Askorbo rūgštis reguliuoja Abalone Haliotis Discus Hannai Ino imunitetą, antioksidaciją ir apoptozę 2 dalis

3.5. Su imunine sistema susijusių genų ir baltymų raiška abalų virškinimo liaukoje ir žiaunose

Cistancho glikozidas taip pat gali padidinti SOD aktyvumą širdies ir kepenų audiniuose bei žymiai sumažinti lipofuscino ir MDA kiekį kiekviename audinyje, efektyviai pašalindamas įvairius reaktyviuosius deguonies radikalus (OH-, H2O₂ ir kt.) ir apsaugodamas nuo DNR pažeidimo. OH-radikalais. Cistanche feniletanoidiniai glikozidai pasižymi stipriu laisvųjų radikalų šalinimo gebėjimu, didesne redukcijos savybe nei vitaminas C, pagerina SOD aktyvumą spermos suspensijoje, mažina MDA kiekį ir turi tam tikrą apsauginį poveikį spermos membranos funkcijai. Cistanche polisacharidai gali padidinti SOD ir GSH-Px aktyvumą eksperimentiškai senstančių pelių eritrocituose ir plaučių audiniuose, kuriuos sukelia D-galaktozė, taip pat sumažinti MDA ir kolageno kiekį plaučiuose ir plazmoje bei padidinti elastino kiekį. geras sugeriantis poveikis DPPH, pailgina senstančių pelių hipoksijos laiką, pagerina SOD aktyvumą serume ir lėtina fiziologinę plaučių degeneraciją eksperimentiškai senstančiose pelėse Dėl ląstelių morfologinės degeneracijos, eksperimentai parodė, kad Cistanche pasižymi geru antioksidaciniu gebėjimu. ir gali būti vaistas, skirtas odos senėjimo ligų prevencijai ir gydymui. Tuo pačiu metu Cistanche esantis echinakozidas turi didelį gebėjimą sunaikinti DPPH laisvuosius radikalus ir geba pašalinti reaktyviąsias deguonies rūšis ir užkirsti kelią laisvųjų radikalų sukeltam kolageno skaidymui, taip pat turi gerą atkuriamąjį poveikį timino laisvųjų radikalų anijonų pažeidimams.

Spustelėkite „Cistanche Reddit“, kad apsaugotumėte nuo senėjimo

【Daugiau informacijos:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Pagrindinių genų mRNR lygiai į rinkliavą panašių receptorių (TLR) signalizacijos kelyje ešerių virškinimo liaukoje parodyti 6 ir 7 lentelėse. Tlr2 ir tlr4 ekspresijos lygiai virškinimo liaukoje buvo žymiai sumažėję (p < { {5}}.05) ir turėjo žemiausią lygį AA1000 ir AA500{{43 atitinkamai }} grupių (6 lentelė). The-a mRNR lygis buvo žymiai padidintas (p < 0.05), o laipsniškas AA lygis su maistu neturėjo įtakos the-b (p > 0.05). ). Myd88, su kelione susijusios adapterio molekulės (tram), su interleukino 1 receptoriumi susijusios kinazės 4 (irak4) ir su naviko nekrozės faktoriaus receptoriais susijusio faktoriaus 6 (traf6) ekspresija žymiai sumažėjo po AA papildymo su maistu (p < 0,05). Traf4 neturėjo įtakos AA papildymo lygis (p > 0,05). iκb kinazės (ikk ) ir nf-κb inhibitoriaus (iκb ) mRNR lygiams ešerių virškinamojoje liaukoje mitybos AA įtakos neturėjo (p > 0,05) (7 lentelė). Tačiau p38 mitogeno aktyvuotos baltymų kinazės (p38 žymė) ir šiukšlių ekspresija buvo žymiai sumažinta didėjant AA (p < 0,05). Dietinis AA gali žymiai sumažinti nf-κb, aktyvatoriaus baltymo 1 (ap-1) ir naviko nekrozės faktoriaus (tnf-) ekspresijos lygį (p < 0,05), o interleukino 16 (il 16) lygis nebuvo toks. atsižvelgiant į mitybos AA (p > 0,05). MyD88, JNK, brandaus IL-1 ir branduolinio NF-κB p65 baltymų ekspresija parodyta 2 paveiksle. Abalono liaukos buvo žymiai sumažintos dėl AA (p < 0,05). Priešingai, JNK baltymų lygiui AA įtakos neturėjo (p > 0,05).

