Bendras glikozidų kiekis iš Cistanche Tubulosa stiebų palengvina į depresiją panašų elgesį: dvikryptė fitocheminių medžiagų ir žarnyno mikrobiotos sąveika

Norėdami gauti daugiau informacijos:ali.ma@wecistanche.com

Li Fan ir kt

SANTRAUKA

Fonas: Kaip dažniausiai tradicinėje kinų medicinoje naudojama inkstų yang tonizuojanti žolė, džiovinti sultingi stiebaiCistanchekanalėlių(Schenk) Wight (CT) buvo veiksmingas gydant depresiją. Tačiau antidepresantų komponentai ir jų mechanizmas lieka neaiškūs.

Tikslas: ištirti aktyvius KT komponentus(Cistanchekanalėlių)nuo depresijos, taip pat galimi mechanizmai. Tyrimo planas ir metodai: elgsenos nevilties testai buvo naudojami siekiant įvertinti polisacharidų, oligosacharidų ir skirtingų glikozidais praturtintų frakcijų, atskirtų nuo KT, antidepresinį aktyvumą, taip pat tipinius žarnyno mikrobiotos metabolitus, įskaitant 3-hidroksifenilpropiono rūgštį ({{2). }}HPP) ir hidroksitirozolis (HT). Be to, bioaktyvių frakcijų ir metabolitų poveikis lėtinio nenuspėjamo lengvo streso (CUMS) modeliams buvo ištirtas atliekant daugybę farmakodinamikos ir biocheminių analizių. Storosios žarnos histologijos ir žarnyno barjero pokyčiai buvo pastebėti dažymo ir imunohistocheminės analizės būdu. Žarnyno mikrobų savybės ir triptofano-kinurenino metabolizmas buvo tiriami atitinkamai naudojant 16S rRNR seką ir Western blot metodą.

Rezultatai: Iš visoglikozidai(TG) dramatiškai sumažino į depresiją panašų elgesį, palyginti su skirtingomis atskirtomis frakcijomis, atspindėdamas sinergetinį feniletanoido ir iridoidinių glikozidų poveikį pagumburio-hipofizės-antinksčių (HPA) ašies hiperaktyvacijai, sunkiam neuronų ir periferiniam uždegimui ir trūkumams. 5-hidroksitriptaminu (5-HT) ir smegenų kilmės neurotrofiniu faktoriumi hipokampe. Be to, TG(bendras glikozidų kiekis)sumažino žemo laipsnio storosios žarnos uždegimą ir žarnyno barjero sutrikimą, o kelių bakterijų genčių gausa labai koreliavo su HPA ašimi ir CUMS žiurkių uždegimu. Nuosekliai indoleamino 2, 3-dioksigenazės 1 (IDO1) ekspresija gaubtinėje žarnoje po TG buvo žymiai sumažinta.(bendras glikozidų kiekis)vartojant kartu su triptofano-kinurenino metabolizmo slopinimu. Kita vertus, HT taip pat padarė ryškų antidepresinį poveikį gerindamas HPA ašies funkciją, priešuždegiminį citokinų išsiskyrimą ir triptofano-kinurenino metabolizmą, tuo tarpu jis negalėjo iš esmės pakoreguoti sutrikusios žarnyno mikrobiotos taip, kaip TG. Keista, bet pranašesni už fluoksetiną, TG ir HT gali dar labiau pagerinti pagumburio-hipofizės-lytinių liaukų ašies disfunkciją ir nenormalų ciklinį nukleotidų metabolizmą.

Raktažodžiai: Cistanchekanalėlių, visų glikozidų, hidroksitirozolis, depresija, žarnyno mikrobiota

Spustelėkite, jei norite cistanche deserticola ma produktą

Įvadas

Depresija yra lėtinis, pasikartojantis ir potencialiai gyvybei pavojingas psichikos sutrikimas, kuriuo serga iki 20 procentų viso pasaulio gyventojų (Nabavi ir kt., 2017). Šiuo metu, nors buvo patvirtinta daug antidepresantų, šalutinis poveikis kelia susirūpinimą. Pažymėtina, kad ilgalaikis gydymas selektyviais serotonino reabsorbcijos inhibitoriais (SSRI), tokiais kaip fluoksetinas, pagrindinis farmakologinis depresijos agentas, paaštrino problemas, tokias kaip lėtinė seksualinė disfunkcija (Bijlsma ir kt., 2014); tai atkreipė vis didesnį dėmesį į naujų antidepresantų iš natūralių žolelių atradimą (Wang ir kt., 2019). Pagal tradicinės kinų medicinos (TCM) teoriją, inkstų ir jango trūkumas sukelia veiklos ypatybes, panašias į klinikinius depresijos simptomus, tokius kaip jausmas sąvartynuose, susidomėjimo praradimas ir sentimentalumas (Yang ir kt., 2020), skatinantys mintis. palengvinti į depresiją panašų elgesį tonizuojant inkstų yang. Atsitiktinai daugelis inkstų yang tonizuojančių žolelių turi pranašumą gerinant lytinę funkciją (Wu ir kt., 2015). Tokie tyrimai verčia mus atkreipti dėmesį į galimą taikymąCistanchesHerba, kuri yra dažniausiai TCM naudojama inkstų yang tonizuojanti žolė ir veiksminga gydant vyrų seksualinę disfunkciją (Wang ir kt., 2020), kalbant apie antidepresantų vystymąsi.CistanchesHerba, oficialiai užregistruoti kaip džiovinti sultingi stiebaiCistanchekanalėlių(Schrenk) Wight (CT) irCistanchedeserticola(YC Ma) Kinijos farmakopėjoje (Wang ir kt., 2017) buvo naudojamas Kinijoje ir kitose Rytų Azijos šalyse nuo XV amžiaus gydant tokias ligas kaip inkstų-yang trūkumas, impotencija ir moterų nevaisingumas. Šiuolaikiniai farmakologiniai tyrimai rodoCistanchesHerba pasižymi daugybe biologinių savybių, tokių kaip imuniteto stiprinimas, neuroprotekcija, antioksidacinis, senėjimą stabdantis ir nuovargį mažinantis poveikis (Wang ir kt., 2017). Neuroprotekcinės savybėsCistanchesHerba siūlo terapinį potencialą gydant su pažinimu susijusias ligas, tokias kaip insultas, depresija ir Alzheimerio liga (Wang ir kt., 2020). Ankstesniame tyrime nustatėme, kad CT(Cistanchekanalėlių)ekstraktas palengvino į depresiją panašų lėtinio nenuspėjamo lengvo streso (CUMS) žiurkių elgesį (Li ir kt., 2018). Iki šiol cheminė CT analizė(Cistanchekanalėlių)parodė, kad pagrindinės jo sudedamosios dalys yra feniletanoidiniai glikozidai, iridoidiniai glikozidai, polisacharidai ir oligosacharidai (Jiang ir Tu, 2009), tačiau junginio tipas, kuris vaidina dominuojantį antidepresinį poveikį, lieka neaiškus.

