3 8 (0,052 procentai ),3 9 (0,0036 proc. ),3 10(0,025 proc. ),15 11 (0,044 proc. ),16 (2R,3R)-butanas-2,{{44 }}diolis2-ObD-gliukopiranozidas (0,0087 proc.),17 mezobutanas-2,3-diolis 2-ObD-gliukopiranozidas (0,0065 proc.),17 etilb-D- gliukopiranozidas (0,055 proc.), 17 3-metilbutanolis-bD-gliukopiranozidas (0,0030 proc.),17 (plius)-pinorezinolis 40-ObD-gliukopiranozidas (0,016 proc.),18 ir (plius)-sirringarezinolis{{8 }ObD-gliukopiranozidas (0,022 proc ).15

2.2. Kankanozidų F (1) ir G (2) struktūros

Kankanozidas F (1) buvo gautas kaip balti milteliai su neigiamu optiniu sukimu (½a -28D -44.8- MeOH). IR spektras 1 rodė sugerties juostas 156{{69} }, 1508 ir 1458 cm-1, priskiriamos aromatizuojančioms ir stiprioms sugerties juostoms ties 3432, 1075 ir 1044 cm-1, o tai rodo aminoglikozidų struktūrą. neigiamų jonų FAB-MS 1, kvazimolekulinių jonų smailės buvo stebimos esant m/z 647 (M plius Na) plius ir 623 (MH), o didelės skiriamosios gebos FAB-MS analizė parodė, kad 1 molekulinė formulė yra C26H40O17. 1H ir 13C BMR (CD3OD, 2 lentelė) spektrai 1, kurie buvo priskirti įvairiais BMR eksperimentais, rodė signalus, priskirtinus dviem metilenams [d 2,78 (2H, m, H2-7), 3,70, 4.{{ 39}} (kiekvienas po 1 H, abu m, H2-8)] ir orto- ir meta-susieti ABC tipo aromatiniai protonai [d 6,56 (1H, dd, J=1,9,7,9 Hz, H-6), 6,67 (1H, d, J=7,9 Hz, H-5), 6,69 (1H, d, J=1,9 Hz, H{ {64}})] kartu su trimis gliukopiranozės dalimis [d 4,30 (1H, d, J=8,0 Hz, H-10), 4,37 (1H, d, J=8). 0 Hz, H-1000), 5,16 (1H, br s, H-100)]. 1 aminoglikozidų struktūra buvo apibūdinta heterobranduolinio daugybinio ryšio jungties (HMBC) eksperimentu, kuris parodė tolimą koreliaciją tarp šių protonų ir anglies porų (H-10 ir C-8; H-100 ir C-30; H-1000 ir C-60), kaip parodyta 2 paveiksle. Echinakozido (4), kurio absoliuti stereostruktūra buvo pranešta anksčiau, fermentinis deacilinimas3 su tannaze13,14 davė 1. Remiantis pirmiau minėtais įrodymais, nustatyta, kad kankanozido F struktūra yra 2-(3,4-). dihidroksifenil)etilo OaL-ramnopiranozil(1-3)[bD-gliukopiranozilas(1-6)]-b-D-gliukopiranozidas (1).

