Kvercetinas kaip nefroprotektorius po šiltos išemijos: histomorfometrinis graužikų modelio įvertinimas

Gabriela F. Perka Gonçalves¹, Maria Eduarda M. Silva², Francisco JB Sampaio¹, Marco A. Pereira-Sampaio^{1, 3}, Diogo Benchimol de Souza¹

SANTRAUKA

Paskirtis:Kiekybiškai įvertinti galimą ilgalaikį apsauginį kvercetino poveikį inkstų šiltos išemijos metu.

Medžiagos ir metodai:Žiurkių patinai buvo suskirstyti į 4 grupes: fiktyvus (S), fiktyvus kvercetinas (SQ), išemija (I) ir išeminis kvercetinas (IQ). SQ ir IQ grupės gavo kvercetino (50 mg/kg) prieš ir po operacijos. I ir IQ grupių kairiosios inkstų kraujagyslės buvo užspaustos 60 minučių. Visi gyvūnai buvo numarinti praėjus keturioms savaitėms po procedūros, išmatuotas karbamido ir kreatinino kiekis serume. Inksto svoris ir tūris, žievės ir ne žievės ploto santykis (C-NC), žievės tūris (CV), glomerulų tūrinis tankis (Vv[glom]), tūrinis glomerulų tūris (VWGV) ir glomerulų skaičiusinkstas(N[glom]) buvo įvertinti stereologiniais metodais. Rezultatai buvo laikomi statistiškai reikšmingais, kai p<>

Rezultatai:Karbamido kiekis serume I grupėje padidėjo 10,4 proc., palyginti su S grupe, tačiau skirtumų tarp kitų grupių nepastebėta. I grupės C-NC buvo mažesnis nei visų kitų grupių, o grupės IQ rezultatai buvo panašūs į fiktyvių grupių rezultatus. I grupės Vv[glom] ir N[glom] buvo mažesni nei S grupės (atitinkamai 33,7 proc. ir 28,3 proc.), o grupės IQ reikšmingai nesiskyrė nuo S grupės.

Išvados:Kvercetinas buvo veiksmingas kaip nefroprotekcinis agentas, užkertantis kelią glomerulų praradimui, pastebėtam, kaiinkstaspatyrė šiltą išemiją. Tai rodo, kad šis flavonoidas gali būti naudojamas profilaktiškaiinkstasoperacija, kai būtina šilta išemija, pvz., dalinė nefrektomija.

Kontaktas:joanna.jia@wecistanche.com

cistanche vyrų privalumai

ĮVADAS

Dalinė nefrektomija buvo laikoma auksiniu standartiniu lokalizuotų mažų inkstų masės gydymo metodu (1, 2) ir vis dažniau atliekama dėl diagnostikos metodų raidos (3). Nepaisant nuolatinių tyrimų ir naujų chirurginių metodų, įskaitant šalčio išemiją ir nulinę išemiją (4, 5), kūrimo ir tobulinimo, inkstų šiltoji išemija vis dar dažniausiai naudojama norint gauti be kraujo operatyvinį lauką dalinės nefrektomijos metu (6).

Priešingai, inkstų išemija nefronus tausojančios operacijos metu yra susijusi su pooperaciniu glomerulų praradimu ir likusios parenchimos funkciniu nuosmukiu (7, 8), o tai gali sukelti inkstų nepakankamumą. Todėl vaistai, kurie gali turėti apsauginį poveikįinkstaspriešoperaciniu, pooperaciniu ir pooperaciniu laikotarpiu yra pateisinami (9, 10).

Kvercetinas parodė teigiamus rezultatus skirtingomis eksperimentinėmis sąlygomis, daugiausia dėl jo antioksidacinių ir priešuždegiminių savybių (11-14). Šis flavonoidas taip pat buvo daug žadantis, kai jis susijęs su šilta išemija įvairiuose organuose ir audiniuose (15-17), o konkrečiauinkstas(18-20). Tačiau, mūsų žiniomis, kvercetinas dar nebuvo ištirtas siekiant užkirsti kelią glomerulų praradimui po šiltos išemijos.