Daugybė tyrimų patvirtino, kad fiziologinis žarnyno (ypač kommensalinės mikrobiotos) veikimas vaidina svarbų vaidmenį vystant depresiją ir gali reguliuoti neuroendokrininę, autonominę nervų sistemą ir imunines sistemas (Yang ir kt., 2020). Be to, ryšys, siejantis triptofano metabolizmą, žarnyno mikrobiotą ir depresiją, palaipsniui pritraukė daug dėmesio. Pakitusi žarnyno mikrobiota gali suaktyvinti triptofano ir kinurenino kelią, todėl sumažėja periferinio ir smegenų triptofano prieinamumas, o tai lemia 5-HT trūkumą (Agus ir kt., 2018). Mūsų ankstesnis tyrimas parodė, kad feniletanoidiniai glikozidai KT(Cistanchekanalėlių)paprastai pasižymi mažu biologiniu prieinamumu, o žarnyno mikrobiota gali greitai metabolizuoti į 3-hidroksifenilpropiono rūgštį (3-HPP) ir hidroksitirozolį (HT) (Li ir kt., 2016). Be to, CT(Cistanchekanalėlių)buvo pranešta, kad ekstraktas atkuria žarnyno mikrobiotos homeostazę CUMS žiurkėms (Li ir kt., 2018). Remdamiesi tokiais tyrimais, padarėme išvadą, kad dvikryptė fitocheminių medžiagų ir žarnyno mikrobiotos sąveika gali lemti specifinių bioaktyvių KT komponentų antidepresinį poveikį.(Cistanchekanalėlių). Tiksliau, junginiai virškinimo trakte gali virsti absorbuojamais metabolitais (tokiais kaip 3-HPP ir HT), veikiant žarnyno mikrobiota, ir vėliau daryti antidepresinį poveikį. Savo ruožtu, bioaktyvių komponentų sukelti žarnyno mikrobiotos struktūriniai pokyčiai gali vienu metu atlikti svarbų vaidmenį antidepresantų veikloje.

Savo tyrime mes naudojome elgesio nevilties testus, kad įvertintume polisacharidų, oligosacharidų ir įvairių glikozidais praturtintų frakcijų, atskirtų nuo KT, antidepresinį aktyvumą.(Cistanchekanalėlių)vandeninis ekstraktas (CTE) ir tipiški žarnyno mikrobiotos metabolitai (įskaitant 3-HPP ir HT), kuriuos toliau patvirtinome lėtinio nenuspėjamo lengvo streso (CUMS) modelyje, atlikdami daugybę farmakodinamikos ir biocheminių analizių. Vėliau mes ištyrėme, ar jo mechanizmas prieš depresiją buvo svarbus dvikryptei fitocheminių medžiagų ir žarnyno mikrobiotos sąveikai.

Medžiagos ir metodai

Medžiagos

Visi cheminei analizei naudojami standartai buvo įsigyti iš Durst (Sichuanas, Kinija). 3-HPP, HT, fluoksetinas ir imipraminas buvo įsigyti iš Aladdin (Šanchajus, Kinija). BCA baltymų kiekybinis rinkinys buvo įsigytas iš Boster (Uhanas, Kinija). Nanjing Jiancheng (Nankinas, Kinija) pateikė 5-HT, BDNF, naviko nekrozės faktorių alfa (TNF-), interleukiną-1beta (IL-1) ir gama interferoną (IFN-). ) su fermentais susieto imunosorbento tyrimo (ELISA) rinkiniai. Kortikosterono (CORT), adrenokortikotropinio hormono (AKTH) ir kortikotropiną atpalaiduojančio hormono (CRH) ELISA rinkiniai buvo įsigyti iš „MultiSciences“ (Hangdžou, Kinija). Ciklinio adenozino monofosfato (cAMP), ciklinio guanozino monofosfato (cGMP), testosterono (T) ir gonadotropiną atpalaiduojančio hormono (GnRH) ELISA rinkiniai buvo įsigyti iš su fermentais susietos biotechnologijos (Šanchajus, Kinija). Triptofano ir kinurenino ELISA rinkiniai buvo gauti iš Small Molecule Antibodies (Bordo, Prancūzija). Pirminiai / antriniai antikūnai, įskaitant zonula occludens 1 (ZO-1), indoleaminą 2, 3-dioksigenazę 1 (IDO1), -aktiną ir HRP ožkų anti-triušio IgG (H plius L), buvo įsigyti iš Proteintech. (Uhanas, Kinija). Visi kiti analitinės kokybės ar aukštesnio grynumo reagentai buvo gauti iš komercinių tiekėjų.

Skirtingų frakcijų, atskirtų nuo CTE, paruošimas(Cistanchekanalėlių ekstraktas)

KT(Cistanchekanalėlių)buvo surinktas 2015 m. lapkritį Hetiane, Sindziange, Kinijoje, o autentiškumą patvirtino prof. Xiaobo Li. Kupono pavyzdys (20151108) buvo deponuotas Šanchajaus Jiao Tong universiteto Farmacijos mokykloje.

Susmulkinti mėginiai tris kartus ekstrahuojami distiliuotu vandeniu (1:10, m/v) 2 valandas 80–90 ◦C temperatūroje, kad būtų gauta CTE(Cistanchekanalėlių ekstraktas)(derlius buvo 57,1 proc.). CTE buvo ištirpintas distiliuotame vandenyje, po to lėtai maišomas su etanoliu (1:4, v/v) ir 24 valandoms 4 ◦C temperatūroje. Tada nuosėdos ir supernatantas buvo surinkti centrifuguojant 4000 aps./min., 20 min. Bendri polisacharidai (TP; išeiga 5,7 proc.) buvo gauti plaunant 80 procentų etanoliu ir tris kartus iš surinktų nuosėdų deproteinizuojant Savage reagentu. Tada likęs supernatantas chromatografuojamas per D101 mikroporingos dervos kolonėlę ir eliuuojamas distiliuotu vandeniu ir 40 procentų etanoliu. Išplautoje vandens ir 40 procentų etanolio frakcijose buvo visų oligosacharidų (TO; išeiga buvo 35,1 procento) irvisoglikozidai(TG; derlius buvo atitinkamai 12,1 proc.). TG(bendras glikozidų kiekis)buvo toliau eliuuojamas distiliuotu vandeniu ir 5 proc., 10 proc. ir 40 proc. etanoliu per D101 mikroporinę dervą, o eliuuotos 5 proc. ir 40 proc. etanolio frakcijos buvo bendri iridoidiniai glikozidai (TG-IrG; išeiga 2,7 proc.) ir bendrųjų feniletanoidinių glikozidų (TG-PhG; išeiga atitinkamai 8,7 proc.).

Cheminė analizė

Pirma, iš CTE atskirtos pagrindinės skirtingų frakcijų cheminės sudedamosios dalys(Cistanchekanalėlių ekstraktas)buvo apibūdinti UPLC-QTOF-MS. Antra, santykinis visų angliavandenių ir glikozidų kiekis buvo nustatytas UV-Vis metodu. Trečia, pagrindiniai komponentai (echinakozidas, verbaskozidas, verbaskozidas, 8-epilogano rūgštis ir tenipozido rūgštis) buvo kiekybiškai įvertinti patvirtintu HPLC metodu. Išsamūs parametrai ir metodo patvirtinimas pateikti papildomoje medžiagoje.

