Cistanche Deserticola Deserticola polisacharidų komponentų analizės ir antioksidacinio aktyvumo tyrimas

Abstraktus: Šiame darbe Cistanche deserticola neutralus cukrus CLP1 ir rūgštinis cukrus CLP2 buvo gauti ekstrahuojant polisacharidus iš Cistanche deserticola deserticola ir išgryninant neapdorotą Cistanche deserticola deserticola polisacharidą CLP naudojant DEAE celiuliozės kolonėlės chromatografiją. Ultravioletinio spektro skenavimu buvo nustatytas bendrojo cukraus, urono rūgšties ir baltymų kiekis Cistanche deserticola žaliame polisacharide CLP, Cistanche deserticola neutraliame cukruje CLP1 ir Cistanche deserticola rūgšties cukruje CLP2, nustatyta polisacharido molekulinė masė ir monosacharidų sudėtis. Tuo pačiu metu buvo ištirtas Cistanche deserticola neapdoroto polisacharido CLP kiekis. Eksperimentiškai buvo ištirtas Cistanche deserticola deserticola neutralaus cukraus CLP1 ir Cistanche deserticola deserticola rūgštinio cukraus CLP2 DPPH radikalų šalinimo pajėgumas ir bendras antioksidacinis pajėgumas. Išmatuoti duomenys parodė, kad Cistanche deserticola deserticola neapdoroto polisacharido CLP, Cistanche deserticola deserticola neutralaus cukraus CLP1 ir Cistanche deserticola deserticola rūgštinio cukraus CLP2 sudėtis buvo panaši, tačiau reikšmingai skyrėsi; Cistanche deserticola deserticola neutralus cukrus CLP1 ir Cistanche deserticola deserticola rūgštinis cukrus CLP2 gali gauti daug eliuavimo smailių, kai jie yra atskirti ir išgryninti DEAE celiuliozės chromatografine kolonėlė, o molekulinė masė yra nuo 0 iki 10 000 Da, o tai rodo kad pagrindinis Cistanche deserticola deserticola polisacharido komponentas yra mažos molekulinės masės cukrus. Neutralaus cukraus CLP1 monosacharidai Cistanche deserticola deserticola parodė, kad Cistanche deserticola deserticola deserticola deserticola neutraliame cukruje CLP1 esantys monosacharidai daugiausia buvo manozės, galaktozės urono rūgšties, gliukozės, galaktozės ir arabinozės; Cistanche deserticola rūgšties cukraus CLP2 monosacharidų nustatymo rezultatai parodė, kad Cistanche deserticola rūgšties cukraus CLP2 monosacharidai daugiausia buvo ramnozė, galaktozės urono rūgštis, gliukozė ir galaktozė. DPPH laisvųjų radikalų šalinimo eksperimentas ir bendrojo antioksidacinio pajėgumo eksperimentas su polisacharidais Cistanche deserticola parodė, kad neutralaus cukraus CLP1 antioksidacinis pajėgumas Cistanche deserticola buvo didesnis nei žalio polisacharido CLP Cistanche deserticola ir rūgštinio cukraus CLP2 Cistanche deserticola.

Pagrindiniai žodžiai: Cistanche deserticola; polisacharidai; Komponentų analizė; Antioksidacinis aktyvumas; absorbcija

Cistanche deserticola eksperimentas

Cistanche deserticola deserticola yra savotiškas žolinis parazitinis augalas, kuriame yra daug fenolio glikozidų, alkaloidų, fenetilo alkoholio glikozidų, cukrų ir alkoholių. Tarp jų cukrus daugiausia yra polisacharidų pavidalu. Cistanche deserticola polisacharidai turi stiprią imuninės veiklos reguliavimo funkciją [1-2]. Laisvieji radikalai, kaip tarpinis metabolitas žmogaus gyvenime, yra nestabilios būsenos ir turi didelį oksidacijos aktyvumo intensyvumą, dėl ko žmogaus organizme bus pažeisti biomakromolekulių audiniai ir organai. Todėl natūralių antioksidantų naudojimas laisviesiems radikalams pašalinti tapo pagrindine dabartinių maisto tyrimų kryptimi. Cistanche deserticola sudėtyje esantys polisacharidai turi stiprų antioksidacinį pajėgumą, kuris gali skatinti laisvųjų radikalų pašalinimą iš žmogaus kūno [3].

