Cistanche Tubulosa feniletanoidiniai glikozidai sukelia apoptozę H22 kepenų ląstelių karcinomos ląstelėse per išorinius ir vidinius signalizacijos kelius
Mar 15, 2022
Daugiau informacijos:ali.ma@wecistanche.com
Pengfei juanis1 ir kt
Abstraktus
Fonas: Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight yra tradicinė kinų medicina, kuri parazituoja Tamarix augalo šaknyse ir buvo naudojama vyrų impotencijai, sterilumui, kūno silpnumui gydyti ir kaip tonikas. Tačiau jo priešnavikinis poveikis kepenų ląstelių karcinomai vis dar sunkiai suprantamas. Čia mes ištyrėme priešnavikinį poveikįCistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai(CTPG) H22 kepenų ląstelių karcinomos ląstelėse tiek in vitro, tiek in vivo ir jos mechanizmai.
Metodai:Morfologija, gyvybingumas,apoptozė, ląstelių ciklas ir H22 ląstelių mitochondrijų membranos potencialas (Δψm) buvo analizuojami atitinkamai apverstu mikroskopu, MTT tyrimu ir srauto citometrija. Baltymų ekspresija ir aktyvinimasapoptozėkelias buvo aptiktas Western blot metodu. In vivo priešnavikinis poveikis buvo įvertintas auglio pelės modelyje, sukurtame naudojant Kunmingo pelių patinus.
Rezultatai:Gydymas CTPG reikšmingai slopino H22 ląstelių augimą priklausomai nuo dozės ir laiko, o tai koreliavo su padidėjusiuapoptozėir ląstelių ciklo sustabdymas G0/G1 ir G2/M fazėse. Be to, CTPG apdorotose H22 ląstelėse buvo pastebėta chromosomų kondensacija. Gydymas CTPG žymiai padidino Bax/Bcl-2 santykį, sumažino Δψm ir padidino citochromo c išsiskyrimą. Skaldytos kaspazės-8 ir kaspazės-9 lygis tiek išoriniuose, tiek vidiniuose signalizacijos keliuose buvo žymiai padidintas, o tai nuosekliai aktyvavo kaspazę-7 ir -3, kad suskaldytų PARP. Galiausiai, CTPG slopino H22 ląstelių augimą pelėse ir pagerino auglių pelių išgyvenamumą.
Išvados: Šie rezultatai rodo, kad CTPG slopino H22 ląstelių augimą tiek išoriniu, tiek vidiniu būdu.apoptozėkeliai.
Raktiniai žodžiai: Cistanche tubulosa, Feniletanoidiniai glikozidai, Apoptozė, Signalizacijos kelias, Naviko pelės modelis
Spustelėkite organinius Cistanche tubulosa feniletanoidinius glikozidus
Fonas
Kepenų vėžys visame pasaulyje užėmė šeštą vietą pagal sergamumą vėžiu ir ketvirtą vietą pagal mirčių nuo vėžio skaičių. Be to, ji užėmė ketvirtą vietą pagal sergamumą vėžiu ir pirmą vietą pagal mirtingumą nuo vėžio šalyse, kurių sociodemografinis indeksas žemas [1]. 2015 m. Kinijoje kepenų vėžys yra trečia pagrindinė su vėžiu susijusių mirčių priežastis [2]. Daugiau nei 90 procentų pirminių kepenų vėžio atvejų pasaulyje yra hepatoceliulinė karcinoma (HCC) [3]. Šiuo metu kepenų rezekcija yra pagrindinė HCC gydymo galimybė. Tačiau mažiau nei 30 procentų pacientų, sergančių HCC, atitiko gydomosios kepenų rezekcijos kriterijus, o bendras 5-metų išgyvenamumas vis dar yra tik 35-50 proc. dėl didelio pasikartojimo dažnio [4, 5] . Gydymo galimybės pacientams, sergantiems vidutiniu ir pažengusiu HCC, yra labai ribotos. Sorafenibą, į molekulinį tikslą nukreiptą vaistą, FDA patvirtino kaip pirmos eilės pažangios HCC gydymą. Tačiau sorafenibas pailgina tik maždaug 3 mėnesius, o atsako dažnis yra mažesnis nei 4 procentai [6, 7]. Būtina skubiai sukurti naujus vaistus ar strategijas prieš HCC.
