Šlapimo metabolizmas rodo nenormalų atsigavimą po maksimalaus fizinio krūvio pacientėms, sergančioms ME/CFS, 3 dalis

Kodėl būsime pavargę? Kaip galime išspręsti nuovargio problemas?

【Susisiekite】 El. paštas: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501

3. Diskusija

Tai pirmas kartas, kai ME / CFS pacientų šlapimo metabolizmas buvo apibūdintas prieš ir po fizinio krūvio, kai ME / CFS pacientai patiria PEM. Daugelis šių metabolitų niekada anksčiau nebuvo matuojami pacientams, sergantiems ME/CFS, nes ankstesniuose šlapimo metabolomikos tyrimuose su ME/CFS buvo nustatyta mažiau nei 50 metabolitų, o dabartiniame tyrime buvo išmatuotas 1403. Be to, naudojant sėdimą sveiką kontrolę fizinio aktyvumo lygis, kuris gali turėti įtakos pradiniam ir po treniruotės metabolitų lygiui, yra pagrindinis dabartinio tyrimo plano pranašumas, kuris nebuvo panaudotas ankstesniuose tyrimuose. Mūsų rezultatai parodė, kad praėjus 24 valandoms po fizinio krūvio kontrolinių žmonių šlapime metabolitų kiekis padidėjo, o tai nebuvo pastebėta ME/CFS sergantiems pacientams, o 110 šių junginių turi reikšmingą sąveiką tarp ligos būklės (ME/CFS arba kontrolinės). ) ir laikas (pradinis lygis ir po pratimo) (papildomas S2 paveikslas). Be daugybės metabolitų kiekio šlapime analizių, koreliuojantis metabolitų kiekis šlapime ir plazmoje davė papildomų įrodymų apie metabolinį sutrikimą ME / CFS pacientams po treniruotės. Ši analizė pateikė papildomų įrodymų apie patofiziologinius pokyčius keliuose subtakuose, taip pat įrodymų apie papildomų kelių, kurie neturėjo daug reikšmingų skirtumų tarp ME / CFS pacientų ir kontrolinių grupių, skirtumų, kai buvo žiūrima į šlapimo metabolitų kiekį atskirai.

Cistanche gali veikti kaip nuovargio ir ištvermės stipriklis, o eksperimentiniai tyrimai parodė, kad Cistanche tubulosa nuoviras gali veiksmingai apsaugoti kepenų hepatocitus ir endotelio ląsteles, pažeistas plaukiojančiose plaukiojančiose kūno masės, reguliuoti NOS3 ekspresiją ir skatinti glikogeno kiekį kepenyse. sintezė, todėl veikia nuo nuovargio. Cistanche tubulosa ekstraktas, kuriame gausu feniletanoido glikozidų, gali žymiai sumažinti kreatinkinazės, laktato dehidrogenazės ir laktato kiekį serume bei padidinti hemoglobino (HB) ir gliukozės kiekį ICR pelėse, o tai gali atlikti nuovargį mažinantį vaidmenį mažinant raumenų pažeidimus. ir sulėtinti pieno rūgšties sodrinimą pelėms energijos kaupimui. Sudėtinės Cistanche Tubulosa tabletės žymiai pailgino plaukimo laiką plaukiant su svoriu, padidino kepenų glikogeno atsargas ir sumažino karbamido kiekį serume po mankštos pelėms, parodydamos jo nuovargį mažinantį poveikį. Cistanchis nuoviras gali pagerinti sportuojančių pelių ištvermę ir pagreitinti nuovargio pašalinimą, taip pat gali sumažinti kreatinkinazės koncentracijos serume padidėjimą po krūvio ir palaikyti normalią pelių skeleto raumenų ultrastruktūrą po mankštos, o tai rodo, kad jis turi poveikį. stiprinti fizinę jėgą ir kovoti su nuovargiu. Cistanchis taip pat žymiai pailgino nitritais apsinuodijusių pelių išgyvenimo laiką ir padidino toleranciją hipoksijai ir nuovargiui.

Spustelėkite visą laiką jaustis pavargęs

3.1. Palyginimas su ankstesniais šlapimo metabolizmo tyrimais su ME/CFS pacientais

Apskritai, mūsų rezultatai nesutampa su keliais ankstesniais tyrimais, kuriuose buvo matuojami šlapimo metabolitai ME / CFS pacientams, palyginti su kontroliniais ne ME / CFS pacientais. Siekdami geriau palyginti savo rezultatus su ankstesniais tyrimais, kurių metu buvo matuojamas mažiau metabolitų, pradinius rezultatus, gautus p < 0.05 LMM, palyginome su ankstesniais tyrimais. Vienintelis junginys, kuris buvo reikšmingas kitame ir mūsų tyrime, buvo alaninas, nors ankstesniame tyrime nustatyta, kad pacientėms moterims alanino kiekis yra mažesnis nei kontrolinės grupės (BH koreguojama p vertė < 0,05) ir mūsų tyrime vidutinė normalizuota koncentracija ME/CFS sergantiems pacientams buvo didesnė nei kontrolinėje grupėje [20]. Tačiau keliuose tyrimuose buvo nustatyti junginių skirtumai, kurie, mūsų nuomone, skiriasi ME/CFS sergančių pacientų ir kontrolinės grupės fizinio krūvio metu, įskaitant fenilalaniną (mažiau ME/CFS pacientams [23,24]) ir valiną (mažiau ME/CFS pacientai [20]). Ir fenilalaninas, ir valinas taip pat buvo žymiai padidintas sėdimoje kontrolėje po mankštos dabartiniame tyrime, todėl gali būti, kad kitų tyrimų kontrolinės grupės buvo aktyvesnės ir jau turėjo didesnį fenilalanino kiekį šlapime. Jokiuose kituose tyrimuose specialiai nebuvo įdarbinti sėslūs ne ME / CFS subjektai, nors vienas tyrimas siekė suderinti „bendrą gyvenimo būdą“ [23]. Armstrongas ir kt. ištyrė Pearsono koreliaciją tarp šlapimo ir plazmos metabolitų ME/CFS pacientų ir kontrolinių grupių pacientams pradiniame etape ir nustatė acetato, laktato ir fenilalanino skirtumus, kurių slenkstis yra |R| > 0,4 ​​bet kurioje grupėje [20]. Acetatas yra per mažas, kad jį būtų galima aptikti mūsų tyrime, ir mes nenustatėme laktato ar fenilalanino plazmos ir šlapimo koreliacijos skirtumų.

McGregoras ir jo kolegos taip pat tyrė šlapimo ir plazmos metabolomų pokyčius ME/CFS pacientams, kuriems pasireiškia PEM [19]. Jie panaudojo apklausą, kad atskirtų ME/CFS pacientus, kurie šiuo metu patyrė PEM per pastarąsias septynias dienas, ir išsiaiškino, kad aštuonių iš trisdešimties išmatuotų šlapimo metabolitų ME/CFS grupėje koncentracija buvo žymiai mažesnė, palyginti su kontrolinėmis grupėmis. Iš jų tik serinas turėjo reikšmingų skirtumų mūsų analizėse; jis padidėjo po treniruotės kontrolinėje grupėje (papildomų duomenų failas S2 – LMM rezultatai). Dviejų šlapimo metabolitų, acetato ir metilhistidino, lygiai taip pat labai skyrėsi PEM ir be PEM [19]. Šiame tyrime tirtų metilhistidinų lygiai LMM analizėje reikšmingai nesiskyrė, tačiau nustatėme 1-metilhistidino ir N-acetil-3-metilhistidino koreliacijų plazmoje ir šlapime skirtumus (9 pav.). McGregor ir kt. taip pat nustatė septynių dienų PEM balų sąsajas su keliais metabolitais plazmoje ir šlapime [19].

