Cassia Spectabilis DC etanolinio lapų ekstrakto toksikologinis įvertinimas ir apsauginis poveikis Plasmodium Berghei infekuotų pelių kepenų ir inkstų funkcijai
Oct 30, 2023
1. Įvadas
Iki šios dienos problemaPlasmodiumparazitų atsparumas esamiems vaistams nuo maliarijos vis dar yra pagrindinė maliarijos likvidavimo problema [1–3]. todėl ir toliau atliekami naujų vaistų nuo maliarijos šaltinių, kurių vienas yra iš vaistinių augalų, atradimo tyrimai [4].In vivoirin vitromodeliai jau seniai naudojami antimalariniams tyrimams. XX amžiaus antroje pusėje,Plasmodium bergheiarbaPlasmodium yoeliibuvo naudojamas graužikams užkrėsti. Tuo tarpuP. bergheitapo dažniausiai naudojama rūšimi tiriant kepenų stadiją, ypač hipnozoito susidarymui maliarijos pasikartojimui tirti [5–7].
SPUSTELĖKITE ČIA, KAD GAUTI ŽOLELĖS CISTANCHE FORMUOTI INKSTS
Vienas iš tradicinių Indonezijos augalų, Caesalpiniaceae šeimos Cassia spectabilis DC, buvo eksperimentiškai įrodytas in vitro prieš P. falciparum ir gydant maliarija in vivo nuo P. berghei [8, 9], o tai rodo, kad C. spectabilis DC augalas yra gali būti toliau tobulinamas kaip kandidatas į vaistus nuo maliarijos. Ankstesniuose darbuose buvo pranešta, kad 90 % etanolinio C. spectabilis DC lapų ekstrakto bandymas su P. berghei ANKA su BALB/c pelėmis parodė, kad ED50 vertė buvo 131,5 mg/kg KM [9], ir ji priskiriama labai kategorijai. geras antimalarinis aktyvumas [10].
Be to, C. spectabilis DC ekstraktas, frakcijos, subfrakcijos ir izoliuoti junginiai buvo tiriami in vitro dėl jų antimalarinio aktyvumo. *Šio augalo aktyvus junginys buvo sėkmingai identifikuotas kaip junginys, identiškas (–){0}}hidroksikassinui, o jo antimalarinio aktyvumo in vitro tyrimas parodė labai žemą IC50 – 0,016 ug/mL [ 11], kuri priskiriama labai stipriam antimalariniam poveikiui [12].
Šio augalo tyrimai, siekiant įveikti atsparumą maliarijos vaistams, buvo tęsiami tiriant C. spectabilis DC lapų ekstrakto gerinimo saugumą ir poveikį kepenų ir inkstų funkcijoms P. berghei ANKA infekuotoms pelėms. Plačiai atliekami vaistinių augalų, turinčių antimalarinį poveikį, poveikio parazitais užkrėstų pelių kepenų ir inkstų funkcijoms tyrimai [13–16], taip pat ūmaus ir poūmio toksiškumo tyrimai [17–20]. Kepenys vaidina svarbų vaidmenį reguliuojant fiziologinius procesus. yra organas, dalyvaujantis daugelyje gyvybiškai svarbių funkcijų, tokių kaip metabolizmas, sekrecija ir saugojimas. Be to, kepenys atlieka svarbų vaidmenį detoksikuojant ir pašalinant endogeninius ir egzogeninius junginius [21–24].
Maliarinė infekcija prasideda, kai sporozoidus užsikrečia maliariniu parazitu užkrėstos patelės Anopheles uodo įkandimas. Maitinant krauju, užkrėstos Anopheles patelės suleidžia parazito sporozoitinę stadiją [25, 26]. Po maždaug valandos kelionės žmogaus kūne sporozoitai patenka į kepenis, atakuoja hepatocitus ir pradeda nelytinį egzoeritrocitinės šizogonijos ciklą. Kepenų ląstelėse parazitai dauginasi nelytiškai, kol pasiekia brandų šizontą, o galiausiai daug merozoitų gamina ir patenka į kraują po užkrėstų hepatocitų sprogimo. *Infekuoti hepatocitai, sukeliantys kepenų pažeidimą dėl infekuotų hepatocitų ir merozoitų plyšimo, patenka į kraują ir pradeda eritrocitų ciklą raudonuosiuose kraujo kūneliuose [27, 28]. Pažeidus kepenų ląsteles, gali padidėti kepenų funkciją veikiančių fermentų, ypač transaminazių, aktyvumas ir morfologiniai kepenų išvaizdos pokyčiai [29, 30], pvz., hepatomegalija. Hepatosplenomegalija yra dažnas žmonių [31] ir pelių [32] maliarinės infekcijos požymis, kurį sukelia lėtinis maliarijos parazitų poveikis. Tačiau inkstai nepadidėja sergant maliarijos infekcija.
