Cistanche Deserticola viso glikozidų fitocheminis patikrinimas ir estrogeninis aktyvumas

Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com

Abstraktus

Per kelis dešimtmečius buvo nuolatos stengiamasi gerinti žmogaus gyvenimo kokybę. Postmenopauzinis sindromas kelia rimtą susirūpinimą moterų gerovei. Šiuo metu pagrindinis šios būklės gydymo būdas yra hormonų terapija. Tačiau šis gydymas gali sukelti piktnaudžiavimą estrogenais, o tai gali sukelti nepageidaujamas reakcijas ir šalutinį poveikį. Dėl to hormonų terapija nepadėjo palengvinti pomenopauzinio sindromo.Cistanche deserticolayra klasikinė tonizuojanti žolė tradicinėje kinų medicinoje. Jis pasižymi dideliu estrogeniniu aktyvumu. Pagrindinės šios žolės veikliosios medžiagos yra glikozidai. Ankstesniame eksperimente buvo nustatyti trys svarbūs veiksniai, lemiantys bendrą glikozidų išeigą, akteozido išeigą ir estrogeninį aktyvumą, ty eliuento koncentracija, pH ir eliuento tūris. Šiame eksperimente buvo nustatytas optimalus valymo procesas, naudojant centrinę sudėtinę dizaino ir atsako paviršiaus metodiką, siekiant gauti glikozidus iš šios žolės. Nustatyta, kad eliuento (etanolio) koncentracija 85 procentai ir tūris 25 BV, kai pH 11, yra optimalus. Dvidešimt vienas aktyvus junginys buvo identifikuotas naudojant didelio efektyvumo skysčių chromatografiją / kvadrupolio skrydžio laiko masės spektrometrijos tyrimą. Šis tyrimas suteikia vertingų įžvalgų tolimesniems nuodugniams tyrimams, vertinantiems bendrųjų glikozidų estrogeninį aktyvumą.Cistanche deserticola.

Raktiniai žodžiai: Centrinis kompozitinis dizainas; Cistanche deserticola bendrieji glikozidai; LC/Q-TOF-MS; valymo technologija; gimdos augimo testas.

Įvadas

Cistanche deserticolayra valgoma, klasikinė tonizuojanti žolė. Pirmą kartą jis paminėtas Shen Nong vaistažolių klasikoje ir įtrauktas į aukščiausią klasę. Tai šilta žolė ir saldus. Jis turi daug gydomųjų savybių, pavyzdžiui, maitina kepenis ir inkstus, stiprina raumenis ir kaulus, gerina imuninę reguliaciją, taip pat stabdo senėjimą ir priešnavikinę veiklą [1-4]. Kai kurie natūralūs junginiai buvo išskirti ir identifikuoti iš šios žolės ekstraktų, iš kurių pagrindiniai yra feniletanoidiniai glikozidai, lignanoidai, iridoidai, polisacharidai ir alkaloidai [5-8].

Iš vaistinių augalų gaunamuose vaistuose yra įvairių veikliųjų junginių, kurie pirmiausia yra atsakingi už jų gydomąjį poveikį. To paties vaisto, gauto iš skirtingų augalinių šaltinių, veiksmingumas gali skirtis dėl jame esančių veikliųjų junginių rūšies ir kiekio skirtumų. Taigi svarbu nustatyti ir kiekybiškai įvertinti visas veikliąsias medžiagas, esančias iš vaistinių augalų gautuose vaistuose. Tas pats pasakytina apie C. deserticola. Atsako paviršiaus metodika yra eksperimentinis metodas, leidžiantis vienu metu ištirti skirtingų veiksnių sąveiką [9-10]. Jis gali būti naudojamas fitofarmacinių preparatų ekstrahavimo parametrams optimizuoti ir kiekybiniam veikliųjų junginių kiekiui vaistuose įvertinti. Centrinis kompozicinis dizainas (CCD) yra vienas iš eksperimentinių projektų, naudingų atsako paviršiaus metodikoje. Palyginti su stačiakampiu ir vienodu dizainu, CCD pasižymi didesniu tikslumu ir geresniu nuspėjamumu [11].