Tradicinė kinų medicina (TCM) atskirai arba kartu su kitomis strategijomis buvo naudojama gydant HCC ir parodė klinikinę naudą, įskaitant ilgesnį išgyvenamumą, geresnę gyvenimo kokybę, sumažintą nepageidaujamų reakcijų skaičių ir tt [8, 9]. Cistanche, tam tikra TCM, atlieka įvairias biologines funkcijas, tokias kaip antioksidacinė, priešuždegiminė, senėjimą stabdanti ir neuroprotekcija [10, 11].Feniletanoidiniai glikozidaibuvo laikomi pagrindiniais aktyviais Cistanche komponentais, turinčiais įvairią veiklą, įskaitant antioksidacinį, priešuždegiminį, hepato- ir neuroprotekcinį poveikį [12–15]. Mūsų grupė apie tai pranešėCistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai(CTPG) gali sukeltiapoptozėmelanomos B16-F10 ląstelėse ir slopina pelių navikų augimą [16]. Šiame tyrime išmatavome CTPG priešnavikinį poveikį HCC H22 ląstelėms tiek in vitro, tiek in vivo ir ištyrėme jo mechanizmus. Mes nustatėme, kad CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)sukeltasapoptozėH22 ląstelėse per išorinius ir vidinius signalizacijos kelius ir slopino H22 navikų augimą pelėse.
Metodai
Ląstelių linija
Pelės H22 kepenų ląstelių karcinomos ląstelės buvo gautos iš Sindziango universiteto (Urumčis, Sindziangas, Kinija) pagrindinės biologinių išteklių ir genų inžinerijos laboratorijos ir kultivuotos RPMI 1640 terpėje (Gibco), papildytos 100 V/ml penicilino ir 100 ug/ml. streptomicino ir 10 procentų karščiu inaktyvuoto galvijų vaisiaus serumo (Gibco) 37 laipsnių temperatūroje drėgnoje 5 procentų CO2 atmosferoje.
MTT tyrimas
CTPG (Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)buvo nupirktas iš Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian, Sindziangas, Kinija) ir pagrindinių CTPG junginių(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)buvo kvalifikuoti ir kiekybiškai įvertinti naudojant aukštos kokybės skysčių chromatografiją [16]. Ląstelių gyvybingumas buvo įvertintas naudojant 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolio bromidą (MTT) (Sigma, Sent Luisas, MO , JAV) tyrimas. H22 ląstelės buvo pasėtos į 96-šulinėlių plokšteles 2 × 104 ląstelių tankiu 100 ul terpėje vienoje duobutėje ir kultivuojamos 37 laipsnių temperatūroje. Po 24 valandų ląstelės buvo apdorotos skirtingomis koncentracijomis CTPG (0, 100, 200, 300 ir 400 ug / ml) arba 0, 3 procento DMSO (lygus 400 ug / ml CTPG) atitinkamai 24, 48 ir 72 valandas. Po centrifugavimo 1000 aps./min. greičiu 7 minutes, supernatantas buvo išmestas ir į kiekvieną šulinėlį įpilama 100 ul MTT tirpalo (5 mg/ml PBS). Plokštelės buvo inkubuojamos 37 laipsnių temperatūroje 4 valandas ir buvo pridėta 100 ul DMSO, kad ištirptų susidarę formazano kristalai. OD490 vertės buvo aptiktos 96-šulinėlių mikroplokštelių skaitytuvu (Bio-Rad Laboratories, CA, JAV). Ląstelių gyvybingumas buvo apskaičiuotas pagal formulę: Ląstelių gyvybingumas (procentais)=(ODtreated/ODuntreated) x 100 proc.
Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai
Apoptozės nustatymas
H22 ląstelės buvo apdorotos skirtingomis CTPG koncentracijomis(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)({0}}, 100, 200, 300 ir 400 ug/ml) arba 0,3 proc. DMSO 24 val., o po to nudažytas aneksino VFITC/propidžio jodidu (PI)ApoptozėAptikimo rinkinys (YEASEN, Kinija) pagal gamintojo instrukcijas. Mėginiai buvo analizuojami srauto citometrija (BD FACSCalibur, JAV).
Mitochondrijų membranos potencialo nustatymas
H22 ląstelės buvo apdorotos skirtingomis CTPG koncentracijomis(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)[ Du kartus nuplovus JC-1 buferiu, mėginiai buvo resuspenduojami su 300 ul JC-1 buferio ir analizuojami srauto citometrija (BD FACSCalibur, JAV).