Kepenų funkcijos sutrikimas gali būti nustatytas atliekant plazmos glutamo oksaloacto transaminazės (SGOT) ir plazmoje išsiskiriančios glutamo piruvinės transaminazės (SGPT) kepenų ląstelių transaminaciją arba histologinį audinio tyrimą [33]. Dažniausia žala yra apoptozinės ląstelių mirties suaktyvėjimas arba hepatocitų nekrozė [34–36]. Kliniškai reikšmingas inkstų pažeidimas yra susijęs su P. falciparum ir P. malariae infekcija. *P. falciparum infekcija sukelia ūmius pasireiškimus: nuo besimptomių iki šlapinimosi sutrikimų ir lengvų elektrolitų sutrikimų, susijusių su ūminiu inkstų nepakankamumu (ARF) arba ūminiu inkstų pažeidimu (AKI), kuriems reikalinga dializės pagalba [27, 37]. *Žinoma, kad AKI atvejai maliarijos komplikacijos metu prisideda prie didelio mirtingumo lygio, kuris sudaro apie 75% atvejų. *Histologinis tyrimas rodo, kad glomerulonefritas, ūminė kanalėlių nekrozė ir intersticinis nefritas yra pagrindinis su maliarija susijusios AKI hemodinaminis veiksnys [38]. Paprastai inkstų funkcijos sutrikimo laipsnį galima nustatyti pagal pakankamą baltymų kiekį šlapime ir padidėjusį šlapalo, kreatinino ir plazmos elektrolitų kiekį [39].
*90 % etanolinio C. spectabilis DC (EECS) lapų ekstrakto toksiškumas BALB/c pelėms, po kurio atliekami fermentų tyrimai, gali turėti įtakos histopatologijai ir kepenų bei inkstų funkcijoms po EECS vartojimo.
2. Medžiagos ir metodai
2.1. Augalinė medžiaga ir EECS paruošimas. *e C. spectabilis
DC lapai buvo įsigyti ir nustatyti LIPI (Indonezijos tyrimų centre), Botanikos sode, Purwodadi mieste, Rytų Java, Indonezija (B-160/IPH.06/KS.02/III/ 2019). *Pavyzdys buvo deponuotas kaip herbariumas Airlangos universiteto Farmacijos fakulteto Farmakognozijos ir fitochemijos katedroje. * Lapai buvo kruopščiai nuplauti vandeniu iš čiaupo, kad būtų pašalinti pašaliniai teršalai, išdžiovinti 45 laipsnių temperatūroje ir trintuvu sumalti į miltelius. *Estrahavimas buvo atliktas maceruojant miltelius augalines medžiagas (500 g) kolboje, kurioje yra 2500 ml 90% etanolio (25–30 laipsnių temperatūroje), 3 × 24 valandas. * Ekstrahavimo tirpiklis buvo atskirtas, filtruojamas per filtravimo popierių ir išgarinamas sumažintame slėgyje rotaciniu garinimu. *Etanolio ekstrakto išeiga iš 1000 g džiovintų C. spectabilis DC lapų miltelių masės buvo 10,20% (m/m) ir buvo naudojamas šiame eksperimente.
2.2. Gyvūnai.
Tyrime buvo naudojami 6–8 savaičių amžiaus BALB/c pelių patinai, sveriantys 25–30 g. Visos pelės buvo gautos iš Farma veterinarijos centro, Gyvulininkystės ir gyvūnų sveikatos generalinio direktorato Žemės ūkio ministerijos, Surabaya, Rytų Java, Indonezija. * Gyvūnai buvo laikomi standartinėmis sąlygomis ir šeriami pradiniu maistu ir vandeniu ad libitum. *Tyrimo protokolo patvirtinimas gautas iš gyvūnų tyrimų etikos komiteto, Universitas Air langga, Indonezija, numeris 2.KE.181.10.2018.
2.3. Ūmaus toksiškumo testas.
