Šlapimo rūgšties mažinimas ir akteozido bei echinacosido, ekstrahuoto iš cistanche tubulosa, mechanizmas
Mar 03, 2025
Anotacija:Siekite ištirti šlapimo rūgšties mažinantį akteozido (AS) ir echinacosido (ECH), išgauto išCistanche tubulosa.
MetodaiHiperuricemijos (HUA) žiurkių modelis buvo sukurtas naudojant kalio oksonatą (1,5 g · kg -1 · d -1) kartu su adeninu (100 mg · kg {{5 {5}} · d -1). The HUA model rats were randomly divided into a model control group, an allopurinol group (30 mg·kg-1·d-1 ), AS low and high (50, 100 mg·kg-1·d-1 ) dose groups, and ECH low and high (50, 100 mg · kg -1 · d -1) dozės grupės. Anksčiau buvo sukurta normali kontrolės grupė. Po keturių vartojimo savaičių kraujo biochemijos analizatorius buvo naudojamas aptikti SUA karbamidą, krea, adenozino deaminazę (ADA) ir šlapimo rūgšties (UUA) kiekį šlapime. Ksantino oksidazės (XOD) lygiui serume buvo naudojamas fermentų sujungtas imunosorbentų tyrimas. Inkstų audinys buvo surinktas, o inkstų koeficientas buvo pasveriamas ir apskaičiuotas. Hematoksilino eozino (HE) dažymas buvo naudojamas stebėti inkstų patologinius pokyčius. Imunohistochemija (IHC) ir realaus laiko PGR buvo naudojami aptikti urato pernešėjo 1 (URAT1), 9 -osios gliukozės pernešėjo 9 (GLUT9), organinio anijonų pernešėjo 1 (OAT1) ir organinių anijonų pernešėjo 3 (OAT3) baltymų ir mRNR ekspresijos lygį inkstų audinyje. Rezultatai ir ECH galėtų pagerinti inkstų funkciją HUA modeliuose žiurkėms, sumažinti šlapimo rūgšties kiekį kraujyje, skatinti šlapimo rūgšties išsiskyrimą, sumažinti ADA ir XOD serumo kiekį serume ir padidinti URAT1 ir GLUT9 baltymų ir mRNR ekspresiją inkstų audinyje, tuo pačiu padidindami baltymų ir mRNR ekspresiją OAT1 ir OLO3 inkstiniame audinyje.
Išvados Feniletoidiniai glikozidai ir ECH iš Cistanche tubulosa gali sukelti šlapimo rūgšties mažinimo poveikį, pagerindama inkstų funkciją HUA modeliui žiurkėms, sumažinant ADA ir XOD lygį ir reguliuojant URAT1, GLUT9, OAT1 ir OAT3 raišką.
Pagrindiniai žodžiai: cistanche tubulosa; akteozidas; Echinacosidas; hiperurikemija; Šlapimo rūgšties redukcija; mechanizmas
Cistanche tubulosa ekstraktas su 16% akteozidu
Hiperurikemija (HUA) yra metabolinė liga, kurią sukelia netvarkingas purino metabolizmas žmogaus organizme, dėl kurio padidėjo šlapimo šlapimo rūgšties kiekis kraujyje [1]. Paprastai diagnozuojama, kai šlapimo rūgšties kiekis kraujyje viršija 7. 0 mg · dl⁻¹ (416. 0 μmol·l⁻¹) vyrams ir 6. 0 mg · dl⁻¹ (357. Hiperurikemijos vystymasis visų pirma yra susijęs su tokiais veiksniais kaip dietos, turinčios daug puokštų, lėtinio alkoholio vartojimo, vaistų vartojimo ir hipotiroidizmo. Tai ne tik padidina širdies ir kraujagyslių ligų, diabeto ir hipertenzijos [3-4] riziką, bet ir daro didelę įtaką pacientų sveikatai.