3.2. Po treniruotės padidėjęs metabolitų kiekis šlapime sėdimos veiklos kontrolės metu atitinka ankstesnius tyrimus

Moterų šlapimo metabolizmas praėjus 24 valandoms po fizinio krūvio nebuvo gerai apibūdintas. Mūsų žiniomis, jokiais tyrimais nebuvo išmatuotas šlapimo metabolizmas, palyginti su 24 valandomis po fizinio krūvio moterims. Viename tyrime buvo išmatuoti 32 metabolitai vyrų šlapime prieš fizinį krūvį ir 24 valandas po treniruotės, lyginant devynis dviratininkus ir aštuonis sveikus, bet netreniruotus to paties amžiaus (50–60 metų) vyrus [48]. Nors jų tyrime pagrindinis dėmesys buvo skiriamas sportininkų ir netreniruotų tiriamųjų palyginimui, jie pastebėjo, kad po treniruotės kontrolinių asmenų laktato, acetato ir hipoksantino koncentracijos pokytis padidėjo daug kartų (daugiau nei du kartus). Mūsų tyrime acetatas nebuvo matuojamas, o nei laktatas, nei hipoksantinas mūsų kontrolinėje grupėje nesiskyrė nuo pradinio lygio ir po fizinio krūvio. Mukherjee ir kt. nustatė reikšmingus skirtumus tarp sportininkų ir kontrolinių grupių aštuoniuose išmatuotuose metabolituose, susijusiuose su įvairiais biocheminiais keliais [48]. Todėl dabartinio tyrimo stiprybė yra sėdinčių sveikų asmenų atranka, o ne aktyvesni asmenys, kuriems dėl reguliaraus fizinio krūvio gali pakisti šlapimo metabolizmas.

Nors paskelbtos literatūros apie šlapimo metabolizmą 24 valandas po fizinio krūvio yra labai mažai, yra keletas tyrimų, kuriuose matuojami šlapimo metabolitai tiek vyrams, tiek moterims ankstesniais laiko momentais po treniruotės (apžvelgta [49]). Viena iš išvadų, kuri buvo suderinta tarp tyrimų, yra tai, kad daugumos lipidų koncentracija padidėja biofluiduose po treniruotės, įskaitant šlapimą. Visų pirma, įrodyta, kad acilkarnitino koncentracija kraujyje ir šlapime didėja, reaguojant į fizinį krūvį. Tai atitinka mūsų tyrimo rezultatus, kurių metu kai kurių acilkarnitino junginių kiekis kontrolinės grupės šlapime po pratimo buvo žymiai padidėjęs (7A pav.).

Didžiausias tyrimas, kuriame dalyvavo moterys (iš viso 255 tiriamosios, 107 moterys), taip pat nustatė didelius metabolinius pokyčius šlapime po treniruotės: 37 iš 47 išmatuotų metabolitų reikšmingai pakito po FDR korekcijos, o 33 iš jų padidėjo po treniruotės [50]. . Tai atitinka mūsų pastebėtus didelio masto metabolinius pokyčius po fizinio krūvio kontrolinių asmenų šlapime, nes nustatyta, kad daugumos pakeistų junginių koncentracija padidėjo. Šis tyrimas taip pat užbaigė lyginamąją lyties analizę, tačiau aptiko tik du metabolitus, kurių moterų ir vyrų santykis po treniruotės ir pradinis santykis labai skiriasi.

Schranner ir kt. Išvados apie aminorūgštis nėra tokios nuoseklios, kaip apie lipidus, kurie paprastai padidina po treniruotės [49]. Tačiau kai kurie radiniai šlapime buvo nuoseklūs bent dviejuose tyrimuose (nors visi laiko momentai po treniruotės yra sujungti), įskaitant tai, kad po treniruotės šlapime padaugėjo šių junginių: alanino, O-acetil-homoserino, 5- hidroksiindolepiruvatas, ksanturenatas, L-metanefrinas, N-acetilvanilalaninas ir N-(karboksietil)argininas. Mažiausiai dviejų tyrimų metu buvo nustatyta, kad šlapime po fizinio krūvio sumažėjo šių junginių: glicino, histidino, trimetilamino n-oksido. Palyginus šiuos rezultatus su mūsų tyrimu, dauguma metabolitų arba reikšmingai nesiskyrė prieš ir po treniruotės, arba nebuvo išmatuoti mūsų tyrime. Tačiau mes taip pat nustatėme reikšmingą alanino kiekio padidėjimą kontrolinėse grupėse, o tai atitinka peržiūrėtus tyrimus. Mūsų tyrime glicino lygis taip pat padidėjo po treniruotės kontrolinėje grupėje, o ne sumažėjo. Tačiau Kistner ir kt. Tyrimas, kuriame dalyvavo daug moterų, taip pat nustatė, kad glicino lygis po treniruotės žymiai padidėjo [50].

3.3. Skirtumai tarp sėdimos kontrolės ir ME / CFS pacientų lipidų superkelyje

Daugelis lipidų subtakų šio tyrimo pacientų ir kontrolinių grupių šlapime labai skyrėsi, įskaitant acilkarnitino riebalų rūgščių metabolizmą. Acilkarnitino metabolitų kiekis sveikų kontrolinių asmenų šlapime padidėjo po fizinio krūvio, o fizinio krūvio sukelti pokyčiai reikšmingai skyrėsi tarp kontrolinių ir ME/CFS pacientų (3, 7 ir S4 pav.). Be to, nors deoksikarnitinas ir nėra acilo karnitinas, karnitino metabolizmo lipidų potakyje deoksikarnitinas ME/CFS sergančių pacientų plazmoje ir šlapime koreliavo skirtingai nei kontrolinės grupės (9 pav.). Acilo karnitinai yra labai svarbūs energijos apykaitai, nes jie reikalingi riebalų rūgštims transportuoti į mitochondrijas oksidacijai. Ilgos grandinės riebalų rūgščių oksidacija yra pagrindinis energijos apykaitos būdas aerobinių pratimų metu. Sutrikęs acilkarnitino metabolizmas fizinio krūvio metu gali prisidėti prie pratimų netoleravimo ir PEM ME / CFS pacientams. Kitame tyrime, kuriame buvo tiriami tik tiriamieji iš pradžių ir kuriame nebuvo specialiai įdarbinti sėdintys asmenys, nustatyta, kad acilkarnitino pogrupis labai skiriasi ME/CFS pacientų ir kontrolinės grupės pacientų organizme, o penkių iš aštuonių junginių koncentracija pacientų organizme yra mažesnė. [11]. Kai buvo analizuojami tik pradiniai tiriamieji, specifiniai acilkarnitino matavimai serume parodė, kad junginys buvo mažesnis ME/CFS pacientams nei kontrolinėje grupėje vienoje ataskaitoje [51], tačiau kitame tyrime nebuvo pastebėta šlapimo ar plazmos koncentracijos skirtumų [52]. Didesnės kohortos, kurios pogrupis yra šio tyrimo subjektai, plazmoje karnitino cheminių medžiagų klasteris taip pat buvo reikšmingai pakitęs sėslumo kontrolės moterims atsigavimo metu (apibrėžiamas kaip skirtumas tarp 24 valandų po treniruotės ir 15 minučių po treniruotės). ), daugumos junginių kiekis didėja po treniruotės [25]. Nustatyta, kad ME / CFS pacientų atsigavimo metu karnitino cheminis klasteris reikšmingai nepasikeitė. Nors šiame klasteryje yra ne tik acilkarnitinai, acilkarnitinai yra nariai ir prisideda prie jo reikšmės atliekant cheminio panašumo sodrinimo analizę ir dabartiniame tyrime (papildomas S4 paveikslas). Taip pat ex vivo buvo įrodyta, kad palmitoilkarnitinas, kurio raumenyse laikinai po treniruotės padaugėja, gali veikti kaip krūvio signalas iš raumenų į neuronų pogrupį [53].

