Echinacoside ir Acteoside estrogeninio poveikio tyrimas iš Herba Cistanche
Mar 08, 2022
Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com
WANG Lin-lin, LI Wei, SONG Xin-bo*, YU He-Shui, MIAO Lin, ZHANG Li-Juan, TAO Rui
Tiandzino tradicinės kinų medicinos universitetas, Tiandzino 300193, Kinija
Abstraktus: Šiame tyrime estrogeninis poveikisežiuolėiracteosideiš Herba Cistanche buvo ištirtas. Luciferazės reporterio plazmidžių dėsnis buvo naudojamas estrogeniniamežiuolėiracteoside. Estrogenų receptorių konkurencijos surišimo eksperimentai buvo naudojami jų konkurenciniam poveikiui su estrogenu nustatyti. Rezultatai parodė, kadežiuolėiracteosidegali padidinti ERE aktyvumą. Kadaežiuolėarbaacteosidepridedamas prie estrogenų aktų, ERE varomas reporterio genų aktyvumas gali būti stimuliuojamas kaip estrogenų agonistas. Taigi buvo padaryta išvada, kadežiuolėiracteosideturėjo fitoestrogenų aktyvumą, skatindamas ERE padidėjimo reporterio genų aktyvumą.Echinacozidasiracteosidebuvo potencialūs SERM.
Raktažodžiai: Echinacoside; acteoside; phytoestrogens ;
Herba Cistanche yra Cistanche genties (Cistanche) Cistanche genties (Oroban- chaceae) augalas. Tai sausas mėsingas stiebas su žvynuotais lapais. Jis turi inkstų yang maitinančių, maitinančios esencijos ir kraujo bei drėkinančios žarnyno funkcijas. Jis naudojamas inkstų yang trūkumui, esencijos ir kraujo trūkumui, impotencijai ir nevaisingumui, juosmens ir kelių skausmui, raumenų ir kaulų silpnumui, sausosioms žarnoms ir vidurių užkietėjimui ̈. 2J. Šiuo metu pagrindiniai cheminiai komponentai, išskirti ir identifikuoti iš Cistanche, yra fenil glikozidai, iridoidai, lignanai, flavonoidai, polisacharidai, oligosacharidai, galaktitolis, lakieji komponentai, alkaloidai ir kt. Tarp jų fenetilo alkoholio glikozidai yra pagrindinės Cistanche cistanche veikliosios medžiagos, taip pat yra pagrindiniai Cistanche kokybės kontrolės aptikimo rodikliai, kuriuos atstovaujaežiuolė ir verbaskozidas. Šiuolaikiniai farmakologiniai tyrimai parodė, kad Cistanche turi imuninio reguliavimo, antioksidacijos, anti-senėjimo, anti-nuovargio, neuroprotekcijos ir kepenų apsaugos funkcijas. Kai kurie farmakologiniai tyrimai taip pat rodo, kad Cistanche gali skatinti kaulų regeneraciją-l"J, slopinti osteoporozės ir fitoestrogenų susidarymą moterims po menopauzės"]. Šiame eksperimente mes pasirinkome Echinacoside ir verbascoside, kurie yra pagrindiniai Cistanche kokybės kontrolės rodikliai, ir išbandėme estrogeninįežiuolės poveikisir liuciferazės reporterio plazmidžių metodu ir estrogenų receptorių konkurencinio surišimo eksperimentu. Tyrinėkite Echinacoside ir verbascoside estrogeno mechanizmą
1 Medžiaga ir metodai
1.1 Medžiagos Hela ląstelės (žmogaus gimdos kaklelio vėžio ląstelės), įsigytos iš Šanchajaus ląstelių biologijos instituto;ežiuolėmūsų laboratorijoje buvo atskirtas ir išvalytas nuo Cistanche deserticola ir buvo išbandytas HPLC-ELSD. Nutarėežiuolėkontrolinei medžiagai (Kinijos nacionaliniam farmacijos ir biologinių produktų kontrolės institutui, partijos numeris: 111670) buvo naudojama kaip kontrolinė medžiaga, o išmatuotas grynumas buvo 95,1 %. Nutarėacteosidemūsų laboratorija jį atskyrė ir išgrynino nuo Cistanche dykumos ir jį gavo HPLC. ELSD bandymas su Verbascum glikozido etalonine medžiaga (Kinijos farmacijos ir biologinių produktų kontrolės institutas, partijos numeris: 111530) kaip kontroline medžiaga, išmatuotas grynumas buvo 96,4 %; plazmidės ERa, ER[3, ERE-luc, Renila (ekstrahuota mūsų laboratorijos) ; Estradiolis (E), "Sigma Company"; Vaisiaus galvijų serumas (FBS), PAA kompanija; Aktyvuota anglimi apdorotas vaisiaus galvijų serumas (CS-FBS), PAA kompanija; Fenolis be raudonojo DMEM, Sigma kompanija; Dimetilsulfoksidas (DMSO) ), "Amresco Company"; LB medium, Šanchajaus Shenggong biotechnologijų kompanija; PassiveLysis5X Buffer, Promega kompanija; Lipofektaminas2000, Promega kompanija; Plazmidžių ištraukimo rinkinys, TIANGEN Company; Luciferazės reporterio genų aptikimo rinkinys yra "Promega Company" produktas.