Postmenopauzinis sindromas gali labai pabloginti moterų gyvenimo kokybę. Paprastai šiai būklei gydyti naudojamas estrogenas. Tačiau ilgalaikis estrogenų vartojimas gali sukelti piktnaudžiavimą, taip sukeldamas įvairias nepageidaujamas reakcijas ir šalutinį poveikį. Todėl pomenopauzinio sindromo gydymui būtina pasirinkti alternatyvų gydymą, pageidautina augalinius vaistus, kurių veiklioji medžiaga yra estrogenų [12-13].

Preliminariame eksperimente, naudojant masių spektrometriją (MS) buvo identifikuotos įvairių natūralių junginių, gautų iš C. deserticola, struktūros [14]. Patvirtinta, kad glikozidai yra pagrindiniai aktyvūs junginiai, turintys reikšmingą estrogeninį aktyvumą [14-15]. Norint sukurti saugią ir veiksmingą estrogeninę veikliąją medžiagą naujame vaiste, reikia nuodugniai ištirti TGCD po išgryninimo. Šiame tyrime CCD pirmą kartą buvo panaudotas siekiant optimizuoti visų C. deserticola (TGCD) glikozidų gryninimą. Vėliau to paties glikozido estrogeniniam aktyvumui įvertinti buvo naudojamas gimdos augimo testas. Kokybinei TGCD junginių analizei po gryninimo buvo naudojama didelio efektyvumo skysčių chromatografija/kvadrupolio skrydžio laiko masės spektrometrija (HPLC/Q-TOF-MS). Šis procesas buvo taikomas siekiant aiškiai parodyti įvairių aktyvių junginių, turinčių estrogeninį aktyvumą, buvimą TGCD. Tai vienu metu gali būti pagrindas jo klinikiniam naudojimui esant pomenopauziniam sindromui, pakeičiančiam estrogenus.

Eksperimentinė procedūra

Instrumentai

„Agilent 1290“ HPLC sistema („Agilent Technologies“, Palo Alto, CA, JAV), „Agilent 6530“ serijos keturpolio skrydžio laiko LC/MS (Q-TOF) sistema („Agilent Technologies“, Palo Alto, CA, JAV) ir cheminė HPLC{ {5}}D darbo stotys buvo naudojamos kaip chromatografiniai prietaisai duomenims apdoroti. Viso tyrimo metu buvo naudojamas itin grynas Milli-Q vanduo. AR1140 elektroniniai analitiniai svarstyklės (Ohaus International Ltd.); 680 mikroplokštelių skaitytuvas („Bio-Rad Corporation“); ir 64R didelės spartos centrifuga (Beckman Coulter Allegra) buvo naudojama mėginių paruošimui.

Narkotikai ir chemikalai

C. deserticola buvo nupirkta iš vaistų rinkos ir identifikuota prof. Zhang Delian (Harbino komercijos universitetas, Kinija). Standartinis dietilstilbestrolis (99 proc. grynumo, partijos Nr. 60518) buvo pirktas iš Dr. Ehrenstorfer (Vokietija). Kiti standartai akteozidas (111530-200505) ir echinakozidas (111670-200503) buvo gauti iš Nacionalinio farmacijos ir biologinių produktų kontrolės instituto Pekine, Kinijoje. Kiekvieno etalono grynumas buvo > 98 proc. Acetonitrilas (ACN), metanolis ir skruzdžių rūgštis (MS klasė) buvo įsigyti iš Thermo Scientific Pierce (Rockford, IL, JAV). Itin grynas vanduo buvo gautas iš Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd. (Hangdžou, Kinija). Visi parduodami reagentai buvo analitinės kokybės.

C. deserticola gryninimo tirpalo bendrųjų glikozidų paruošimas

Panardinus į 75 procentų etanolį 12 valandų, neapdoroti C. deserticola milteliai (100 g) buvo ekstrahuojami 800 ml 75 procentų (t/v) etanolio 80 laipsnių temperatūroje 150 min., virinant su grįžtamu šaldytuvu. Tada jis buvo filtruojamas per dviaukštį filtrą ir po to du kartus ekstrahuojamas 800 ml 75 procentų etanolio dar 150 minučių. Vėliau filtratai buvo sujungti ir koncentruoti vakuume 45 °C temperatūroje. Ekstraktas buvo gautas pašalinus tirpiklį. Į ekstraktą buvo įpiltas tam tikras kiekis distiliuoto vandens, kad būtų gauta 0,5 g/ml koncentracija, kuri buvo naudojama gryninimo procesui tikrinti.