Acilglicino riebalų rūgščių metabolitai yra vieninteliai junginiai, kurių šlapime buvo aptikta reikšmingai skirtingomis koncentracijomis ME/CFS, palyginti su kontroline grupe vienu laiko momentu (24 val. po treniruotės), ir kitoks acilglicino junginys, 3-hidroksibutiroilglicinas. , turėjo reikšmingą neigiamą koreliaciją ME/CFS sergantiems pacientams, kai U3/U1 koreliuoja su P3/P1 (5 ir 9 pav.). Be to, cis-3,4-metilenheptanoilglicinas kinta skirtingai fizinio krūvio metu ME/CFS sergantiems pacientams, palyginti su kontrolinėmis grupėmis (LMM, S2 papildomas paveikslas). Nors acilglicino metabolizmas nėra vienas iš pobūdžių, kurie po treniruotės reikšmingai padidėjo vien tik kontrolinėje grupėje, ME/CFS sergančių pacientų ir kontrolinės grupės pacientų jis reikšmingai skyrėsi tiek 24 val. po pratimo, tiek analizuojant skirtumą. po pratimo ir pradinio lygio santykiu (3 pav.). Tam tikrų acilglicinų išsiskyrimą su šlapimu taip pat keičia sutrikimai, susiję su riebalų rūgščių oksidacija mitochondrijose, įskaitant vidutinės grandinės acilkofermento A (CoA) dehidrogenazės (MCAD) trūkumą [54]. Mūsų grupė pastebėjo, kad riebalų rūgščių oksidacija imuninėse ląstelėse skiriasi nuo ME/CFS sergančių pacientų ir kontrolinių grupių [55].

3.4. Skirtumai tarp sėdimos būklės kontrolės ir ME / CFS pacientų aminorūgščių superkelyje

Mes taip pat nustatėme daug skirtumų šlapime amino rūgštyse ME / CFS pacientams ir kontrolei po treniruotės. Du iš šių būdų išsiskyrė, nes jie turėjo reikšmingų ME/CFS pacientų, palyginti su kontrolinių, pakitimų visose mūsų analizėse, įskaitant KEGG kelio analizę, ir yra aptariami toliau.

Karbamido ciklas kepenyse yra svarbi fizinio krūvio metabolizmo dalis, nes ji reikalinga norint pašalinti didelį amoniako kiekį, susidarantį fizinio krūvio metu [56,57]. Germainas ir jo kolegos taip pat nustatė, kad karbamido ciklas ir amoniako perdirbimo SMPDB keliai reikšmingai pasikeitė plazmoje tarp ME/CFS pacienčių moterų ir kontrolinių grupių, atlikdami kelio analizę, lyginant skirtumą tarp metabolitų lygių praėjus 24 valandoms po CPET (P3) ir 15 min po CPET (P2) [25]. Amoniako kaupimasis anksčiau buvo siejamas su neurotoksiškumu ir fizinio krūvio sukeltu nuovargiu [56,57]. Karbamido ciklo šlapime ir plazmos metabolomų reguliavimas po fizinio krūvio pacientams, sergantiems ME/CFS, gali sukelti amoniako kaupimąsi, tačiau 1403 junginiai, išmatuoti Metabolon® šlapime, neapėmė amoniako, nes jis yra lakus junginys ir mažesnis nei Metabolon® platformos aptikimo riba.

Cisteinas, metioninas, SAM ir taurinas yra svarbios aminorūgštys, nes jos vienintelės turi sieros, o cisteinas yra unikalus savo gebėjimu sudaryti disulfidinius ryšius. Cisteinas taip pat gali būti paverstas glutationu ir taurinu. Cisteinas ir metioninas atlieka daugybę vaidmenų ląstelių metabolizme, tačiau jie taip pat yra pagrindiniai baltymų statybiniai blokai [37]. Dėl savo tiolio grupės cisteinas dalyvauja daugelio fermentinių reakcijų katalizavime ir redokso homeostazės palaikyme. Cisteino metabolizmo pokyčiai atsiranda sergant daugeliu neurodegeneracinių sutrikimų, įskaitant Alzheimerio ligą, Hantingtono ligą ir Parkinsono ligą [58]. Nors cisteino, metionino, SAM ir taurino metabolizmas parodė daug skirtumų tarp pacientų ir kontrolinių mūsų šlapimo metabolomų analizės, šlapimo ir plazmos koreliacijos atskleidė papildomų junginių, turinčių reikšmingų skirtumų tarp ME / CFS pacientų ir kontrolinių grupių, įskaitant cisteino, kuris yra susidaro, kai du cisteinai yra oksiduojami, kad susidarytų disulfidinė jungtis, ir cistationinas, kuris yra tarpinis cisteino gamybos produktas metionino cikle [37].

3.5. Apribojimai

Mūsų tyrimas turi keletą svarbių apribojimų. Pirma, tiriamųjų mityba nebuvo kontroliuojama, o su maistu gaunami metabolitai gali turėti įtakos jų išsiskyrimui su šlapimu. Antra, pripažįstame, kad KMI atitikimo trūkumas nėra idealus ir yra šio tyrimo apribojimas. Mūsų didesnė ME / CFS pacientų ir sveikų sėdinčių asmenų grupė atitinka KMI, todėl jei šis bandomasis tyrimas bus išplėstas, tai nebus problema ateityje. Trečia, mūsų rezultatai apsiriboja ME / CFS sergančiomis moterimis. Nors labai svarbu tirti abi lytis sergant ME/CFS ir atrandama vis daugiau lyčių skirtumų patofiziologijoje [25, 59, 60], mes nusprendėme savo bandomąjį tyrimą sutelkti į moteris dėl didesnės ME ligos naštos. / CFS moterims (60–65 % moterų) [2]. Be to, kadangi mes užfiksavome šlapimo metabolomą tik dviem laiko momentais, pradiniu lygiu ir 24 val. po treniruotės, negalime pasakyti, ar ME / CFS pacientai anksčiau ar vėliau pakeitė kai kurių šių metabolitų išsiskyrimo lygį. taškas nei valdikliai. Šis išskyrimo produktų padidėjimas gali pasireikšti pacientams, tačiau su didesniu vėlavimu, panašiai kaip ME/CFS pacientai vėluoja atsigauti nuo fizinio krūvio. Tačiau taip pat gali būti, kad šis pakitusios metabolinės ekskrecijos trūkumas yra bendro sveiko metabolinio atsako į mankštą dalis.

4. Medžiagos ir metodai

4.1. Studijų dalykai

Į šį tyrimą buvo įtraukti aštuoni sveiki sėdintys kontroliniai asmenys ir dešimt ME / CFS pacientų. ME/CFS pacientams buvo diagnozuoti Kanados konsensuso kriterijai [3]. 18 tiriamųjų, įtrauktų į šį tyrimą, priklausė didesnei 173 dalyvių grupei (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT04026425) [61]. Šiame bandomajame tyrime visi tiriamieji buvo moterys. Tiriamieji buvo įdarbinti pagal šiuos kriterijus. Visi dalyviai turi būti 18–70 metų amžiaus. Tiriamieji buvo pašalinti iš bet kurios grupės, jei jie rūkė, nėščia ar maitina krūtimi, sirgo cukriniu diabetu, vartojo per daug alkoholio arba turėjo ortopedinių apribojimų, neleidžiančių jiems atlikti CPET. Šizofrenijos, didelio depresinio sutrikimo, bipolinio sutrikimo ar nerimo sutrikimo diagnozės taip pat buvo atmetimo kriterijai abiejose grupėse. Be to, sveikų sėdimųjų asmenų kontrolė buvo neįtraukta, jei jiems buvo diagnozuoti kokie nors autoimuniniai sutrikimai. Visų šio tyrimo tiriamųjų inkstų funkcija buvo normali, įvertinus šiuos standartinius Quest Diagnostics laboratorinius kraujo tyrimus: kreatinino kiekį serume, karbamido azotą kraujyje ir apskaičiuotą glomerulų filtracijos greitį (eGFR).