tlr2, tlr4 ir the-b mRNR lygiai abalų žiaunose reikšmingai nesiskyrė (p > 0.05), o dervos a lygis buvo žymiai sumažintas po graduotų lygių. mitybos AA (p < 0.05) (8 lentelė). Be to, myd88, irak4 ir traf6 ekspresijos lygiai abalonų žiaunose buvo žymiai sumažėję, didėjant AA kiekiui maiste (p < 0.{{20}}5). Vietoj to, reikšmingų tramvajaus ir traf4 išraiškų skirtumų nepastebėta (p > {{30}}.05). Dietos AA reikšmingai sumažino ikk mRNR lygį (p < 0,05), o iκb , p38 ženklo ir šiukšlių išraiškos žiaunose AA nepaveikė (p > 0,05) (9 lentelė). Vienpusė ANOVA atskleidė, kad nf-κb, ap-1 ir tnf- ekspresijos lygius reikšmingai sumažino AA su maistu (p < 0,05) ir reikšmingo il 16 lygių skirtumo nepastebėta (p > 0,05). MyD88 ir branduolinio NF-κB p65 baltymų kiekis buvo žymiai sumažintas dėl suskirstyto AA lygio su maistu (p < 0,05) (3 pav.). Tačiau JNK ir subrendusio IL-1 baltymų ekspresijai abalonų žiaunose mitybos AA įtakos neturėjo (p > 0,05).

Defenzino, mitų kūrimo 6 ir arginazės-I išraiškos abalonų virškinimo liaukoje ir žiaunose pateiktos 1 lentelėje0. -defenzino ir arginazės-I kiekis virškinimo liaukoje žymiai padidėjo po AA su maistu (p < 0.05), tuo tarpu mitų kūrimo 6 raiškos AA nepaveikė (p) > 0,05). Priešingai, -defenzino ir arginazės-I mRNR lygiai žiaunose reikšmingai nesiskyrė, o mitų kūrimo 6 išraišką žymiai padidino dietinis AA (p < 0,05).

3.6. Su imunitetu susijusių genų ekspresija virškinimo liaukoje, reaguojant į Vibrio Parahaemolyticus

Kelių svarbių genų, esančių TLR signalizacijos kelyje, apimančių tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1 ir tnf-, ekspresijos lygiai abalono virškinimo liaukoje po V. parahaemolyticus infekcijos pateikti 4 paveiksle. tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1 ir tnf- mRNR ekspresijos buvo žymiai padidintos po V. parahaemolyticus vartojimo (p < 0.05). tlr4 kartotinis pokytis buvo didžiausias AA0 grupėje (10.24-} kartus) praėjus 24 valandoms po užsikrėtimo, o vėliau didžiausias lygis sumažėjo iki 3.{{ 20}} kartus AA5000 grupėje 6 val. Myd88 mRNR lygis buvo žymiai padidintas 12–72 val. AA0 grupėje (6{28}} kartus) ir 6–12 val. AA5000 grupėje (3{33}} kartus) po V. parahaemolyticus infekcija. Tramvajaus ekspresija abalono virškinimo liaukoje po V. parahaemolyticus infekcijos reikšmingai padidėjo nuo 12 val. iki 72 val. AA0 grupėje ir nuo 12 val. iki 24 val. AA5000 grupėje. nf-κb kartotinis pokytis pasiekė aukščiausią lygį 48 val. AA0 grupėje (10.{44}} kartų), po to didžiausias lygis sumažėjo 12 val. AA5000 grupėje (3.{48 }}lenkimo pakeitimas). Ap-1 ekspresijos lygis AA0 ir AA50 grupėse buvo žymiai padidintas nuo 6 iki 72 val., o po 72 valandų po nuolatinio AA papildymo atsigavo iki normalaus lygio. TNF-kartinis pokytis pasiekė aukščiausią tašką praėjus 24 valandoms po V parahaemolyticus infekcijos AA0, AA50, AA100, AA200 ir AA500 grupėse, o aukščiausią lygį pasiekė po 12 valandų AA1000 ir AA5000 grupėse.