Kankanozidas G (2) taip pat buvo gautas kaip balti milteliai su neigiamu optiniu sukimu (½a-26D-35.0-MeOH). IR spektras 2 rodė sugerties juostas ties 3432, 1709, 1638, 1518, 1447 ir 1040 cm{11}}, priskiriamos hidroksilo, konjuguoto esterio karbonilo ir eterio funkcijoms bei aromatiniam žiedui. Molekulinė formulė C29H36O14 iš 2 buvo nustatyta iš teigiamų ir neigiamų jonų FAB-MS [m/z 631 (M plius Na) plius ir 607 (MH)-] ir didelės skiriamosios gebos FAB-MS. Fermentinis 2 deacilinimas tannaze davė cistanozidą G(12), kurio absoliuti stereostruktūra buvo pranešta anksčiau.16 Šarminė hidrolizė 2 su 10 proc. vandeninio kalio hidroksido (KOH) – 50 proc. vandeninio 1,4-dioksano (1:1, v/v), kavos rūgštis buvo nustatyta HPLC analize. 1H ir 13C BMR (CD3OD, 2 lentelė) spektrai19 iš 2 parodė, kad yra šios funkcijos: 4-hidroksifeniletilo alkoholio dalis {dvimetilenai [d 2,82 (2H, m, H2-7), 3,70, 3,96 ( 1H kiekvienas, abu m, H2-8)] ir orto-sujungti A2B2- tipo aromatiniai protonai [d 6,65, 7,03 (kiekvienas 2H, abu d, J=8,6 Hz, H{ {62}},5 ir H-2,6)]} ir dvi gliukopiranozės dalys [d4,33 (1H, d, J=7,9 Hz, H-10), 5,19 (1H, br s, H-100)] kartu su kafeoilo fragmentu {trans-olefinu [d 6,29, 7,56 (kiekviena 1H, abu d, J=15,9 Hz, H{{84) }} ir H-7)] ir pirokatecholio tipo dihidroksibenzenas [d 6,78 (1H, d, J=8,3 Hz, H-5), 6,89 (1H, dd, J {{ 96}},9, 8,3 Hz, H-6), 7,04 (1H, d, J=1,9 Hz, H-2)]}. 2 HMBC eksperimento metu buvo pastebėta ilgalaikė koreliacija tarp 60-protono [d 4,36 (1H, dd, J=6.1, 11,6 Hz), 4,50 (dd, J {{) 119}},8, 11,6 Hz)] ir kafeoilo karbonilą (dC 169,1). Todėl buvo nustatyta, kad kankanosido G struktūra yra 4-hidroksifenil-OaL-ramnopiranozilas(1 ! 3)-(6-O-kofeoil)-bD-gliukopiranozidas (2).

2.3. Kankanozės struktūra (3)

Kankanozė (3), ½a- 27D-35.3- (MeOH), taip pat buvo gauta kaip balti milteliai. 3 IR spektras parodė absorbcijos juostas ties 343{{30}}, 1702, 1639, 1611, 1458 ir 1071 cm-1. hidroksilo, konjuguoto esterio karbonilo ir eterio funkcijos bei aromatinis žiedas. 3 teigiamų ir neigiamų jonų FAB-MS parodė kvazimolekulinių jonų smailes, atitinkamai esant m/z 673 (M plius Na) plius ir m/z 649 (MH). Didelės skiriamosios gebos FAB-MS 3 atskleidė, kad molekulinė formulė yra C27H38O18. 3 šarminė hidrolizė su 10 procentų KOH–50 procentų vandenine 1,4- dioksano išsiskiriančia kavos rūgštimi, kuri buvo nustatyta HPLC analize, kartu su oligo cukrumi. Rūgštinė šio oligo cukraus hidrolizė su 1,0 M druskos rūgštimi (HCl) atpalaidavo L-ramnozę ir D-gliukozę, kurios buvo identifikuotos HPLC analize naudojant optinio sukimosi detektorių.1,13,14 1H ir 13CNMR (CD3OD, 3 lentelė) spektrai19 iš 3 parodė signalus, priskirtinus trisacharido fragmentui {d [5,11 (d, J=3,4 Hz), 4,57 (d, J=7,9 Hz), H{ a ir b formos mišinį {52}} (apie 1:1)], 4,25, 4,27 (abu d, J=7,7 Hz, H-1000), 5,13, ​​5,18 (abu br s, H{{66 }})} kartu su kafeo grupe [d 6,28, 6,29 (abu d, J=15,9 Hz, H-9), 6,78 (d, J=8,0 Hz, H -5), 6,96 (dd, J=2,0, 8,0 Hz, H-6), 7,06 (d, J=2,0 Hz, H{{90} }), 7,60 (d, J=15,9 Hz, H-7)]. Atliekant HMBC eksperimentus su 3, buvo pastebėtos ilgo nuotolio koreliacijos tarp 40-protono [d 5,04, 4,99 (abu dd, J=9,5, 9,8 Hz)] ir kafeoilo karbonilo anglies (dC168,53) , 168,65). Remiantis aukščiau minėtais įrodymais, kankanozės struktūra buvo išaiškinta iki bea-L-ramnopiranozilo(1-3)[bD-gliukopiranozilo(1-6)]-O-(4- O-kofeoil)-D-gliukopiranozė (3).