Adsorbcijai naudojant AB-8 makroporinę dervą, tiriamojo mėginio tirpalo pH buvo nustatytas iki 11. Pirma, 2 BV distiliuotas vanduo buvo naudojamas priemaišoms nuplauti. Tada eliuentas, kurio koncentracija 25 BV 85 % etanolio, buvo išplautas ir surinktas. Galiausiai surinktas išgrynintas eliuentas buvo sujungtas. Į ekstraktą buvo įpiltas tam tikras kiekis distiliuoto vandens, kad būtų gauta 1,5 g/ml koncentracija, kuri buvo naudojama intragastriniam vartojimui. Teigiamai kontrolei dietilstilbestrolio tirpalas (20 ug/ml) buvo paruoštas su dietilstilbestrolio milteliais.

Pagal gryninimo santykį ({{0}}.6), tam tikras ekstrakto kiekis (atitinka 1 g C. deserticola) buvo perpiltas į 10 ml matavimo kolbą, ištirpinama 50 procentų (t/v) metanolio tirpale ultragarso vonioje 5 minutes ir praskiedžiama iki 10 ml. Vaistinis tirpalas buvo gautas nufiltravus supernatantą per 0,45 μm filtro membraną. Akteozidas ir echinakozidas (po 1 mg) buvo sumaišyti ir visiškai ištirpinti 10 ml 50 procentų (t/v) metanolio tirpale. Galiausiai prieš analizę standartinis tirpalas buvo filtruojamas per 0, 45 μm Millipore filtrą.

LC-MS sąlygos

Chromatografinis atskyrimas buvo atliktas naudojant HPLC sistemą (Agilent 129{{10}}), turinčią ketvirtinę tirpiklio tiekimo sistemą, vakuuminį degazatorių ir fotodiodų matricos detektorių. MS/MS analizė buvo atlikta naudojant prietaisą Agilent-1290 HPLC/6530 Q-TOF-MS, turintį elektropurškimo jonizacijos šaltinį tiek teigiamų, tiek neigiamų jonų režimais. Atskyrimui buvo naudojama „Waters Symmetry“ skydo RP C18 kolonėlė (4,6 × 250 mm, 5 μm) (Waters Corporation, Milford, MA, JAV). Mobiliąją fazę sudarė 0,2 % skruzdžių rūgšties vandeninis tirpalas (v/v) (A) ir ACN (B), ir ji buvo pumpuojama 0,5 ml/min srauto greičiu. Kiekvieno mėginio įpurškimo tūris buvo 10 μL. Gradiento eliuavimo programa buvo tokia: 5–23 procentai B 0–35 min., 23–25 procentai B 35–65 min. ir 25–5 procentai B 65–70 min. Kolonėlės temperatūra buvo palaikoma 30 laipsnių. Chromatogramos buvo stebimos ir registruojamos esant 330 nm. Purškimo dujų slėgis buvo nustatytas 30 Psi, o kapiliarų įtampa buvo 3,5 kV. Sausų dujų srautas buvo 8 l/min 30 laipsnių temperatūroje. Apvalkalų dujų temperatūra buvo nustatyta 400 laipsnių, esant 12 l/min srauto greičiui. Susidūrimo energija buvo nustatyta 10–20 eV mažos energijos skenavimui ir 30–50 eV didelės energijos skenavimui. Masės spektro duomenys buvo įrašyti 50–1000 Da nuskaitymo diapazone teigiamų ir neigiamų jonų skenavimo režimais. Šiame tyrime greitas ir efektyvus TGCD ir standartų palyginimas buvo atliktas tomis pačiomis LC-MS sąlygomis.

Gimdos augimo testas

Tai buvo atlikta griežtai laikantis Nacionalinių sveikatos institutų laboratorinių gyvūnų priežiūros ir naudojimo vadovo rekomendacijų. Visos eksperimentinės procedūros buvo peržiūrėtos ir patvirtintos Harbino prekybos universiteto (Kinija) Gyvūnų etikos komiteto.