-defenzino ir mitų darymo 6 virškinimo liaukoje po V. parahaemolyticus infekcijos koncentracijos rezultatai parodyti 5 paveiksle. -defenzino ir mitų kūrimo 6 raiškos lygiai abalų virškinimo liaukoje žymiai padidėjo po V. parahaemolyticus infekcijos ( p < 0.05). Defenzino mRNR lygis buvo reikšmingai padidėjęs AA0, AA50, AA100 ir AA200 grupėse 12 val. ir 24 val., o viršūnę pasiekė 12 val. AA200, AA500, AA1000 ir AA5000 grupėse su 4 .51-fold, 4.{22}}fold, 5.20-fold ir 5.{26}}fold. Mitų kūrimo 6 kartotinis pokytis abalono virškinimo liaukoje buvo žymiai padidintas nuo 12 valandų iki 24 valandų AA0, AA50, AA100, AA200 ir AA500 grupėse ir nuo 6 valandų iki 72 valandų AA1000 ir AA5000 grupėse. Didžiausias mitų kūrimo 6 išraiškos lygis buvo pastebėtas po 12 val. AA5000 grupėje (5{43}} kartus).

3.7. Su antioksidacija ir apoptoze susijusių genų ir baltymų raiškos virškinimo liaukose ir žiaunose

nf-e2-susijusio faktoriaus-2 (nrf2), gpx, katės ir cuznsod mRNR lygiai abalų virškinimo liaukoje buvo žymiai padidėję, kai su maistu gaunamas AA lygis buvo laipsniškas (p < {{4). }}.05) (11 lentelė). Priešingai, Keap1 mRNR ir baltymų kiekis buvo žymiai sumažintas po AA su maistu (p < 0.05), o glutationo-s-transferazės (GST) AA nepaveikė (pav. 6, 11 lentelė) (p > 0.05). Žiaunose nrf2 ir gpx mRNR kiekis reikšmingai padidėjo dėl AA su maistu (p < 0,05) (11 lentelė). Tačiau keap1, cat, GST ir cuznsod išraiškoms žiaunose nebuvo taikomi laipsniški AA lygiai (p> 0,05). Reikšmingo su maistu gaunamo AA poveikio Keap1 baltymo ekspresijai gelžbetonio žiaunose nepastebėta (p > 0,05) (6 pav.).

Iš 12 lentelės matyti, kad Bax ir kaspazės3 ekspresijos lygiai abalono virškinimo liaukoje buvo reikšmingai sumažėję, įvertinus su maistu gaunamo AA lygį (p < 0.05). Tuo tarpu bcl-2 mRNR lygis buvo žymiai padidintas (p < 0.05). Tačiau kaspazės7 raiška neturėjo įtakos mitybos AA (p > 0.{{20}}5). Skaldyto kaspazės3 baltymo kiekis virškinimo liaukoje žymiai sumažėjo po AA papildymo (p < 0,05) (6 pav.). Žiaunose kaspazės7 ir bcl-2 mRNR lygiai atitinkamai reikšmingai sumažėjo ir padidėjo po AA su maistu (p < 0,05) (12 lentelė). Nepaisant to, Bax ir kaspazės3 išraiškos reikšmingai nesiskyrė tarp visų gydymo būdų (p > 0, 05). Be to, suskaidytos kaspazės3 baltymų ekspresijai gelžbetonio žiaunose neturėjo įtakos suskirstytas AA lygis su maistu (p > 0,05) (6 pav.).

4. Diskusija

4.1. Askorbo rūgšties kiekis skirtinguose audiniuose

Šiame tyrime AA kiekis raumenyse, žiaunose ir virškinimo liaukose padidėjo didėjant AA kiekiui maiste. Panašus rezultatas taip pat buvo aptiktas Vundu (Heterobranchus logfiles), japonų ungurių ir Chu croaker (Nibea spalva) [27,56,57]. Didžiausias AA kiekis buvo žiaunose, o po to seka abalo virškinimo liauka. Tačiau AA kiekis abalo žiaunose, virškinimo liaukose ir raumenyse nepasiekė savo prisotinimo po 4821,17 mg/kg su maistu gaunamo AA. Kininio čiulptuko (Myxocyprinus asiaticus) AA kiekis kepenyse žymiai padidėjo dėl AA su maistu [58]. Padidėjęs AA kiekis kiniškojo čiulptuko kepenyse po AA su maistu buvo susijęs su kepenų sveikata. Amūro AA kiekis galvos inkstuose, blužnyje ir odoje buvo žymiai padidėjęs, kai AA papildai buvo gausesni [35]. Galvos inkstai, blužnis ir oda yra svarbūs vandens gyvūnų imuniniai organai [59–61]. Šie rezultatai rodo, kad padidėjęs AA kiekis abalono virškinimo liaukoje ir žiaunose buvo glaudžiai susijęs su abalono sveikata po AA su maistu ir kad AA kaupimasis atspindi AA poveikio su maistu lygį.

