Paruošiamasis keturių junginių iš Cistanches Deserticola YC Ma išskyrimas ir gryninimas didelės spartos priešsrovės chromatografija

Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com

Santrauka:

Po sudedamųjų dalių sodrinimo silikagelio kolonėlėje keturifeniletanoidiniai glikozidaibuvo sėkmingai izoliuoti nuoCistanches deserticolair išgrynintas preparatine didelės spartos priešpriešinės srovės chromatografija (HSCCC) su dviejų fazių tirpiklių sistema, sudaryta iš etilacetato-n-butanolio-etanolio-vandens (40:6:6:50, v/v). /v/v). Iš viso buvo 30,9 mg akteozido, 13,0 mg izoakteozido, 12,5 mg siringalido A 3'- -L-ramnopiranozido ir 7,2 mg 2'-acetillakteozido, kurio grynumas didesnis nei 95 proc., kaip nustatyta HPLC-ELSD. gautas atskyrus vienu žingsniu nuo 297 mgCistanche deserticola ekstraktas, atitinkamai. Jų struktūros buvo identifikuotos pagal HR-MS, 1H-BMR ir 13C-BMR.

Raktiniai žodžiai: didelės spartos priešsrovės chromatografija;Cistanches deserticola YC Ma;feniletanoidiniai glikozidai; akteozidas; izoakteozidas; siringalidas A 3'- -L-ramnopiranozidas; 2'-acetilaktozidas.

Įvadas

Cistanches deserticolaYC Ma, rūšisCistancheskuri priklauso Orobanchacea šeimai, yra gerai žinoma tradicinė kinų medicina, skirta gydyti inkstų nepakankamumą, moterų nevaisingumą, liguistą leukorėją, neurapraksiją ir senatvinį vidurių užkietėjimą [1]. Tai parazitinis augalas, plačiai paplitęs šiaurės vakarų Kinijoje. Iki šiol iš šios rūšies buvo išskirti keli junginiai, įskaitant feniletanoidinius glikozidus (PhG), iridoidus ir lignanus [2]. Buvo pranešta, kad kai kurie PhG turi antioksidacinį, hepatoprotekcinį ir neuroprotekcinį poveikį [3–6]. Tačiau PhG išskyrimo ir gryninimo procedūra yra sudėtinga ir daug laiko reikalaujanti. Be to, taikant klasikinius daugkartinės chromatografijos metodus naudojamas ne tik daug organinių tirpiklių, bet ir gaunamas mažesnis mėginio išgaunamas kiekis. Didelės spartos priešpriešinės srovės chromatografija (HSCCC), be atramos skysčių ir skysčių pasiskirstymo chromatografijos technika, siūlo puikų mėginio atgavimą, palyginti su kai kuriais įprastiniais metodais, ir buvo plačiai naudojama įvairių natūralių produktų atskyrimui ir gryninimui [7–9] . Nors keletas PhG buvo išgryninti nuoCistanchesgenus ir kt., HSCCC [10–14], jokiame dokumente nebuvo pranešta apie akteozido, izoakteozido, siringalido A 3'- -L-ramnopiranozido ir 2'-acetilakteozido gryninimą vienoje dvifazėje sistemoje.

Šiame darbe pateikiame paprastą keturių PhG iš C. deserticola atskyrimo ir gryninimo metodą. Galiausiai per vieną veiksmą buvo gauta 30,9 mg akteozido, 13,0 mg izoakteozido, 12,5 mg siringalido A 3'- -L-ramnopiranozido ir 7,2 mg 2'-acetillakteozido. atskyrimas nuo 297 mg frakcijos, kurios grynumas yra atitinkamai 99 proc., 95 proc., 99 proc. ir 98 proc. Jų struktūros apibūdintos remiantis 1H ir 13C-BMR spektriniais duomenimis ir HR-MS spektrais. Šiame tyrime nustatytų keturių PhG struktūros parodytos 1 paveiksle.