1.2 Ląstelių kultūra Hela ląstelės buvo kultivuojamos DMEM kultūros terpėje, kurioje buvo 10 % vaisiaus galvijų serumo. Bent viena karta prieš eksperimentą buvo pakeista DMEM kultūros terpe, kurioje yra 1 % aktyvintąja medžio anglimi apdoroto vaisiaus galvijų serumo.
1.3 Transfekcijos ir luciferazės aktyvumo nustatymas Hella ląstelės buvo pasėtos į 24 duobučių plokštelę, kurios tankis buvo nuo 70% iki 80%. Po to, kai ląstelės prilipo prie sienos ir ląstelių tankis pasiekė 90%, vadovaukitės lipo instrukcijomis. Feetamine2000 transfekcinio reagento instrukcijos transfekto ERa, ER[3 išraiškos plazmidės ir ERE, Renila reporterio plazmidės, pakeiskite terpę po 8 valandų ir pridėkite skirtingų koncentracijų bandomuosius vaistus. Inkubuodami per naktį, naudokite daugiafunkcinį plokštelių skaitytuvą, kad nustatytumėte estrogeno atsaką. Komponentas ERE luciferazės aktyvumas, apskaičiuokite santykinę vaistų įtaką luciferazės aktyvumui.
1.4 Duomenų apdorojimas ir statistinė analizė
Naudojant SPSS18.0 statistinę programinę įrangą, duomenys išreiškiami vidurkiu± standartiniu nuokrypiu (x±S). Vienpusė dispersijos analizė (ANOVA) ir Dunnetto daugkartinis palyginimo t-testas buvo naudojami analizuojant duomenis tarp grupių. P<0.05 was="" considered="" there="" is="" statistical="">
Acteoside
2 Eksperimentiniai rezultatai
2.1 Verbaskozido poveikis estrogenų atsako elemento ERE luciferazės aktyvumui Rezultatai rodo, kad, palyginti su kontroline grupe, kai tarpininkauja ERa ir ER[3, E (10nmol), gali žymiai padidinti estrogenų atsako elemento ERE luciferazės aktyvumą Verbaskozido aktyvumas gali padidinti estrogenų atsako elemento ERE luciferazės aktyvumą esant 10, 100, 1, 10 ir 50 txmol. Kai koncentracija pasiekia 50 I ~ mol, ERE luciferazės aktyvumo reguliavimas yra lygiavertis estradiolio aktyvumui. Jis priklauso nuo dozės, tačiau estrogenų receptorių ERa ir EP~ selektyvumas nėra akivaizdus (2 pav.).
2 Skirtingų koncentracijų poveikisacteosidedėl ERE aktyvumo liuciferazės
Pastaba: palyginti su kontroline grupe, P
2.2ežiuolėdėl estrogeno atsako elemento ERE luciferazės aktyvumas Rezultatai rodo, kad lyginant su kontroline grupe, kai tarpininkauja ERa ir ER[3, E(10nmol) gali žymiai padidinti estrogenų atsako elementą ERE fluorescencija Echinacoside gali reguliuoti estrogeno atsako elementą ERE luciferazės aktyvumas esant 10, 100, 1, 10 ir 50 ixmol. Kai koncentracija pasiekia 50 iksmolį, ERE luciferazės aktyvumo reguliavimas yra šiek tiek mažesnis nei estrogeno. Diolis taip pat priklauso nuo matuoklio, tačiau turi nedidelį estrogenų receptorių ERa ir E selektyvumo skirtumą (3 pav.).
2.3 Verbascum glikozidų ir estradiolio konkurencinis rišamasis poveikis estrogenų receptoriams Rezultatai rodo, kad Verbascum glikozidai gali konkurencingai prisijungti prie estrogenų receptorių su estradioliu ir priešintis estradiolio aktyvumui estrogenų atsako elemente ERE luciferazė. "Up-regulatory" efektas. Palyginti su E (10nmo1) grupe, verbaskozidai gali sumažinti-reguliuoti estradiolio estradiolio aktyvumą estrogenų atsako elemente ERE įvairiais laipsniais 1, 10 ir 50p, mol, o verbaskozidai rodo priklausomybę nuo dozės. , Kai koncentracija pasiekia 50 iksmolį, antagonistinis poveikis estradioliui yra akivaizdžiausias (4 pav.).