Ląstelių ciklo analizė
H22 ląstelės buvo pasėtos į 60 mm auginimo lėkštes ir 24 valandas apdorotos skirtingomis koncentracijomis CTPG (0, 100 200, 300 ir 400 ug/ml) arba 0,3 proc. DMSO. . Visos ląstelės buvo surinktos ir du kartus plaunamos PBS. Ląstelės buvo fiksuotos 70 procentų ledo šaltame etanolyje -20 laipsnių temperatūroje 2 valandas ir du kartus plaunamos PBS, tada pakartotinai suspenduotos 300 ul propidžio jodido / RNazės dažymo buferyje (BD Biosciences). Po 10 minučių kambario temperatūroje mėginiai buvo paimti srauto citometrija (BD FACSCalibur, JAV), o ląstelių ciklo pasiskirstymas buvo analizuojamas naudojant ModFit LT 3.0 programinę įrangą.
feniletanoidiniai glikozidaiinCistanche tubulosa
Hoechst 33 258 dažymas
Morfologiniai H22 ląstelių branduolių pokyčiai buvo analizuojami membranai pralaidžiu DNR surišančiu dažikliu Hoechst 33 258 dažymu. H22 ląstelės buvo pasėtos į 6-šulinėlių plokštelę, koncentraciją 1 × 105 ląstelių/šulinėlių 2 ml terpėje. Po 60–70 procentų susiliejimo ląstelės buvo apdorotos CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)(0, 100, 200, 300 ir 400 ug/ml) 24 val. Ląstelės buvo surinktos ir fiksuotos 4 procentų lediniu paraformaldehidu 4 laipsnių temperatūroje 10 min. Po plovimo PBS ląstelės buvo nudažytos Hoechst 33 258 (Beyotime, Kinija) 4 laipsnių temperatūroje 10 minučių. Mėginiai buvo stebimi apverstu fluorescenciniu mikroskopu (Nikon Eclipse Ti-E, Japonija).
Western blot
Anti-caspase-3, anti-caspase-3, Anti-Bcl-2 ir anti-Bax buvo įsigyti iš Beyotime Biotech Co., Ltd. (Šanchajus, Kinija). Anti-kaspazė-7, anti-kaspazė-7,anti-kaspazė-8, anti-kaspazė-8, anti-kaspazė-9, anti-kaspazė skeltos kaspazės-9, anti-PARP, anti-PARP, anti-pelės IgG-HRP ir anti-triušio IgG-HRP buvo įsigyti iš Cell Signaling Technology. Anti- -aktinas buvo įsigytas iš Beijing ComWin Biotech Co., Ltd. (Pekinas, Kinija).
H22 ląstelės buvo apdorotos skirtingomis CTPG koncentracijomis(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)({0}}, 100, 200, 300 ir 400 ug/ml) arba 0,3 proc. DMSO 24 val. Ląstelės buvo surinktos ir lizuojamos su ląstelių lizės tirpalu RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) 30 minučių ant ledo. Mėginiai buvo susukti žemyn (12,000 g 15 min 4 laipsnių temperatūroje), kad būtų surinkti supernatantai, o baltymų koncentracija buvo išmatuota BCA rinkiniu (Thermo Fisher Scientific, JAV). Vienodas baltymų kiekis kiekviename mėginyje buvo išskirtas 12 procentų SDS-PAGE ir perkeltas į PVDF membranas (Biosharp, Kinija). Užblokavus TBST buferiu, buvo 5 procentai neriebaus pieno, membranos buvo inkubuojamos atitinkamai su atitinkamais pirminiais antikūnais ir antriniais antikūnais, konjuguotais su krienų peroksidaze (HRP). Po plovimo TBST tiksliniai baltymai buvo aptikti ECL tyrimo rinkiniu (Beyotime, Kinija).
Gyvūnų ir etikos pareiškimas
6-8 savaičių amžiaus Kunmingo pelių patinai buvo įsigyti iš Sindziango medicinos universiteto (Urumčis, Sindziangas, Kinija) gyvūnų laboratorijos centro. Pelės buvo laikomos standartinėje Sindziango universiteto, kontroliuojamos temperatūros, šviesos ciklo gyvūnų patalpoje. Visi tyrimai su gyvūnais buvo atlikti pagal Sindziango universiteto Gyvūnų priežiūros ir naudojimo komiteto gaires. Protokolą patvirtino Sindziango universiteto Sindziango pagrindinės biologinių išteklių ir genų inžinerijos laboratorijos (BRGE-AE001) eksperimentų su gyvūnais etikos komitetas.
Naviko pelių tyrimas
Pelės auglio modelio indukcijai Kunmingo pelių patinams į dešinįjį šoną po oda buvo sušvirkšta 1 × 1 0 6 H22 ląstelių 100 ul PBS. Po 3 dienų pelės buvo atsitiktinai suskirstytos į 3 grupes (7 pelės grupėje). Kontrolinei grupei aplink naviką po oda buvo švirkščiama 0, 1 ml DMSO. CTPG-200 ir CTPG-400 grupėms po oda buvo sušvirkšta 200 arba 400 mg/kg CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)0.1 ml DMSO aplink naviką. Pelės buvo gydomos kas 2 dienas iki 21 dienos. Naviko dydžiai buvo matuojami naudojant suportus iki 25 dienų, o naviko tūris buvo apskaičiuotas pagal formulę: naviko tūris (mm3)=(ilgis × plotis 2)/2. Po 25 dienų auglių pelių išgyvenamumas buvo stebimas kiekvieną dieną iki šio tyrimo pabaigos.