Nesubrendusios Kunming pelių patelės (apie 21 d. gimimo, nujunkytos), sveriančios 12 ± 2 g, buvo įsigytos iš Čangčuno nacionalinės biologinės pramonės bazės laboratorijos gyvūnų centro (Changchun, Kinija). Pelės buvo laikomos reguliuojamos temperatūros patalpoje (22 ± 2 laipsnių) su maistu ir vandeniu ad libitum. Eksperimentai su gyvūnais buvo pradėti po penkių dienų aklimatizacijos. Pelės nevalgė per naktį su vandeniu ad libitum prieš skiriant tiriamąjį tirpalą į skrandį.

Pelės buvo atsitiktinai suskirstytos į 22 grupes, kiekvienoje grupėje po 10 gyvūnų. Jiems buvo skiriami to paties tūrio eksperimentiniai vaistai du kartus per dieną (ryte ir vakare) keturias dienas taip:

1 grupė: C. deserticola gryninimo tirpalo (20 ml/kg) intragastriniai bendrieji glikozidai (tirpalo tūris / pelės svoris),

II grupė: Intragastrinis distiliuotas vanduo (neigiama kontrolinė grupė) ir

III grupė: intragastrinis dietilstilbestrolis (20 ug/ml) (teigiama kontrolinė grupė).

Penktą dieną visos pelės buvo paaukotos. Gimdos buvo nedelsiant pašalintos ir pasvertos bei apskaičiuoti gimdos koeficientai.

Statistinė analizė

Dviejų dalių porinės imties t testas buvo naudojamas statistiškai reikšmingiems įvairių parametrų skirtumams skirtingose ​​eksperimentinėse grupėse nustatyti. Analizė atlikta naudojant SPSS statistinę programinę įrangą (SPSS for Windows v21.0, SPSS Inc., JAV). Skirtumai buvo laikomi statistiškai reikšmingais esant 95 procentų patikimumo lygiui (p <>

Rezultatai ir DISKUSIJA

Akteozidų ir bendrųjų glikozidų derlių tiesiškumas ir koreliacija

Akteozido derlingumo tiesinės regresijos lygtis buvo y {{0}}x – 14,75 (kur x yra akteozido koncentracija, o y yra atitinkamas smailės plotas) su koreliacijos koeficientu r=1 koncentracijos diapazone 0.12−{{10}},72 mg/mL. Tai rodė linijinę kalibravimo kreivę. Bendros glikozidų išeigos tiesinės regresijos lygtis buvo y=26.074x plius 0,0866 (kur x yra visų glikozidų koncentracija, o y yra atitinkamas smailės plotas), o koreliacijos koeficientas r { {12}}.9982 koncentracijos intervale 0,013–0,065 mg/mL. Tai taip pat parodė linijinę kalibravimo kreivę.

Metodinis tyrimas

Metodologinio tyrimo metu buvo tiriamas mėginių tikslumas, atkuriamumas, stabilumas ir regeneracija. Tikslaus eksperimento metu akteozido ir bendrojo glikozidų santykinis standartinis nuokrypis (RSD) buvo atitinkamai 1,43 proc. ir 0.05 proc. Atkuriamumo eksperimente akteozido ir bendrojo glikozidų RSD buvo atitinkamai 0,10 proc. ir 1,44 proc. Atliekant 24 valandų stabilumo eksperimentą, akteozido ir bendrojo glikozidų RSD buvo atitinkamai 0,14 ir 0,90 procento. Atkūrimo eksperimente akteozido atgauta buvo 100,50 proc., kai RSD buvo 2,08 proc., o bendro glikozidų atgauta buvo 99,12 proc., kai RSD buvo 1,65 proc. Visos RSD reikšmės buvo mažesnės nei 3 proc. Šie rezultatai parodė gerą tikslumą ir atkuriamumą. Be to, mėginys buvo stabilus 24 valandas. Atsigavimo rezultatai taip pat yra leistinose ribose (95–105 proc.). Todėl šis metodas gali būti naudojamas nustatant akteozido ir bendrą glikozidų išeigą po valymo.