Eksperimentai su gyvūnais

Konkretūs eksperimentų su gyvūnais grafikai parodyti 1 pav. Visi eksperimentiniai gyvūnai buvo laikomi ir aklimatizuojami 1 savaitę prieš eksperimentus Šanchajaus Jiao Tong universiteto (Šanchajus, Kinija) laboratorinių gyvūnų centre kontroliuojamoje kambario temperatūroje (25 ± 2). ◦C; 55 ± 10 procentų santykinė oro drėgmė) su 12:12 h šviesos ir tamsos ciklu. Šis tyrimas atliktas vadovaujantis SJTU Laboratorinių gyvūnų priežiūros ir naudojimo gairėmis. Gyvūnų patalpas ir protokolus patvirtino SJTU Gyvūnų etikos komitetas (Nr. A2019008).

Šimtas penkiasdešimt ICR pelių patinų (sveriančių 18–20 g, 6 savaičių amžiaus) buvo įsigytos iš Shanghai Slack Biotechnology Company (Šanchajus, Kinija) ir atsitiktinai suskirstytos į 10 grupių (n=15 / grupė). Kiekvienos grupės elgsenos nevilties pelių tiriamieji ir dozės parodyti 1 lentelėje. CTE dozės(Cistanchekanalėlių ekstraktas) ir jo atskirtos frakcijos buvo apskaičiuotos pagal šią formulę: dozė=4,55 g/kg.d.bw × išeiga, kuri buvo nustatyta pagal tris žmogaus ekvivalentinės dozės skaičiavimus pagal kūno paviršiaus plotą. Teigiamo vaisto imipramino ir žarnyno mikrobiotos metabolitų (3-HPP ir HT) dozės buvo nustatytos pagal ankstesnius tyrimus (Gupte ir kt., 2016; Pablos ir kt., 2019). Sušvirkštus į skrandį vieną kartą per parą 7 dienas, 8-ąją, 9-ąją ir 10-ąją dieną buvo atliktas atviro lauko testas (OFT), uodegos pakabos testas (TST) ir priverstinio plaukimo testas (FST). Konkretūs elgesio testų metodai yra aprašyti papildomoje medžiagoje.

Septyniasdešimt du patinai Sprague-Dawley žiurkės (sveriančios 160–180 g, 6 savaičių amžiaus) buvo įsigyti iš Shanghai Slack Laboratory Animal Company (Šanchajus, Kinija). Prieš oficialius eksperimentus visoms žiurkėms po atitinkamo mokymo buvo atliktas sacharozės pirmenybės testas (SPT). Žiurkės buvo suskirstytos į 8 grupes (n=9 / grupė) pagal sacharozės pasirinkimą (papildomas S1 pav.). Kiekvienos grupės tiriamieji ir žiurkėms skirtos dozės parodytos 1 lentelėje. Dozės buvo nustatytos pagal konversijos koeficientą tarp pelės ir žiurkės, remiantis jų efektyviomis dozėmis elgsenos nevilties pelėms. Ir teigiamo kontrolinio vaisto fluoksetino dozė atitiko ankstesnį tyrimą (Hou ir kt., 2017). Visos grupės patyrė lėtinio nenuspėjamo lengvo streso (CUMS) seriją, išskyrus kontrolinę grupę. Stresoriai buvo taikomi nuolat ir atsitiktinai 4 savaites (daugiau informacijos rasite S1 papildomoje lentelėje). Maistas ir vanduo buvo laisvai prieinami kontrolinėms žiurkėms, kurios liko netrukdomos kitoje patalpoje, išskyrus elgesio testus. Tiriamieji buvo švirkščiami į skrandį likus 1 valandai iki CUMS procedūros 4 savaites. Po 28 dienų nuolatinio stresorių ir vaistų vartojimo OFT, SPT ir FST buvo atlikti atitinkamai 29, 31 ir 33 dienomis. Konkretūs elgesio eksperimentų metodai parodyti papildomoje medžiagoje.

Mėginių paėmimas ir biocheminė analizė

Po elgesio testų nevalgiusios žiurkės buvo anestezuotos pentobarbitalio natrio druska ir paimtas visas kraujas serumo mėginiams gauti. Po širdies perfuzijos fiziologiniu tirpalu, hipokampo, gaubtinės žarnos ir aklųjų žarnų turinys buvo surinktas ir laikomas -80 ◦C temperatūroje. Distaliniai storosios žarnos segmentai buvo pašalinti ir užfiksuoti 4 procentų paraformaldehidu. CORT, CRH, AKTH, TNF-, IL-1, IFN-, cAMP, cGMP, T, GnRH, triptofano ir kinurenino kiekis serume, 5-HT, BDNF ir TNF- hipokampe, o TNF- ir IFN- storojoje žarnoje buvo išmatuoti pagal instrukcijas, pateiktas su atitinkamais ELISA rinkiniais.

Histologija, imunohistochemija ir Western-blot tyrimas

Patologiniams storosios žarnos audinio pokyčiams stebėti buvo naudojamas hematoksilino ir eozino (H&E) ir Alciano mėlynojo periodinės rūgšties-Schiff (AB-PAS) dažymas. Be to, buvo atlikti šių skyrių imunohistocheminiai vertinimai, siekiant stebėti ZO-1 baltymų ekspresiją storosios žarnos epitelio ląstelėse (Ding ir kt., 2020). Išsami informacija apie mėginio paruošimą ir Western-blot tyrimą, siekiant nustatyti IDO1 baltymo ekspresiją gaubtinėje žarnoje ir hipokampe, taip pat aprašyta papildomose medžiagose.

Žarnyno mikrobiotos sudėtinio profilio analizė

16S rRNR didelio našumo sekos nustatymą atliko MajorBio Co., Ltd. (Šanchajus, Kinija), o išsamus metodas ir duomenų apdorojimas yra parodyti papildomose medžiagose.

Statistinė analizė

Duomenys išreiškiami kaip vidurkis ± standartinė vidurkio paklaida (SEM). Vienpusė dispersijos analizė (ANOVA) buvo naudojama kelių grupių palyginimui naudojant SPSS 20.0 programinę įrangą. Skirtumas buvo laikomas reikšmingu, kai p < 0,05.="" žarnyno="" mikrobų="" ir="" tam="" tikrų="" su="" depresija="" susijusių="" fiziologinių="" veiksnių="" koreliacijos="" buvo="" analizuojamos="" naudojant="" spearman="" koreliacijos="" koeficientą,="" pagrįstą="" šilumos="" žemėlapio="">

Rezultatai

Iš CTE atskirtų skirtingų frakcijų cheminė analizė(Cistanchekanalėlių ekstraktas)

Pagrindiniai komponentai buvo apibūdinti naudojant UPLC-QTOF-MS (papildoma lentelė S2 ir S2 pav.) ir iš viso nustatyta 21 sudedamoji dalis, įskaitant 16 feniletanoidinių glikozidų sudedamųjų dalių, 2 CTE fenolio glikozidų sudedamąsias dalis.(Cistanchekanalėlių ekstraktas), TG ir TG-PhG; ir 3 iridoidinių glikozidų sudedamosios dalys CTE(Cistanchekanalėlių ekstraktas), TG ir TG-IrG. Apskritai santykinis visų angliavandenių kiekis TP ir TO buvo atitinkamai 60,3 ir 80,8 procento. Santykinis turinysvisoglikozidaiTG buvo 87,7 proc. Atitinkamai, feniletanoidai ir iridoidiniai glikozidai sudarė atitinkamai 86,7 proc. ir 53,4 proc. TG-PhG ir TG-IrG. Echinakozido, verbaskozido, verbaskozido, 8-epilogano rūgšties ir tenipozido rūgšties turinys kiekvienoje frakcijoje parodytas 2 lentelėje, o HPLC chromatogramos ir metodo patvirtinimo duomenys pateikti papildomoje S3 lentelėje ir S3 pav.