Šio tyrimo hipotezė yra ta, kad kvercetinas gali pagerinti inkstų pažeidimą, kurį sukelia išemija-reperfuzija. Tikslas yra kiekybiškai įvertinti galimą ilgalaikį apsauginį kvercetino poveikį inkstų šiltos išemijos metu graužikų modelyje.

MEDŽIAGOS IR METODAI

Visi eksperimentai buvo atlikti pagal nacionalinius ir tarptautinius gyvūnų naudojimo mokslinius įstatymus, o šį projektą oficialiai patvirtino Institucinis eksperimentų su gyvūnais etikos komitetas (CEUA 040/2017).

Buvo panaudota keturiasdešimt 9 savaičių amžiaus Wistar žiurkių patinų. Gyvūnai buvo atsitiktinai suskirstyti į 4 grupes: Apgaulė (S) – grupė, kuriai atlikta laparotomija ir inksto pedikulo išpjaustymas (n=10); „Sham Quercetin“ (SQ) – grupė, gydoma kvercetinu ir kuriai taikomos tos pačios procedūros kaip ir grupė „Sham“ (n=10); Išemija (I) – grupė, patyrusi inkstų šiltą išemiją (n=10); Išemija Kvercetinas (IQ) – grupė, gydoma kvercetinu ir patyrė inkstų šiltą išemiją (n=10). SQ ir IQ grupės gavo 50 mg/kg kvercetino (Quercetin, New Roots Herbal, Vaudreuil{11}}Dorion, Kanada) zondu 3 dienas prieš operaciją ir 3 dienas po jos ir vieną kartą į pilvaplėvės ertmę 60 minučių prieš chirurginę procedūrą, kai nebuvo gydoma. grupės (S ir I) gavo fiziologinį tirpalą (vietoj kvercetino), naudodamos tuos pačius protokolus.

Visos žiurkės buvo anestezuotos intramuskuliniu ketaminu (Cetamin, Syntec, Santana de Parnaíba, Brazilija, 100 mg/kg) ir ksilazinu (Xilazin, Syntec, 20 mg/kg). Taikant aseptinę techniką, pilvo vidurinės linijos pjūvis buvo naudojamas pilvo vidaus organams atskleisti, kuris buvo perkeltas, kad būtų atskleistas kairysisinkstas. Kairioji inkstų arterija ir vena buvo išskirtos buku išpjaustymu. I ir IQ grupių gyvūnams inkstų kraujagyslės buvo užspaustos 60 minučių, o S ir SQ grupėse pedikulas buvo išpjaustytas, tačiau išemija nesukelta. Visos grupės buvo anestezuotos 60 minučių, per kurias pilvo vidaus organai buvo pakeisti į pilvą, o pjūvis uždengtas sudrėkinta marle. Pasibaigus šiam laikotarpiui, buvo pašalinti kraujagyslių spaustukai ir stebima reperfuzija (I ir IQ grupėse), o pilvo ertmė buvo uždaryta standartiniu būdu.

Kairėinkstusbuvo surinkti ir fiksuoti 4 procentų fosfatiniu buferiu formaldehidu. Inkstai buvo pasverti, o inkstų tūris matuojamas Scherle metodu (21). Žievės ir ne žievės ploto santykis (C-NC) buvo apskaičiuotas naudojant Cavalieri metodą (22-24). Žievės tūris (CV) buvo apskaičiuotas inkstų tūrį padauginus iš C-NC (24).

Gyvūnai buvo užmigdyti praėjus 4 savaitėms po operacijos dėl anestetikų perdozavimo (Isoflurane, BioChimico, Rio de Žaneiras, Brazilija). Iš karto po mirties širdies punkcija buvo paimtas kraujo mėginys. Šis mėginys buvo naudojamas karbamido ir kreatinino koncentracijai serume tirti automatiniu fermentiniu metodu. Kairėinkstusbuvo surinkti ir fiksuoti 4 procentų fosfatiniu buferiu formaldehidu. Theinkstusbuvo pasverti, o inkstų tūris matuojamas Scherle metodu (21). Žievės ir ne žievės ploto santykis (C-NC) buvo apskaičiuotas Cavalieri metodu (22-24). Žievės tūris (CV) buvo apskaičiuotas inkstų tūrį padauginus iš C-NC (24).