Vieno veiksnio TGCD tyrimas

TGCD valymui naudojant makroporinę dervą gali turėti įtakos daugelis veiksnių, tokių kaip dervos tipas, statinės adsorbcijos faktoriai (adsorbcijos laikas, nuotėkio koncentracija ir mėginio tirpalo pH) ir eliuavimo sąlygos (tekėjimo greitis, tūris ir koncentracija). Naudojant adsorbcijos pajėgumą ir TGCD desorbcijos bei eliuavimo greitį kaip indeksus, eksperimentinė būklė buvo nustatyta remiantis vieno faktoriaus eksperimentų rezultatais. Naudojant AB-8 tipo makroporuotą adsorbcinę dervą, nustatytos tokios optimalios sąlygos: 0,5 mg/mL mėginio tirpalo, pH 10, statinės adsorbcijos laikas 8 val., 2 BV distiliuotas vanduo priemaišoms plauti, 20 BV 80 procentų etanolis kaip eliuentas ir tėkmės greitis 0,5 BV/min. Konkretūs rezultatai parodyti 1–7 paveiksluose.

CCD, skirtas optimizuoti TGCD valymo technologiją

Remiantis vieno faktoriaus tyrimo rezultatais, kaip rodikliai buvo pasirinkti trys veiksniai, reikšmingai įtakojantys valymo metodą: mėginio tirpalo pH (x1), eliuento koncentracija (x2) ir eliuento tūris (x3). Pagal CCD principą kiekvienas faktorius turi penkis lygius. Didžiausias ir minimalus šių įvairių veiksnių lygis buvo nustatytas pagal preliminaraus eksperimento rezultatus. Faktorių lygiai pateikti 1 lentelėje, o eksperimentiniai rezultatai – 2 lentelėje.

Bendra glikozidų ir akteozidų išeiga buvo nustatyta siekiant optimizuoti TGCD gryninimo metodą. Pirma, bendras glikozidų ir akteozidų kiekis buvo nustatytas pagal skaitinius pageidautinumo kriterijus (d) tarp {{0}}–1. Tada buvo apskaičiuotas bendras pageidautinumas (OD) [OD=(d1, d2, d3,....,dn)1/n, kur n yra indekso numeris]. SPSS21.{{10}} programinė įranga ir projektavimo ekspertų programinė įranga buvo naudojama daugialypei tiesinei regresijai ir nepriklausomų kintamųjų bei OD pritaikymui dvinariai, o p < 0.05="" buvo="" atsižvelgta="" statistiškai="" reikšmingas="" lygties="" standartas.="" lygtis="" su="" didesne="" r="" reikšme="" (daugkartinės="" koreliacijos="" koeficientas)="" buvo="" pasirinkta="" kaip="" geriausiai="" tinkantis="" modelis.="" daugiamatė="" tiesinė="" lygtis="" pavaizduota="" kaip="" y="–" 1.02="" –="" 0.131x1="" plius="" 0.034x2="" plius="" 0,012x3="" (r="" {{="" 25}}.55,="" p="0.004)." dvejetainė="" lygtis="" yra="" y="–" 21,92173="" –="" 0,74079="" x="" 1="" plius="" 0,62914="" x="" 2="" plius="" 0,041161="" x="" 3="" plius="" 0,014972="" x="" 1="" x="" 2="" plius="" 2,06050*10-4="" x="" 1="" x="" 1="" x="" 2="" plius="" 2,06050="" x="" {56}}.78730="" ×="" 10-3x22="" -="" 2.89446="" ×="" 10-3x32="" (r="0.91," p="0.012)." iš="" aukščiau="" pateiktų="" lygčių="" matyti,="" kad="" daugiamatės="" tiesinės="" regresijos="" lygties="" koreliacijos="" koeficientas="" yra="" mažesnis.="" koreliacija="" tarp="" nepriklausomų="" ir="" priklausomų="" kintamųjų="" yra="" labai="" maža,="" todėl="" buvo="" nuspręsta,="" kad="" tai="" nepalanku="" naudoti="" tiesiniame="">