Skirtingų frakcijų, atskirtų nuo CTE, poveikis(Cistanchekanalėlių ekstraktas)ir tipinius metabolitus pagal žarnyno mikrobiotą pelių elgesio nevilties testuose

Kaip parodyta 2 pav., palyginti su kontroline grupe, pelėms, kurioms 7 dienas buvo skiriamas imipraminas (teigiama kontrolė), reikšmingai sumažėjo nejudrumo laikas tiek FST, tiek TST ir neturėjo reikšmingo poveikio visam atstumui, nuvažiuotam per OFT. . Panašūs pokyčiai buvo pastebėti ir CTE(Cistanchekanalėlių ekstraktas), TG ir HT grupės, o tai rodo, kad CTE, TG(bendras glikozidų kiekis), o HT veikė antidepresantą, o poveikis nebuvo susijęs su jaudrumu. Vadinasi, TG(bendras glikozidų kiekis)ir HT buvo dominuojanti bioaktyvi frakcija, kurią nuo CTE ir tipiškų metabolitų skyrė atitinkamai žarnyno mikrobiota. Įdomu tai, kad po TG-PhG ir TG-IrG vartojimo reikšmingų nejudrumo laiko pokyčių FST nepastebėta, palyginti su kontrolinio tyrimo rezultatais, arba TST po TG-PhG vartojimo, o tai rodo, kad feniletanoidų ir iridoidinių glikozidų buvimas gali būti labai svarbūs CTE antidepresantiniam aktyvumui.

Įvairių glikozidais praturtintų frakcijų ir HT farmakodinaminis poveikis ir biocheminiai pokyčiai CUMS žiurkėms

Kaip parodyta 3 lentelėje, žiurkėms, kurioms 28 dienas buvo taikoma CUMS paradigma, labai sumažėjo (p < 0.001)="" sacharozės="" pirmenybė="" spt,="" bendras="" nuvažiuotas="" atstumas,="" ir="" auginimo="" skaičius="" oft,="" taip="" pat="" reikšmingas="" bendro="" nejudrumo="" laiko="" padidėjimas="" (p="">< 0,01)="" fst,="" palyginti="" su="" kontrolinėmis="" grupėmis,="" o="" tai="" rodo,="" kad="" cums="" žiurkėse="" atsirado="" į="" depresiją="" panašūs="" fenotipai.="" flx="" (teigiamos="" kontrolės)="" grupėje="" depresiniai="" rodikliai="" buvo="" pakeisti.="" panašiai,="" gydant="" cte,="" tg,="" tg-phg,="" tg-irg="" ir="" ht,="" sacharozės="" pirmenybė="" buvo="" atkurta="" iki="" normalaus="" lygio="" cums="" žiurkėms,="" kurios="" sudarė="" 102,7="" proc.,="" 94,1="" proc.,="" 89,8="" proc.,="" 91,9="" proc.="" ir="" 94,3="" proc.="" atitinkamai="" valdikliai.="" nuosekliai="" fst,="" cte="" ir="" tg="" grupėse="" poveikis="" buvo="" akivaizdžiausias,="" o="" nejudrumo="" laikas="" siekė="" atitinkamai="" 103,3="" ir="" 93,4="" procento="" kontrolinės="" grupės,="" o="" tg-phg,="" tg-irg="" ir="" ht="" grupių="" nejudrumo="" laikas.="" tik="" pasiekė="" 62,1="" proc.,="" 73,2="" proc.="" ir="" 69,9="" proc.="" kontrolinės="" grupės.="" panašiai="" reikšmingai="" padidėjo="" (p="">< 0,05)="" bendras="" nuvažiuotas="" atstumas="" ir="" auginimo="" skaičius="" oft="" po="">(Cistanchekanalėlių ekstraktas), TG ir HT skyrimas bei gydymas TG-PhG ir TG-IrG turėjo tendenciją peržiūrėti CUMS žiurkių auginimo skaičių. Rezultatai parodė, kad TG buvo dominuojanti bioaktyvi antidepresantų frakcija, atskirta nuo CTE, o feniletanoidai ir iridoidiniai glikozidai buvo būtini norint sukelti antidepresinį poveikį. Be to, buvo įrodyta, kad HT yra vienas iš aktyvių TG metabolitų in vivo .

Nuosekliai, sergant CUMS, žymiai padidėjo CORT, CRF, AKTH, TNF-, IL-1 ir IFN kiekis serume ir TNF- kiekis žiurkių hipokampe, palyginti su kontroline grupe (p.< 0.05),="" resulting="" in="" significant="" reductions="" (p="" <="" 0.05)="" in="" the="" levels="" of="" hippocampal="" 5-ht="" and="" bdnf="" (fig.="" 3).="" except="" for="" a="" non-significant="" difference="" in="" the="" level="" of="" hippocampal="" bdnf="" between="" flx="" and="" cums="" groups,="" the="" above-mentioned="" alterations="" in="" cums="" rats="" could="" be="" significantly="" reversed="" (p="" <="" 0.05)="" after="" administration="" of="" fluoxetine,="" cte="">(Cistanchekanalėlių ekstraktas), TG ir HT, nurodant, kad CTE, TG(bendras glikozidų kiekis), ir HT parodė gerinantį poveikį HPA ašies hiperaktyvacijai, sunkiam periferiniam ir nerviniam uždegimui bei {{0}}HT ir BDNF trūkumams. Be to, gydymas TG-IrG ir TG PhG reikšmingai sumažino CORT, TNF-, IFN- ir hipokampo TNF- koncentraciją serume ir padidino hipokampo 5-HT lygį CUMS žiurkėse (p < {{8}="" }.{14}}5).="" reikšmingas="" crf="" ir="" akth="" koncentracijos="" serume="" sumažėjimas="" (p="">< 0.05)="" taip="" pat="" buvo="" pastebėtas="" tg-irg="" grupėje,="" palyginti="" su="" cums="" grupe.="" įdomu="" tai,="" kad="" cort,="" tnf-="" ,="" akth="" ir="" crf="" kiekis="" serume="" tg-phg="" ir="" tg-irg="" grupėse="" buvo="" žymiai="" didesnis="" nei="" tg="" grupėse="" (p="">< 0,05),="" o="" hipokampo="" 5-ht="" lygis.="" ir="" bdnf="" pasižymėjo="" priešinga="" išraiška="" (p="">< 0,05).="" šie="" rezultatai="" parodė,="" kad="" tg-phg="" ir="" tg-irg="" poveikis="" hpa="" ašies="" hiperaktyvumui,="" periferiniam="" ir="" nerviniam="" uždegimui="" bei="" 5-ht="" trūkumui="" buvo="" aiškiai="" prastesnis="" nei="" tg,="" o="" tai="" rodo,="" kad="" feniletanoidai="" ir="" iridoidiniai="" glikozidai="" gali="" veikti.="" sinergetinį="" poveikį="" pirmiau="" minėtiems="" daugeliui="">