Rezultatai ir DISKUSIJA

Neapdoroto ekstrakto HPLC analizė

n-butano ekstrakto iš C. deserticola sudedamųjų dalių praturtinta frakcija buvo ištirta HPLC-UV. Naudota kolonėlė buvo Accurasil C18 (250 mm × 4,6 mm, id 5 μm) (Thermo-Fisher Scientific Instruments, miestas, valstijos santrumpa, JAV), mobilioji fazė buvo metanolis-vanduo (30:70, v/v). Srauto greitis buvo 1 ml/min. Detektoriaus bangos ilgis buvo nustatytas 254 nm. HPLC chromatograma parodyta 2 paveiksle. 1–4 smailės atitinka akteozidą (1), izoakteozidą (2), siringalido A 3'- -L-ramnopiranozidą (3) ir 2'-acetillakteozidą (4), atitinkamai.

Dviejų fazių tirpiklių sistemos pasirinkimas

Sėkmingas HSCCC atskyrimas daugiausia priklauso nuo tinkamos dvifazės tirpiklių sistemos parinkimo, dvifazių tirpiklių sistema buvo parinkta pagal kiekvieno tikslinio komponento pasiskirstymo koeficiento reikšmes (K), o optimalus K diapazonas turėtų būti nuo {{ 2}}.5–2.

Eksperimento metu kelių dvifazių tirpiklių sistemų tikslinių komponentų K vertės parodytos 1 lentelėje (nors ir šiek tiek didesnės 4 smailės atveju, rezultatai buvo priimtini). Tarp jų etilo acetatas-n-butanolis-etanolis-vanduo (40:6:6:50, v/v/v/v) davė tinkamus tikslinių junginių pasiskirstymo koeficientus. Galiausiai tirpiklių sistema, sudaryta iš etilo acetato – n-butanolio – etanolio ir vandens (40:6:6:50, v/v/v/v), buvo panaudota keturiems C. deserticola junginiams išskirti ir išvalyti, kaip parodyta 3 pav. Kaip parodyta 2 paveiksle, kiekvienos HSCCC frakcijos HPLC analizė parodė, kad keturi gryni PhG (akteozidas, 99 procentai; izoakteozidas, 95 procentai; siringalidas A 3′- -L-ramnopiranozidas 99 procentai ir 2′- 98 proc. acetillakteozido) galima gauti iš neapdorotos frakcijos.

Eksperimentinis

Aparatai

Šiame tyrime naudota HSCCC įranga buvo TBE{0}}B didelės spartos priešsrovės chromatografijos sistema (Shanghai Tauto Biotech Co., Šanchajus, Kinija) su trimis paruošiamomis daugiasluoksnėmis ritės atskyrimo kolonėlėmis, sujungtomis nuosekliai (vamzdžio skersmuo).=2,6 mm, bendras tūris=300 ml) ir 20 ml mėginio kilpa. Apsisukimo spindulys arba atstumas tarp laikiklio ašies ir centrinėscentrifugos ašis (centrifugos ašis (R) buvo 5 cm, o vertė svyravo nuo 0,5 vidiniame gnybte iki 0,8 išoriniame gnybte (= r/R, kur r yra atstumas nuo ritės iki laikiklio veleno). Eksperimento temperatūrai kontroliuoti buvo naudojamas HX 105 pastovios temperatūros cirkuliacinis įrenginys (Beijing Changliu Lab Instrument Company, Pekinas, Kinija). HSCCC sistemoje buvo sumontuotas modelio TBP-5002 vidutinio slėgio pastovaus srauto siurblys, modelio TBP-2000 UV detektorius, veikiantis esant 254 nm, ir V4.0 modelio darbo stotis (Jinda Biochemistry Instrument Company, Šanchajus, Kinija).