2.4. Pagrindinių sudedamųjų dalių (1, 3–6, 10, 11) kraujagysles atpalaiduojantis poveikis nuoCistanche tubulosadėl noradrenalino sukelto susitraukimo ir didelio K plus izoliuotoje žiurkės krūtinės aortoje

Kaip parodyta 4 lentelėje ir 3 paveiksle, slopinamasis pagrindinių sudedamųjų dalių, kankanozido F (1) ir kankanozės (3), echinakozido (4), akteozido (5), izoakteozido (6), cistanozido F (10) ir salidrozido ( 11) tirti izoliuotų žiurkės krūtinės ląstos aortos noradrenalino sukelti susitraukimai. Dėl to 3–5 ir 10 junginiai, turintys kofeoilo grupę 40-padėtyje, reikšmingai slopino susitraukimus, priklausomai nuo laiko ir (arba) koncentracijos (10–100 lM), o 6 turintys 60- O-kofeoilo fragmentas pasižymėjo silpnu aktyvumu nei 4 ir 5. Kita vertus, junginys 1 su katecholinėmis grupėmis rodė reikšmingą slopinimą, bet 11 su fenolio grupe tokio poveikio neparodė. Šie rezultatai leido daryti prielaidą, kad 40-O-kofeoilo dalis ir 10-O-dihidroksifenetilo dalis yra būtinos stipriam kraujagysles atpalaiduojančiam poveikiui. Kita vertus, 1, 3–6 ir 10 (100 lM) junginiai neparodė jokio poveikio susitraukimams, kuriuos sukelia didelė kalio kalio koncentracija (didelis K plius ), skiriasi nuo nifedipino, nuo įtampos priklausomo kalcio kanalų blokatoriaus. tie patys audiniai (duomenys nerodomi). Šis atradimas rodo, kad šios aktyvios sudedamosios dalys slopino susitraukimus per receptorių valdomą kalcio kanalą, bet ne per nuo įtampos priklausomą kalcio kanalą. Neseniai Iizuka ir kt. pranešė, kad Forsythia suspensa vaisiaus feniletanoidas forzitiazidas slopino noradrenalino sukeltus susitraukimus žiurkės aortos žiedo preparatuose, ir teigė, kad noradrenalino sukeltų susitraukimų slopinimas forzitiazidu iš dalies yra nesumažėjęs dėl aortos kalcio antplūdis.20 Tačiau šiame tyrime atpalaiduojantis aktyvių sudedamųjų dalių poveikis buvo pastebėtas apytiksliai. 30 min. po noradrenalino pridėjimo kitaip nei prazosino, adrenalino a1-receptorių antagonisto. Reikia toliau tirti aktyvių sudedamųjų dalių veikimo mechanizmus.

3. Eksperimentinis

3.1. Bendra eksperimentinė procedūra

Fiziniams duomenims gauti buvo naudojami šie instrumentai: specifiniai sukimai, Horiba SEPA-300 skaitmeninis poliarimetras (l=5 cm); UV spektrai, Shimadzu UV-1600spektrometras; IR spektrai, Shimadzu FTIR-8100 spektrometras; 1H BMR spektrai, JEOL JNM-LA500 (500 MHz) spektrometras; 13C BMR spektrai, JEOLJNM-LA500 (125 MHz) spektrometras su tetrametilsilanu kaip vidiniu etalonu; FABMS ir HR-FAB MS, JEOL JMS-SX 102A masės spektrometras; HPLCdetector, Shimadzu RID{15}}lūžio rodiklis ir SPD 10A UV spindulių detektoriai. HPLC kolonėlė, YMC-PackODS-A (250 · 4,6 mm id) ir (250 · 20 mm id) kolonėlės buvo naudojamos atitinkamai analitiniais ir paruošiamaisiais tikslais.