Septyniolika tiriamųjų atliko pratimų testą Itakos koledže Itakoje, Niujorke, o vienas tiriamasis atliko pratimų testą ID Med Torrance mieste, Kalifornijoje. Visų dalyvių buvo paprašyta nustoti vartoti maisto papildus, įskaitant probiotikus, dvi savaites prieš atliekant pratimų testą. Dalyvių buvo paprašyta nutraukti skausmą ir stimuliuojančius vaistus dvi dienas prieš pratimų testą. Visi pacientai pateikė raštišką informuotą sutikimą, o visus protokolus patvirtino Ithaca College IRB Nr. 1017-12Dx2. Visi dalyviai užpildė „Bell Disability Scale“ [26], trumpos formos-36 sveikatos apklausą [62] ir individualius klausimynus. ME/CFS pacientai papildomai užpildė daugiamatį nuovargio aprašą [63].

4.2. Širdies ir plaučių pratimų tyrimas ir šlapimo mėginių paėmimas

CPET buvo atlikta stacionariu ciklo ergometru, laikantis šio protokolo: 3 min. poilsio, po to nuolatinis važiavimas dviračiu, kurio metu darbo krūvis padidėja 15 vatų per minutę pratimo iki valingo išsekimo (apie 8–10 min.). Kvėpavimo keitimo koeficientas (RER), kuris yra anglies dioksido susidarymo greitis, padalytas iš deguonies suvartojimo greičio, buvo išmatuotas siekiant užtikrinti, kad dalyviai testą atliko pakankamai stengdamiesi (RER > 1,1 rodo maksimalias pastangas).

Visi šlapimo mėginiai buvo paimti ryte: (1) 15–20 minučių prieš CPET ir (2) 24 valandas vėliau. Šlapimas buvo renkamas viduryje į sterilius šlapimo rinktuvus, padalytas į alikvotas, centrifuguojamas 10, 000 × g 10 minučių, kad būtų pašalintos ląstelių liekanos, ir laikomas –80 ◦ C temperatūroje. Šlapimo mėginiams buvo atliktas vienas užšaldymo / atšildymo ciklas, kad būtų galima padalyti alikvotines dalis, o alikvotinės dalys buvo siunčiamos per naktį į Metabolon® ant sauso ledo.

4.3. Metabolizmo tyrimas

Metabolitai buvo matuojami naudojant Precision Metabolomics™ skysčių chromatografijos – tandeminės masės spektrometrijos (LC-MS/MS) pasaulinę metabolomikos platformą Metabolon®. Išsamūs metodai buvo aprašyti anksčiau [64]. Trumpai tariant, mėginiai buvo ekstrahuojami metanolyje (5:1 metanolis: mėginys) ir išgarinami. Kiekviename mėginyje metabolitai buvo aptikti naudojant keturias skirtingas LC-MS / MS platformas, kurios buvo optimizuotos hidrofiliniams ir hidrofobiniams junginiams ir naudojant teigiamą ir neigiamą jonizaciją. Visoje chromatografijoje buvo naudojamas Waters Acquity itin didelio efektyvumo (UP)LC ir 5 µL įpurškimo tūris (mėginiai buvo atstatyti atitinkamuose tirpikliuose kiekvienai platformai). Visa masių spektrometrija buvo atlikta naudojant „ThermoScientific Q-Exactive“ didelės skiriamosios gebos/tikslius masės spektrometrus su šildomais elektropurškimo jonizacijos (HESI-II) šaltiniais ir „Orbitrap“ masės analizatoriais, veikiančiais 35,{10}} masės skiriamąja geba, nuskaitymo diapazonu 70–1000 m/ z. Metabolon® patentuota programinė įranga buvo naudojama eksperimentiniams mėginiams suderinti su 1 pakopos identifikavimo standartų etalonine biblioteka, kaip apibrėžta Metabolomikos standartų iniciatyvoje, o plotas po kreive buvo naudojamas smailės kiekybiniam įvertinimui. Vertės normalizuotos pagal neapdorotų plotų skaičių, o visi mėginiai buvo paleisti vienoje partijoje, todėl partijos taisyti nereikėjo. Nežinomi junginiai neturi standarto, o iš dalies apibūdintos molekulės yra tos, kurios nebuvo oficialiai patvirtintos remiantis standartu arba kurių standartas nėra prieinamas, tačiau Metabolon® yra pakankamai įsitikinęs savo tapatybe.

4.4. Duomenų apdorojimas

Neapdoroti duomenys buvo normalizuoti pagal kiekvieno mėginio osmoliškumą, o kiekvieno metabolito duomenys buvo orientuoti į medianą iki 1 (neapdorotus duomenis, įskaitant osmoliškumą, galite rasti papildomame faile S1). Trūkstamos reikšmės buvo priskirtos mažiausia vertei, išskyrus vaistus, kurie buvo priskirti kaip 0. Duomenys buvo log10 transformuoti naudojant dispersiją stabilizuojančią transformaciją (MetaboanalystR) [65,66]. Iš viso iš pradžių buvo išmatuoti 1403 metabolitai. Metabolitai buvo filtruojami pagal modifikuotą 80% taisyklę: junginys buvo įtrauktas, jei jis buvo aptiktas bent 80% mėginių vienoje iš ME/CFS arba kontrolinių grupių [27]. Iš viso 1154 metabolitai atitiko kriterijus ir buvo įtraukti į vėlesnes analizes. Vienintelė analizė, atlikta be filtravimo, buvo koreliacijos su plazmos metabolitais. Kiekvieno metabolito po pratimo ir pradinio lygio santykis buvo apskaičiuotas logaritmine baze 10 kaip vertė po pratimo atėmus kiekvieno tiriamojo pradinę vertę. Nubraižant ugnikalnio diagramą, vidutiniai log kartos pokyčiai (ME/CFS pacientai, palyginti su kontroliniais pacientais) buvo konvertuoti į logaritminę bazę 2, naudojant bazinės formulės pakeitimą.

4.5. Duomenų analizė ir statistika

Vienmatė statistinė kiekvieno metabolito analizė buvo atlikta naudojant linijinį mišrų modelį su fiksuotu ligos būklės, laiko taško, amžiaus ir KMI poveikiu bei atsitiktiniu tiriamojo poveikiu (protingiausi [67] ir vidutinių [68] R paketai). Benjamini-Hochberg (BH) metodas buvo naudojamas klaidingų atradimų dažniui pataisyti, o q < 0.1 buvo naudojamas kaip reikšmingumo slenkstis. „EnhancedVolcano R“ paketas buvo naudojamas ugnikalnių sklypams [69].

ChemRICH in R buvo naudojamas nepersidengiančiai kelio analizei atlikti su Metabolon® apibrėžtais potakiais ir kelio tvarka [29]. ChemRICH žiniatinklio įrankis buvo naudojamas cheminių panašumų klasterizacijos analizei atlikti [30]. Į šią analizę buvo galima įtraukti tik tuos junginius, kurie turėjo žinomą SMILES kodą, iš viso 516 junginių. Abiejose ChemRICH analizėse sodrinimo statistika buvo atlikta naudojant Kolmogorovo-Smirnov testą, kuris nenaudoja p reikšmės reikšmingumo ribos, o lygina tikimybių pasiskirstymą su nulinės hipotezės tikimybės skirstiniu [70]. Metabolon® subkelių atveju q < 0.05 buvo pasirinktas kaip reikšmingumo slenkstis, o q < 0,15 buvo pasirinktas cheminių grupių klasteriams (BH FDR korekcija). Abiejų atveju visos grupės, esančios žemiau q slenksčių, taip pat turėjo p < 0,05.