Tačiau binominės lygties koreliacijos koeficientas buvo aukštas ir dėl to gerai sutapo. Taigi buvo pasirinktas binominis modelis. Remiantis išsamia paviršiaus figūros ir kontūro žemėlapio analize kartu su eksperimentiniais duomenimis (OD vertė artima {{0}}.6), buvo gautas optimalus valymo metodo diapazonas. Iš 8 paveikslo matyti, kad didžiausia OD vertė buvo sukurta, kai mėginio tirpalo (A) pH buvo 9–10, o eliuento koncentracija (B) buvo 79–85 procentų ribose. . 9 paveiksle parodyta, kad didžiausia OD vertė buvo gauta, kai mėginio tirpalo (A) pH vertė buvo 9–10, o eliuento tūris (C) – 20–25 BV. 10 paveiksle parodyta, kad didžiausia OD vertė buvo gauta, kai eliuento koncentracija (B) buvo 80–85 procentų ribose, o eliuento tūris (C) buvo 20–25 BV. Išsamios šių duomenų analizės metu nustatyta, kad mėginio tirpalo pH, eliuento koncentracija ir eliuento tūris yra atitinkamai 9–10, 80–85 procentų ir 20–25 BV. Remiantis daugiamate binomine lygtimi kintamiems išvestiniams rezultatams ir optimalia schema, buvo nustatyta, kad geriausias TGCD gryninimo metodas yra 85 procentų eliuento (etanolio) koncentracija ir 25 BV tūris, kai pH 11. Atitinkama OD vertė buvo 0,8332. , o bendra glikozidų išeiga buvo 73,0339 proc. Vaizdinis įspūdis iš paveikslų 8-10 rodo, kad geriausias metodas yra tas, kai buvo atsižvelgta į dviejų veiksnių sąveiką, nors geriausias metodas, išvestas iš formulės, atpažįsta tą, į kurį įtraukta trijų veiksnių sąveika. Du rezultatai skyrėsi ir buvo manoma, kad optimalus gryninimo metodas yra 85 procentų eliuento (etanolio) koncentracija ir 25 BV tūris, kai pH 11.

Gimdos augimo matavimas

Kiekvienos grupės gimdos koeficientas parodytas 3 lentelėje. Palyginti su neigiama kontroline grupe, kitų grupių rezultatai reikšmingai skyrėsi. Nustatyta, kad TGCD, gautas iš 20 skirtingų gryninimo metodų, veikė estrogeninį poveikį.

Patvirtinantis eksperimentas

Išsamūs CCD ir gimdos augimo testo rezultatai parodė, kad optimaliu valymo metodu laikomas 85 procentų eliuento (etanolio) koncentracija ir 25 BV tūris, kai pH 11.

patvirtinimo proceso metu vidutinė bendro glikozidų išeiga buvo 70,9150 proc. Vidutinis nuokrypis tarp prognozuojamų ir faktinių verčių buvo 2,1180 proc. Todėl galima teigti, kad šio modelio nuspėjamumas ir eksperimentinis patikimumas yra geras.

TGCD identifikavimas po valymo

Remiantis sulaikymo trukme ir MS duomenimis, buvo spėliojama apie 21 natūralią sudedamąją dalį, įskaitant kampneozidą 1, 2′-acetilaktozidą, cistanosidą A, cistanosidą B, siringalidą A 3'- - L-ramnopiranozidą, tubulozidą A, tubulozidą B, salidrosidą, cistanozidas G, tenipozido rūgštis, dekofeoilakteozidas, 8-epilogano rūgštis, echinakozidas, cistanosidas F, cistantubulozidas B1, izoakteozidas, akteozidas, cis-akteozidas, kankanosidas E, osmantuzidas B ir cistanozidas C. MS ir MS sulaikymo laikas/, MS informacija, formulė ir spėjami junginiai pateikti 4 lentelėje.