Šiuo metu klinikinis hiperurikemijos gydymas daugiausia apima vaistus, kurie slopina šlapimo rūgšties gamybą ir skatina šlapimo rūgšties išsiskyrimą. Tačiau šie gydymo būdai turi tam tikrų apribojimų pacientams, kuriems sutriko kepenų ar inkstų funkcija [5-6]. Todėl veiksmingi vaistai, turintys mažą šalutinį poveikį, turi didelę reikšmę hiperurikemijos prevencijai ir gydymui.
Cistanche tubulosa (Schenk) R. Wight, paprastai naudojama tradicinėje kinų medicinoje kaip inkstų tonizuojanti žolė, naudojama tokioms ligoms kaip impotencija, nevaisingumas, esmės ir kraujo trūkumas, apatinės nugaros dalies ir kelių silpnumas, raumenų silpnumas ir vidurių užkietėjimas dėl žarnyno sausumo [7]. Tyrimai tai parodėCistanche tubulosaTuri neuroprotekcinį [8], priešuždegiminį [9], kaulų metabolizmą reguliuojantį [10] ir efektyvumą gerinantį poveikį chemoterapijai vėžiu sergantiems pacientams [11]. Tarp įvairių aktyviųjų komponentų feniletanoidiniai glikozidai yra gausiausi.
Acteozidas (AS) ir echinacosidas (ECH) - du feniletanoidiniai glikozidai, kurių kiekis yra didelisCistanche tubulosa, pasižymi stipriu biologiniu aktyvumu ir turi didelį vystymosi ir taikymo potencialą. Todėl mūsų tyrimų grupė pasirinko AS ir ECH, kad būtų galima atlikti tolesnius tyrimus. Per tinklo farmakologijos prognozes ir pelių išankstinius eksperimentus mes sužinojome, kad feniletanoidiniai glikozidų ekstraktai išCistanche tubulosaGali turėti tam tikrą šlapimo rūgštį mažinantį poveikį. Tačiau šių padarinių keliai ir mechanizmai išlieka neaiškūs.
Taigi, naudodamiesi šlapimo rūgšties gamybos mechanizmais ir jos pirminio išsiskyrimo keliais, kaip dėmesys skiriamas tyrimams, mes ištyrėme šlapimo rūgštį mažinantį feniletanoidų glikozido ekstraktų poveikį ir ECH. Šiuo tyrimu siekiama išsiaiškinti kelius ir mechanizmus, per kuriuos AS ir ECH daro savo šlapimo rūgštį mažinantį poveikį.
1 medžiagos
1.1 Eksperimentiniai gyvūnai
Septyniasdešimt SPF klasės „Sprague-Dawley“ (SD) žiurkių, sveriančių 150–180 g, buvo įsigyti iš Xinjiang medicinos universiteto eksperimentinio gyvūnų centro. Gyvūnų gamybos licencijos numeris: SCXK (Xin) 2023-0001. Šį eksperimentą patvirtino Xinjiango autonominio regiono Uygur medicinos tyrimų instituto gyvūnų etikos komitetas, kurio gyvūnų etikos patvirtinimo numeris: Iacuc- (Zhun) -2024-009.
1.2 Narkotikai ir reagentai
Feniletanoidiniai glikozidų ekstraktai (kaip ir Ech)nuoCistanche tubulosa (purity >98%, patikrinta aukšto našumo skysčių chromatografija) buvo išgauti, išgryninti ir paruošti pagrindinėje Uyguro formuluotės mokslo laboratorijoje, Xinjiang autonominio regiono Uygur medicinos tyrimų institute. Siektų partijų numeriai: 20220617 (AS) ir 20220526 (ECH).
Alopurinolio tabletės, partijos numeris: 62208726, pagamino Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co., Ltd.
Kalio oksonatasirAdeninas, partijų numeriai: I2130050 ir C2202255, įsigyti iš Šanchajaus „Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.“.
Crea (kreatininas), UA (šlapimo rūgštis), karbamidas ir ADA (adenozino deaminazės) tyrimų rinkiniai, partijų numeriai: 141123010, 141223004, 141323008 ir 043624005, įsigyti iš „Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.“.
XOD (ksantino oksidazės) aktyvumo tyrimo rinkinys, partijos numeris: Y10001219, įsigytas iš Šanchajaus „Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.“.
