Bendras Cistanche Deserticola glikozidų kiekis skatina MCAO/R žiurkių neurologinių funkcijų atkūrimą, skatindamas neurovaskulinę regeneraciją per Nrf{0}}/Keap-1 kelią MCAO/R žiurkėms-Ⅱ

TG skatina nervų remodeliavimą I/R pažeistose žiurkėse

Daugelio tyrimų duomenimis, neurogenezė po insulto gali žymiai pagerinti funkcinį atsigavimą. Sinaptofizinas (SYN), postsinapsinio tankio 95 (PSD-95) baltymai ir su mikrotubuliais susijęs baltymas 2 (MAP-2) buvo naudojami kaip žymenys tiriant neuronų plastiškumą išeminėje žievės pusrutulio dalyje. Norint įvertinti gydymo TG, PS ir OS poveikį I/R pažeistų žiurkių neurogenezei, buvo atlikta imunofluorescencija ir Western blot SYN, PSD95 ir MAP-2 išraiškoms. Kaip parodyta 9 ir 10 paveiksluose, SYN, PSD95 ir MAP{10}} ekspresijos lygiai I/R žiurkėms po 14 dienų reperfuzijos sumažėjo, palyginti su NOR žiurkėmis, o TG ir PS išgydymas galėjo žymiai padidėti. reguliuoti jų išraiškos lygius. OS grupė neturėjo reikšmingų pokyčių, palyginti su MOD grupe. Duomenys parodė, kad TG ir PS išgydo dramatiškaiskatinti nervų remodeliavimąsi po I/R traumos. 

NATŪRALUS CISTANCHE TUBULOSA, SAUGANT NUO ISCHEMINIO INSTRUKTO PHGS75% ECH 30% ACT 12%

TGs keičia Nrf{0}} ir Keap-1 išraiškas I/R sužeistose žiurkėse

Oksidacinis stresas yra pagrindinis patogeninis I/R traumos mechanizmas. Tyrimai patvirtino, kad Nrf{0}} yra pagrindinis antioksidacinių reakcijų reguliatorius. Norėdami ištirti Nrf{1}} ir Keap-1 sukeltus oksidacinius atsakus po I/R pažeidimo, įvertinome citoplazminę

išraiška ir Keap{0}} branduolinė translokacija. Tuo tarpu Nrf{1}} ekspresija I/R pažeistų žiurkių smegenų audiniuose taip pat buvo ištirta (10 ir 11 pav.). Remiantis imunofluorescencine analize, nustatyta, kad Nrf{4}} daugiausia yra NOR grupės citoplazmoje. TG grupėje Nrf-2 ekspresija citoplazminėje lokalizacijoje buvo sumažinta, tačiau branduolyje buvo reguliuojama aukštyn, taip pat buvo pastebėta sumažėjusi Keap-1 ekspresija. Duomenys parodė, kad TG smegenų apsauga gali būti susijusi su Nrf{7}} ir Keap-1 moduliavimu.

TG susilpnina smegenų audinių oksidacinį stresą I/R sužeistoms žiurkėms

Siekiant patvirtinti antioksidacinį TG poveikį, SOD, CAT, GSH-Px ir MDA aktyvumas buvo įvertintas I/R sužeistose žiurkėse. 12 paveiksle MDA kiekis buvo žymiai padidėjęs MOD grupėje ir tuo pačiu metu SOD, CAT ir GSH-Px aktyvumas sumažėjo, palyginti su įprastomis žiurkėmis. Priešingai, gydymas TG žymiai sumažino MDA kiekį ir padidino SOD, CAT ir GSH-Px aktyvumą. Šie rezultatai dar labiau patvirtino TG antioksidacinį aktyvumą.

NATŪRALŪS CISTANCHE TUBULOSA, SKIRTAS GYDYTI IŠEMINIAM INTULTUI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

DISKUSIJA

Daugelis tyrimų rodo, kad TCM C. deserticola pasižymi dideliu biologiniu aktyvumu, pvz., stiprina gebėjimą mokytis, atmintį ir imunitetą. Tačiau aktyvūs C. deserticola komponentai neuroprotekcijai lieka neaiškūs. Dabartiniu darbu siekiama patikrinti aktyvius komponentusC. deserticola nuo išeminio insultoMCAO/R modelyje. Trys C. deserticola ekstraktai (TG, PS ir OS) buvo naudojami siekiant įvertinti jų poveikį MCAO/R žiurkėms, taip pat galimus mechanizmus.