Statistinė analizė
Statistinis reikšmingumas buvo apskaičiuotas atliekant vienpusę dispersijos analizę tarp gydymo ir kontrolinių grupių. Visi duomenys buvo išreikšti kaip vidurkis ± standartinis nuokrypis (SD). p < 0,05="" buvo="" laikomas="" statistiškai="">
Rezultatai
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)sumažino H22 ląstelių gyvybingumą in vitro
Siekiant ištirti priešnavikinį CTPG poveikį(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)naudojant HCC, H22 ląstelės buvo apdorotos skirtingomis koncentracijomis CTPG (0, 100, 200, 300 ir 400 ug/ml) in vitro. Po 24 valandų H22 ląstelių morfologija buvo stebima naudojant apverstą mikroskopą. Mes nustatėme, kad H22 ląstelių morfologija smarkiai pasikeitė gydant CTPG. Didėjant CTPG koncentracijai, ląstelės tapo mažos ir apvalios, o ląstelių skaičius taip pat labai sumažėjo (1a pav.). MTT tyrimas buvo naudojamas H22 ląstelių gyvybingumui analizuoti po gydymo CTPG atitinkamai 24, 48 ir 72 valandas. CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)žymiai sumažino H22 ląstelių gyvybingumą priklausomai nuo dozės ir laiko (1b pav.). CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)esant 300 ug/ml, buvo pasiektas geriausias slopinimo greitis (1c pav.). CTPG IC50 reikšmės H22 ląstelėms yra 236 ug/ml 24 val. ir 169,8 ug/ml 48 val.
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)sukėlė apoptozę H22 ląstelėse
Ištirti, ar sumažėjusį H22 ląstelių gyvybingumą lemia indukcijaapoptozė, H22 ląstelės buvo apdorotos skirtingomis koncentracijomis CTPG (0, 100, 200, 300 ir 400 ug/ml) 24 valandas ir nudažytos PI bei aneksinu V. Srauto citometrijos rezultatai parodė, kad CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)reikšmingai sukeltasapoptozėH22 ląstelių (įskaitant ankstyvą ir vėlyvąapoptozė) priklausomai nuo dozės (2a pav.). Nors didelė CTPG dozė(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)taip pat žymiai padidino H22 ląstelių nekrozę, nekrozė vaidina nedidelį vaidmenį slopinant H22 ląstelių augimą, nes jos dalis yra mažesnė (8,3 proc.), palyginti suapoptozė(52,6 proc.). Be to, visi H22 ląstelių baltymai buvo išskirti po CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)gydymas ir antiapoptozinės B ląstelių limfomos 2 (Bcl-2) ir proapoptotinės BCL-2-susijusio X baltymo (Bax) ekspresijos buvo aptiktos Western blot metodu. Pilkų atspalvių nuskaitymo duomenys parodė, kad Bax ir Bcl-2 ekspresijos lygiai atitinkamai padidėjo ir sumažėjo. Bax/Bcl-2 santykis žymiai padidėjo (2b pav.). Šie rezultatai rodo, kad CTPG sukeliaapoptozėH22 ląstelėse.
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)H22 ląstelėse sukelia chromosomų kondensaciją ir ląstelių ciklo sustabdymą
Buvo pranešta, kad vaistų sukeltas DNR pažeidimas ir ląstelių ciklo sustabdymas gali slopinti naviko ląstelių augimą ir sukeltiapoptozėnavikinėse ląstelėse [17, 18]. Nustatyti branduolių morfologiją H22 ląstelėse po CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)Gydant 24 valandas, H22 ląstelės buvo nudažytos Hoechst 33 342 ir stebimos naudojant apverstą fluorescencinę mikroskopiją. CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)apdorotose ląstelėse buvo nuo dozės priklausomas ryškiai kondensuoto branduolių chromatino padidėjimas, o neapdorotose ląstelėse buvo homogeniškai dažyti branduoliai (3a pav.). Ląstelių ciklo pasiskirstymas H22 ląstelėse buvo toliau analizuojamas dažant PI po gydymo CTPG 24 valandas. Kaip parodyta 3b pav., CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)gydymas žymiai padidino G0/G1- ir G2/M fazės ląstelių dalį ir žymiai sumažino S fazės ląstelių dalį, o tai rodo, kad CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)sukėlė G0/G1 ir G2/M fazių sustabdymą H22 ląstelėse. Didelė CTPG dozė taip pat žymiai padidino sub G1 ląstelių dalį.