TG ir HT reguliuoja HPG ašį ir ciklinį nukleotidų metabolizmą CUMS žiurkėse

Buvo išmatuoti T, GnRH, cAMP ir cGMP lygiai bei cAMP ir cGMP (cAMP/cGMP) santykis serume, kuriam buvo atlikta CUMS, o rezultatai pateikti 4 lentelėje. T, GnRH, cAMP, ir cAMP/cGMP serume reikšmingai sumažėjo, o cGMP lygis reikšmingai padidėjo (p < 0.05)="" cums="" grupėje,="" lyginant="" su="" kontrolinėmis="" grupėmis,="" o="" tai="" rodo,="" kad="" taikant="" cums,="" hpg="" ašis="" buvo="" slopinama.="" ir="" ciklinio="" nukleotidų="" apykaitos="" sutrikimas.="" palyginti="" su="" cums="" grupe,="" flx="" grupėje="" reikšmingų="" pokyčių="" nebuvo.="" keista,="" bet="" po="">(bendras glikozidų kiekis)ir HT gydymas, reikšmingai padidėjo (p < {0}},05)="" t,="" gnrh,="" camp="" ir="" camp/cgmp="" koncentracijos="" serume,="" o="" cgmp="" lygis="" serume="" buvo="" reikšmingai="" sumažintas="" (p="">< 0,05).="" šie="" rezultatai="" parodė,="" kad="">(bendras glikozidų kiekis)ir HT reguliavo HPG ašį ir ciklinį nukleotidų metabolizmą, kuris buvo aiškiai pranašesnis už teigiamą fluoksetino kontrolę.

TG ir HT palengvina žemo laipsnio storosios žarnos uždegimą ir žarnyno barjero sutrikimą CUMS žiurkėms

H&E dažymas buvo naudojamas storosios žarnos morfologiniams pažeidimams įvertinti, o didelių storosios žarnos skirtumų tarp eksperimentinių grupių nepastebėta (4a pav.). Be to, taip pat buvo analizuojamas TG ir HT poveikis storosios žarnos uždegimui ir žarnyno barjero sutrikimui (4b-d pav.). Palyginti su kontroline grupe, CUMS grupėje sumažėjo taurių ląstelių skaičius ir gleivių sluoksnio storis. Nuosekliai ZO-1 baltymų ekspresija ir IFN- bei TNF- lygiai gaubtinėje žarnoje reikšmingai sumažėjo (p < 0.05)="" ir="" padidėjo="" (p="">< 0,05).="" ),="" o="" tai="" rodo,="" kad="" nors="" akivaizdus="" histologinis="" pažeidimas="" nebuvo="" sukeltas,="" cums="" taikymas="" sukėlė="" mažo="" laipsnio="" storosios="" žarnos="" uždegimą="" ir="" žarnyno="" barjero="" sutrikimą.="" po="" fluoksetino="">(bendras glikozidų kiekis), ir gydant HT, padidėjo tauriųjų ląstelių skaičius ir gleivių sluoksnio storis, o storosios žarnos IFN- ir TNF- kiekis reikšmingai sumažėjo (p < 0.05).="" be="" to,="" tg="" ir="" ht="" reikšmingai="" padidino="" (p="">< 0,05)="" baltymų="" zo-1="" ekspresiją="" iki="" tokio="" lygio,="" kaip="" ir="" kontrolinės="" grupės.="" šie="" rezultatai="" parodė,="" kad="">(bendras glikozidų kiekis)ir HT gali palengvinti žemo laipsnio storosios žarnos uždegimą ir žarnyno barjero sutrikimą CUMS žiurkėms.

TG ir HT poveikis žarnyno mikrobiotos sudėčiai

Pašalinus nekvalifikuotas sekas, iš viso buvo gautas 1 874 721 efektyvus skaitymas. Alfa įvairovės (5a pav.) ir beta įvairovės (5b pav.) rezultatai parodė, kad nors žarnyno mikrobiotos turtingumas (Chao) ir įvairovė (Šenonas) aklųjų žarnų turinyje nesiskyrė, bendra žarnyno mikrobiotos struktūra pagrindinių koordinačių analizės (PCoA) diagrama parodė ryškų skirtumą tarp kontrolinių ir CUMS grupių. Be to, TG(bendras glikozidų kiekis)ir HT gydymas žymiai padidino CUMS žiurkių bakterijų gausumą ir sukėlė ryškius PCoA diagramos skirtumus, palyginti su CUMS žiurkėmis, parodydami aiškius panašumus su kontrolinėmis grupėmis, ypač kai TG(bendras glikozidų kiekis)buvo ištirtas.

Taksonominiai mikrobiotos pokyčiai taip pat patvirtino, kad TG(bendras glikozidų kiekis)padarė dramatišką reguliavimo poveikį žarnyno mikrobiotos sudėčiai. Po TG(bendras glikozidų kiekis)vartojant, daugumos pakitusių taksonų gausa CUMS žiurkėse buvo pakeista iki lygio, panašaus į kontrolinės grupės. Reikšmingas sumažėjimas (14,2 proc., p < 0.05)="" ir="" sodrinimas="" (53,6="" proc.,="">< 0.05)="" in="" the="" abundances="" of="" the="" phylum="" firmicutes="" and="" bacteroidetes="" were="" observed="" in="" the="" tg="">(bendras glikozidų kiekis)grupė, palyginti su CUMS grupe (5c pav.). Nuosekliai šeimos lygmeniu (papildoma lentelė S4) TG sumažino Ruminococcaceae (firmicutes) ir Peptococcaceae (prieglaudos Firmicutes) gausą atitinkamai 33,9 ir 82,9 procentais, palyginti su CUMS grupe (p < 0).="" {{10}}5).="" ir="" atvirkščiai,="" tg="" grupėje="" buvo="" reikšmingas="" erysipelotrichaceae="" (firmicutes="" genties,="" 78,4="" proc.,="" p="">< 0,05)="" ir="" muribaculaceae="" (bacteroidetes,="" 77,3="" proc.,="" p="">< 0,05)="" šeimos="" gausumas.="" nuosekliai="" genties="" lygmeniu="" (5d="" pav.),="" anaerotruncus,="" harryflintia,="" ruminiclostri="" dium_9,="" neklasifikuotų_f_ruminococcaceae="" (rumino-coccaceae="" šeimos="" narių)="" gausa="" ir="" peptococcus="" (peptococcaceae="" šeimos="" narys)="" buvo="" žymiai="" sumažintas,="" o="" norank_f_erysipelotrichaceae,="" allo="" baculum,="" dubosiella="" (erysipelotrichaceae="" šeimos="" nariai)="" ir="" norank_f{{24}="" }muribaculaceae="" (muribaculaceae="" šeimos="" narys)="" tg="" grupėje="" buvo="" gausiau="" nei="" cums="" grupėje="">< 0.05).="" in="" addition,="" tg="" decreased="" the="" abundances="" of="" tyzzerella_3,="" acetatifactor,="" and="" norank_f_lachnospiraceae="" assigned="" to="" the="" family="" lachnospiraceae="" (p="" <="" 0.05),="" although="" the="" abundance="" of="" the="" family="" lachnospiraceae="" was="" similar="" across="" all="" experimental="" groups.="" unlike="" tg,="" ht="" decreased="" the="" abundances="" of="" partially="" altered="" taxa="" induced="" by="" cums,="" including="" the="" family="" ruminococcaceae,="" 3="" genera="" (anaerotruncus,="" harryflintia,="" and="" ruminiclostridium_9)="" assigned="" to="" the="" family="" ruminococcaceae="" and="" 2="" genera="" (tyzzerella_3,="" acetatifactor)="" assigned="" to="" the="" family="" lachnospiraceae.="" additionally,="" converse="" variations="" were="" observed="" in="" the="" abundances="" of="" ruminococcaceae_ucg_013="" and="" streptococcus="" in="" the="" ht="" group.="" these="" results="" indicated="" that="" tg="" and="" ht="" exerted="" clear="" differences="" in="" the="" regulation="" of="" gut="" microbiota="" composition,="" and="" the="" effect="" of="" tg="" was="" superior="" to="" that="" of="" tg="" especially="" in="" altering="" the="" genera="" assigned="" to="" the="" family="" erysipelotrichaceae,="" peptococcaceae,="" and="">