Insultas yra dažna ūminė smegenų kraujagyslių liga. Epidemiologiniai tyrimai rodo, kad insultu dažniau serga vyrai nei moterys. Taigi mūsų eksperimente žiurkių patinai buvo priimti bandymams. Mūsų rezultatai įrodė, kad I/R indukcija pagreitino oksidacinį stresą ir infarkto tūrį, sulaužydama BBB ir sukeldama nervų bei smegenų kraujagyslių pažeidimus. Po atrankos nustatyta, kad TG sumažina infarkto tūrį ir skatina nervų remodeliaciją bei angiogenezę. Be to, buvo pastebėta, kad TG išlaiko BBB vientisumą po I / R sužalojimo. Priešingai, PS ir OS reikšmingai nepalengvina I/R žalos. Taigi TG laikomi pagrindine aktyvia C. deserticola frakcija, skirta neuroprotekcijai, galbūt skatinant nervų remodeliavimąsi, angiogenezę ir BBB vientisumą aktyvinant Nrf{0}}/Keap-1 kelią.

Daugėja įrodymų, kad veiksmingos užstato cirkuliacijos sukūrimas yra labai svarbus siekiant išvengti infarkto ir išeminio penumbra susidarymo ir yra labai svarbus gydymas ankstyvoje išeminio insulto stadijoje. Kraujagyslių endotelio ląstelių ir lygiųjų raumenų ląstelių dauginimasis po išeminio infarkto lemia kolateralinės kraujotakos susiformavimą. Tačiau išemijos modeliai turi bendrą reiškinį, tai yra, oksidacinis stresas plačiai egzistuoja smegenų mikrovaskuliacijoje. Tyrimo duomenys parodė, kad daug antioksidantų gali sutrikdyti BBB funkciją ir angiogenezės savybes. CD31 ir a-SMA yra atitinkamai kraujagyslių endotelio ląstelių ir lygiųjų raumenų ląstelių žymenys. Norėdami ištirti aukščiau paminėto C. deserticola ekstraktų ląstelių proliferacijos poveikį, ištyrėme CD31 ir a-SMA ekspresiją smegenų išeminiame pusumbra homogenate. Mūsų duomenys parodė, kad TG ryškiai pagerino CD31 ir a-SMA išraiškas. Tačiau reikšmingų skirtumų tarp PS ir OS grupių nebuvo. Todėl padarėme išvadą, kad TG gali sumažinti smegenų pažeidimą skatindami angiogenezę didindami CD31 ir a-SMA išraiškas, o PS ir OS nesuteikė tokios apsaugos nuo smegenų pažeidimo. Šie rezultatai dar labiau patvirtino, kad tik TG gali užkirsti kelią smegenų I / R pažeidimui.

Išeminis insultas gali būti laikomas smegenų išemijos, kurią sukelia neuronų plastiškumo pažeidimas arba smegenų sričių remodeliavimas, rezultatas. Dauguma pacientų, sergančių insultu, kenčia nuo neurologinių sutrikimų. Neurogenezės aktyvinimas yra perspektyvi strategija pacientams, sergantiems insultu, siekiant pagerinti jų neurologines funkcijas. Neurogenezė tiesiogiai dalyvauja atkuriant neurologinę funkciją po smegenų I/R pažeidimo. Ankstesni tyrimai rodo, kad TG gali pagerinti hipokampo piramidinių ląstelių išgyvenamumą ir sukelti neurogenezę. Oksidacinis stresas sukelia neuronų praradimą daugelio ligų, tokių kaip Parkinsono liga, insultas ir pan., metu. Nrf{0}} transkribuoja daugybę genų, susijusių su neuro apsauga jų promotoriaus srityje, daugiausia įskaitant SOD, MDA, CAT ir g-glutamilo cisteino ligazes ir kt. SYN, PSD-95 ir MAP{{ 4}} baltymai, kurie yra glaudžiai susiję su sinapsiniu formavimusi ir neurotransmisija, gali būti laikomi tiriamojo neuronų plastiškumo žymenimis išeminėje penumbra srityje. Ištyrę nustatėme, kad gydymas TG gali žymiai padidinti PSD95, SYN ir MAP -2 išraiškas, o tai rodo, kad TG smegenų apsauga buvo koreliuojama su padidėjusiu neuronų plastiškumu I/R metu. Tačiau gaila, kad nėra akivaizdaus skirtumo tarp PS ir OS grupių. Šie rezultatai parodė, kad TG gali sustiprinti neuroplastiškumą po smegenų I / R pažeidimo.