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)sumažino mitochondrijų membranų potencialą ir padidino citochromo c išsiskyrimą
Nuo mitochondrijų priklausomas kelias vaidina svarbų vaidmenį indukcijojeapoptozė[19, 20]. Mitochondrijų membranos potencialo (Δψm) pokyčiai gali būti
stebimas JC-1 dažymu dėl JC-1 agregato (raudona fluorescencija), sumažėjus Δψm [21], gali suirti į monomerą (žalia fluorescencija). Po CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)Gydant 24 valandas, H22 ląstelės buvo nudažytos JC-1 dažais. Srauto citometrijos duomenys parodė, kad raudona fluorescencija FL-2 kanale ir žalia fluorescencija FL-1 kanale žymiai sumažėjo ir padidėjo po CTPG.(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)gydymas. PE-FITC plius ląstelių dalis žymiai padidėjo (4a pav.), o tai rodo, kad CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)sumažino Δψm H22 ląstelėse. Tai atitinka padidėjusį Bax/Bcl-2 santykį. Todėl mes pastebėjome, kad citochromo c išsiskyrimas žymiai padidėjo po CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)gydymas (4b pav.). Šie rezultatai parodė, kad CTPG gali iš dalies sukeltiapoptozėH22 ląstelėse per nuo mitochondrijų priklausomą (vidinį) kelią.
CTPG aktyvavo kaspazės kelią ir užkirto kelią DNR taisymui
Kitas, CTPG sukeltas kaspazės aktyvavimas(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)buvo analizuojami tiek išoriniai, tiek vidiniai signalizacijos keliai. Po CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)Gydant 24 valandas, visi baltymai buvo išskirti iš H22 ląstelių, o pro ir suskaidytų kaspazių lygiai buvo nustatyti Western blot metodu. Palyginti su neapdorota arba DMSO kontrole, CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)gydymas žymiai padidino ne tik suskaidytos kaspazės -8 (išorinio kelio), bet ir suskaldytos kaspazės-9 (vidinio kelio) lygį (5 pav.). Paeiliui aktyvuota kaspazė-8 ir -9 suskaldė pasroviui esančią prokaspazę-3 ir -7, kurios buvo pastebėtos 5 pav. Suaktyvinta kaspazė-3 suskaidė DNR poli (ADP-ribozės) polimerazės (PARP) remonto fermentas, siekiant užkirsti kelią DNR atstatymui ir kaupti DNR pažeidimus, kaip parodyta 3a pav. Šie rezultatai parodė, kad CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)sukeltasapoptozėH22 ląstelėse per išorinius ir vidinius signalizacijos kelius.
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)slopina H22 HCC augimą in vivo ir pagerina auglių pelių išgyvenamumą
Galiausiai, priešnavikinis CTPG poveikis(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)HCC buvo įvertintas pelės auglio modelyje, kuris buvo nustatytas H22 ląstelių injekcija po oda. Po 3 dienų H22 ląstelių injekcijos naviko pelės buvo gydomos CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)8 kartus. Nurodytais laiko momentais buvo stebimas pelių kūno svoris ir naviko dydžiai. Kaip parodyta 6a pav., kiekvienos grupės pelių kūno svoris reikšmingai nesiskiria, o tai rodo, kad pasirinktos CTPG dozės(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)neturi akivaizdaus šalutinio poveikio. Įdomu tai, kad pelių, gydytų 200 mg/kg ir 400 mg/kg CTPG, auglio augimas buvo reikšmingai slopinamas (6b pav.). Be to, dvi CTPG dozės(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)gydymas labai pagerino auglių pelių išgyvenamumą (3/7, 3/7), palyginti su kontroline grupe (0/7) eksperimento pabaigoje (6b pav.). Taip pat nustatėme, kad CTPG, priklausomai nuo dozės, žymiai padidino splenocitų, išskirtų iš Kunmingo pelių patinų, dauginimąsi (6c pav.), o tai rodo, kad CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)turi imunostimuliacinį poveikį.