Naudota didelio efektyvumo skysčių chromatografijos (HPLC) įranga buvo Agilent 1200 sistema, kurią sudaro G1312A dvejetainis siurblys, G1329A automatinis mėginių ėmiklis, G1314A kintamo bangos ilgio detektorius (VWD), G1316A termostatuotas kolonėlės skyrius, Agislent LC799, Agislent LC. darbo vieta. Grynumui nustatyti buvo naudojamas Alltech 3300 ELSD. Junginių struktūrai identifikuoti buvo naudojami Agilent 6520 Q-TOF ir Bruker AVANCE III 500-BMR spektrometrai. 1H ir 13C-BMR spektrai (atitinkamai 500 ir 125 MHz) buvo matuojami kambario temperatūroje (22 laipsniai /295,1 K).

Reagentai ir medžiagos

Etilo acetatas, n-butanolis ir etanolis buvo analitinės klasės, o metanolis - HPLC. Visi tirpikliai buvo įsigyti iš Tianjin Concord Technology Company (Tianjinas, Kinija). Visiems tirpalams ir skiedimams buvo naudojamas Milli-Q vanduo (18,2 MΩ) (Millipore, Bedford, MA, JAV). C. deserticola šakniastiebiai buvo surinkti iš Vidinės Mongolijos provincijos, Kinijos Liaudies Respublikoje, 2009 m. birželio mėn. Augalą identifikavo prof. Lijuan Zhang, o kupono pavyzdys (Nr. 20091001) buvo deponuotas mūsų laboratorijoje.

Neapdoroto mėginio paruošimas

Miltelių pavidalo ore išdžiovinti mėsingi C. deserticola stiebai (1 kg) buvo du kartus virinami su grįžtamu šaldytuvu vandeniniu etanoliu (8 l, 60 proc. tūrio) kiekvieną kartą po 2 valandas. Ekstraktas išgarinamas sumažintame slėgyje ir 60 laipsnių temperatūroje, kol visiškai išgaruoja etanolis. Likutis buvo suspenduotas vandenyje ir tris kartus iš eilės ekstrahuojamas chloroformu, etilo acetatu ir n-butanoliu. Gaunama 5,16 g n-butano ekstrakto, išgarinant iki sausumo sumažintame slėgyje. Tada n-butano ekstraktas buvo atskirtas silikagelio kolonėlėje (200–300 akių), naudojant laipsnišką gradiento eliuavimą (CHCl3–MeOH, 10:1 → 1:1), kad gautų aštuonias frakcijas. 6 frakcija (297 mg) buvo naudojama tolesniam HSCCC išskyrimui ir atskyrimui.

Dviejų fazių tirpiklių sistemų pasirinkimas

Dviejų fazių tirpiklių sistemos parinktos pagal tikslinių komponentų pasiskirstymo koeficientą (K) C. deserticola frakcijoje. K reikšmės buvo nustatytos LC analize taip: Tinkamas kiekis neapdorotų ekstrakto miltelių (6 frakcija) buvo ištirpintas apatinėje tirpiklių sistemos fazėje ir analizuojamas HPLC. Smailių plotai buvo užregistruoti kaip A1. Tada į tirpalą įpilama vienodo tūrio viršutinės fazės ir gerai išmaišoma, kad būtų pasiekta pasiskirstymo pusiausvyra. Tada apatinė fazė vėl buvo analizuojama HPLC. Pastarosios smailės plotai buvo užfiksuoti kaip A2. K reikšmės buvo apskaičiuotos pagal šią lygtį: K=(A1 − A2)/A2 [15,16].

Dviejų fazių tirpiklių sistemos ir mėginio tirpalo paruošimas

Šiame tyrime HSCCC atskyrimui buvo naudojama dviejų fazių tirpiklių sistema, sudaryta iš etilo acetato-n-butanolio-etanolio-vandens (40:6:6:50, v/v/v/v). Kiekvienas tirpiklis buvo pridėtas į dalijamąjį piltuvą ir kruopščiai subalansuotas kambario temperatūroje. Viršutinė ir apatinė fazės buvo atskirtos ir degazuotos ultragarsu 30 minučių prieš pat naudojimą. Mėginio tirpalas buvo paruoštas ištirpinant 297 mg 6 frakcijos 15 ml apatinės etilacetato – n-butanolio – etanolio – vandens fazės (40:6:6:50, v/v/v/v).