Cistanche tubulosa privalumai – antioksidantas

Šiame darbe tiriamasis objektas buvo Cistanche deserticola deserticola, o polisacharidinės medžiagos buvo išskirtos ir klasifikuojamos. Cistanche deserticola deserticola polisacharidinių medžiagų molekulinė masė buvo išmatuota didelio efektyvumo gelio pralaidumo chromatografija. Tuo pačiu metu buvo nuodugniai ištirta polisacharidinių medžiagų sudėtis. Cistanche deserticola deserticola deserticola polisacharido antioksidacinis aktyvumas buvo ištirtas išmatuojant Cistanche deserticola deserticola deserticola polisacharido komponentų laisvųjų radikalų šalinimo gebą ir bendrą antioksidacinį pajėgumą. Tai suteikia teorinį pagrindą Cistanche deserticola deserticola deserticola kūrimui ir panaudojimui bei pridėtinės vertės skatinimui.

Dykumos gyva cistanche

Spustelėkite čia norėdami pamatyti Cistanche produktus

【Klauskite daugiau】 El. paštas:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1 Cistanche deserticola mėginio paruošimas

Pasverkite 2,5 kg Cistanche deserticola, supjaustykite griežinėliais, įpilkite 12,5 l distiliuoto vandens ir virkite 3 valandas. Užvirus filtruokite ir surinkite filtratą. Įpilkite 75 procentų etanolio ir palikite pastovėti 24 valandas. Centrifuguokite 4000 aps./min. greičiu 30 min., surinkite nuosėdas, užšaldykite ir išdžiovinkite, kad gautumėte neapdorotą Cistanche deserticola CLP polisacharidą [4]. Paimkite DEAE celiuliozę, pamirkykite ir išbrinkinkite prieš apdorojimą degazuojant, įdėkite į DEAE celiuliozės anijonų mainų chromatografijos kolonėlę ir subalansuokite distiliuotu vandeniu bei NaCl tirpalu. Pasverkite 100 mg neapdoroto polisacharido CLP iš Cistanche deserticola deserticola ir ištirpinkite jį 10 ml distiliuoto vandens. Išplovę distiliuotu vandeniu, surinkite eliuentą ir sukoncentruokite jį džiovinimui šalčiu, kad gautumėte neutralų cukrų CLP1 iš Cistanche deserticola deserticola; Išplovus NaCl tirpalu, eliuentas buvo surinktas, sukoncentruotas ir po dializės išdžiovintas šalčiu, kad būtų gautas Cistanche deserticola rūgštus cukrus CLP2 [5].

Paruoškite Cistanche deserticola neutralų cukrų CLP1 ir rūgštinį cukrų CLP2 į polisacharidų tirpalus, kurių koncentracija atitinkamai yra 1 mg/mL. UV spektroskopijos nuskaitymui naudokite 210-600nm spektrofotometrą. Kai smailė atsiranda ties 260-280nm, patvirtinama, kad tirpale yra baltymų ir nukleino rūgšties [6].

Pagrindinės Cistanche deserticola cheminės sudedamosios dalys

2 Cistanche deserticola polisacharidinių komponentų nustatymas

Bendrojo cukraus kiekis Cistanche deserticola buvo nustatytas fenolio sieros rūgšties metodu. Išmatuokite {{0}}, 0.2, 0.4, 0.6, {{10}},8 ir 1 ml gliukozės tirpalus, kurių koncentracija yra 0,1 mg/mL, ir sudėkite juos į stiklinius mėgintuvėlius. Įpilkite distiliuoto vandens iki pastovaus 1 ml tūrio, tada į mėgintuvėlius įpilkite 0,5 ml fenolio reagento, kurio koncentracija yra 6 procentai, ir 2,5 ml koncentruotos sieros rūgšties. Gerai suplakite ir atvėsinkite iki kambario temperatūros. Spektrofotometru išmatuokite absorbciją esant 490 nm, kai cukraus kiekis yra x ašis, o absorbcija – y ašis, nubrėžkite standartinę kreivę ir apskaičiuokite regresijos lygtį [7-8].