Diskusija
TCM buvo naudojamas įvairioms ligoms, įskaitant vėžį, gydyti ilgą istoriją. Buvo pranešta, kad TCM gali sukeltiapoptozėĮvairių tipų naviko ląstelėse per išorinius (nuo mirties receptorių priklausomus) ir vidinius (nuo mitochondrijų priklausomus) signalizacijos kelius, kad būtų daromas priešnavikinis poveikis [22–25]. Šie du būdai gali suaktyvinti atitinkamai kaspazę -8 ir -9 [24, 26]. Čia mes nustatėme, kad CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)žymiai slopino H22 ląstelių augimą indukuodamas apoptozę ir ląstelių ciklo sustabdymą. Skaldytos kaspazės -8 ir -9 lygius žymiai padidino CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)gydymas, o tai rodo, kad tiek išoriniai, tiek vidiniai signalizacijos keliai buvo susiję suapoptozė. Mūsų ankstesnis tyrimas parodė, kad CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)sukėlė apoptozę melanomos B16-F10 ląstelėse nuo mitochondrijų priklausomu keliu, kuris padidino suskaidytos kaspazės-9, bet ne kaspazės-8 lygį [16]. CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)gali suaktyvinti skirtingus signalizacijos kelius skirtingų tipų naviko ląstelėse.
Mitochondrijų membranos vientisumą griežtai reguliuoja BCL{0}} baltymų šeimos nariai, įskaitant Bax ir Bcl-2 [27, 28]. Bax ir Bcl-2 santykis vaidina lemiamą vaidmenį priklausomybė nuo mitochondrijųapoptozėkelias [29]. CTPG apdorotose H22 ląstelėse(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai), Bax/Bcl-2 santykis buvo žymiai padidintas, todėl šiame tyrime gali sumažėti Δψm ir išsiskirti citochromas c. Todėl pro-kaspazė-9 buvo suskaidyta ir suaktyvinta. Galiausiai aktyvios kaspazės -8 ir -9 iniciatoriai aktyvavo kaspazės vykdytoją-3, kad suskaldytų PARP, kad būtų išvengta DNR atkūrimo. Visi šie rezultatai rodo, kad CTPG sukėlėapoptozėH22 ląstelėse per išorinius ir vidinius signalizacijos kelius. Naviko pelės modelyje CTPG žymiai slopino H22 HCC augimą ir labai pagerino naviko pelių išgyvenimą. Įdomu tai, kad CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)priklausomai nuo dozės skatino Kunmingo pelių splenocitų dauginimąsi, o tai atitinka mūsų ankstesnį tyrimą [16]. Šie rezultatai rodo, kad CTPG gali slopinti H22 HCC augimą pelėse tiek dėl tiesioginio priešnavikinio poveikio, tiek netiesioginio imuniteto stiprinimo.
Cistanche tululosaProduktai
Išvados
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)slopino H22 ląstelių augimą tiek in vitro, tiek in vivo ir sukėlėapoptozėH22 ląstelėse per išorinius ir vidinius signalizacijos kelius. Šie duomenys parodė, kad CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai)gali būti potencialus kandidatas gydyti HCC.
Santrumpos
Bax: BCL{0}}susijęs X baltymas; Bcl-2: B ląstelių limfoma 2; CTPG:Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidai; HCC: kepenų ląstelių karcinoma; HRP: krienų peroksidazė; MTT: 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolio bromidas; PARP: poli (ADP-ribozės) polimerazės DNR atkūrimo fermentas; TCM: tradicinė kinų medicina; Δψm: mitochondrijų membranos potencialas
Finansavimas
Šį darbą rėmė Sindziango Uigūrų autonominio regiono aukšto lygio talentų įvedimo projektas JL, Kinijos nacionalinio gamtos mokslų fondo dotacija (31460241) JL ir Sindziango universiteto doktorantūros pradžios fondas (BS160261 iki XW ir BS150236 iki BS150236). YL).
Duomenų ir medžiagų prieinamumas
Šio tyrimo neapdorotus duomenis galima gauti atitinkamam autoriui pagrįstu prašymu.
Autorių indėlis
JL ir JL sukūrė eksperimentus. PY, JL, AA ir YY atliko eksperimentus. LX, XW ir YL analizavo duomenis. PY, JL ir JL parašė rankraštį. Visi autoriai prisidėjo ir patvirtino galutinį rankraštį.
Etikos patvirtinimas
Tyrimą su gyvūnais patvirtino Sindziango universiteto Sindziango pagrindinės biologinių išteklių ir genų inžinerijos laboratorijos Eksperimentų su gyvūnais etikos komitetas.
Konkuruojantys interesai
Autoriai pareiškia, kad neturi konkuruojančių interesų.
Leidėjo pastaba
Springer Nature išlieka neutralus paskelbtų žemėlapių ir institucinių ryšių atžvilgiu.