2.4 Dėl privalomo konkurencinio poveikioežiuolėir estradiolis ant estrogenų receptorių. Rezultatai rodo, kadežiuolėtaip pat gali konkurencingai prisijungti prie estrogenų receptorių su estradioliu ir slopinti estradiolio atsaką į estrogeną. ERE luciferazės aktyvumo reguliavimas. Palyginti su E (10nmol) grupe, verbaskozidas gali reguliuoti estradiolio luciferazės aktyvumą estrogeno atsako elemente ERE įvairiais laipsniais 1, 10 ir 50 mol, irežiuolėeksponuoja tingią dozę. Seksas, kai koncentracija pasiekia 50lxmol, antagonistinis poveikis estradioliui yra akivaizdžiausias (5 pav.)
3 Diskusija
Šis eksperimentas pirmą kartą parodė, kad aiškūs duomenys parodė, jogežiuolėir verbaskozidas, pagrindinės Cistanche veikliosios medžiagos, gali prisijungti prie estrogenų receptorių ERa ir EP ~, reguliuoti ERE luciferazės aktyvumą ir daryti estrogeninį poveikį, rodydamas SERM aktyvumą. Pirmiau minėtų eksperimentinių duomenų analizė rodo, kad ERa sistemoje verbaskozido reguliavimas estrogenų atsako elemente ERE luciferazės aktyvumas esant 50 lxmol yra lygus 0,977 karto didesniam E2 (10nmol) kiekiui, kuris yra lygiavertis ERI3 sistemos aktyvumui. 0,970 karto; panašiai ir ERa sistemoje Echinacozido aukštynreguliacijos poveikis estrogenų atsako elementui ERE luciferazės aktyvumui esant 50 lxmol yra lygiavertis E (10nmol) poveikiui, kuris atitinka 0 ERI3 sistemoje. 937 kartus, verbaskozido reguliavimas estrogenų atsako elemento ERE luciferazės aktyvumui yra šiek tiek didesnis neiežiuolė, ir estrogenų receptorių selektyvumas ERa ir ER[3] nėra akivaizdus, o ežiuolės glikozidai turi silpnus selektyvumo skirtumus estrogenų receptoriams ERa ir ERI3. Šie skirtumai gali būti susiję su skirtingomis grupėmis, susijusiomis su verbaskozido ir ežiuolės R4 padėtimi. Estrogenas daugiausia veikia per estrogeno receptorius. Yra du pagrindiniai estrogenų receptorių potipiai, ERa ir ER [3, estrogeną ir estrogeną veikiančios medžiagos sujungiamos su estrogeno receptoriumi, kad susidarytų dimeras, o po to dimerizuoja Organizmas susijungia su estrogeno atsako elementu ERE ir tada daro estrogeno poveikį [2l,. Fitoestrogenai ir estrogenai turi panašias struktūras ir funkcijas. Tyrimai parodė, kad fitoestrogenai gali reguliuoti kaulų apykaitą ir vaidina labai svarbų vaidmenį palaikant kaulų rezorbcijos ir kaulų susidarymo pusiausvyrą. Jis yra veiksmingas osteoporozei pacientams, sergantiems senatvine hipofunkcija. Turi tam tikrą klinikinį prevencijos ir gydymo poveikį ̈. Todėl spėjama, kad Cistanche poveikis skatinant kaulų regeneraciją ir slopinant osteoporozės susidarymą moterims po menopauzės yra per jo fitoestrogenus. Šis eksperimentas taip pat rodo, kad Echinacozidas ir verbaskozidas gali konkurencingai prisijungti prie estrogenų receptorių su estradioliu ir priešintis estradiolio reguliavimui ERE luciferazės aktyvumui. Yra žinoma, kad šio veiksmo mechanizmas resveratrolis. Fitoestrogenų poveikis yra panašus į J. Taip pat paaiškinama, kad ežiuolė ir verbaskozidas daro estrogeninį poveikį prisijungdami prie estrogenų receptorių ERa ir ER3. Pirmiau minėti Cistanche fitoestrogeno aktyvumo ir jo estrogenų poveikio mechanizmo tyrimai rodo, kad Cistanche gali atidėti osteoporozės po menopauzės susidarymą moterims, pagerindamas estrogeno kiekį organizme arba gydydamas gydymą, kurį sukelia estrogeno kiekio organizme sumažėjimas. Osteoporozė iškelia galimybę ir suteikia teorinį pagrindą išplėsti Cistanche klinikinio medicininio vartojimo apimtį.
Nuoroda
1 Kinijos farmakopėjos komisija((国家药典委员)). Kinijos Liaudies Respublikos farmakopėja. Pekinas: Chemijos pramonės spauda,2010. Tomas 1:126.
2 Li SZ(李时珍).Materia Medica kompendiumas. Pekinas: Žmonės * s Medicinos leidykla (人民卫生出版社), 1977.727.
3 Zeng LQ(曾群力),Zheng YF(郑一凡),Lv ZL(吕志良). Cistanchų polisacharidų imunobiologinis aktyvumas ir jo veikimo mechanizmas. J Zhejiang Univ,Med Ed (浙江 大学学报,医学版),2002,31:284-287.