Atsitiktinai paimti mėginiai iš visų kairiųjųinkstusbuvo apdoroti parafino įterpimui, supjaustyti 5 µm storiu ir nudažyti hematoksilinu ir eozinu. Histologinė analizė buvo atlikta aklai, naudojant 25 histologinius laukus, gautus iš penkių skirtingų inkstų žievės skyrių iš kiekvieno inksto. Glomerulų tūrinis tankis (Vv[glom]), kuris rodo proporcingą glomerulų užimamą tūrį žievėje, buvo įvertintas taškų skaičiavimo metodu (22-24). Pagal tūrį svertinis glomerulų tūris (VWGV) buvo įvertintas naudojant taškinių imčių pertraukų metodą (22-24). Bendras glomerulų skaičius viename inkste (N[glom]) buvo apskaičiuotas pagal formulę: CVxVv[glom]/ VWGV (24).

Rezultatai buvo lyginami naudojant vienpusį ANOVA su Bonferroni posthoc testu. Analizė buvo atlikta naudojant GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software, San Diego, JAV). Visi rezultatai buvo laikomi reikšmingais, kai p<0.05. all="" numerical="" data="" were="" presented="" as="" mean±standard="">

Be to, patyręs veterinarijos gydytojas (nežinantis apie gydymo sąlygas) ištyrė visus histologinius pjūvius ir aprašė histopatologinius pokyčius. Tada buvo pranešta apie pastebėtus pokyčius kiekvienai grupei.

cistanche kultūrizmas

REZULTATAI

Karbamido kiekis serume I grupėje buvo 10,4 proc. didesnis nei S grupėje. Šlapalo koncentracijos serume skirtumo tarp IQ grupės ir kitų grupių nepastebėta. Be to, serumo kreatinino analizės skirtumo tarp visų grupių nepastebėta.

I grupės C-NC sumažėjo 9,3 proc., palyginti su S grupe. Gydymas kvercetinu IQ grupėje atkūrė normalias šio parametro vertes. IQ grupės C-NC buvo 5,9 procento didesnis nei I grupės ir turėjo panašias reikšmes kaip S ir SQ grupės.

I grupės Vv[glom] buvo 32,7 proc. mažesnis nei S grupės ir 34,2 proc. mažesnis, palyginti su SQ grupe. Tuo tarpu grupės IQ padidėjo 33,7 proc., palyginti su I grupe, ir sumažėjo 12.{7}} proc., palyginti su SQ. Gyvūnų, kuriems buvo inkstų išemija (grupė IQ), gydymas kvercetinu apsaugojo nuo Vv[glom] sumažėjimo, pastebėto negydytiems gyvūnams.

Išemijainkstus(I grupė) sumažino N[glom], palyginti su S ir SQ grupėmis (atitinkamai 26.{1}} proc. ir 33.0 proc.). Gydymas kvercetinu IQ grupėje užkirto kelią šiam glomerulų praradimui, nes ši grupė nesiskyrė nuo S ir SQ grupių, tačiau 28,3 proc. padidėjo N [glom], palyginti su I grupe.

Jokio skirtumo nepastebėtainkstassvoris,inkstasapimtis, žievės tūris ir VWGV tarp grupių. Visi duomenys pateikti lentelėje-1 ir pavaizduoti 1 ir 2 paveiksluose.

Histopatologinė analizė atskleidė atskirą vamzdinį ir medulinį perkrovą kai kuriuose S ir SQ grupių gyvūnuose, tačiau žievės architektūra buvo išsaugota. Kita vertus, buvo pastebėta daug parenchimos pažeidimo židiniųinkstusI grupės. Tai apėmė amorfinę medžiagą kanalėlių spindyje, amorfinę eozinofilinę medžiagą meduliarinėje srityje, glomerulų degeneraciją, mononuklearinę infiltraciją, akivaizdų glomerulų praradimą ir žievės architektūros praradimą. Šie patologiniai radiniai buvo minimalūsinkstuspatyrė išemiją gydant kvercetinu (IQ grupė).