Išsami informacija apie autorių
1Sindziango pagrindinė biologinių išteklių ir genų inžinerijos laboratorija, Sindziango universiteto Gyvybės mokslų ir technologijų kolegija, 666 Shengli Road, Urumčis, Sindziangas 830046, Kinija.2Gyvybės mokslų koledžas, Sindziango normalusis universitetas, 102 Xinyi Road, Urumqi 830054, Sindziangas, Kinija.3Sindziango medicinos universiteto filialo navikų ligoninė, Urumčis 830011, Kinija.
Cistanche tululosaProduktai
Nuo: 'Cistanche tubulosa feniletanoidiniai glikozidaisukeltiapoptozėH22 kepenų ląstelių karcinomos ląstelėse per išorinius ir vidinius signalizacijos kelius, Pengfei Yuan1 ir kt.
---Yuanas ir kt. BMC papildomoji ir alternatyvioji medicina (2018 m.) 18:275 https://doi.org/10.1186/s12906-018-2201-1
Nuorodos
1. Global Burden of Disease Cancer Collaboration, Fitzmaurice C, Allen C, Barber RM, Barregard L, Bhutta ZA, Brenner H, Dicker DJ, Chimed-Orchir O, Dandona R ir kt. Pasaulinis, regioninis ir nacionalinis sergamumas vėžiu, mirtingumas, prarasti gyvenimo metai, su negalia pragyventi metai ir pagal negalią pakoreguoti gyvenimo metai 32 vėžio grupėse, 1990–2015 m.: sisteminė pasaulinės ligų naštos analizė. JAMA Oncol. 2017;3:524–48.
2. Chen W, Zheng R, Baade PD, Zhang S, Zeng H, Bray F, Jemal A, Yu XQ, He J. Cancer statistika Kinijoje, 2015. CA Cancer J Clin. 2016;66:115–32,3. Europos kepenų tyrimų asociacija, Europos vėžio tyrimų ir gydymo organizacija. EASL-EORTC klinikinės praktikos gairės: kepenų ląstelių karcinomos gydymas. JHepatol. 2012;56:908–43.
4. Roayaie S, Obeidat K, Sposito C, Mariani L, Bhoori S, Pellegrinelli A, Labow D, Llovet JM, Schwartz M, Mazzaferro V. Kepenų ląstelių vėžio rezekcija Mažiau nei 2 cm arba lygi: rezultatai iš dviejų vakarinių centrų. Hepatologija. 2013;57:1426–35.
5. Ting CT, Cheng YY, Tsai TH. Žolelių ir vaistų sąveika tarp tradicinės hepatoprotekcinės formulės ir sorafenibo dėl hepatotoksiškumo, histopatologijos ir farmakokinetikos žiurkėms. Molekulės. 2017;22:E1034.
6. Llovet JM, Ricci S, Mazzaferro V, Hilgard P, Gane E, Blanc JF, de Oliveira AC, Santoro A, Raoul JL, Forner A ir kt. Sorafenibas sergant pažengusia kepenų ląstelių karcinoma. N Engl J Med. 2008;359:378–90.
7. Cheng AL, Kang YK, Chen Z, Tsao CJ, Qin S, Kim JS, Luo R, Feng J, Ye S, Yang TS ir kt. Sorafenibo veiksmingumas ir saugumas pacientams Azijos ir Ramiojo vandenyno regione, sergantiems pažengusia kepenų ląstelių karcinoma: III fazės atsitiktinių imčių, dvigubai aklas, placebu kontroliuojamas tyrimas. Lancet Oncol. 2009;10:25–34.
8. Shi Z, Song T, Wan Y, Xie J, Yan Y, Shi K, Du Y, Shang L. Tradicinių vabzdžių kinų vaistų kombinuotos chemoterapijos nechirurginiam kepenų ląstelių karcinomos gydymui sisteminė apžvalga ir metaanalizė. Sci Rep.2017;7:4355.
9. Yang Z, Liao X, Lu Y, Xu Q, Tang B, Chen X, Yu Y. Papildoma terapija su tradicine kinų medicina pagerina rezultatus ir sumažina nepageidaujamus reiškinius sergant kepenų ląstelių karcinoma: atsitiktinių imčių kontroliuojamų tyrimų metaanalizės duomenys. Evid Based Complement Alternatyvus Med. 2017; 2017:3428253.
10. Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR. Antinociceptinis ir priešuždegiminis aktyvumas, kurį sukelia Cistanche deserticola graužikams. J Etnopharmacol. 2002;83:177–82.
11. Wu CR, Lin HC, Su MH. Atšaukimas vandeniniais ekstraktaisCistanche tubulosadėl elgesio trūkumų į Alzheimerio ligą panašiame žiurkių modelyje: svarba amiloido nusėdimui ir centrinio neurotransmiterio funkcijai. BMC Complement Altern Med. 2014;14:202.