HSCCC atskyrimo procedūra

HSCCC buvo atlikta taip. Daugiasluoksnė suvyniota kolonėlė pirmiausia buvo užpildyta viršutine organine stacionaria faze. Tada apatinė vandeninė judri fazė buvo pumpuojama į kolonėlės galą 1, 5 ml / min srauto greičiu ir tuo pačiu metu HSCCC aparatas buvo paleistas 900 aps./min. greičiu. Nustačius hidrodinaminę pusiausvyrą, kaip rodo skaidri judanti fazė, eliuuojanti prie uodegos išleidimo angos (maždaug po dviejų valandų), per įpurškimo vožtuvą buvo sušvirkštas 15 ml mėginio tirpalo, kuriame yra 297 mg neapdoroto ekstrakto (6 frakcija). Kolonėlės nuotekos buvo nuolat stebimos esant 254 nm. Keturios smailės frakcijos buvo surinktos pagal chromatogramą ir išgarintos sumažintame slėgyje. Aparato temperatūra buvo nustatyta 25 laipsnių.

HPLC analizė ir HSCCC smailių frakcijų identifikavimas

Didžiausios HSCCC frakcijos buvo analizuojamos HPLC-ELSD. Naudota kolonėlė buvo Accurasil C18 (250 mm × 4,6 mm, id 5 μm), mobilioji fazė buvo metanolis-vanduo (30:70, v/v). Srauto greitis buvo 1 ml/min. ELSD buvo eksploatuojamas tokiomis sąlygomis: Temp 45 laipsniai, dujos 1,6 l/min. Keturių HSCCC smailių frakcijų struktūrinis identifikavimas buvo atliktas HR-ESI-MS, 1H ir 13C-BMR spektroskopija.

Struktūrinis identifikavimas

I frakcija: HR-ESI-MS, pastebėta esant m/z 623,2001 (M-H)-, apskaičiuota C29H35O15, 623,1981. 1H-BMR (500 MHz, CD3OD) 8 ppm: 1,09 (3H, d, J=6 Hz, ramnozės CH3), 2,79 (2H, t, J=7,5 Hz, Ar-CH 2-), 4,37 (1H, d, J=8 Hz, H-1 gliukozės), 5,18 (1H, d, J=1 Hz, H{{34} ramnozės }), 6,27 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 7,59 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar) -CH=CH-), 6,5-7,1 (6H, aromatinis H).13C-BMR (125 MHz, CD3OD) 8 ppm: 131,5 (C{62}}), 117,2 (C{65}). }), 146,2 (C-3), 144,7 (C-4), 116,4 (C-5), 121,3 (C-6), 72,4 (C-), 36,6 (C- ), 127,7 (Caf-1), 115,3 (Caf-2), 146,9 (Caf-3), 149,8 (Caf-4), 116,6 (Caf{{ 98}}), 123,2 (Caf-6), 168,3 (Caf- ), 114,8 (Caf- ), 148,1 (Caf- ), 104,3 (G-1), 76,1 (Glc{116} }), 81,7 (Glc-3), 70,5 (Glc-4), 76,3 (Glc-5), 62,4 (Glc-6), 103,1 (Rha{131} }), 72,3 (Rha-2), 72,1 (Rha-3), 73,9 (Rha-4), 70,7 (Rha-5), 18,5 (Rha{{146} }). Palyginti su literatūroje [17] pateiktais duomenimis, frakcija I atitiko akteozidą.