DISKUSIJA

Nepaisant didelių pastangų išvengti šiltos išemijos dalinės nefrektomijos metu, taikant off-clamp ir šaltos išemijos metodus (4, 5), daugumos nefronus tausojančių operacijų metu šilta išemija vis dar būtina (1, 2, 6) ir jos žalingos bei nuolatinės pasekmės. inkstų funkcijai ir likusios parenchimos morfologijai (7, 8) sukelia didelė reaktyviųjų deguonies rūšių gamyba ir dėl to lipidų peroksidacija (25, 26). Atsižvelgiant į tai, antioksidantų, kaip galimų nefrono apsaugos priemonių, naudojimas yra tikėtinas (9-11, 18-20), taip pat kituose organuose ir audiniuose (12-17), susijusiuose su išemija / reperfuzija (9, 10, 15-20, 26).

Kvercetinas yra flavonoidas, kuris pasirodė esąs veiksmingas kovojant su reaktyviųjų deguonies rūšių gamyba ir teigiamai pakeitęs organų ir audinių homeostatinių funkcijų biocheminių žymenų vertes (12-17), įskaitantinkstusįvairiose situacijose (11), pavyzdžiui, esant šiltai išemijai (18-20). Mūsų kiekybiniai rezultatai patvirtina, kad kvercetino naudojimas yra naudingas esant šiltai inkstų išemijai. Manoma, kad apsauginiai rezultatai, pastebėti kvercetiną vartojusiems gyvūnams, atsirado dėl sumažėjusio oksidacinio pažeidimo inkstų audiniuose. Tačiau oksidacinis stresas nebuvo tiesiogiai įvertintas šiame tyrime, kaip ir kituose (27), o būsimi tyrimai turėtų paaiškinti veikimo mechanizmus. Šio flavonoido naudojimas buvo veiksmingas siekiant užkirsti kelią glomerulų praradimui (N[glom]), kuris pasireiškė tik gyvūnams, kuriems buvo inkstų išemija be gydymo kvercetinu.

Nors šiame tyrime pagrindinis dėmesys buvo skiriamas histomorfometriniam įvertinimui, taip pat buvo analizuojamas karbamido ir kreatinino kiekis serume, kurie yra dažniausiai naudojami biocheminiai inkstų funkcijos žymenys (28). Šlapalo kiekis serume padidėjo tik išemijos grupėje, o tai patvirtina, kad gydymas kvercetinu apsaugojo nuo inkstų funkcijos sutrikimo, kaip rodo šis žymeklis. Tai atitinka ankstesnių tyrimų duomenis (18-20).

Nefroną tausojančios operacijos tikslas, kaip rodo pavadinimas, yra pašalinti mažusinkstasmasės, išsaugant maksimalų nefronų skaičių, kad inkstų funkcija būtų išsaugota ilgą laiką (1, 2, 6-8). Todėl kiekybiškai įvertinus absoliutų glomerulų skaičių, kuris yra rezultatas, apytikslis nefronų, esančių parenchimoje, skaičius (10, 22-24), suteikia galutinį rezultatą, rodantį, ar dalinė nefrektomija pasiekia savo tikslą. Kiek mums yra žinoma, šis tyrimas yra pirmasis, kuriame pranešama apie prevencinį kvercetino poveikį glomerulų praradimui, kurį sukelia šilta inkstų išemija.

Graužikų modelis plačiai naudojamas tyrimuose, orientuotuose į inkstų išemijos/reperfuzijos poveikį (9, 18-20, 22), o šios procedūros sukelti morfometriniai pokyčiai jau yra įrodyti (22). Mūsų rezultatai atitinka ankstesnę ataskaitą apie 60-minutės šiltą inkstų išemiją šiame modelyje (22), kai išemijos grupėje sumažėjo C-NC, Vv[glom] ir N[glom], palyginti su butaforinė grupė.

Apgaulingi gyvūnai, gydyti kvercetinu, neparodė klinikinių, biocheminių ar morfometrinių kiekybinių inkstų pakitimų, o tai rodo, kad kvercetinas neturi šalutinio poveikioinkstas, o tai atitinka ankstesnius tyrimus (18-20, 26, 29). Dar svarbiau, kad mūsų rezultatai patvirtina, kad šis flavonoidas apsaugo nuo glomerulų praradimo, kurį sukelia išemija / reperfuzija, nes išemijos grupės Vv [glom] ir N [glom] vertės, gydytos kvercetinu, buvo panašios į fiktyvios grupės.