Chromatografijai buvo naudojamos šios eksperimentinės sąlygos: normalios fazės silikagelio kolonėlės chromatografija, silikagelio BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd, 150–350 tinklelis); atvirkštinės fazės silikagelio kolonėlės chromatografija, Chromatorex ODS DM1020T (FujiSilesia Chemical, Ltd, 100–200 akių); TLC, iš anksto padengtos TLC plokštelės silikageliu 60F254 (Merck, 0,25 mm) (normali fazė) ir silikageliu RP-18 F254S (Merck, 0,25 mm) (atvirkštinė fazė); atvirkštinės fazės HPTLC, iš anksto padengtos TLC plokštelės silikageliu RP-18 WF254S(Merck, 0,25 mm); aptikimas buvo pasiektas purškiant 1% Ce(SO4)2–10% vandeniniu H2SO4, po to kaitinant.

Cistanche tubulosa

3.2. Augalinė medžiaga

Džiovinti stiebaiCistanche tubulosabuvo įsigyti Urumči, Sindziango provincijoje, Kinijoje, 2005 m. sausio mėn. per EishinTrading Co., Ltd, Osaka, Japonija, kaip aprašyta anksčiau.1

3.3. Ištraukimas ir izoliacija

Frakcijos {{0}} (590 mg), 2-1 (466 mg), 2-3 (3931 mg), 3-3(3610 mg), 3-4 (190 mg), 4-5 [=echinakozidas (4, 2595 mg, 0,44 proc. )], 4-6 (1635 mg), 5-2 (1114 mg), {{ 20}} (306 mg), 5-4(347 mg), 5-5 (=4, 1620 mg, 2,03 proc.) ir 5-6 (1453 mg) buvo gauti iš metanolinis stiebų ekstraktasCistanche tubulosakaip buvo pranešta anksčiau.1 1–2 frakcija (590 mg) buvo išgryninta HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)], kad gautų 3-metilbutanolio bD-gliukopiranozidą (18 mg). , 0.0030 proc. ), (plius )-pinorezinolis 40-ObD-gliukopiranozidas (96 mg, 0). 016 proc. ), ir (plius )-siringarezinolio 40-O bD-gliukopiranozido (129 mg, 0.022 proc. ) kartu cistanochlorino (21 mg, {{ 76}}.{{80}}035 proc.). Frakcija 2-1 (466 mg) buvo atskirta HPLC [MeOH/H2O (5:95, v/v)], kad gautų (2R,3R)-butaną-2,{{40 }}diolis 2-ObD-gliukopiranozidas (12 mg, {{1{{108}}4}}.0087 proc.), (2R, 3S)-butanas-2,3-diolis 2-ObD gliukopiranozidas (9 mg, 0.0065 proc. ) ir etilo bD -gliukopiranozido (76 mg, 0.055 proc. ) kartu su uridinu (0.0069 proc. ). Frakcija 2-2 (535 mg) buvo išgryninta HPLC [MeOH/H2O (5:95, v/v)], kad gautų salidrozidą (11, 41 mg, 0,022 proc.) kartu su antiridu (15 mg, 0,0079 proc.) ir 6-deoksikatalpolio (214 mg, 0,11 proc.). Frakcija 2-3 (535 mg) buvo atskirta HPLC [MeOH/H2O (5:95, v/v)], kad gautų 11 (17 mg, 0,022 proc.) kartu su gluro puse (110 mg, 0,14 proc.) ir barciozidas (164 mg, 0,21 proc.). Frakcijai 3-3 (510 mg) buvo atlikta HPLC [MeOH/H2O (40:60, v/v)], kad gautų akteozidą (5, 257 mg, 0,31 proc.), izoakteozido (6, 79 mg, 0,096 proc.) ir 20-acetilaktezido (7, 14 mg, 0,017 proc.). Frakcija 3-4 (190 mg) buvo toliau gryninama HPLC [MeOH/H2O (40:60, v/v)], kad gautų kankanozidą G (2, 17 mg, 0,0029 proc.) ir tubulozidą B (9, 21 mg, 0,0036). procentai). Frakcija 4-6 (75 mg) buvo išgryninta HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)] ir gaunama 5 (18 mg, 0,065 proc.). Frakcija 5-2 (1114 mg) buvo paveikta HPLC [MeOH/H2O (10:90, v/v)] ir gauta 2 (24 mg, 0,030 proc.). Frakcija 5-3 (306 mg) buvo išgrynintas HPLC [MeOH/H2O (15:85, v/v)] ir gaunamas kankanosidas F (1, 13 mg, 0,016 proc.). Frakcija 5-4 (347 mg) buvo paveikta HPLC [MeOH/H2O (10:90, v/v)], kad gautų kankanozę (3, 30 mg, 0,038 proc.) ir cistanozidą F (10, 20 mg, 0,025). procentai). Frakcija 5-6 (530 mg) buvo išgryninta HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)], kad gautų 4 (185 mg, 0,62 proc.), 5 (91 mg, 0,30 proc.) ir tubulozidą A. (8, 16 mg, 0,052 proc.).