Q-TOF-MS yra ypač tinkamas sudėtingų vaistų ir maisto molekulinių komponentų struktūriniam identifikavimui, nes jis gali pateikti galimas elementų kompozicijas pagal tikslią molekulinę masę ir fragmentų jonų struktūrines charakteristikas. Sisteminiam struktūriniam apibūdinimui nustatyti taip pat buvo naudojami Q-TOF-MS, MS duomenys, duomenų bazės paieška ir publikuota informacinė literatūra. Kiekvieno tikslinio komponento molekulinė formulė buvo išvesta iš pirminio jono ir buvo suderinta su žinomais junginiais. Šią formulę galima būtų toliau nustatyti iš susijusių fragmentų jonų. Pavyzdžiui, 5 smailėje buvo vyraujantis deprotonuotas jonas, esant m/z 654 (C30H38O16), kuris buvo identiškas kampneozido 1 elementinei sudėčiai. Kafeoilo praradimas susidarė iš fragmento jono, kurio m/z 493, o rha dalis susidarė iš fragmento jono, kurio m/z 347.

Išvada

Naudojant LC-Q-TOF-MS technologiją, buvo sukurtas ir visiškai patvirtintas paprastas ir patikimas kokybinės TGCD analizės metodas. Natūralių junginių iš TGCD patikrinimo ir identifikavimo patvirtinimo duomenys buvo patenkinami. Buvo spėliojama, kad iš TGCD gaunamas 21 biologiškai aktyvus junginys: salidrozidas, cistanozidas G, genipozido rūgštis, dekafeolakteozidas, kampneozidas 1, 8-epilogano rūgštis, 2'-acetillakteozidas, cistanosidas A, cistanidas B, siringalidas A3'{9′ }}L-ramnopiranozidas, echinakozidas, cistanosidas F, cistantubulozidas B1, izoakteozidas, akteozidas, tubulozidas A, cis-akteozidas, kankanosidas E, osmantuzidas B, cistanozidas C ir tubulozidas B. Šių junginių struktūrinis apibūdinimas gali būti eksperimentinis pagrindas. jų kokybės kontrolė ir tolesnis klinikinis pritaikymas dėl estrogeninio aktyvumo. Tai gali pasiūlyti naują ir patobulintą terapinį variantą pomenopauzinio sindromo gydymui, taip išvengiant šalutinio poveikio ir nepageidaujamų estrogenų terapijos reakcijų.

Santrumpos

TGCDCistanche deserticolabendras glikozidų kiekis LC/Q-TOF-MS skysčių chromatografija/kvadrupolio skrydžio laiko masės spektrometrija

RSM atsako paviršiaus metodika

CCD centrinis kompozitinis dizainas

MS masės spektrometrija HPLC/Q-TOF-MS Didelio efektyvumo skysčių chromatografija/kvadrupolio skrydžio laiko masės spektrometrija

ACN acetonitrilas

BV lovos tūris

OD bendras pageidautinas

LC-MS skysčių chromatografija-masių spektrometrija

Q-TOF-MS kvadrupolio skrydžio laiko masės spektrometrija

TCM tradicinė kinų medicina

RSD santykinis standartinis nuokrypis

Padėkos

Šį projektą rėmė Kinijos nacionalinis gamtos mokslų fondas (Nr. 81073015), Heilongdziango provincijos gamtos mokslo fondas (ZD2017014), Heilongdziango provincijos koledžo jaunųjų novatoriškų talentų mokymo planas (UNPYSCT{2}}). Autoriai pareiškia, kad dėl šio straipsnio publikavimo nėra interesų konflikto.

Interesų konfliktas

Autoriai teigia, kad nėra interesų konflikto.

Nuorodos

[1] Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y., Tu PF, feniletanoidiniai glikozidai, turintys priešuždegiminį poveikį iš Cistanche deserticola stiebų, auginamų Tarimo dykumoje, Fitoterapija, 2013, 89, {{4} }.

[2] Guo Y., Cao L., Zhao Q., Zhang L., Chen J., Liu B., Zhao B., Preliminari charakteristika, Cistanche deserticola polisacharido antioksidacinis ir hepatoprotekcinis aktyvumas, International Journal of Biological Macromolecules , 2016, 293, 678-685.

[3] Nan ZD, Zhao MB, Zeng KW, Tian SH, Wang WN, Jiang Y., Tu PF, priešuždegiminiai iridoidai iš Cistanche deserticola stiebų, auginamų Tarimo dykumoje, Kinijos natūralių vaistų žurnalas, 2016, 14, 61-65.