EECS buvo pasvertas ir resuspenduotas su 0,5 % natrio karboksimetilceliulioze (Na CMC), kad gautų norimas dozes. BALB/c pelės buvo nevalgiusios 24 valandas prieš maitinamos ekstraktu. * Gyvūnai buvo suskirstyti į tris grupes, kurių kiekvienoje buvo po penkias peles. *e dozės kiekvienai grupei buvo 1250; 2500; ir atitinkamai 5,000 mg/kg KM. Bendras kiekvienos pelės elgesys buvo nuolat stebimas vieną valandą po kiekvienos dozės, su pertraukomis kas keturias valandas, o vėliau per 24 valandas [40–42].
2.4. Poūmio toksiškumo testas.
Atliekant poūmio toksiškumo testą, pelės buvo suskirstytos į tris grupes ir kiekviena grupė buvo gydoma EECS vienu metu, penkis kartus ir dešimt kartų po 150 mg/kg KM paros doze 28 dienas; normaliai kontrolinei grupei buvo duodama tik maisto ir gėrimų ad libitum [43]. * 28 dienas gyvūnai buvo stebimi dėl bet kokių toksiškumo požymių. Stebėjimo laikotarpio pabaigoje visi gyvūnai buvo paaukoti taikant eterinę anesteziją, o gyvybiškai svarbūs organai, tokie kaip kepenys ir inkstai, buvo pašalinti iš visų gyvūnų, kad būtų atlikti bendri ir histopatologiniai tyrimai.
2.5. Graužikų parazitas.
Plasmodium berghei ANKA chlorokvino jautrumas buvo gautas iš Biomolekulinio Eijkmano instituto, Džakartoje, Indonezijoje, ir palaikomas serijiniu būdu, kuris buvo naudojamas šiame tyrime.
2.6. EECS poveikis SGOT ir SGPT plazmos lygiui.
*is eksperimentas buvo slopinamasis testas, pagrįstas Petersu [44]. *Ar slopinamasis testas buvo atliktas prieš EECS vertinimą dėl SGOT ir SGPT koncentracijos plazmoje. *e gyvūnai buvo užkrėsti P. berghei ANKA ir suskirstyti į penkias A, B, C, D ir E grupes. *e gyvūnai buvo gydomi netrukus po užsikrėtimo 0 dieną (D{2}}) ir tęsiamas kasdien tris dienas (D1–D3). A grupė kaip neigiama kontrolė gavo 0,5% Na CMC per burną. B ir C grupėms, kaip gydomoms grupėms, buvo skirta viena 150 ir 200 mg/kg kūno svorio EECS dozė. D grupė buvo teigiama kontrolė, gavus vieną 100 mg/kg kūno svorio chlorokvino dozę. Be to, E grupė, kaip sveika kontrolė, nebuvo užsikrėtusi parazitais ir jai buvo duodamas tik maistas ir gėrimai ad libitum. Ketvirtą dieną (D4) buvo paruošti kiekvienos pelės kraujo tepinėliai ir ištirti mikroskopu. Be to, plazma buvo surinkta prieš matuojant SGOT ir SGPT lygius.
2.7. EECS poveikis kepenų ir inkstų histopatologijai.
Stebėjimo laikotarpio pabaigoje visi gyvūnai buvo numarinti taikant eterio anesteziją prieš pašalinant kepenis ir inkstus. Pasvėrus organus, audiniai buvo fiksuoti 10% formaldehido tirpale ir toliau apdoroti hematoksilino-eozino (H&E) dažymui. *atliktas histopatologinis stebėjimas, siekiant išsiaiškinti EECS toksikologinį poveikį degeneracinėms ir nekrozinėms audinių ląstelėms. * Žala buvo įvertinta remiantis Gibson-Corley ir kt. [45].
2.8. Statistinė analizė.
*e duomenys buvo pateikti kaip vidurkis ± standartinis nuokrypis (SD). Vienpusė dispersijos analizė (ANOVA) buvo naudojama normaliai paskirstytiems duomenims tarp gydymo būdų palyginti, po to buvo atliktas post hoc kartotinis palyginimo testas, kai buvo gauta skirtinga reikšmė. Kai duomenys nebuvo paskirstyti įprastai, gydymo skirtumams įvertinti buvo naudojamas Kruskal-Wallis ir Mann-Whitney U testas.
„Wecistanche“ – didžiausio cistansų eksportuotojo Kinijoje – pagalbinė tarnyba:
El. paštas:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp / Tel:+86 15292862950
Įsigykite daugiau specifikacijų:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