Baltymų kiekiui Cistanche deserticola mėginiuose nustatyti buvo naudojamas Coomassie briliantinio mėlynumo metodas. Paimkite 1 ml skirtingų koncentracijų standartinių mėginių ir 0,1 mg/mL koncentracijos mėginių tirpalus, atitinkamai įpilkite 4 ml Coomassie briliantinio mėlynojo tirpalo į kiekvieną mėgintuvėlį, gerai suplakite ir stovėkite vietoje. Spektrofotometru išmatuokite absorbciją esant 495 nm ir apskaičiuokite baltymų kiekį mėginyje pagal standartinės kreivės lygtį [9].

Urono rūgšties kiekis Cistanche deserticola buvo nustatytas m-hidroksifenilo metodu. Paimkite 0,4 ml skirtingų koncentracijų etaloninio tirpalo ir 0,1 mg/mL koncentracijos mėginio tirpalą, į mėgintuvėlį įpilkite 2,5 ml koncentruotos sieros rūgšties, gerai suplakite ir paleiskite 25 min verdančio vandens vonelėje, išimkite ir atvėsinkite iki kambario temperatūros, įpilkite m-hidroksifenilo, kurio koncentracija yra 0,3 proc., ir natrio hidroksido tirpalą, kurio koncentracija 0,5 proc. mėgintuvėlį, gerai pakratykite ir padėkite 30 min. Spektrofotometru išmatuokite absorbciją esant 525 nm ir apskaičiuokite Urono rūgšties kiekį mėginyje pagal standartinės kreivės lygtį [10-11]. Cistanche deserticola polisacharido santykinė molekulinė masė buvo nustatyta efektyvios gelio chromatografijos būdu, o Cistanche deserticola deserticola monosacharidų sudėtis – efektyvia skysčių chromatografija [12].

3 Cistanche deserticola polisacharidinių komponentų nustatymo rezultatai ir analizė

Fotometro UV spektro skenavimo kreivė esant 210-600nm parodyta 1 paveiksle

1 pav. UV spektrinio nuskaitymo kreivė (210-600nm)

Iš 1 paveikslo matyti, kad Cistanche deserticola deserticola neutralus cukrus CLP1 turi akivaizdžią absorbcijos smailę ties 280 nm, o Cistanche deserticola deserticola deserticola rūgštus cukrus CLP2 neturi akivaizdžios sugerties smailės ties 260-280 nm, tačiau UV spinduliai. sugerties spektras yra didelis. Kadangi baltyme esantis triptofanas ir tirozinas turi didelę sugerties vertę ultravioletinėje šviesoje esant 280 nm, galima nustatyti, kad neutraliame Cistanche deserticola cukruje CLP1 yra glikoproteino ir neįmanoma nustatyti, ar Cistanche deserticola rūgštiniame cukruje CLP2 yra nukleino. rūgštis ir baltymai.

DEAE celiuliozės anijonų mainų chromatografinės kolonėlės chromatografija gali adsorbuoti jonines medžiagas ir priemaišas ant chromatografinės kolonėlės, kad būtų galima atskirti polisacharidines medžiagas. Koncentravus ir išdžiovinus distiliuoto vandens plovimo tirpalą, iš Cistanche deserticola iš viso buvo gauta 34,68 mg neutralaus cukraus CLP1, o eliuavus, koncentravus ir išdžiovinus NaCl tirpalu, iš Cistanche iš viso gauta 16,52 mg rūgštinio cukraus CLP2. deserticola. Eksperimento metu gautos Cistanche deserticola bendro cukraus kiekio, baltymų kiekio ir urono rūgšties standartinės kreivės lygtys. Bendras cukraus, baltymų ir urono rūgšties kiekis Cistanche deserticola buvo išmatuotas, kaip parodyta 1 lentelėje.