[4] Peng F., Chen J., Wang X., Xu C., Liu T., Xu R., Cistanche deserticola gabalėlių feniletanoidinių glikozidų lygio pokyčiai, antioksidacinis aktyvumas ir kiti kokybės bruožai Cistanche deserticola griežinėliais apdorojant garais, cheminė medžiaga ir Pharmaceutical Bulletin (Tokijas), 2016 m., 64, 1024-1030.

[5] Wang T., Zhang X., Xie W., Cistanche deserticola YC Ma, „Dykumos ženšenis“: apžvalga, The American Journal of Chinese Medicine, 2012, 40, 1123-1141.

[6] Song Y., Song Q., Li J., Zhang N., Zhao Y., Liu X., Jiang Y., Tu P., Integruota strategija kiekybiškai diferencijuoti ramunėlę tarpCistanche deserticolair C. tubulosa, naudojant didelio efektyvumo skysčių chromatografijos ir hibridinės trigubos kvadrupolio tiesinės jonų gaudyklės masės spektrometriją, Journal of Chromatography A, 2016, 1429, 238-247.

[7] Li Y., Peng Y., Wang M., Zhou G., Zhang Y., Li X., Greitas atranka ir metabolitų skirtumų nustatymasCistanche deserticolair C. tubulosa vandens ekstraktas žiurkėms, naudojant UPLC-Q-TOF-MS kombinuotą modelio atpažinimo analizę, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2016, 131, 364-372.

[8] Li WL, Sun XM, Song H., Ding JX, Bai J., Chen Q., HPLC/Q-TOF-MS pagrįstas absorbuotų sudedamųjų dalių ir jų metabolitų identifikavimas žiurkės serume ir šlapime po geriamojo Cistanche vartojimo deserticola ekstraktas, Maisto mokslų žurnalas, 2015, 80, H2079-2087.

[9] Almasi A., Dargahi A., Mohamadi M., Biglari H., Amirian F., Raei M., Penicilino G pašalinimas derinant sonolizę ir fotokatalitinį (sonofotokatalitinį) procesą iš vandeninio tirpalo: proceso optimizavimas naudojant RSM (Response Surface Methodology), Electron Physician, 2016, 8,

[10] 2878-2887. Hou W., Zhang W., Chen G., Luo Y., Ekstrahavimo sąlygų optimizavimas maksimaliam fenolio, flavonoidų ir antioksidaciniam aktyvumui iš Melaleuca želmenų duomenų lapų, naudojant atsako paviršiaus metodiką, PloS One, 2016, 11,

[11] e0162139. Pooralhossini J., Ghaedi M., Zanjanchi MA, Asfaram A., Ekstrahavimo ultragarsu ir spektrofotometrijos pasirinkimas greitam galio rūgšties kiekiui vandens mėginiuose nustatyti: centrinė kompozicinė proceso kintamųjų optimizavimo konstrukcija, Ultrasonics Sonochemistry, 2017, 34 , 692- 699.

[12] Han L., Boakye-Yiadom M., Liu E., Zhang Y., Li W., Song X., Fu F., Gao X., Feniletanoidinių glikozidų struktūros charakteristika ir identifikavimasCistanches deserticola YC MaUHPLC/ESI-QTOF-MS/MS, Phytochemical Analysis, 2012, 23, 668-676.

[13] Lu D., Zhang J., Yang Z., Liu H., Li S., Wu B., Ma Z., Cistanches Herba kiekybinė analizė naudojant aukštos kokybės skysčių chromatografiją kartu su diodų matricos aptikimu ir aukšto lygio skiriamosios gebos masių spektrometrija kartu su chemometriniais metodais. „Journal of Separation Science“, 2013, 36, 1945-1952.

[14] Li WL, Chen Q., Yang B., Gao S., Zhang JJ, fitoestrogeninių veiksmingų ekstraktų ir dozės patikrinimasCistanche deserticola, Kinijos žoliniai vaistai, 2013, 5, 292-296.

[15] Li YP, Huang FR, Dong J., Xiao C., Xian RY, Ma ZG, Zhao J., Greitas Cistanche identifikavimas naudojant fluorescencinio spektro vaizdavimo technologiją kartu su pagrindinių komponentų analize ir Fišerio skyrimu, Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi, 2015, 35, 689-694.