4.2. Askorbo rūgšties vaidmuo reguliuojant abalono imunitetą

Hemocitai, kaip universalūs moliuskų hemolimfos komponentai, yra atsakingi už daugelį moliuskų gyvenimo aspektų, tokių kaip imuninis atsakas, biomineralizacija, ląstelių ryšys ir regeneracija [62,63]. Todėl hemolimfos THC, RB ir PA gali tiesiogiai atspindėti organizmo imunitetą. AA buvo glaudžiai susijęs su hemocitų THC, RB ir PA, todėl suaktyvėjo adaptyvi imuninė sistema [64, 65].

Šiame tyrime THC, RB ir PA kiekis abalono hemolimfoje buvo žymiai padidintas dėl dietos AA. Nurodoma, kad laipsniškas AA kiekis maiste padėjo sustiprinti abalono imuninę funkciją. Panašūs rezultatai buvo pastebėti su Nilo tilapija ir žolinėmis krevetėmis (Penaeus monodon) [64,66]. RB raudonųjų pelkinių vėžių (Procambarus clarkii) serume ir PA hibridinių sorubinių šamų (Pseudoplatystoma reticulatum × P. corpuscles) serume gerokai sumažėjo po didelio kiekio AA papildų (321,38 mg/kg ir 850 mg/kg). kg, atitinkamai) [67,68]. Tačiau, gydant dideliu kiekiu maisto papildų AA (4821,17 mg/kg), reikšmingo THC, RB ir PA sumažėjimo abalono hemolimfoje nepastebėta.

Lizocimas, C3 ir C4 vaidina pagrindinį vaidmenį įgimtame imunitete ir apsaugo gyvūnus nuo patologinės infekcijos [69–71]. Šiame tyrime LZM abalono CFH žymiai padidėjo po to, kai buvo suskirstytas į AA lygį. Tai buvo panašu į ankstesnių tyrimų rezultatus su kobija (Rachycentron canadum), Korėjos uolinėmis žuvimis (Sebastes schlegelii) ir žuvimis (Epinephelus malabaricus) [29, 72, 73]. AA trūkumas sumažino C3 ir C4 kiekį amūruose, o dietinis AA gali žymiai sustiprinti imuninius parametrus, tokius kaip C3 ir C4 stambiųjų ešerių [35,74]. Tačiau šiame tyrime C4 kiekiui abalono CFH neturėjo įtakos mitybos AA lygis. Pastebėta C3 kiekio didėjimo tendencija abalonų CFH, nors C3 kiekis reikšmingai nepagerėjo vartojant AA. Šie rezultatai atskleidė, kad AA papildymas maistu gali padidinti gebėjimą pašalinti patogenų infekciją LZM ir C3, o ne C4, siekiant pagerinti abalono imuninius barjerus.

Įgimtas imunitetas yra gyvybiškai svarbus abalui, nes bestuburiams nėra adaptyvaus imuniteto [43, 49]. TLR vaidina gyvybiškai svarbų vaidmenį įgimtoje imuninėje sistemoje prieš įvairius mikrobus [75]. PAMP aktyvuoti TLR įdarbina specifines adapterio molekules, kad suaktyvintų transkripcijos faktorius, tokius kaip NF-κB ir AP-1, kurie lemia įgimto imuninio atsako baigtį [76]. TLR signalizacija skirstoma į du skirtingus kelius: nuo MyD88- priklausomo ir nuo MyD88- nepriklausomo, kurie žinduoliams ir kitiems vandens gyvūnams sukelia įvairius citokinus, tokius kaip TNF- ir IL{10}} [77,78 ]. MyD{13}}priklausomame kelyje MyD88 sąveikauja su IRAK4 ir tada sąveikauja su TRAF6 [79]. TRAF6 gali aktyvuoti TGF- -aktyvintą kinazę 1 (TAK1) ir TAK{22}}rišančius baltymus (TAB) [80]. TAK1 aktyvuoja IKK kompleksą, kuris gali fosforilinti IκB, kuris jungiasi prie NF-κB subvienetų (sudaro p50 ir p65), ir fosforilina MAPK bei JNK, o tai skatina AP-1 perkėlimą į branduolį [81]. IκB sunaikinimas palengvina NF-κB branduolinį perkėlimą [82]. Branduoliniai NF-κB ir AP-1 nukreipti į citokinų, tokių kaip TNF- ir IL-1, transkripciją, kurie yra gerai pripažinti kaip priešuždegiminiai mediatoriai, skatinantys uždegimą [76,77,83] . MyD{41}}nepriklausomame kelyje reikalingas TRAM, kuris šiame kelyje atlieka pagrindinį vaidmenį [84]. Tarp stuburinių ir bestuburių tarpląsteliniai komponentai, esantys pasroviui nuo TLR signalizacijos kelio, paprastai yra labai konservuoti [60, 85]. TLR4 intrahepatinė ekspresija buvo sumažinta pelėms, kurioms buvo paskirta AA (Mus musculus) [86]. Slopindamas NF-κB signalo kelią, AA darė teigiamą kepenų apsaugą nuo konkanavalino A sukelto imunologinio kepenų pažeidimo pelėms [87, 88]. Taigi iš šių rezultatų galima daryti išvadą, kad AA gali paveikti TLR signalizacijos kelią. Tačiau lieka nežinoma, kaip AA reguliuoja TLR signalizacijos kelią vandens gyvūnams, ypač moliuskams.