Antikūnai (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3), partijos numeriai: 3i5723 0, 92f0296/4, 0f33081/2I44618, įsigyti iš „Affinity Biosciences“.
HRP pažymėta ožkos anti-triušio IgG, partijos numeris: 245440113, įsigytas iš ZSGB-BIO.
Hematoksilino dažymo tirpalas, partijos numeris: 24135741H, įsigytas iš Pekino „Lanjieke Technology Co., Ltd.“.
DAB chromogeninio reagento rinkinys, partijos numeris: 240010512, įsigytas iš ZSGB-BIO.
DEPC (dietilo pirokarbonatas), katalogo numeris: D 60029-500 ml, įsigytas iš „Amresco“ (JAV).
„M5 Hiclear DL2000“ DNR žymeklis, Katalogo numeris: MF025, įsigytas iš Pekino „Genomics Biotechnology Co., Ltd.“.
„Trizol ™“ reagentas, Katalogo numeris: 15596026, įsigytas iš „Thermo Fisher Scientific“ (JAV).
5x viskas viename „RT Mastermix“ir„Evagreen Express 2 × qPCR Mastermix-Low Rox“, Katalogo numeriai: G492 ir G891, abu įsigyti iš „Applied Biological Materials Inc.“ (ABM).
2 metodai
2.1 Modelio įkūrimas ir grupavimas
Septyniasdešimt patinų „Sprague-Dawley“ (SD) žiurkės buvo aklimatizuotos ir suskirstytos į dvi grupes: normalią kontrolinę grupę (1 0 žiurkės) ir modelio kontrolinę grupę (60 žiurkių). Normaliai kontrolinei grupei buvo skiriama 0,5% cmc-na per gavtą. Modelio kontrolinei grupei buvo skiriamas kalio oksonatas (1,5 g · kg⁻¹) kartu su adeninu (100 mg · kg⁻¹), kurio dozė yra 10 ml · kg⁻¹, vieną kartą per parą 14 dienų iš eilės. Modelis buvo sėkmingai nustatytas, kai karbamido, krea ir SUA lygis žymiai padidėjo, matuojant biocheminiu analizatoriumi.
The hyperuricemia model rats were further divided into the following groups based on SUA, UREA, and CREA levels: model control group, allopurinol group (30 mg·kg⁻¹), low-dose AS group (50 mg·kg⁻¹), high-dose AS group (100 mg·kg⁻¹), low-dose ECH group (50 mg·kg⁻¹), and high-dose ECH Grupė (100 mg · kg⁻¹), kiekvienoje grupėje su 10 žiurkių. Norint palaikyti stabilią hiperurikemiją, visoms grupėms, išskyrus normalią kontrolinę grupę, buvo skiriamas kalio oksonatas (500 mg · kg⁻¹) kartu su adeninu (100 mg · kg⁻¹) per rytą, po to po pietų po pietų vartojant atitinkamus vaistus kiekvienoje gydymo grupėje. Normali kontrolinė grupė ryte gavo 0,5% CMC-NA tirpalą ir geriamą vandenį po pietų po 10 ml · kg⁻¹ dozės, vieną kartą per parą 14 dienų iš eilės. Vėliau buvo sustabdytas modeliavimo agentų skyrimas, o atitinkami vaistai buvo nuolat vartojami kasdien dar 14 dienų.
2.2 Mėginių rinkimas
Po galutinės dozės žiurkės buvo pasninko per naktį (vanduo nebuvo apribotas). Kiekvienos grupės šlapimas buvo surinktas šlapimo rūgšties tyrimui. Kūno svoris buvo matuojamas po pasninko, o kraujo mėginiai buvo paimti atliekant anesteziją. Serumas buvo atskirtas centrifugavimo metu ir saugomas naudoti ateityje. Inkstų audiniai buvo surinkti ir pasverti. Vienas inkstas buvo fiksuotas 4% paraformaldehido tirpale, o kitas buvo užfiksuotas skysto azoto užšaldytame skystame azote.