Anksčiau paskelbti tyrimai parodė apsauginį kvercetino poveikį trumpalaikiu laikotarpiu, nes šių tyrimų analizė buvo atlikta praėjus vienai dienai po inkstų šiltos išemijos (18-20). Šis tyrimas papildė informaciją šia tema, analizuodamasinkstus4 savaites po išeminio sužalojimo, taip įrodant, kad apsauginis kvercetino poveikis yra nuolatinis.

Nepaisant to, reikia pažymėti, kad šis tyrimas turėjo tam tikrų apribojimų. Patofiziologinis atsakas į išeminį sužalojimą įvairiose rūšyse skiriasi. Nors žiurkės inkstų šiltos išemijos modelis yra plačiai naudojamas, tai vis dar yra eksperimentinė aplinka, turinti keletą skirtumų nuo klinikinės aplinkos. Be to, norint atlikti jautresnę funkcinę analizę, pageidautina įvertinti inkstų klirensą ir kitus inkstų serumo biomarkerius. Būsimi klinikiniai tyrimai, tiriantys kvercetino, kaip nefroprotekcinio vaisto, vartojimą pacientams, kuriems buvo atlikta dalinė nefrektomija su šilta išemija.

Taigi daroma išvada, kad kvercetinas buvo veiksmingas kaip nefroprotekcinis agentas, mažinantis histopatologinius pakitimus, užkertantis kelią glomerulų praradimui ir palaikant normalų karbamido kiekį serume po šiltos išemijos. Šie rezultatai rodo, kad šis flavonoidas gali pagerinti ilgalaikę{0}}inkstų funkciją pacientams, kuriems buvo atlikta dalinė nefrektomija su šilta išemija.

Cistanche tubulosa apsaugo nuo inkstų ligos, spustelėkite čia, kad gautumėte mėginį

FINANSAVIMAS

Koordinavimas tobulinant po

- Absolventai - CAPES

Rio de tyrimams skirtas paramos fondas

Janeiro – FAPERJ

Nacionalinė mokslo ir technologijų plėtros taryba – CNPq

KONFLIKTAS APIE INTERESAS

Nė vienas nebuvo deklaruotas.

NUORODOS

1. Campbell S, Uzzo RG, Allaf ME, Bass EB, Cadeddu JA, Chang A ir kt. Inkstų masė ir lokalizuotas inkstų vėžys: AUA gairės. J Urolis. 2017 m.; 198:20-9.

2. Cai Y, Li HZ, Zhang YS. Dalinės ir radikalios laparoskopinės nefrektomijos palyginimas: ilgalaikiai klinikinės T1b inkstų ląstelių karcinomos rezultatai. Urol J. 2018; 15:16-20.

3. Salameh JP, McInnes MDF, McGrath TA, Salameh G, Schieda N. Dvigubos energijos CT diagnostinis tikslumas inkstų masių įvertinimui: sisteminė peržiūra ir metaanalizė. AJR Am J Rentgenol. 2019 m.; 212:W100-W105.

4. Simone G, Capitanio U, Tuderti G, Presicce F, Leonardo C, Ferriero M ir kt. Dalinė nefrektomija naudojant spaustuką ir be spaustuko: ilgalaikių funkcinių rezultatų palyginimas pagal polinkį į balą. Int J Urol. 2019 m.; 26:985-91.

5. Bertolo R, Garisto J, Dagenais J, Agudelo J, Armanyous S, Lioudis M ir kt. Šalta ir šilta išemija, atliekama robotų padedama dalinė nefrektomija: funkcinių rezultatų palyginimas pacientams, kuriems gresia pavojus. J Endourol. 2018 m.; 32:717-23.

6. Hur M, Park SK, Shin J, Choi JY, Yoo S, Kim WH ir kt. Nuotolinio išeminio išankstinio kondicionavimo poveikis kreatinino kiekiui serume pacientams, kuriems atliekama dalinė nefrektomija: atsitiktinių imčių kontroliuojamo tyrimo tyrimo protokolas. Išbandymai. 2018 m.; 19:473.