II frakcija: HR-ESI-MS, pastebėta esant m/z 623,1987 (M-H)-, apskaičiuota C29H35O15, 623,1981. 1H-BMR (5{54}} MHz, CD3OD) 8 ppm: 1,25 (3H, d, J=6,5 Hz, ramnozės CH3), 2,78 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4,33 (1H, d, J=8 Hz, H-1 gliukozės), 5,17 (1H, d, J {{ 33}} Hz, ramnozės H-1), 6,28 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 7,56 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 6,5–7,0 (6H, aromatinis H). 13C-BMR (125 MHz, CD3OD) 8 ppm: 131,5 (C{62}}), 117,2 (C{65}}), 146,2 (C{68}}), 144,7 (C{71}}). ), 116,5 (C-5), 121,3 (C-6), 72,4 (C- ), 36,7 (C- ), 127,8 (Caf-1), 115,2 (Caf{{89) }}), 146,8 (Caf-3), 149,7 (Caf-4), 116,6 (Caf-5), 123,2 (Caf-6), 169,2 (Caf- ), 115,0 (Caf- ), 147,3 (Caf- ), 104,5 (G-1), 75,5 (Glc-2), 84,2 (Glc-3), 70,1 (Glc-4 ), 75,7 (Glc-5), 64,7 (Glc-6), 102,8 (Rha-1), 72,4 (Rha-2), 72,4 (Rha-3 ), 74,1 (Rha-4), 70,5 (Rha-5), 17,9 (Rha-6). 1H-BMR ir 13C-BMR spektriniai duomenys sutapo su izoakteozido duomenimis, kaip aprašyta literatūroje [18].

III frakcija: HR-ESI-MS, pastebėtas esant m/z 6{{108}}7,2032 (M−H)−, apskaičiuota C29H35O14, 607,2032. 1H-BMR (500 MHz, CD3OD) 8 ppm: 1,09 (3H, d, J=6 Hz, ramnozės CH3), 2,84 (2H, t, J=7,5 Hz, Ar-CH 2-), 4,37 (1H, d, J=8 Hz, H-1 gliukozės), 5,19 (1H, d, J=1,5 Hz, H{{ ramnozės 35}}), 6,27 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 7,59 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH) =CH-), 6,6–7,1 (7H, aromatinis H). 13C-BMR (125 MHz, CD3OD) 8 ppm: 130,8 (C{61}}), 116,2 (C{64}}), 130,9 (C{67}}), 156,8 (C{70}} ), 130,8 (C-5), 116,2 (C-6), 72,4 (C- ), 36,4 (C- ), 127,8 (Caf-1), 114,8 (Caf{{88) }}), 149,8 (Caf-3), 146,9 (Caf-4), 116,6 (Caf-5), 123,2 (Caf-6), 168,3 (Caf- ), 115,4 (Caf- ), 148,0 (Caf- ), 104,3 (G-1), 76,3 (Glc-2), 81,7 (Glc-3), 70,4 (Glc-4 ), 76,1 (Glc-5), 62,5 (Glc-6), 103,0 (Rha-1), 72,3 (Rha-2), 72,2 (Rha-3 ), 73,9 (Rha-4), 70,7 (Rha-5), 18,4 (Rha-6). Remiantis literatūra [18], III frakcija atitiko siringalido A 3'- -L-ramnopiranozidą.