Kelio praturtinimas ir topologijos analizė buvo atlikta naudojant Metaboanalyst 5.{1}} žiniatinklio įrankį [65], tiek KEGG, tiek SMPDB žmogaus etaloniniams metabolomams, pasirinkus šiuos parametrus: visuotinį statistikos testo testą ir santykinį tarpcentriškumą kaip mazgo svarbos matas. Junginiai buvo įtraukti į šią analizę, jei Metabolon® pateiktas HMDB ID atitiko HMDB ID Metaboanalyst. Vieno HMDB ID pasikartojantiems junginiams buvo įtrauktas tik pirmasis. Taip buvo įtraukti 453 junginiai.

Tiriamieji suskirstyti į grupes naudojant keturis junginius, kurie labai skyrėsi tarp pacientų ir kontrolinių asmenų po pratimo, buvo atliktas naudojant hierarchinę klasterizaciją, atstumo metriką naudojant euklidinį atstumą, ir metodą „Ward.D2“ (heatmap R paketas [71) ]).

Pirsono koreliacijos tarp šlapimo ir plazmos 727 metabolitų, išmatuotų abiejuose biofluiduose, buvo atliktos R (hmisc paketas). Kiekvienai koreliacijai p vertės buvo apskaičiuotos naudojant t testą su nuline hipoteze, kad koreliacijos koeficientas lygus 0, o po to buvo atlikta BH FDR korekcija su q < 0.15 kaip reikšmingumo riba. 8 paveiksle junginiai buvo tikrinami, kad būtų pašalinti tie, kurie turėjo kraštutinius nuokrypius, naudojant modifikuotą z balo metodą, kuris apskaičiuoja z balą naudojant absoliutaus nuokrypio medianą ir medianą (išskirtinių R paketas, z slenkstis=6).

Jei nenurodyta kitaip, visos duomenų vizualizacijos buvo atliktos naudojant ggplot2 R paketą. Visoms analizėms buvo pasirinkta BH FDR korekcija, o ne griežtesnė Benjamini ir Yekutieli FDR korekcija, nes buvo nustatyta, kad labai mažas junginių skaičius yra kolinearinis (0.75 % taikinių turėjo absoliučią vertę Pirsono koreliacijos koeficientas > { {3}}.7).

5. Išvados

Apskritai, buvo reikšmingų šlapimo metabolizmo skirtumų sveikiems sėdintiems žmonėms ir ME/CFS sergantiems pacientams, reaguojant į CPET iššūkį daugelyje medžiagų apykaitos super ir subtakų, apimančių aminorūgštis, lipidus, angliavandenius, nukleotidus, ksenobiotikus ir nežinomieji. Šie keliai yra susiję su daugybe fiziologinių funkcijų, įskaitant energijos apykaitą, bet neapsiribojant. Tai rodo, kad ME / CFS pacientams būdingas bendras medžiagų apykaitos sutrikimas, kuris yra jų fizinio krūvio netoleravimo ir PEM dalis, dėl kurių pakitęs metabolinis išsiskyrimas yra prisidedantis veiksnys. Mūsų duomenys rodo, kad sėslių asmenų, neturinčių ME / CFS, metabolizmas patiria didelių pokyčių, leidžiančių jiems atsigauti po krūvio, o ME / CFS pacientai nesugeba atlikti panašių adaptacinių reakcijų. Būsimas darbas apims šio tyrimo išplėtimą iki daug didesnės kohortos, apimančios abi lytis, kad būtų patvirtinti šie rezultatai, ištirti šlapimo metabolizmo lyčių skirtumai ir ištirta, ar yra subtilesnių ME / CFS pacientų šlapimo metabolitų skirtumų, kurie galėtų potencialiai. prisidėti prie diagnostinio ligos tyrimo ateityje.

Autoriaus indėlis:Konceptualizavimas, AG, KAG ir MRH; metodika, AG, KAG, YVH ir MRH; formalioji analizė, KAG, AG ir YVH; tyrimas, KAG, AG ir YVH; rašymas – originalaus projekto rengimas, KAG, AG ir MRH; rašymas – peržiūra ir redagavimas, visi autoriai; vizualizacija, KAG ir AG; projektų administravimas, MRH; finansavimo įsigijimas, MRH Visi autoriai perskaitė ir sutiko su paskelbta rankraščio versija.

Finansavimas:Šį tyrimą palaikė Nacionalinis neurologinių sutrikimų ir insulto institutas (NINDS), NIH (U54NS105541) ir Amar fondas. Nacionalinis vertimo mokslų tobulinimo centras NIH skyrė finansavimą Weill Cornell medicinos klinikinio ir vertimo mokslo centrui (CTSC), kad būtų galima palaikyti REDCap duomenų bazę per UL1 TR 002384.

Institucinės peržiūros tarybos pareiškimas:Tyrimas buvo atliktas pagal Helsinkio deklaracijos gaires ir patvirtintas Itakos koledžo institucinės peržiūros tarybos (Itakos, Niujorko valstijoje, JAV) (protokolas 1017-12Dx2) ir Weill Cornell medicinos koledžo institucinės peržiūros tarybos ( protokolas 1708018518).

Informuoto sutikimo pareiškimas:Informuotas sutikimas buvo gautas iš visų tyrime dalyvavusių subjektų.

Duomenų prieinamumo pareiškimas:Visi kiekvieno subjekto metabolitų duomenys pateikiami pateiktuose papildomų duomenų failuose.

Padėkos:Carl Franconi valdė duomenų bazę ir biobanką Kornelio universitete. Kraujo mėginius frakcionavo Davidas Wangas iš EVMED tyrimų, remiamas Workwell fondo, ir Ivanas Falsztynas, Carlas Franconi, Ludovicas Giloteaux, Madeline McCanne, Jineet Patel, Adamas O'Nealas, Alexandra Mandarano, Jessica Maya, Shannon Appelquist iš Kornelio universiteto. Dėkojame šiems asmenims, kurie dalyvavo tikrinant dalyvius, atliekant pratimų testus ir (arba) renkant kraują ir šlapimą: Betsy Keller, John Chia, Jared Stevens, Tiffany Ong ir Maria Russell.

Interesų konfliktai:Autoriai pareiškia, kad nėra interesų konflikto. Finansuotojai neturėjo jokio vaidmens kuriant tyrimą; renkant, analizuojant ar interpretuojant duomenis; rašant rankraštį; arba sprendime skelbti rezultatus.

Nuorodos

1. Jasonas, LA; Mirin, AA Nacionalinės medicinos akademijos ME/CFS paplitimo ir ekonominio poveikio duomenų atnaujinimas, siekiant atsižvelgti į gyventojų skaičiaus augimą ir infliaciją. Nuovargis Biomed. Sveikatos elgesys. 2021, 9, 9–13. [CrossRef]

2. Valdez, AR; Hancock, EE; Adebayo, S.; Kiernicki, didžėjus; Proskaueris, D.; Attewell, JR; Betmenas, L.; DeMaria, A., jaunesnysis; Lapp, CW; Rowe, kompiuteris; ir kt. ME/CFS paplitimo, demografinių rodiklių ir išlaidų įvertinimas naudojant didelio masto medicininių pretenzijų duomenis ir mašininį mokymąsi. Priekyje. Pediatr. 2018, 6, 412. [CrossRef] [PubMed]

3. Carruthers, BM; Jain, AK; De Meirleir, KL; Petersonas, DL; Klimas, NG; Lerner, AM; Bested, AC; Flor-Henry, P.; Joshi, P.; Powlesas, AP; ir kt. Mialginis encefalomielitas / lėtinio nuovargio sindromas: klinikinio darbo atvejo apibrėžimas, diagnostikos ir gydymo protokolai. J. Lėtinio nuovargio sindromas. 2003, 11, 7–115. [CrossRef]