1 lentelė Bendras cukraus, baltymų ir urono rūgšties kiekis Cistanche deserticola

Regresijos lygtį galima gauti nustatant standartinio mėginio molekulinę masę ir smailės plotą. Tiriamo mėginio molekulinę masę galima gauti pakeitus tiriamo mėginio fotoemisijos signalo vertę į regresijos lygtį. Atlikus tolesnę analizę ir skaičiavimą, galima gauti Cistanche deserticola neutralaus cukraus CLP1 ir rūgštinio cukraus CLP2 skaičių vidutinę molekulinę masę, vidutinę molekulinę masę ir dispersijos koeficientą. Cistanche deserticola neutralaus cukraus CLP1 ir Cistanche deserticola rūgšties cukraus CLP2 didelio efektyvumo gelio prasiskverbimo chromatogramos sulaikymo trukmės ir molekulinės masės skaičiavimo rezultatai pateikti 2 lentelėje. Išmatuotos molekulės dydžiui parodyti naudojama skaitinė vidutinė molekulinė masė, o vidutinės molekulinės masės ir skaitinės vidutinės molekulinės masės santykis naudojamas molekulinio pasiskirstymo pločiui pavaizduoti.

2 lentelė Sulaikymo smailės nustatymo laikas ir molekulinės masės skaičiavimo rezultatai

Iš 2 lentelės matyti, kad Cistanche deserticola neutralaus cukraus CLP1 ir Cistanche deserticola rūgštinio cukraus CLP2 molekulinės masės pasiskirstymo diapazonas yra 0~10000 Da, o tai rodo, kad Cistanche deserticola polisacharidas yra mažas. molekulės polisacharidas su skirtingomis molekulėmis, o molekulinė masė rodo nevienalytiškumą. Galima daryti išvadą, kad Cistanche deserticola neutralus cukrus CLP1 ir Cistanche deserticola rūgštinis cukrus CLP2 yra kelių polisacharidinių medžiagų mišiniai.

Devynių standartinių monosacharidų mėginių, Cistanche deserticola deserticola neutralaus cukraus CLP1 ir Cistanche deserticola deserticola rūgštinio cukraus CLP2 CLP2 smailes ir smailių sulaikymo trukmes žr. 3 lentelėje. Palyginus piko laiką, galima daryti išvadą, kad Cistanche deserticola neutraliame cukruje CLP1 yra penki akivaizdūs monosacharidai ir keturi akivaizdūs monosacharidai Cistanche deserticola rūgštiniame cukruje CLP2. Monosacharidų dalis neutraliame Cistanche deserticola deserticola cukruje CLP1 ir Cistanche deserticola deserticola rūgštiniame cukruje CLP2 parodyta 4 lentelėje.

3 lentelė Monosacharidų didelio efektyvumo skysčių chromatografijos smailių sulaikymo laikas

4 lentelė Monosacharidų dalis Cistanche deserticola

Cistanche deserticola neutralaus cukraus CLP1 monosacharidų kiekis po hidrolizės labai skiriasi nuo Cistanche deserticola rūgštinio cukraus CLP2 kiekio. Cistanche deserticola neutralaus cukraus CLP1 gliukozės kiekis siekia net 88,62 proc., Cistanche deserticola rūgštiniame cukruje CLP2 – tik 9,99 proc., o galaktozės aldehido rūgšties, galaktozės ir ramnozės kiekis rūgštiniame cukruje CLP2 Cistanche deserticola yra daugiau nei 5 proc.

4 Cistanche deserticola polisacharido antioksidacinės veiklos analizė

Atliekant Cistanche deserticola deserticola polisacharido antioksidacinio eksperimento analizę, Cistanche deserticola deserticola polisacharidas buvo paruoštas į Cistanche deserticola deserticola polisacharido tirpalą, kurio koncentracija yra {{0}}, 0.25, 0 Išmatuotas .5, 1.0, 2.0, 4,0 mg/mL ir DPPH laisvųjų radikalų pašalinimo greitis bei bendras tirpalo antioksidacinis pajėgumas. Nustatant DPPH laisvųjų radikalų pašalinimo greitį Cistanche deserticola deserticola polisacharido tirpale, įpilkite 2 × Iš viso 2 ml 10-4 mol/L DPPH tolygiai išmaišoma ir 15 minučių padėkite į tamsią vietą. Tirpalas centrifuguojamas 4000 r/min centrifugos greičiu ir 15 minučių centrifugavimo trukme. Spektrofotometru išmatuokite tirpalo absorbcijos vertę esant 517 nm bangai, iš kurios galima gauti Cistanche deserticola deserticola polisacharido tirpalo DPPH radikalų pašalinimo greitį, kaip parodyta 5 lentelėje.