3.3.1. Kankanozidas F (1).

Balti milteliai, ½a{{0}}D -44.8- (c0,50, MeOH). Didelės skiriamosios gebos teigiamų jonų FAB-MSm/z: apskaičiuota C26H40O17Na (M plius Na) plius 647,2163. Rasta: 647,2160. UV [MeOH, nm (log e)]: 224 (3,83), 283 (3,37). IR (KBr): 3432, 2940, 1560, 1508, 1458, 1075, 1044 cm{28}}. 1H BMR (500 MHz, CD3OD) d: pateikta 2 lentelėje. 13C BMR duomenys (125 MHz, CD3OD) dC: pateikti 2 lentelėje. Teigiamų jonų FAB-MS m/z: 647 (M plius Na) plius. Neigiamų jonų FAB-MS m/z: 623 (MH), 477 (M-C6H11O4)-, 623 (M-C6H11O5)-, 623 (M-C12H21O9)-.

3.3.2. Kankanozidas G (2).

Balti milteliai, ½a{{0}}D -35.0-(c 0,80, MeOH). Didelės skiriamosios gebos teigiamų jonų FAB-MSm/z: apskaičiuota C29H36O14Na (M plius Na) plius , 631.2003.Rasta: 631.1996. UV [MeOH, nm (log e)]: 329 (4,10).IR (KBr): 3432, 2924, 1709, 1638, 1518, 1447, 1264, 1040 cm-1. 1H BMR (500 MHz, CD3OD) d: pateikti 2 lentelėje. 13C BMR duomenys (125 MHz, CD3OD) dC: pateikti 2 lentelėje. Teigiamų jonų FAB-MS m/z: 631 (M plius Na) plius .neigiamas jonas FAB-MS m/z: 607 (MH)-, 461 (M-C6H11O4).

3.3.3. Kankanozė (3).

Balti milteliai, ½a{{0}}D -35.3- (c0,50, MeOH). Didelės skiriamosios gebos teigiamų jonų FAB-MSm/z: apskaičiuota C27H38O18Na (M plius Na) plius, 673,1956. Rasta: 673,1959. UV [MeOH, nm (log e)]: 219 (4,10), 247 (3,96), 333 (4,21). IR (KBr): 3430, 2962, 1702, 1639, 1611, 1458, 1264, 1071 cm{32}}. 1H BMR (500 MHz, CD3OD) d: pateikta 3 lentelėje. 13C BMR duomenys (125 MHz, CD3OD) dC: pateikti 3 lentelėje. Teigiamų jonų FAB-MS m/z: 673 (M plius Na) plius. Neigiamų jonų FABM-Sm/z: 649 (MH), 487 (M-C9H8O3)-, 325 (M-C15H18O8)-.

Cistanche tubulosa

3.4. Fermentinis 2 ir 4 deacilinimas tannaze

2 (4,8 mg, 0.008 mmol) tirpalas H2O (10 ml) buvo paveiktas tannaze (3,7 mg, iš Aspergillus oryzae). , Wako Pure Chemical Ind., Ltd, Osaka, Japonija) ir tirpalas maišomas 37 laipsnių temperatūroje 24 valandas. Į reakcijos mišinį pridėjus EtOH, tirpiklis pašalintas sumažintame slėgyje, o likutis išgrynintas HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)], kad gautų cistanosidą G (12, 2,8 mg, 80 proc.). panašiai procedūrai, 4 (9,2 mg, 0,012 mmol) tirpalas H2O (2,0 ml) buvo paveiktas tannaze (7,5 mg) ir tirpalas maišomas 37 laipsnių temperatūroje 24 valandas. Apdorojant reakcijos mišinį, kaip aprašyta aukščiau, buvo gauta liekana, kuri buvo išgryninta HPLC [MeOH/H2O (15:85, v/v)] ir gaunamas 1 (4,7 mg, 62 proc.).