4. Chu, L.; Valensija, IJ; Garvert, DW; Montoya, JG Mialginio encefalomielito/lėtinio nuovargio sindromo negalavimo po fizinio krūvio atstatymas: į pacientą orientuota, skerspjūvio apklausa. PLoS ONE 2018, 13, e0197811. [CrossRef]

5. Stussman, B.; Williamsas, A.; Snow, J.; Gavinas, A.; Skotas, R.; Natas, A.; Walitt, B. Ligonių, sergančių mialginiu encefalomielitu / lėtinio nuovargio sindromu, negalavimo po fizinio krūvio apibūdinimas. Priekyje. Neurol. 2020, 11, 1025. [CrossRef]

6. Stevensas, S.; Snell, C.; Stevensas, J.; Kelleris, B.; VanNess, JM kardiopulmoninio krūvio testo metodika, skirta fizinio krūvio netoleravimui įvertinti sergant mialginio encefalomielito/lėtinio nuovargio sindromu. Priekyje. Pediatr. 2018, 6, 242. [CrossRef]

7. Vanness, JM; Snell, CR; Stevens, SR Sumažėjęs širdies ir plaučių pajėgumas esant negalavimui po fizinio krūvio. J. Lėtinio nuovargio sindromas. 2007, 14, 77–85. [CrossRef]

8. Keleris, BA; Pryor, JL; Giloteaux, L. Mialginio encefalomielito/lėtinio nuovargio sindromo pacientų nesugebėjimas atkurti VO(2) smailės rodo funkcinį sutrikimą. J. Vertimas Med. 2014, 12, 104. [CrossRef]

9. Missailidis, D.; Annesley, SJ; Fisher, PR Patologiniai mechanizmai, lemiantys mialginį encefalomielitą / lėtinio nuovargio sindromą. Diagnostika, 2019, 9, 80. [CrossRef]

10. Hutas, TK; Eaton-Fitch, N.; Staines, D.; Marshall-Gradisnik, S. Sisteminė metabolinio disreguliacijos apžvalga lėtinio nuovargio sindromo / mialginio encefalomielito / sisteminio krūvio netoleravimo ligos (CFS / ME / SEID) atveju. J. Vertimas Med. 2020, 18, 198. [CrossRef]

11. Žermenas, A.; Barupal, DK; Levinas, SM; Hansonas, MR Visapusiška kraujotakos metabolizmas ME/CFS atskleidžia sutrikusią acillipidų ir steroidų metabolizmą. Metabolitai, 2020, 10, 34. [CrossRef]

12. Žermenas, A.; Ruppertas, D.; Levinas, SM; Hansonas, MR Mialginio encefalomielito / lėtinio nuovargio sindromo atradimo grupės metabolinis profiliavimas atskleidžia riebalų rūgščių ir lipidų apykaitos sutrikimus. Mol. Biosyst. 2017, 13, 371–379. [CrossRef]

13. Žermenas, A.; Ruppertas, D.; Levinas, SM; Hanson, MR Galimi biomarkeriai iš mialginio encefalomielito / lėtinio nuovargio sindromo plazmos metabolizmo sukelia redokso disbalansą ligų simptomatologijoje. Metabolitai, 2018, 8, 90. [CrossRef]

14. Yamano, E.; Sugimoto, M.; Hirayama, A.; Kume, S.; Yamato, M.; Jin, G.; Tajima, S.; Goda, N.; Iwai, K.; Fukuda, S.; ir kt. Lėtinio nuovargio sindromo indekso žymenys su TCA ir karbamido ciklų disfunkcija. Sci. Rep. 2016, 6, 34990. [CrossRef]

15. Armstrongas, CW; McGregor, NR; Sheedy, JR; Buttfieldas, I.; Užpakalis, HL; Gooley, PR NMR serumo metabolinis profilis nustato aminorūgščių sutrikimus lėtinio nuovargio sindromo atveju. Clin. Chim. Acta 2012, 413, 1525–1531. [CrossRef]

16. Armstrongas, CW; McGregor, NR; Lewisas, DP; Užpakalis, HL; Gooley, PR Išmatų mikrobiotos ir išmatų, kraujo serumo ir šlapimo metabolitų ryšys sergant mialginiu encefalomielitu / lėtinio nuovargio sindromu. Metabolomika, 2016, 13, 8. [CrossRef]

17. Hoelis, F.; Hoelis, A.; Pettersen, IK; Rekelandas, IG; Risa, K.; Almė, K.; Sorlandas, K.; Fossa, A.; Lien, K.; Herderis, I.; ir kt. Pacientų, sergančių mialginiu encefalomielitu / lėtinio nuovargio sindromu, metabolinių fenotipų žemėlapis. JCI Insight 2021, 6, e149217. [CrossRef]

18. Nagy-Szakal, D.; Barupal, DK; Lee, B.; Che, X.; Williams, BL; Kahn, EJR; Ukaigwe, JE; Betmenas, L.; Klimas, NG; Komaroff, AL; ir kt. Įžvalgos apie mialginio encefalomielito / lėtinio nuovargio sindromo fenotipą per išsamią metabolomiką. Sci. Rep. 2018, 8, 10056. [CrossRef]

19. McGregor, NR; Armstrongas, CW; Lewisas, DP; Gooley, PR negalavimas po fizinio krūvio yra susijęs su hipermetabolizmu, hipoacetiliacija ir purino metabolizmo reguliavimo panaikinimu ME/CFS atvejais. Diagnostika, 2019, 9, 70. [CrossRef]

20. Armstrongas, CW; McGregor, NR; Lewisas, DP; Užpakalis, HL; Gooley, PR Metabolinis profiliavimas atskleidžia anomalų energijos apykaitą ir oksidacinio streso kelius pacientams, sergantiems lėtinio nuovargio sindromu. Metabolomika 2015, 11, 1626–1639. [CrossRef]

21. Fluge, O.; Mella, O.; Brulandas, O.; Risa, K.; Dyrstad, SE; Almė, K.; Rekelandas, IG; Sapkota, D.; Roslandas, GV; Fossa, A.; ir kt. Metabolizmo profiliavimas rodo, kad piruvato dehidrogenazės funkcija sutrikusi sergant mialgine encefalopatija / lėtinio nuovargio sindromu. JCI Insight 2016, 1, e89376. [CrossRef] [PubMed]

22. Naviaux, RK; Naviaux, JC; Li, K.; Šviesus, AT; Alaynick, WA; Wang, L.; Baksteris, A.; Natanas, N.; Andersonas, W.; Gordon, E. Lėtinio nuovargio sindromo metaboliniai ypatumai. Proc. Natl. Akad. Sci. JAV, 2016, 113, E5472–E5480. [CrossRef] [PubMed]

23. Džounsas, MG; Cooperis, E.; Amjadas, S.; Goodwin, CS; Barronas, JL; Chalmers, RA Šlapimo ir plazmos organinės rūgštys ir aminorūgštys sergant lėtinio nuovargio sindromu. Clin. Chim. Acta 2005, 361, 150–158. [CrossRef] [PubMed]

24. Niblet, SH; Karalius, KE; Dunstanas, RH; Clifton-Bligh, P.; Hoskin, LA; Robertsas, TK; Fulcheris, GR; McGregor, NR; Dunsmore, JC; Užpakalis, HL; ir kt. Hematologinės ir šlapimo išskyrimo anomalijos pacientams, sergantiems lėtinio nuovargio sindromu. Exp. Biol. Med. 2007, 232, 1041–1049. [CrossRef] [PubMed]

25. Žermenas, A.; Giloteaux, L.; Moore, GE; Levinas, SM; Chia, JK; Kelleris, BA; Stevensas, J.; Franconi, CJ; Mao, X; Šungu, Kolumbija; ir kt. Plazmos metabolomika atskleidžia sutrikusią reakciją ir atsigavimą po maksimalaus pratimo sergant mialginio encefalomielito / lėtinio nuovargio sindromu. JCI Insight 2022, 7, e157621. [CrossRef]

26. Bell, DS Lėtinio nuovargio sindromo gydytojo vadovas. Supratimas, gydymas ir gyvenimas su CFIDS; „Addison-Wesley Publishing Company“: Reading, MA, JAV, 1994 m.