5 lentelė Cistanche deserticola polisacharido tirpalo DPPH radikalų pašalinimo greitis

Iš 5 lentelės matyti, kad Cistanche deserticola neapdoroto polisacharido CLP ir Cistanche deserticola neutralaus cukraus CLP1 pašalinimo greitis nuo DPPH laisvųjų radikalų yra žymiai didesnis nei Cistanche deserticola rūgštinio cukraus CLP2 nuo DPPH laisvųjų radikalų. Kai tirpalo koncentracija yra mažesnė nei 20mg/mL, Cistanche deserticola deserticola neapdoroto polisacharido CLP ir Cistanche deserticola deserticola neutralaus cukraus CLP1 DPPH radikalų šalinimo greitis palaipsniui didėja didėjant koncentracijai, ir pagaliau tampa stabilus.

Nustatant bendrą Cistanche deserticola deserticola polisacharido antioksidacinį pajėgumą, greitam aptikimui buvo naudojamas antioksidacinio pajėgumo tyrimo rinkinys. Paimkite standartinį Trolox aptikimo tirpalą ir praskieskite jį distiliuotu vandeniu iki {{0}}, 0.25, 0.5, 1.0, 2.{101} {10}} ir atitinkamai 4,0 mg/ml. Į aptikimo šulinėlių plokštelę įpilkite peroksidazės darbinio tirpalo, tada įpilkite bandinio arba standartinio aptikimo tirpalo, kurį reikia tirti, ir galiausiai įpilkite greitojo aptikimo rinkinio darbinio tirpalo. Gerai išmaišykite ir palikite pastovėti 6 minutes. Bendras Cistanche deserticola polisacharido antioksidacinis pajėgumas buvo nustatytas mikroplokštelių skaitytuvu, esant 405 nm ir 734 nm bangos ilgiams [14-15]. Žr. 6 lentelę, kurioje pateikiami Cistanche deserticola deserticola polisacharido tirpalo bendro antioksidanto pasiekimo bandymo rezultatai.

6 lentelė Cistanche deserticola polisacharido tirpalo bendras antioksidacinis pajėgumas

Iš 6 lentelės matyti, kad kai Cistanche deserticola tirpalo koncentracija yra mažesnė nei 40mg/mL, bendras neapdoroto Cistanche deserticola polisacharido CLP, Cistanche deserticola neutralaus cukraus CLP1 ir rūgštinio cukraus bendras antioksidacinis pajėgumas. Cistanche deserticola CLP2 didėja didėjant tirpalo koncentracijai; Cistanche deserticola deserticola neutralaus cukraus CLP1 antioksidacinė talpa yra žymiai didesnė nei Cistanche deserticola deserticola deserticola žalio polisacharido CLP ir Cistanche deserticola deserticola deserticola rūgštinio cukraus CLP2.

Cistanche arbata

5. Išvada

Cistanche deserticola deserticola polisacharido analizės rezultatai naudojant aukštos kokybės gelio pralaidumo chromatografiją parodė, kad jame esančio polisacharido molekulinė masė buvo ne didesnė kaip 10000 Da ir jame buvo daug eliuavimo smailių. Cistanche deserticola deserticola polisacharidas turėjo tam tikrų antioksidacinių savybių. Šio tyrimo rezultatai sudaro pagrindą tolesniam Cistanche deserticola vystymuisi ir naudojimui.