Šiame tyrime tlr2 ir tlr4 mRNR lygiai virškinamojoje liaukoje buvo žymiai sumažinti dėl laipsniško dietinio AA lygio. Manoma, kad TLR signalizacijos kelią suaktyvino AA abalono virškinimo liaukoje (7 pav.). Terminai-a ir tlr-b turėjo platesnes modelio atpažinimo galimybes ir buvo susiję su antibakteriniu ir antivirusiniu abalonų imunitetu [89]; tačiau pagrindinis the-a/b mechanizmas vis dar nežinomas. Tačiau tlr-b lygiui mitybos AA įtakos neturėjo, o šiame tyrime AA žymiai padidino tlr-a. Reikia atlikti tolesnius tyrimus. Myd88, irak4 ir traf6 ekspresija bei MyD88 baltymų ekspresija abalono virškinimo liaukoje buvo sumažintos papildant AA, o traf4 lygiui įtakos neturėjo dietinis AA. TRAF4 veikia kaip duslintuvas TLR tarpininkaujant signalizacijai, slopindamas TRAF6 [90]. Nurodoma, kad TLR kelio slopinimas dietiniu AA nebuvo tarpininkaujamas per traf4 abalono virškinimo liaukoje. AA neturėjo įtakos iκb mRNR lygiui virškinimo liaukoje. Tačiau NF-κB gali būti perkeltas į branduolį tik po IκB fosfato skaidymo [91]. nf-κb mRNR ekspresija ir branduolinio NF-κB p65 baltymų ekspresija virškinimo liaukoje buvo žymiai sumažintos dietos AA. Šie rezultatai rodo, kad AA gali slopinti IκB baltymo fosforilinimą, kad sumažintų branduolinį NF-κB. IKK gali suaktyvinti NF-κB p65, kad suaktyvintų NF-κB kanoninį kelią, o IKK gali suaktyvinti NF-κB p52, kad suaktyvintų NF-κB nekanoninį kelią [92]. Nurodoma, kad dietinis AA gali suaktyvinti NF-κB kanoninį kelią abalono virškinimo liaukoje. Be to, dėl mitybos AA žymiai sumažėjo tram, p38 ženklo, šiukšlių, ap-1 ir tnf- mRNR ekspresija ir brandaus IL-1 baltymų kiekis. Šie rezultatai rodo, kad dietinis AA gali slopinti TLR signalizacijos kelią per Myd88-priklausomą kelią per NF-κB, p38 mark/ap-1 ir JNK/ap-1 ir Myd{{ 43}}nepriklausomi būdai, padedantys sumažinti ešerių virškinimo liaukos uždegimą. Žiaunėje AA taip pat paveikė TLR signalizacijos kelią (7 pav.). Tačiau subrendusios IL-1 tramvajaus, p38 ženklo ir šiukšlių bei baltymų ekspresijos mRNR lygiai reikšmingai nesiskyrė. Šie rezultatai parodė, kad dietinis AA gali slopinti TLR signalizacijos kelią per Myd88-priklausomą kelią, o ne nuo MyD88-nepriklausomo. Inhibuotas TLR kelias palengvino ešerių žiaunų uždegimą per NF-κB ir p38 mark/ap{51}}, o ne JNK/ap{52}} kelią. Dietinis AA turėjo stipresnį poveikį TLR keliui virškinimo liaukoje nei ešerių žiaunose.

【Daugiau informacijos:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】