27. Yang, J.; Zhao, X; Lu, X.; Linas, X.; Xu, G. Metabomikos išankstinio duomenų apdorojimo strategija, siekiant sumažinti maskavimo efektą duomenų analizėje. Priekyje. Mol. Biosci. 2015, 2, 4. [CrossRef]

28. Benjamini, Y.; Hochberg, Y. Klaidingo atradimo greičio valdymas: praktiškas ir efektyvus kelių bandymų metodas. JR stat. Soc. Ser. B 1995, 57, 289–300. [CrossRef]

29. Barupalas, DK; Ventiliatorius, S.; Fiehn, O. Bioinformatikos metodų integravimas siekiant visapusiškai interpretuoti metabolomikos duomenų rinkinius. Curr. Nuomonė. Biotechnol. 2018, 54, 1–9. [CrossRef]

30. Barupalas, DK; Fiehn, O. Cheminio panašumo praturtinimo analizė (ChemRICH) kaip alternatyva biocheminiam metabolominių duomenų rinkinių kartografavimui. Sci. Rep. 2017, 7, 14567. [CrossRef]

31. Goemanas, JJ; van de Geer, SA; de Kortas, F.; van Houwelingen, HC Pasaulinis genų grupių testas: Bandymo ryšys su klinikiniu rezultatu. Bioinformatika 2004, 20, 93–99. [CrossRef]

32. Rosato, A.; Tenoris, L.; Cascante, M.; De Atauri Carulla, PR; Martins Dos Santos, VAP; Saccenti, E. Nuo koreliacijos iki priežastinio ryšio: metabolomikos duomenų analizė naudojant sistemų biologijos metodus. Metabolomika, 2018, 14, 37. [CrossRef]

33. Cardounel, AJ; Cui, H.; Samouilovas, A.; Johnsonas, W.; Kearns, P.; Tsai, AL; Berka, V.; Zweier, JL Endogeninių metilargininų patofiziologinio vaidmens įrodymai reguliuojant endotelio NO gamybą ir kraujagyslių funkciją. J. Biol. Chem. 2007, 282, 879–887. [CrossRef]

34. Čandrasekharanas, UM; Wang, Z.; Wu, Y.; Wilsonas Tangas, WH; Hazen, SL; Wang, S.; Elaine Husni, M. Padidėjęs simetrinio dimetilarginino kiekis plazmoje ir padidėjęs arginazės aktyvumas kaip galimi širdies ir kraujagyslių ligų sergant reumatoidiniu artritu rodikliai. Artritas Res. Ten. 2018, 20, 123. [CrossRef]

35. Siroen, parlamentaras; Teerlink, T.; Nijveldt, RJ; Prins, HA; Ričiras, MC; van Leeuwen, PA Klinikinė asimetrinio dimetilarginino reikšmė. Annu. Nutr. 2006, 26, 203–228. [CrossRef]

37. Bertinatas, R.; Villalobos-Labra, R.; Hofmannas, L.; Blauensteiner, J.; Sepulveda, N.; Westermeier, F. Sumažėjusi NO gamyba endotelio ląstelėse, veikiamose ME/CFS pacientų plazmoje. Vasc. Pharmacol. 2022, 143, 106953. [CrossRef]

37. Brosnanas, JT; Brosnan, ME Sieros turinčios aminorūgštys: apžvalga. J. Nutr. 2006, 136, 1636S–1640S. [CrossRef]

38. Fernández-García, JC; Martínez-Sánchez, MA; Bernal-López, MR; Muñoz-Garach, A.; Martínez-González, MA; Fitó, M.; Salas-Salvadó, J.; Tinahones, FJ; Ramos-Molina, B. Gyvenimo būdo intervencijos programos su apribota Viduržemio jūros dieta ir mankšta poveikis serumo poliamino metabolizmui asmenims, kuriems yra didelė širdies ir kraujagyslių ligų rizika: atsitiktinių imčių klinikinis tyrimas. Esu. J. Clin. Nutr. 2020, 111, 975–982. [CrossRef]

39. Wang, W.; Zhang, H.; Xue, G.; Zhang, L.; Zhang, W.; Wang, L.; Lu, F.; Li, H.; Bai, S.; Linas, Y.; ir kt. Treniruotės metu išsaugomas išeminis išankstinis kondicionavimas senų žiurkių širdyse, atkuriant miokardo poliamino telkinį. Oksidas. Med. Ląstelė. Longevas. 2014, 2014, 457429. [CrossRef]

40. Blomstrand, E.; Eliassonas, J.; Karlsson, HK; Kohnke, R. Šakotosios grandinės aminorūgštys aktyvina pagrindinius baltymų sintezės fermentus po fizinio krūvio. J. Nutr. 2006, 136, 269S–273S. [CrossRef]

41. Newsholme, P.; Stensonas, L.; Sulvucci, M.; Sumayao, R.; Krause, M. 1.02-Aminorūgščių metabolizmas. In Comprehensive Biotechnology, 2nd ed.; Moo-Young, M., Red.; Academic Press: Burlington, ON, Kanada, 2011; 3–14 p. [CrossRef]

42. Li, S.; Gao, D.; Jiang, Y. Funkcija, aptikimas ir acilkarnitino metabolizmo pakeitimas sergant kepenų ląstelių karcinoma. Metabolitai, 2019, 9, 36. [CrossRef]

43. Braunas, TP; Marks, DL Raumenų masės reguliavimas endogeniniais gliukokortikoidais. Priekyje. Physiol. 2015, 6, 12. [CrossRef] [PubMed]

44. Furman, BL Mineralokortikoidai. In xPharm: Išsami farmakologijos nuoroda; Enna, SJ, Bylund, DB, red.; Elsevier: Niujorkas, NY, JAV, 2007 m.; p. 1. [CrossRef]

45. Kavyani, B.; Lidbury, BA; Schloeffel, R.; Fisher, PR; Missailidis, D.; Annesley, SJ; Dehhaghi, M.; Hengas, B.; Guilleminas, GJ Ar kinurenino kelias gali būti pagrindinė trūkstama mialginio encefalomielito / lėtinio nuovargio sindromo (ME / CFS) sudėtingo galvosūkio dalis? Ląstelė. Mol. Life Sci. 2022, 79, 412. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Kossman, DA; Williams, NI; Domčekas, SM; Kurzeris, MS; Stopferis, JE; Schmitz, KH Pratimai sumažina estrogeno ir progesterono kiekį moterims prieš menopauzę, kurioms yra didelė krūties vėžio rizika. J. Appl. Physiol. 2011, 111, 1687–1693. [CrossRef] [PubMed]

47. De Souza, MJ; Van Heestas, J.; Demersas, LM; Lasley, BL Liutealinės fazės trūkumas laisvalaikio bėgikams: hipometabolinės būklės įrodymai. J. Clin. Endokrinolis. Metab. 2003, 88, 337–346. [CrossRef]

48. Mukherjee, K.; Edgettas, BA; Burrows, HW; Castro, C.; Griffin, JL; Schwertani, AG; Gurdas, BJ; Funk, CD Viso kraujo transkriptomika ir šlapimo metabolomika, siekiant apibrėžti adaptyvius biocheminius didelio intensyvumo pratimų kelius 50–60- metų meistrų sportininkams. PLoS ONE 2014, 9, e92031. [CrossRef]