Nuorodos:

 [1] Bi Cuicui, Liu Yinlu, Wei Fenfen ir kt. Cistanche deserticola [J] pagrindinių cheminių sudedamųjų dalių ir biologinės veiklos tyrimų pažanga. Narkotikų vertinimo tyrimas, 2019, 42 (9): 1896-1900

[2] Dong Yuwei, Miao Jingzhi, Li Yong. Česnako polisacharidų dvigubo fermento ekstrahavimo proceso optimizavimas ir jo antioksidacinis aktyvumas in vitro ［ J］. Kinų prieskoniai, 2020, 45 (10): 30-35, 48

[3] Yang Ting, Eladan McIntyre, Tao Yichun ir kt. Cistanche tubulosa nuotekų polisacharidų kiekio ir antioksidacinio aktyvumo nustatymas ［ J ］. Sindziango medicinos universiteto žurnalas, 2019 m., 42 (2): 234-236241

[4] Liu Lisa, Zhang Qing, You Lin ir kt. Fenetilo alkoholio glikozidų iš Cistanche tubulosa [J] ekstrahavimo tirpikliu technologijos tyrimas. Maisto mokslas ir technologija, 2019 m., 44 (4): 225-229

[5] Liu Yaowei, Su Zihao. Cistanche deserticola ［ J］ ežiuolės ir verbascum thapsus glikozidų staigiojo ekstrahavimo proceso tyrimas. Medicininė dieta ir sveikata, 2020, 18 (23): 27-28

[6] Tian Wenjing, Zhou Xuan, Huang Qunhui ir kt. Ultragarsinio apdorojimo poveikis Cistanche deserticola deserticola polisacharido ［ J］ reologinėms savybėms. Biologijos biuletenis, 2021, 56 (2): 48-53

[7] Feng Jie, Guo Yehong, Zhu Wenjuan ir kt. Įvairių šeimininkų, buveinių ir derliaus nuėmimo datų poveikis veikliųjų medžiagų kiekiui Cistanche deserticola ［ J］. Kinijos laukinių augalų ištekliai, 2021, 40 (5): 18-23

[8] Lv Mingshuai, Zhao Bo, Sun Wenyu ir kt. Seleno turtingo Auricularia auricula-judge polisacharido ［ J］ fizikinių ir cheminių savybių ir antioksidacinio aktyvumo tyrimas. Kinijos kvapiosios medžiagos, 2021, 46 (6): 54-59

[9] Chen Yuebai. Lentinano gavybos proceso atranka ir dabartinės jo poveikio sveikatai tyrimų būklės analizė [J]. Kinijos kvapiosios medžiagos, 2021, 46 (8): 189-191

[10] Guo Qiaoli, Wu Zhibo, Zhou Yubi ir kt. Cistanche deserticola Lanzhou ［ J］ polisacharidų sudėties analizė ir antioksidacinis aktyvumas. Maisto pramonės mokslas ir technologija, 2021, 42 (15): 96-103

[11] Cao Libo, Gong Xingcheng, Jia Jinru ir kt. Greita kokybinė Cistanche salsa cheminių sudedamųjų dalių analizė tiesioginio įpurškimo daugiapakopės masės spektrometrijos pilno skenavimo metodu ［ J ］. Kinijos tradicinės kinų medicinos žurnalas, 2021, 46 (16): 4150-4156

[12] Hu Dongbao, Du Wei, Yang Meng. Polisacharido iš Macrocybe gigantea ekstrahavimo proceso ir antioksidacinio aktyvumo optimizavimas atsako paviršiaus metodika ［ J ］. Kinų prieskoniai, 2021, 46 (10): 78-82

[13] Xu Sheng, Chai Shasha. Greitas pagrindinių veikliųjų medžiagų Cistanche deserticola [J] aptikimo metodas. Uhano profesinio ir technikos koledžo žurnalas, 2021, 20 (4): 116-120

[14] Zhang Hongchi, Liu Rui, Jiao Lele ir kt. Lentinano ekstrahavimo proceso optimizavimas kvadratinės regresijos sukimosi ortogonaliniu metodu ［ J ］. Kinijos kvapiosios medžiagos, 2021, 46 (11): 88-93

[15] Song Qingqing, Zhang Ke, Li Ting ir kt. Vienalaikis kelių komponentų Cistanche deserticola kiekio nustatymas atvirkštinės fazės hidrofilinės sąveikos chromatografijos būdu, pritaikytu kelių reakcijų stebėjimo metodu [J]. Analitinė chemija, 2020, 48 (11): 1573-1593