IV frakcija: HR-ESI-MS, pastebėta esant m/z 665,21{{20}} (M−H)−, apskaičiuota C31H37O16, 665,2087. 1H-BMR (500 MHz, CD3OD) 8 ppm: 1,09 (3H, d, J=6,5 Hz, ramnozės CH3), 2,00 (3H, s, OAc), 2,72 (2H, t, J { {25}},5 Hz, Ar-CH2-), 4,55 (1H, d, J=8 Hz, H-1 gliukozės), 4,90 (1H, d, J { {37}} Hz, ramnozės H-1), 6,29 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 7,62 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 6,5–7,0 (6H, aromatinis H). 13C-BMR (125 MHz, CD3OD) 8 ppm: 131,9 (C{66}}), 117,3 (C{69}}), 146,1 (C{72}}), 144,7 (C{75}}). ), 116,4 (C-5), 121,4 (C-6), 72,7 (C- ), 36,4 (C- ), 127,7 (Caf-1), 115,4 (Caf{{93) }}), 146,9 (Caf-3), 149,9 (Caf-4), 116,6 (Caf-5), 123,2 (Caf-6), 168,1 (Caf- ), 114,7 (Caf- ), 148,2 (Caf- ), 101,8 (G-1), 75,3 (Glc-2), 80,3 (Glc-3), 70,8 (Glc-4 ), 76,2 (Glc-5), 62,3 (Glc-6), 103,3 (Rha-1), 72,0 (Rha-2), 71,8 (Rha-3 ), 73,7 (Rha-4), 70,8 (Rha-5), 18,5 (Rha-6), 171,5 (C=O), 20,9 (OAC). 1H-BMR ir 13C-BMR spektriniai duomenys sutapo su 2'-acetilaktozido [17].

Išvados

HSCCC metodas, skirtas preparatiniam akteozido, izoakteozido, siringalido A 3'- -L-ramnopiranozido ir 2'-acetillakteozido atskyrimui ir gryninimui išCistanches deserticola YC Mabuvo įkurtas. Šis tyrimas rodo, kad HSCCC yra labai galingas bioaktyvių komponentų paruošiamojo atskyrimo ir gryninimo iš augalinių medžiagų metodas. Be to, junginiai gali būti išskirti pakankamai dideliu mastu su dideliu grynumu ir gali būti naudojami kaip etaloninės medžiagos chromatografijos arba biologinio aktyvumo tyrimams. Metodas yra tinkamas, ekonomiškas ir efektyvus sudėtingų natūralių produktų greito paruošimo išskyrimo būdas.

Padėkos

Šis darbas buvo paremtas Čangdziango mokslininkų ir naujoviškų universiteto mokslinių tyrimų grupės programa (PCSIRT), Kinijos mokslo ir technologijų ministerijos tarptautinio bendradarbiavimo plano projektas (2008DFB30070) ir Alašano kairiojo vėliavos mokslinė programa ({{2). }}).

Nuorodos

1. Kinijos farmakopėjos komisija. Kinijos Liaudies Respublikos farmakopėja; Liaudies medicinos leidykla: Pekinas, Kinija, 2010 m.; 1 tomas, p. 126.

2. Jiang, Y.; Tu, PF Cistanche rūšių cheminių sudedamųjų dalių analizė. J. Chromatogr. 2009, 1216, 1970–1979.

3. Morikawa, T.; Pan, Y.; Ninomiya, K.; Imura, K.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M.; Yuan, D.; Muraoka, O. Acilinti feniletanoidiniai aminoglikozidai, turintys hepatoprotekcinį aktyvumą iš dykumos augalo Cistanche tubulosa. Bioorg. Med. Chem. 2010, 18, 1882–1890.

4. Chen, H.; Jing, FC; Li, CL; Tu, PF; Zhang, QS; Wang, ZH Echinakozidas neleidžia sumažėti monoamino neurotransmiterių tarpląsteliniam striataliniam kiekiui 6-hidroksidopamino pažeidimo žiurkėms. J. Ethnopharmacol. 2007, 114, 285–289.

5. Muraoka, O.; Ninomiya, K.; Morikawa, T.; Wakayama, H.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Hepatoprotective sudedamosios dalys iš Cistanche tubulosa stiebų. Yakugaku Zasshi 2007, 127, 49–51.

6. Koo, KA; Sung, SH; Parkas, OH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC In vitro neuroprotekcinė feniletanoidinių glikozidų veikla iš Callicarpa dichotomos. Planta Med. 2005, 71, 778–780.