3.5. 2 ir 3 šarminė ir rūgštinė hidrolizė

2 ir 3 (kiekvienas po 3,5 mg) tirpalas 50 proc. vandeniniame 1,4- dioksano (10 ml) buvo apdorotas 10 proc. vandeniniu KOH. (1.{{30}} ml) ir visa tai maišoma 37 °C temperatūroje atitinkamai 1 val. Pašalinus tirpiklį sumažintame slėgyje, gautas reakcijos mišinys, kuriam buvo atlikta HPLC analizė [stulpelis: YMC-Pack ODS-A, 250 · 4,6 mm id; judrioji fazė: MeOH/H2O (30:70, v/v); aptikimas: UV (254 nm); srauto greitis: 1,0 ml/min.], kad būtų galima identifikuoti kavos rūgštį (tR: 13,1 min.). Tada reakcijos mišinys iš 3 buvo ištirpintas 1 M HCl (2,0 ml) ir kaitinamas su grįžtamu šaldytuvu 3 valandas. Po aušinimo reakcijos mišinys ekstrahuojamas EtOAc. Vandeniniam sluoksniui buvo atlikta HPLC analizė atitinkamai tokiomis sąlygomis: HPLC kolonėlė, KaseisorbLC NH2-60-5, 250 × 4,6 mm id (Tokyo Kasei Co., Ltd, Tokijas, Japonija); aptikimas, optinis sukimas [ShodexOR-2 (Showa Denko Co., Ltd, Tokijas, Japonija); mobilioji fazė, CH3CN/H2O (85:15, v/v); srauto greitis 0,8 mL/min.]. Vandeniniame sluoksnyje esančios L-ramnozės ir D-gliukozės identifikavimas atliktas palyginus jų sulaikymo laiką ir optinį sukimąsi su autentiškų mėginių tR: 9,9 min (L-ramnozė, neigiamas optinis sukimas) ir 17,9 min (D-gliukozė, teigiamas optinis sukimas).

3.6. Kraujagysles atpalaiduojantis aktyvumas

3.6.1. Audinių paruošimas.

Sprague–Dawley žiurkių patinai, sveriantys 250–350 g, buvo numarinti anestezijos būdu perpjovus abi miego arterijas, o krūtinės ląstos aorta buvo izoliuota ir supjaustyta sraigtinėmis juostelėmis (2–3 mm ·15–2{25). }} mm). Fiziologiniame druskos tirpale buvo NaCl (118,0 mM), KCl (4,7 mM), KH2PO4 (1,2 mM), MgSO4 (1,2 mM), CaCl2 (2,5 mM), NaHCO3 (25,0 mM) ir D-gliukozės (10,0 mM). Tirpalas aeruojamas 95 procentų O2–5 procentų CO2 dujų mišiniu ir laikomas 37 laipsnių temperatūroje. Norint ištirti mechaninį atsaką, kiekvienas preparatas buvo suspenduotas organų vonioje (6 ml) ir pradinė apkrova buvo maždaug 1 g. Prieš pradedant eksperimentus, buvo leistas vienos valandos pusiausvyros laikotarpis. Susitraukimai buvo matuojami izometriškai naudojant jėgos poslinkio keitiklį (AD Instruments) ir užfiksuoti poligrafu.

3.6.2. Slopinamasis poveikis susitraukimui, kurį sukelia dl-noradrenalinas arba didelis K+.

Po pusiausvyros į vonią buvo pridėta dl-nor-adrenalino (galutinė koncentracija: 1 lM) arba 3 M KCl (0,1 ml, galutinė K plius: 54 mM). Audiniai buvo nuplauti tris kartus ir vėl subalansuoti, kai susitraukimas pasiekė maksimalų lygį. Ilgalaikis susitraukimas vėl buvo sukeltas pridedant dl-noradrenalino arba KCl, o tada tiriamasis junginys buvo naudojamas 10–100 lM (noradrenalinas) arba 100 lM (didelis K plius). Prieš uždedant tiriamąjį mėginį, susitraukimo atsakas buvo 100 procentų. Prazosino hidrochloridas ir nifedipinas buvo naudojami kaip etaloniniai junginiai.