TG paveiktų pakitusių mikrobų genčių koreliacinė analizė(bendras glikozidų kiekis)ir HT, su HPA ašimi susiję hormonai, priešuždegiminiai citokinai, 5-HT ir BDNF

Išsiaiškinti ryšį tarp žarnyno mikrobiotos sudėties pokyčių, paveiktų TG(bendras glikozidų kiekis)ir HT bei atitinkamus su depresija susijusius požymius, buvo atlikta Spearman koreliacinė analizė. Kaip parodyta 6 pav., 5-HT ir BDNF lygiai hipokampe buvo tik reikšmingai teigiamai koreliuojami su norank_f_Muribaculaceae. Priešingu atveju būtų galima nustatyti aiškią koreliaciją tarp pakitusių mikrobų genčių ir su HPA ašimi susijusių hormonų. Visų pirma Dubosiella, norank_f_Muribaculaceae, norank_f_ Erysipelotrichacea ir Peptococcus buvo stipriai susiję su HPA ašies funkcija. CORT, CRF ir AKTH serume buvo neigiamos koreliacijos su Dubosiella, norank{10}}f_Muribaculaceae ir norank_f_Erysipelotrichacea ir teigiamų asociacijų su Peptococcus. Be to, Dubosiella ir norank_f_ Erysipelotrichacea parodė neigiamus ryšius su storosios žarnos IFN ir hipokampo TNF-, o panašūs ryšiai egzistavo Allobaculum, Harryfinita ir serumo bei hipokampo TNF-, taip pat norank _f_Lachnospiracea ir serumo IFN- ir TNF-. Priešingai, Peptococcus buvo teigiamai susijęs su storosios žarnos TNF- ir serumo TNF-. Taip pat norank{25}}f_Muribaculaceae buvo teigiamai susiję su serumo IFN- ir TNF-. Šie rezultatai parodė, kad pakitusios mikrobų gentys, ypač tam tikros gentys, priklausančios Erysipelotrichaceae, Peptococcaceae ir Muribaculaceae šeimai, kurios buvo konkrečiai paveiktos TG, parodė stiprią sąsają su HPA ašimi susijusiais hormonais ir priešuždegiminiais citokinais, o tai rodo lemiamą vaidmenį. žarnyno mikrobiotą reguliuojant HPA ašies funkciją ir uždegimą.

TG(bendras glikozidų kiekis)ir HT slopina triptofano-kinurenino metabolizmą CUMS žiurkėse

TG poveikis(bendras glikozidų kiekis)ir HT buvo nustatyti triptofano ir kinurenino kiekiai žiurkių serume, taip pat IDO1 ekspresija gaubtinėje žarnoje ir hipokampe. Kaip parodyta 7 ir 8 pav., palyginti su kontroline grupe, triptofano kiekis serume buvo žymiai sumažintas CUMS grupėje, priešingai nei padidėjęs kinurenino ir kinurenino ir triptofano santykis (Kyn). /Trp) ir IDO1 baltymo ekspresija gaubtinėje žarnoje ir hipokampe. Palyginti su CUMS grupe, serumo Kyn / Trp FLX grupėje buvo žymiai sumažintas (p< 0.05).="" tg="">(bendras glikozidų kiekis)ir HT gydymas lėmė reikšmingą CUMS žiurkių serumo triptofano lygio padidėjimą (p < {0}}.05)="" ir="" kinurenino="" bei="" kyn/trp="" koncentracijos="" serume="" sumažėjimą.="" (p="">< 0,05).="" be="" to,="" tg="" reikšmingai="" slopino="" ido1="" baltymo="" ekspresiją="" cums="" žiurkių="" gaubtinėje="" žarnoje="" (p="">< 0,05),="" tuo="" tarpu="" tarp="" cums="" ir="" tg="" grupių="" pastebėtas="" nereikšmingas="" ido1="" baltymo="" ekspresijos="" skirtumas="" hipokampe.="" tačiau="" ht="" poveikis="" ido1="" baltymo="" ekspresijai="" gaubtinėje="" žarnoje="" ir="" hipokampe="" buvo="" priešingas="" tg="" poveikiui,="" o="" tai="" rodo,="" kad="" tg="" ir="" ht="" slopino="" triptofano-kinurenino="" metabolizmą,="" sumažindami="" ido1="" ekspresiją="" atitinkamai="" cums="" žiurkių="" gaubtinėje="" žarnoje="" ir="" hipokampe.="">

Diskusija

Šiame tyrime buvo naudojami du skirtingi gyvūnų modeliai, siekiant nustatyti biologiškai aktyvius junginius KT(Cistanchekanalėlių)kurie pirmą kartą palengvina į depresiją panašų elgesį. TP ir TO greičiausiai buvo neveiksmingos CTE sudedamosios dalys, o TG(bendras glikozidų kiekis)parodė didžiausią potencialą gydant depresiją. Ankstesni KT tyrimai(Cistanchekanalėlių), taip patCistancheaugalai, daugiausia dėmesio skyrė didžiausio kiekio feniletanoidinių glikozidų biologiniam aktyvumui ir nepaisė iridoidinių glikozidų bei kitų mažiau gausių ingredientų svarbos. Įdomu tai, kad mūsų tyrimas parodė, kad feniletanoidai ir iridoidiniai glikozidai turėjo sinergetinį poveikį HPA ašies hiperaktyvumui, sunkiam periferiniam ir nerviniam uždegimui bei hipokampo 5-HT ir BDNF trūkumams, kurie gali būti pagrindinė naudingo antidepresanto priežastis. TG poveikis(bendras glikozidų kiekis). Šie rezultatai taip pat rodo daugiakomponentes ir daugiafunkcines vaistažolių medicinos ypatybes ir primena mums, kad sudedamosios dalys, kurių kiekis yra mažesnis, net ir pėdsakų sudedamosios dalys taip pat gali atlikti pagrindinį vaidmenį farmakologiniame veiksmuose.