7. Li, M.; Liu, RM; Saulė, AL; Wu, SJ; Liu, NN Rutino ir akacino atskyrimas ir išgryninimas iš kinų vaistinių augalų Herba Cirsii derinant makroporinę adsorbcinę dervą ir didelės spartos priešsrovės chromatografiją. J. Chromatogr. Sci. 2009, 47, 329–332.

8. Yin, H.; Zhang, S.; Luo, XM; Liu, YH. Paruošiamasis dviejų benzoksazinoidų gliukozidų iš Acanthus ilicifolius L. išskyrimas ir gryninimas didelės spartos priešpriešinės srovės chromatografija. J. Chromatogr. 2008, 1205, 177–181.

9. Pengas, AH; Li, R.; Hu, J.; Chen, LJ; Zhao, X; Luo, HD; Taip, HY; Yuan, Y.; Wei, YQ Srauto greičio gradiento didelės spartos priešsrovės chromatografija penkių diterpenoidų atskyrimas nuo Triperygium wilfordii ir mastelio padidinimas. J. Chromatogr. 2008, 1200, 129–135.

10. Xie, J.; Dengas, J.; Tanas, F.; Su, J. Echinakozido atskyrimas ir gryninimas iš Penstemon barbatus (Can.) Roth perdirbant didelės spartos priešsrovės chromatografiją. J. Chromatogr. B2010, 878, 2665–2668.

11. Li, L.; Tsao, R.; Yang, R.; Liu, C.; Youngas, JC; Zhu, H. Feniletanoidinių glikozidų išskyrimas ir gryninimas išCistanche deserticoladidelės spartos priešsrovinės chromatografijos būdu. Food Chem. 2008, 108, 702–710.

12. Li, L.; Tsao, R.; Liu, ZQ; Liu, SY; Yang, R.; Youngas, JC; Zhu, HH; Dengas, ZY; Xie, MY; Fu, ZH Akteozido ir izoakteozido išskyrimas ir gryninimas iš Plantago psyllium L. didelės spartos priešsrovės chromatografija. J. Chromatogr. 2005, 1063, 161–169. Molekulės, 2012 m., 17 8284

13. Lei, L.; Yang, FQ; Zhang, Ty; Tu, PF; Wu, LJ; Ito, Y. Paruošiamasis akteozido ir 2'-acetilo akteozido išskyrimas ir gryninimas iš Cistanches salsa (CA Mey.) G. Beck naudojant didelės spartos priešsrovės chromatografiją. J. Chromatogr. 2001, 912, 181–185.

14. Lei, L.; Yang, FQ; Zhang, Ty; Tu, PF; Wu, LJ; Chen, FK; Ito, Y. Paruošiamasis feniletanoidinių glikozidų išskyrimas ir gryninimas iš biglių šunų išmatų ekstrakto didelės spartos priešsrovinės chromatografijos būdu. J. Liq. Chromatogr. Relat. Techn. 2001, 24, 2187–2195.

15. Gao, SY; Fengas, B.; Zhu, RN; Ma, JK; Wang, W. Trijų antrachinonų paruošiamasis išskyrimas iš Rumex japonicus naudojant didelės spartos priešsrovės chromatografiją. Molekulės 2011, 16, 1201–1210.

16. Jis, F.; Bai, YH; Wang, J.; Wei, J.; Yu, CY; Li, S.; Yang, WL; Han, CH Oridonino išskyrimas ir gryninimas iš viso Isodon rubescens augalo didelės spartos priešsrovės chromatografija. Molekulės 2011, 16, 7949–7957.

17. Kobayashi, H.; Ogučis, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Ueno, A.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. Nauji feniletanoidiniai glikozidai iš cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. f. I. Chem. Pharm. Bull. 1987, 35, 3309–3314.

18. Yoshizawa, F.; Deyama, T.; Takizawa, N.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. Cistanche tubulosa (Schrenk) Hook sudedamosios dalys. f. II. Naujo feniletanoido glikozido ir naujo neolignano glikozido išskyrimas ir struktūros. Chem. Pharm. Bull. 1990, 38, 1927–1930.