Insultą patyrusių pacientų vaizdiniai tyrimai parodė, kad BBB disfunkcija gali būti laikoma ryškiu periišeminių smegenų požymiu (Bang ir kt., 2007). TJ, kuriuos sudaro citoplazminiai baltymai, transmembraniniai baltymai ir jungties adhezijos molekulės tarp kapiliarinių endotelio ląstelių, yra labai svarbūs palaikant BBB vientisumą (Ye ir kt., 2019). Tarp jų ZO-1, claudin-5 ir okludinas yra svarbiausi TJ baltymai. Daugėja įrodymų, kad išemijos sukeltas padidėjęs BBB pralaidumas paprastai koreliuoja su ZO-1, claudin-5 ir okludino pokyčiais (Cao ir kt., 2016a; Page ir kt., 2016; Yu ir kt., 2017; Liu ir kt., 2018). Šio darbo rezultatai parodė, kad nors TG gali žymiai padidinti ZO-1, claudin-5 ir okliudino baltymų ekspresiją MCAO sukeltuose smegenų audiniuose, nei PS, nei OS to nepadarė. BBB susideda iš smegenų endotelio ląstelių ir yra glaudžiai susijusi su pericitais (Nyul-Toth ir kt., 2016). Pericitai yra gyvybiškai svarbūs BBB vientisumui (Bell ir kt., 2010). Išeminis insultas sukelia pericitų mirtį ir atsiskyrimą nuo smegenų endotelio ląstelių ūminėje fazėje, taip destabilizuodamas mikrokraujagysles ir pakeisdamas BBB savybes (Zechariah ir kt., 2013). Mūsų duomenys parodė, kad TG gali padidinti pericitų aprėptį kapiliaruose ir padidinti ZO-1, claudino-5 ir okliudino ekspresijos lygius. Šie reiškiniai įrodė, kad TG gali veiksmingai apsaugoti BBB vientisumą po smegenų I/R sužalojimo. Apibendrinant galima pasakyti, kad TG gali susilpninti smegenų pažeidimą įvairiais būdais, pavyzdžiui, skatinti angiogenezę, pagerinti neuronų plastiškumą ir išlaikyti BBB vientisumą.

Tada ištyrėme signalizacijos kelią, kad ištirtume TG smegenų apsaugos mechanizmą. I/R pažeidimo procesas yra daugiafaktorinis, todėl patogenezėje dalyvauja daugybė mechanizmų. Oksidacinis stresas yra pagrindinis rizikos veiksnys, prisidedantis prie I/R sukelto smegenų pažeidimo, pvz., BBB struktūros pažeidimo, kraujagyslių endotelio disfunkcijos ir išeminio neuronų pažeidimo pasunkėjimo. Taigi, oksidacinis stresas tapo patraukliu terapiniu taikiniu I / R sukelto smegenų pažeidimo atveju. 2 fazės fermentai, tarpininkaujantys su branduoliniu faktoriumi E 2-susijęs faktorius-2 (Nrf-2), buvo laikomi svarbia priemone, kuria neuronai apsisaugo nuo oksidacinio streso. Daugėja įrodymų, kad Nrf -2 aktyvinimas I/R metu yra galimas terapinis neuroprotekcijos taikinys. Nrf-2, kaip svarbus endogeninės antioksidacinės gynybos reguliatorius, tarpininkauja hemo oksigenazės 1 (HO-1) ir kitų antioksidantų fermentų, pvz., NAD(P)H chinono oksidoreduktazės 1 (NQO1), lygiui. SOD, CAT, GSH ir MDA. Be to, Nrf{12}} atlieka svarbų reguliatoriaus vaidmenį angiogenezėje. Šis tyrimas rodo, kad Nrf{13}} gali būti žymiai sustiprintas ir suaktyvintas kraujagyslių vystymosi procese.