Lėtinis stresas sukelia HPA ašies hiperaktyvumą, kuris skatina depresijos atsiradimą, taip pat HPG ašies slopinimą dėl sumažėjusio GnRH išsiskyrimo ir (arba) hipofizės GnRH jautrumo (Kirby ir kt., 2009). Tuo tarpu cAMP ir cGMP yra svarbūs tarpiniai centrai, kurie priklausė nuo daugelio neurotransmiterių ir hormonų, kad padarytų savo fiziologinį poveikį (Siawrys ir kt., 2002). Naujausi tyrimai nuosekliai parodė, kad inkstų ir jang trūkumo atsiradimas yra glaudžiai susijęs su pagumburio-hipofizės-tikslinės liaukos ašies disfunkcija (Zhang ir kt., 2019). Sergant inkstų ir jang trūkumo sindromu, taip pat buvo pastebėtas žymus cAMP ir cAMP/cGMP koncentracijos serume sumažėjimas. Šiame tyrime mes nustatėme, kad TG(bendras glikozidų kiekis)gali slopinti CORT, CRF ir AKTH kiekį serume ir padidinti T ir GnRH kiekį serume CUMS žiurkėse, o tai rodo HPA ir HPG ašies disfunkcijos atsigavimą po TG vartojimo. Be to, TG(bendras glikozidų kiekis)panaikino reikšmingą cAMP/cGMP koncentracijos serume sumažėjimą žiurkėms, kurioms buvo taikytas CUMS. Taigi galimas pagrindinis CT mechanizmas(Cistanchekanalėlių) gydant depresiją ir inkstų yang trūkumą gali būti iš dalies panašus ir vertas tolesnio tyrimo. Be to, seksualinio potraukio ir elgesio sukūrimas yra sudėtingas nervinio reflekso procesas. Lytiniai hormonai yra pagrindiniai centrinio seksualinio susijaudinimo šaltiniai, o lytinių hormonų trūkumas gali sukelti mažesnį seksualinį potraukį arba seksualinę disfunkciją (Holloway ir Wylie, 2015). Visų pirma, per didelis 5-HT slopina GnRH išsiskyrimą, kuris yra pagrindinė lėtinės seksualinės funkcijos sutrikimo priežastis po ilgalaikio gydymo SSRI (Prasad ir kt., 2015). Mūsų tyrime fluoksetinas (SSRI atstovas) buvo neveiksmingas HPG ašies disfunkcijai. Tačiau nors TG(bendras glikozidų kiekis)žymiai pagerino 5-HT lygį hipokampe, taip pat buvo pastebėti panašūs serumo T ir GnRH koncentracijos pokyčiai, todėl pagerėjo HPG ašies slopinimas. Šie rezultatai rodo aiškų CT pranašumą(Cistanchekanalėlių) gydant depresiją, todėl reikia toliau tirti vidinį už šį poveikį atsakingą mechanizmą.

Vis daugiau įrodymų parodė, kad žarnynas yra galimas lėtinių ligų gydymo taikinys, naudojant natūralius junginius, kurių biologinis prieinamumas yra mažas (Zhou ir kt., 2020). Naujausi tyrimai (Wei ir kt., 2019) parodė, kad gydymas CUMS sukelia išmatų mikrobiomų pakitimus ir žarnyno barjero defektus, kurie palengvina bakterijų invaziją į storosios žarnos gleivinę ir sustiprina uždegimines reakcijas storojoje žarnoje. Remiantis šia ataskaita, mūsų rezultatai parodė, kad 4 savaites CUMS ekspozicija sukėlė didelį tauriųjų ląstelių skaičiaus ir gleivių sluoksnio storio sumažėjimą žiurkės gaubtinėje žarnoje, taip pat žarnyno barjero pažeidimo atsiradimą dėl padidėjusio žarnyno pralaidumo, kuris buvo nustatytas matuojant ZO-1 baltymą. Be to, gaubtinėje žarnoje buvo pastebėta padidėjusi priešuždegiminių veiksnių (tokių kaip TNF- ir IFN-) ekspresija. Atitinkamai, šie radiniai parodė, kad nors akivaizdus histologinis pažeidimas nebuvo sukeltas, gydymas CUMS sukėlė storosios žarnos uždegimą ir žarnyno barjero sutrikimą. Ankstesni tyrimai parodė, kad KT pagerino pelių DSS sukelto kolito prevencijos veiksmingumą (Jia ir kt., 2014). Nenuoseklus, TG(bendras glikozidų kiekis)taip pat buvo įrodyta, kad jis palengvina CUMS žiurkių storosios žarnos ir žarnyno barjero sutrikimą, o tai pabrėžia jo potencialą kliniškai gydyti su storosios žarnos uždegimu susijusias ligas.