7. Lee H, Song BD, Byun SS, Lee SE, Hong SK. Šilto išemijos laiko įtaka pooperacinei inkstų funkcijai po dalinės nefrektomijos dėl klinikinės T1 inkstų ląstelių karcinomos: polinkio balų tyrimas. BJU Int. 2018 m.; 121:46-52.

8. Zabell JR, Wu J, Suk-Ouichai C, Campbell SC. Inkstų išemija ir funkciniai rezultatai po dalinės nefrektomijos. Urol Clin North Am. 2017 m.; 44:243-55.

9. Ozkan TA, Karakoyunlu N, Polat R, Sarıbaş GS, Şener NC, Özdemir S ir kt. Apsauginio ezomeprazolo poveikio įvertinimas eksperimentiniame inkstų išemijos-reperfuzijos modelyje. Int Urol Nephrol. 2018 m.; 50:217-23.

10. Damasceno-Ferreira JA, Abreu LAS, Bechara GR, Costa WS, Pereira-Sampaio MA, Sampaio FJB ir kt. Manitolis sumažina nefronų praradimą po šiltos inkstų išemijos kiaulių modelyje. BMC Urol. 2018 m.; 18:16.

11. Abharzanjani F, Afshar M, Hemmati M, Moussavi M. Trumpalaikė didelė kvercetino ir resveratrolio dozė keičia žmogaus senėjimo žymenisInkstasLąstelės. Int J Ankstesnis Med. 2017 m.; 8:64.

12. Patra A, Satpathy S, Shenoy AK, Bush JA, Kazi M, Hussain

MD. Kvercetino mišrių polimerinių micelių formulavimas ir įvertinimas krūties, kiaušidžių ir daugeliui vaistų atsparių vėžio gydymui. Int J Nanomedicina. 2018;13:2869-81.

13. Wang D, Lou X, Jiang XM, Yang C, Liu XL, Zhang N. Kvercetinas apsaugo nuo uždegimo, MMP{1}} aktyvacijos ir apoptozės indukcijos žiurkės širdies ir plaučių gaivinimo modelyje, moduliuodamas Kmi{{2} } išraiška. Mol Med Rep. 2018; 18:610-6.

14. Srinivasan P, Vijayakumar S, Kothandaraman S, Palani M. Antidiabetinis kvercetino, išgauto iš Phyllanthus Emblica L. vaisių, aktyvumas: In silico ir in vivo metodai. J Pharm Anal. 2018;8:109-18.

15. Tóth Š, Jonecová Z, Čurgali K, Maretta M, Šoltés J, Švaňa M ir kt. Kvercetinas susilpnina išemijos reperfuzijos sukeltą COX-2 ir MPO ekspresiją plonosios žarnos gleivinėje. Biomed Pharmacother. 2017 m.; 95:346-54.

16. Park DJ, Shah FA, Koh PO. Kvercetinas susilpnina neuronų ląstelių pažeidimus vidurinės smegenų arterijos okliuzijos gyvūnų modelyje. J Vet Med Sci. 2018 m.; 80:676-83.

17. Uyla MU, ahin A, ahintürk V, Alata Ö. Kvercetinas daro įtaką kepenų išemijos ir reperfuzijos pažeidimo likimui žiurkėms: eksperimentinis tyrimas. Int J Surg. 2018 m.; 53:117-21.

18. Kahraman A, Erkasap N, Serteser M, Köken T. Apsauginis kvercetino poveikis inkstų išemijai/reperfuzijos pažeidimams žiurkėms. J Nefrolis. 2003 m.; 16:219-24.

19. Kinaci MK, Erkasap N, Kucuk A, Koken T, Tosun M. Kvercetino poveikis apoptozei, NF-B ir NOS genų ekspresijai esant inkstų išemijai/reperfuzijos pažeidimui. Exp Ther Med. 2012 m.; 3:249-54.

20. Chen BL, Wang LT, Huang KH, Wang CC, Chiang CK, Liu SH. Kvercetinas susilpnina inkstų išemijos / reperfuzijos pažeidimą aktyvuodamas AMP aktyvuotą baltymų kinazės reguliuojamą autofagijos kelią. J Nutr Biochem. 2014 m.; 25:1226-34