3.6.3. Statistinė analizė.

Reikšmės išreiškiamos kaip vidurkiai± SEM. Statistinei analizei buvo naudojama vienpusė dispersijos analizė, po kurios buvo atliktas Dunnett testas daugkartinei palyginimo analizei. Tikimybės (p) reikšmės, mažesnės nei 0.05, buvo laikomos reikšmingomis.

Padėkos

Šį tyrimą rėmė 21-oji COE programa, projektas „Academic Frontier“ ir Japonijos švietimo, kultūros, sporto, mokslo ir technologijų ministerijos subsidija moksliniams tyrimams.

Nuorodos ir pastabos

1. Šis dokumentas yra 19 numeris serijoje „Bioaktyvios sudedamosios dalys iš Kinijos natūralių vaistų“. Dėl popieriaus numerio 18 žr. Xie, H.; Morikawa, T.; Matsuda, H.; Nakamura, S.; Muraoka, O.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Bull. 2006, 54, 669–675.
2. Namba, T. Vakan-Jaku enciklopedijoje (tradiciniai Kinijos ir Japonijos vaistai) su spalvotais paveikslėliais; Hokuryusha: Osaka, 1994; II tomas.
3. Kobayashi, H.; Ogučis, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Ueno, A.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. Chem. Pharm. Bull. 1987, 35, 3309–3314.
4. Matsuda, H.; Morikawa, T.; Tao, J.; Ueda, K.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Bull. 2002, 50, 208–215.

5. Morikawa, T.; Matsuda, H.; Toguchida, I.; Ueda, K.; Yoshikawa, MJ Nat. Prod. 2002, 65, 1468–1474.

6. Tao, J.; Morikawa, T.; Toguchida, I.; Ando, ​​S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Bioorg. Med. Chem. 2002, 10, 4005–4012.
7. Morikawa, T.; Tao, J.; Ando, ​​S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, MJ Nat. Prod. 2003, 66, 638–645.
8. Tao, J.; Morikawa, T.; Ando, ​​S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Bull. 2003, 51, 654–662.
9. Matsuda, H.; Morikawa, T.; Xie, H.; Yoshikawa, M. Planta Med. 2004, 70, 847–855.
10. Saulė, B.; Morikawa, T.; Matsuda, H.; Tewtrakul, H.; Wu, LJ; Harima, S.; Yoshikawa, MJ Nat. Prod. 2004, 67, 1464–1469.

11. Morikawa, T.; Saulė, B.; Matsuda, H.; Wu, LJ; Harima, S.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Bull. 2004, 52, 1194–1199.

12. Xie, H.; Wang, T.; Matsuda, H.; Morikawa, T.; Yoshikawa, M.; Tani, T. Chem. Pharm. Bull. 2005, 53, 1416–1422.
13. Morikawa, T.; Xie, H.; Matsuda, H.; Yoshikawa, MJ Nat. Prod. 2006, 69, 881–886.
14. Morikawa, T.; Xie, H.; Matsuda, H.; Wang, T.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Bull. 2006, 54, 506–513.
15. Kobayashi, H.; Karasava, H.; Miyase, T.; Fukušima, S. Chem. Pharm. Bull. 1985, 33, 1452–1457.

16. Karasava, H.; Kobayashi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Fukušima, S. Yakugaku Zasshi 1986, 106, 721–724.

17. Kitajima, J.; Išikava, T.; Tanaka, Y. Chem. Pharm. Bull. 1998, 46, 1643–1646.
18. Čiba, M.; Hisada, S.; Nišibė, S.; Thieme, H. Phytochemistry 1980, 19, 335–336.
19. 1H ir 13C BMR spektrai 1–3 buvo priskirti naudojant neiškraipytą stiprinimą naudojant poliarizacijos perdavimą (DEPT), dvigubo kvantinio filtro koreliacijos spektroskopiją (DQF COSY) ir heterobranduolinę daugybinę kvantinę koherenciją (HMQC), heterobranduolinį daugialypį ryšį. (HMBC) eksperimentai.
20. Iizuka, T.; Nagai, M. Yakugaku Zasshi 2005, 125, 219–224.