Išsamūs tyrimai taip pat parodė, kad ryšys, siejantis kommensalinę žarnyno mikrobiotą, HPA ašį ir uždegimą, yra sudėtingas ir vaidina lemiamą vaidmenį vystant depresiją (Misiak ir kt., 2020). Žarnyno mikrobiotos sudėties pokyčiai gali prisidėti prie padidėjusio citokinų išsiskyrimo ir mažų bioaktyvių molekulių sintezės (Du ir kt., 2020). Tam tikri citokinai (pvz., TNF-) gali prasiskverbti pro kraujo ir smegenų barjerą ir yra stiprūs HPA ašies aktyvatoriai (Misiak ir kt., 2020). Savo ruožtu HPA ašies hiperaktyvacija gali prisidėti prie žarnyno mikrobiotos disbiozės, lėtinio storosios žarnos uždegimo ir pakitusio žarnyno pralaidumo (Misiak ir kt., 2020). Remiantis ankstesniais tyrimais, TG gydomas žarnyno mikrobiotos modifikavimas greičiausiai yra atsakingas už jo gerinantį poveikį depresijai. Pastebėjome, kad TG(bendras glikozidų kiekis)žiurkėms, kurioms buvo taikomas CUMS, skirtingu lygiu mikrobų taksonų gausą pakeitė iki tokio lygio, kaip ir kontrolinėse. Visų pirma, buvo nustatyta, kad pagrindinės pakeistos gentys, priklausančios Peptococcaceae, Erysipelotrichaceae ir Muribaculaceae šeimai, labai koreliuoja su HPA ašimi ir uždegimu. Remiantis mūsų rezultatais, buvo pranešta, kad šeimos Peptococcaceae, Erysipelotrichaceae ir Muribaculaceae atlieka svarbų vaidmenį palaikant gleivinės barjero vientisumą ir uždegimo atsiradimą (Kankoush, 2015; Borton ir kt., 2017; Zhang ir kt., 2020). Todėl manėme, kad TG gali sumažinti kai kurių genčių, priskirtų Erysipelotrichacea, Peptococcaceae ir Muribaculaceae šeimai, gausumą, vėliau palengvindamas žemo laipsnio storosios žarnos uždegimą, HPA ašies hiperaktyvumą ir gleivinės barjero vientisumo sutrikimą. Įdomu tai, kad mūsų tyrime tik viena gentis, pavadinta nor ank{4}}f_Muribaculaceae, buvo koreliuojama su 5-HT ir BDNF hipokampe. Konkretus santykių mechanizmas lieka neaiškus ir jį reikia toliau nagrinėti. Priešingu atveju išvados taip pat rodo, kad daugumai TG sukeltų pakitusių genčių labai sunku tiesiogiai paveikti 5-HT lygį hipokampe. Norint paaiškinti, kaip žarnyno mikrobiotos sudėties pokyčiai įtakoja hipokampo 5-HT lygį po gydymo TG, mūsų dėmesį patraukė sudėtingas ryšys, jungiantis triptofano metabolizmą, HPA ašį, uždegiminius citokinus ir 5-HT. Triptofanas yra nepakeičiama aminorūgštis žmonėms ir mažiau nei 1 procentas sunaudojama baltymų sintezei, o didžioji dalis (daugiau nei 90 procentų) yra paverčiama IDO1 ir triptofano 2, 3-dioksigenazės 2 (TDO2) į kinureninus ir apytiksliai. 5 procentus serotonino keliu skatina triptofano hidroksilazė (Duan ir kt., 2018). 5-HT lygis smegenyse labai priklauso nuo periferinio triptofano prieinamumo, nes triptofanas į smegenis transportuojamas per neutralius aminorūgščių transporterius (Duan ir kt., 2018). IDO1, greitį ribojantį fermentą pirmajame kinurenino kelio etape, pirmiausia sukelia IFN- ir kiti priešuždegiminiai citokinai, tokie kaip IL-1 ir TNF- (Kennedy ir kt., 2017). kurie mūsų tyrime buvo įrodyta, kad yra susiję su žarnyno mikrobiota. Kaip pranešama, daugiau triptofano metabolizuojamas kinurenino keliu, todėl konkurenciškai sumažėja triptofano pavertimas 5-HT ir susiejamas su sumažėjusiu 5-HT kiekiu, kuris dažniausiai nustatomas sergant depresija (O'Mahony ir kt., 2015). Taigi žemesnis triptofano kiekis ir didesnis Kyn/Trp yra dažni ir sutampa su padidėjusia depresinės nuotaikos rizika. Paskyrus TG, per didelė IDO1 ekspresija gaubtinėje žarnoje buvo slopinama, todėl padidėjo triptofano koncentracija serume ir sumažėjo Kyn/Trp, o tai atskleidė galimą ryšį tarp žarnyno mikrobiotos ir hipokampo 5-HT lygio, kurį paveikė TG. Tuo tarpu BDNF, neurotrofinų šeimos narys, yra būtinas ląstelių diferenciacijai, neuronų išgyvenimui, sinapsių formavimuisi ir neuroplastiškumo procesams sergant depresija (Greenberg ir kt., 2009). Naujausi tyrimai parodė, kad BDNF yra glaudžiai susijęs su žarnyno gleivinės barjerine funkcija ir žarnyno mikrobiota (Maqsood ir Stone, 2016). Taip pat buvo pranešta, kad žarnyno mikrobiotos pokyčiai gali padidinti BDNF ekspresijos lygį ir taip paveikti į depresiją panašaus elgesio vystymąsi (Du ir kt., 2020). Tačiau, panašiai kaip 5-HT variacija, daugumai mūsų tyrimo metu TG sukeltų pakitusių genčių buvo labai neįmanoma tiesiogiai paveikti BDNF lygių hipokampe, todėl reikia toliau tirti vidinį molekulinį ryšį ir mechanizmą.

Priešingai, HT, žarnyno mikrobiotos TG metabolitas(bendras glikozidų kiekis), šiame tyrime taip pat pasižymėjo antidepresiniu poveikiu, kuris atitinka jo naudingą neuroprotekcinį aktyvumą (Hu ir kt., 2014). Susirūpinimą kelia tai, kad HT taip pat gali sumažinti priešuždegiminių citokinų, su HPA ir HPG ašimi susijusių hormonų ir hipokampo 5-HT koncentraciją iki tokio lygio, kaip ir kontrolinėse CUMS žiurkėse, o dauguma pakitusių mikrobų genčių paveikė HT turėjo silpną koreliaciją su aukščiau nurodytais fiziologiniais indeksais, o tai rodo, kad žarnyno mikrobiota gali būti ne HT antidepresinio aktyvumo taikinys. Be to, HT slopino per didelę IDO1 ekspresiją hipokampe, bet ne storojoje žarnoje, kartu su padidėjusiu triptofano kiekiu serume. Akivaizdžių skirtumų tarp TG atsiradimas(bendras glikozidų kiekis)ir HT gali atsirasti dėl puikios HT absorbcijos į kraują ir HT gebėjimo pereiti hematoencefalinį barjerą (Robles-Almazan ir kt., 2018), o tai taip pat rodo, kad žarnyno mikrobiotos yra stiprus metabolinis pajėgumas. ypač svarbus TG antidepresantiniam aktyvumui, be jo fiziologinių funkcijų. Taigi mes preliminariai įrodėme, kad dvikryptė fitocheminių medžiagų ir žarnyno mikrobiotos sąveika vaidina lemiamą vaidmenį gydant depresiją vartojant TG (kaip parodyta 9 pav.).

Išvada

Apibendrinant, TG(bendras glikozidų kiekis)daugiausia buvo atsakingas už CT antidepresinį aktyvumą(Cistanchekanalėlių), atspindintis sinergetinį feniletanoidų ir iridoidinių glikozidų poveikį HPA ašies hiperaktyvacijai, sunkų periferinį ir nervinį uždegimą bei 5-HT ir BDNF trūkumus hipokampe. Be to, galimas TG antidepresinio poveikio molekulinis mechanizmas(bendras glikozidų kiekis)buvo pasiektas dvikryptės fitocheminių medžiagų ir žarnyno mikrobiotos sąveikos dėka. Be to, TG pagerina slopintą HPG ašį ir ciklinį nukleotidų anomaliją(bendras glikozidų kiekis)ir HT, kurių nereguliavo gydymas SSRI, atstovaujamais fluoksetinu, parodė aiškų KT pranašumą gydant depresiją. Tokie moduliavimai yra perspektyvi depresijos gydymo strategija naudojant KT(Cistanchekanalėlių) ir panašūs tradiciniai augaliniai vaistai.

Autoriaus indėlis

XL, YP ir LF sukūrė eksperimentus ir analizavo duomenis. LF ir JW atliko eksperimentą ir analizavo duomenis. LF ir XL parengė rankraštį. PM prisidėjo prie eksperimento su gyvūnais ir mėginių tyrimo, o LZ prisidėjo prie žarnyno mikrobiotos sudėties analizės. Visi duomenys buvo sugeneruoti įmonės viduje ir nebuvo naudojama popieriaus gamykla. Visi autoriai sutinka būti atsakingi už visus darbo aspektus, užtikrinant vientisumą ir tikslumą.

Konkuruojančių interesų deklaracija

Autoriai pareiškia, kad interesų konfliktų nėra.

Padėkos

Šis darbas buvo paremtas Nacionalinio pagrindinių tyrimų ir plėtros projekto (2017YFC1702400) dotacijomis.

Papildomos medžiagos

Papildomą su šiuo straipsniu susijusią medžiagą galite rasti internetinėje versijoje adresu doi:10.1016/j.phymed.2021.153471.

Nuo: 'visų glikozidų iš stiebųCistanchekanalėliųpalengvinti į depresiją panašų elgesį: dvikryptė fitocheminių medžiagų ir žarnyno mikrobiotos sąveika.Li Fan ir kt

---Fitomedicina 83 (2021) 153471/ https://doi.org/10.1016/j.phymed.2021.153471