2.3 Šlapimo rūgšties matavimas žiurkių šlapime
Kiekvienos grupės šlapimo mėginiai buvo centrifuguoti (3, 000 r · min⁻¹, 10 min., Centrifugos spindulys 14 cm), o supernatantas buvo surinktas. Šlapimo mėginiai buvo praskiedžiami 1: 9 druskos tirpalu ir išanalizuoti šlapimo rūgšties kiekiui, naudojant biocheminį analizatorių.
2.4 ADA, karbamido, krea ir SUA matavimas žiurkių serume
Kiekvienos grupės kraujo mėginiai buvo centrifuguoti (3, 000 r · min⁻¹, 10 min., Centrifugos spindulys 14 cm) ir buvo surinkti serumas. ADA, karbamido, krea ir SUA lygis serume buvo matuojamas naudojant biocheminį analizatorių.
2.5 XOD matavimas žiurkės serume
XOD lygio pokyčiai žiurkių serume buvo išmatuoti naudojant fermentinį tyrimą pagal gamintojo instrukcijas. Buvo užregistruota pradinė absorbcija (A₁) ir galutinė absorbcija (A₂) esant 290 nm, o ΔA (ΔA =} - A₁) buvo apskaičiuotas. ΔA buvo pakeista į formulę:
XOD (nMol⁻¹ · min⁻¹ · ml⁻¹)=[ΔA × reakcijos sistema Bendras tūris ÷ (šlapimo rūgšties × optinio kelio ilgis) × 10⁹] × 10⁹] ÷ mėginio tūris ÷=4262}}}}} × ΔA koeficientas,
Norint apskaičiuoti šlapimo rūgšties kiekį, katalizuojamo per minutę per mililitrą serume.
2.6 Inkstų koeficiento matavimas
Inkstų audiniai buvo surinkti, plaunami druskos tirpalu, o vandens perteklius pašalinamas. Organų svoris buvo tiksliai išmatuotas, o inkstų koeficientas buvo apskaičiuotas taip:
Inkstų koeficientas=inksto svoris (mg) / kūno svoris (G).
2.7 Histopatologinis inksto audinio stebėjimas HE dažant
Inkstų audiniai, pritvirtinti 4% paraformaldehido tirpale, buvo dehidratuoti su laipsniškomis etanolio koncentracijomis, išvalytomis ksilenu, įterptas į parafiną ir suskirstytas į 4- μm griežinėlius. Skyriai buvo deparafinuoti ksilenu, hidratuoti su rūšiuojamu etanoliu, dažyti hematoksilinu ir eozinu (HE) ir užklijuotos neutralia guma. Morfologiniai inkstų audinių pokyčiai buvo stebimi šviesos mikroskopu, o vaizdai buvo užfiksuoti 400 kartų padidinimu.
2.8 URAT1, GLUT9, OAT1 ir OAT3 baltymų ekspresijos nustatymas inkstų audinyje IHC
Inkstų audiniai, pritvirtinti 4% paraformaldehido tirpale, buvo dehidratuoti su laipsniškomis etanolio koncentracijomis, išvalytomis ksilenu, įterptas į parafiną ir padalintas. Buvo atliktas antigeno gavimo ir ožkos serumo blokavimas. Pirminiai antikūnai (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) buvo pridedami praskiedžiant 1: 200 ir inkubuojami per naktį 4 laipsniais. Kitą dieną sekcijos buvo plaunamos PBS, džiovintais orais ir inkubuojamos su biotinu pažymėta ožkos anti-triušio IgG 37 laipsniais 30 minučių. Skyriai buvo plaunami PBS ir 10 minučių inkubuotos su DAB chromogeniniu reagentu, po to PBS skalaujama, 3 minutes - hematoksilino dažymas, diferenciacija su druskos rūgšties etanolio tirpalu, ličio karbonato kraujavimas, dehidratacija su gradiento etanoliu, išvalyti su xylen ir neutraliomis gumomis.
Kiekvienai žiurkei buvo parinkti du atsitiktiniai 4 0 0 × inkstų sekcijų laukai. Buvo išanalizuotas teigiamas dažymas (ruda geltona spalva), o kiekvieno lauko integruotas optinis tankis (IOD) buvo matuojamas naudojant „Image-PRO Plus 6.0“ statistinei analizei.