49. Schranner, D.; Kastenmuller, G.; Schonfelder, M.; Romish-Margl, W.; Wackerhage, H. Metabolitų koncentracijos pokyčiai žmonėms po pratimų: sisteminė pratimų metabolizmo tyrimų apžvalga. Sporto med. Atidaryta 2020 m., 6, 11. [CrossRef]

50. Kistner, S.; Rist, MJ; Doringas, M.; Dorras, C.; Neumann, R.; Hartelis, S.; Bub, A. BMR pagrįstas būdas nustatyti šlapimo metabolitus, susijusius su ūmiu fiziniu krūviu ir širdies ir kvėpavimo sistemos tinkamumu sveikiems žmonėms – KarMeN tyrimo rezultatai. Metabolitai, 2020, 10, 212. [CrossRef]

51. Kuratsune, H.; Yamaguti, K.; Takahashi, M.; Misaki, H.; Tagawa, S.; Kitani, T. Acilkarnitino trūkumas sergant lėtinio nuovargio sindromu. Clin. Užkrėsti. Dis. 1994, 18 (1 priedas), S62–S67. [CrossRef]

52. Džounsas, MG; Goodwin, CS; Amjadas, S.; Chalmers, RA Plazmos ir šlapimo karnitinas ir acilkarnitinai sergant lėtinio nuovargio sindromu. Clin. Chim. Acta 2005, 360, 173–177. [CrossRef]

53. Zhang, J.; Šviesa, AR; Hoppelis, CL; Campbell, C.; Chandleris, CJ; Burnett, didžėjus; Souza, EB; Casazza, GA; Hughen, RW; Keimas, NL; ir kt. Acilkarnitinai kaip su mankšta susijusio kuro pasiskirstymo, ksenometabolizmo ir galimų signalų į raumenų aferentinius neuronus žymenys. Exp. Physiol. 2017, 102, 48–69. [CrossRef]

54. Kosta, CG; Guerand, WS; Struys, EA; Holwerda, U.; dešimt Brink, HJ; Tavaresas de Almeida, I.; Duranas, M.; Jakobs, C. Kiekybinė šlapimo acilglicinų analizė beta oksidacijos defektams diagnozuoti naudojant GC-NCI-MS. J. Pharm. Biomed. Anal. 2000, 21, 1215–1224. [CrossRef]

55. Maya, J.; Leddy, SM; Gottschalk, CG; Petersonas, DL; Hanson, MR pakitusi riebalų rūgščių oksidacija mialginio encefalomielito / lėtinio nuovargio sindromo limfocitų populiacijose. Tarpt. J. Mol. Sci. 2023, 24, 2010. [CrossRef]

56. Wilkinsonas, didžėjus; Smeeton, NJ; Watt, PW Amoniako metabolizmas, smegenys ir nuovargis; dar kartą peržiūrint nuorodą. Prog. Neurobiol. 2010, 91, 200–219. [CrossRef]

57. Chen, S.; Minegishi, Y.; Hasumura, T.; Shimotoyodome, A.; Ota, N. Amoniako metabolizmo dalyvavimas gerinant arbatos katechinų ištvermę pelėms. Sci. Rep. 2020, 10, 6065. [CrossRef]

58. Paulius, BD; Sbodio, JI; Snyder, SH Cisteino metabolizmas neuronų redokso homeostazėje. Trends Pharmacol. Sci. 2018, 39, 513–524. [CrossRef]

59. Nkiliža, A.; Parksas, M.; Cseresznye, A.; Oberlinas, S.; Evans, JE; Darsis, T.; Aenlė, K.; Niedospial, D.; Mullan, M.; Crawford, F.; ir kt. ME / CFS pacientų lyčiai specifiniai plazmos lipidų profiliai ir jų ryšys su skausmu, nuovargiu ir pažinimo simptomais. J. Vertimas Med. 2021, 19, 370. [CrossRef]

60. O'Nealas, AJ; Stiklas, KA; Emigas, CJ; Vitug, AA; Henris, SJ; Šungu, Kolumbija; Mao, X; Levinas, SM; Hanson, MR tyrimas dėl anti-patogeninių antikūnų lygių sergant mialginio encefalomielito / lėtinio nuovargio sindromu. Proteomes 2022, 10, 21. [CrossRef]

61. Negalavimo po krūvio analizė naudojant dviejų dienų CPET žmonėms, sergantiems ME/CFS.

62. Ware, JE, Jr.; Sherbourne, CD MOS 36-elementas trumpos formos sveikatos tyrimas (SF-36). I. Koncepcinė struktūra ir elementų pasirinkimas. Med. Priežiūra 1992, 30, 473–483. [CrossRef]

63. Smetsas, EM; Garsenas, B.; Bonke, B.; De Haes, JC. Daugiamatis nuovargio inventoriaus (PFI) psichometrinės nuovargio įvertinimo instrumento savybės. J. Psychosom. Res. 1995, 39, 315–325. [CrossRef]

64. Fordas, L.; Kennedy, AD; Goodmanas, KD; Pappan, KL; Evansas, AM; Mileris, LAD; Wulff, JE; Wiggs, BR; Lenonas, JJ; Elsea, S.; ir kt. Klinikinės metabolizmo profiliavimo platformos, skirtos įgimtoms metabolizmo klaidoms nustatyti, tikslumas. J. Appl. Lab. Med. 2020, 5, 342–356. [CrossRef]

65. Pangas, Z.; Chong, J.; Džou, G.; de Lima Morais, DA; Changas, L.; Barrette, M.; Gauthier, C.; Jacques, PE; Li, S.; Xia, J. MetaboAnalyst 5.0: Atotrūkio tarp neapdorotų spektrų ir funkcinių įžvalgų mažinimas. Nucleic Acids Res. 2021, 49, W388–W396. [CrossRef] [PubMed]

66. Durbinas, BP; Hardinas, JS; Hawkinsas, DM; Rocke, DM Dispersiją stabilizuojanti transformacija, skirta genų ekspresijos mikrogardelių duomenims. Bioinformatika 2002, 18 (1 priedas), S105–S110. [CrossRef] [PubMed]

67. Kuznecova, A.; Brockhoff, PB; Christensen, RHB lmerTest Paketas: Linijinių mišrių efektų modelių testai. J. Stat. Programinė įranga 2017, 82, 1–26. [CrossRef]

68. Lenth, R. Emmeans: Estimated marginal Means, dar žinomas kaip mažiausių kvadratų vidurkis, 1.8.2; R paketas. 2022 m.

69. Blighe, K.; Rana, S.; Lewis, M. EnhancedVolcano: Publikuoti paruošti ugnikalnių siužetai su patobulintu spalvinimu ir ženklinimu, 1.16 versija.0; R paketas. 2022 m.

70. Smirnov, NV Dėl dviejų nepriklausomų imčių empirinių pasiskirstymo kreivių neatitikimo įvertinimo. Bull. Matematika. Univ. Maskva 1939, 2, 3–14.

71. Kolde, R. Pheatmap: Pretty Heatmaps, 1.0.12; R paketas. 2019 m.

Atsisakymas / leidėjo pastaba:Visuose leidiniuose pateikiami teiginiai, nuomonės ir duomenys yra tik atskiro (-ių) autoriaus (-ų) ir bendradarbio (-ų), o ne MDPI ir (arba) redaktoriaus (-ų). MDPI ir (arba) redaktorius (-iai) neprisiima atsakomybės už bet kokius žmonių ar turto sužalojimus, atsiradusius dėl turinyje nurodytų idėjų, metodų, instrukcijų ar produktų.

【Susisiekite】 El. paštas: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501