NATŪRALUS CISTANCHE TUBULOSA, skirtas ANTIIZEMINIAM INDUSTELIUI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Kaip aprašyta anksčiau, TG yra daug biologiškai aktyvių junginių, pavyzdžiui, echinakozido, tubulozido A, akteozido, izoakteozido ir 2'-acetillakteozido, o kai kurie iš jų parodė neuroprotekcines funkcijas po smegenų I / R pažeidimo. Echinakozidas turi daug farmakologinių poveikių, pavyzdžiui, antioksidacinį, senėjimą stabdantį, neuroprotekcinį, priešuždegiminį, nuovargio, hepatoprotekcinio, kaulų formavimosi ir priešnavikinį poveikį. Neseniai echinakozidas buvo nustatytas kaip stiprus antioksidantas centrinėje nervų sistemoje. Echinakozidas gali sumažinti MDA kiekį ir pagerinti SOD ir GSH-Px veiklą esant išeminiam smegenų pažeidimui, o molekulinės prijungimo analizė parodė, kad echinakozidas gali prisijungti prie Keap-1, o tai lemia Nrf-2 branduolio translokaciją. Xia atliktas tyrimas parodė, kad akteozidas gali sumažinti infarkto tūrį ir smegenų vandens kiekį, kad pagerintų MCAO/R žiurkių neurologinį trūkumą, sumažindamas oksidacinį stresą. Kiti tyrimai parodė, kad izoakteozidas gali padidinti ląstelių antioksidantų fermentų, SOD ir CAT aktyvumą H2O2-apdorotose V{10}} ląstelėse. Remiantis aukščiau pateiktomis ataskaitomis apie aktyvius junginius, esančius TG, galima daryti išvadą, kad TG galiapsaugo nuo išeminio insulto per antioksidacinius kelius.

Li pranešė apie feniletanoidinių glikozidų (PhG) neuroprotekcinį poveikį H2O2- sukeltai apoptozei PC12 ląstelėse per Nrf2/ARE kelią (Li ir kt., 2018). Šie PhG buvo reikšmingai slopinami suaktyvinus Nrf2 branduolio translokaciją ir padidinus HO-1, NQO1, glutamato cisteino ligazės-katalizinio subvieneto (GCLC) ir glutamato-cisteino ligazės modifikatoriaus subvieneto (GCLM) ekspresiją (Li ir kt., 2018). Gong ir kt., 2019). Todėl šie radiniai rodo, kad Nrf-2/ARE kelias vaidina lemiamą vaidmenį PhGs tarpininkaujamam apsauginiam poveikiui neuronų ląstelėms. Panašiai, šiame tyrime mes nustatėme, kad TG gali sumažinti MDA lygį ir padidinti SOD, CAT ir GSH-Px lygį I / R žiurkėse. Tuo tarpu TG gali reguliuoti Nrf2 ekspresiją branduolyje, sumažinti atitinkamą ekspresiją citoplazmoje ir žymiai sumažinti Keap{16}} ekspresiją. Todėl Nrf-2/Keap-1 kelias gali būti susijęs su TG tarpininkaujamu neuroprotekciniu poveikiu. Tolesnis šio kelio patvirtinimas bus atliktas in vitro ląstelių kultūroje, naudojant deguonies ir gliukozės trūkumo / reoksigenacijos sužalojimo modelius. Be to, mūsų tyrime C. deserticola ekstraktai buvo vartojami 14 dienų nepertraukiamai. Kadangi suaugusiųjų neurogenezė paveiktų neuroprotekcinio poveikio aiškinimą per 14 reperfuzijos dienų, neurogenezės negalima atmesti iš mūsų dabartinio eksperimento plano tiriant neuroprotekcinį KT poveikį. Tai yra mūsų tyrimo apribojimas.

Apibendrinant galima pasakyti, kad tai gali būti C. deserticola TGsustiprinti angiogenezę ir neurogenezętaip pat išlaikyti BBB vientisumą I/R sužeistoms žiurkėms, bet ne PS ir OS. Poveikis gali atsirasti suaktyvinus Nrf{0}}/Keap-1 kelią.

NATŪRALUS CISTANCHE VABULYS, SKIRTAS GYDYTI IŠEMINIAM INsultui PHGS75% ECH 30% ACT 12%