12. Jiang Y, Tu PF. Cistanche rūšių cheminių sudedamųjų dalių analizė. JChromatogr A. 2009;1216:1970–9.
13. Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Matsuda H, Yoshikawa M, Yuan D, Muraoka O. Acilinti feniletanoidiniai oligoglikozidai, turintys hepatoprotekcinį aktyvumą iš dykumos augaloCistanche tubulosa.Bioorg Med Chem. 2010 m.; 18:1882–90.
14. Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y, Tu PF.Feniletanoidiniai glikozidaisu priešuždegiminiu poveikiu iš Tarimo dykumoje auginamų Cistanche deserticola stiebų. Fitoterapija.2013;89:167–74.
15. Deng M, Zhao J, Tu P, Jiang Y, Li Z, Wang Y. Echinakozidas atkuria SHSY5Y neuronų ląsteles iš TNF sukeltųapoptozė. Eur J Pharmacol. 2004;505:11–8.
16. Li J, Li J, Airire A, Gao L, Huo S, Luo J, Zhang F.Feniletanoidiniai glikozidaiišCistanche tubulosaslopina B16-F10 ląstelių augimą tiek in vitro, tiek in vivo indukuodamasapoptozėper nuo mitochondrijų priklausomą kelią. J Vėžys. 2016;7:1877–87.
17. Shang HS, Chang CH, Chou YR, Yeh MY, Au MK, Lu HF, Chu YL, Chou HM, Chou HC, Shih YL ir kt. Kurkuminas sukelia DNR pažeidimus ir paveikia susijusią baltymų ekspresiją HeLa žmogaus gimdos kaklelio vėžio ląstelėse. Oncol Rep. 2016;36:2207–15.
18. Wang R, Zhang Q, Peng X, Zhou C, Zhong Y, Chen X, Qiu Y, Jin M, Gong M, Kong D. Stelettin B sukelia G1 areštą,apoptozė, ir autofagija žmogaus nesmulkialąstelinio plaučių vėžio A549 ląstelėse blokuojant PI3K / Akt / mTOR kelią. Sci Rep. 2016;6:27071.
19. Sinha K, Das J, Pal PB, Sil PC. Oksidacinis stresas: nuo mitochondrijų priklausomi ir nuo mitochondrijų nepriklausomi keliaiapoptozė. Arch Toxicol. 2013 m.; 87:1157–80.
20. Zhang YS, Shen Q, Li J. Tradicinė kinų medicina, nukreipta į stemplės vėžio gydymo apoptozinius mechanizmus. Acta Pharmacol Sin. 2016 m.; 37:295–302.
21. Chong ZZ, Lin SH, Li F, Maiese K. Sirtuino inhibitorius nikotinamidas padidina neuronų ląstelių išgyvenimą ūminio anoksinio pažeidimo metu per AKT, BAD, PARP ir su mitochondrijomis susijusius "antiapoptotinius" kelius. Curr Neurovasc Res. 2005;2:271–85.
22. Hu B, Wang SS, Du Q. Tradicinė kinų medicina hepatokarcinomos profilaktikai ir gydymui: nuo suolo iki lovos. Pasaulis J Hepatol. 2015;7:1209–32.
23. Hu B, An HM, Wang SS, Chen JJ, Xu L. Prevencinis ir terapinis Kinijos vaistažolių junginių poveikis nuo kepenų ląstelių karcinomos. Molekulės. 2016;21:142.
24. Xu H, Zhao X, Liu X, Xu P, Zhang K, Lin X. Tradicinės kinų medicinos priešnavikinis poveikis, nukreiptas į ląstelių apoptotinį kelią. Vaistas Des Devel Ther. 2015;9:2735–44.
25. Li-Weber M. Taikymasapoptozėkinų medicinos metodai vėžiui susirgti. Vėžys Lett. 2013;332:304–12.
26. Xu G, Shi Y.Apoptozėsignalizacijos keliai ir limfocitų homeostazė. Cell Res. 2007;17:759–71.
27. Tait SW, Green DR. Mitochondrijos ir ląstelių mirtis: išorinės membranos pralaidumas ir ne tik. Nat Rev Mol Cell Biol. 2010;11:621–32.
28. Galluzzi L, Kepp O, Kroemer G. Mitochondrijos: pagrindiniai pavojaus signalizacijos reguliatoriai. Nat Rev Mol Cell Biol. 2012;13:780–8.
29. Martinou JC, Youle RJ. Mitochondrijos vidujeapoptozė: Bcl{0}} šeimos nariai ir mitochondrijų dinamika. Dev Cell. 2011;21:92–101.
