Apsauginio maliarijos imuniteto veiksniai pelėms, imunizuotoms gyvais sporozoitais trimetoprimo ir sulfametoksazolo profilaktikos metu

Abstraktus.

ŽIV ir maliarija geografiškai sutampa. Trimetoprimas – sulfametoksazolas (TMP-SMX) yra vaistas, plačiai naudojamas ŽIV užsikrėtusiems neinfekuotiems ir infekuotiems vaikams maliarijos endeminiuose rajonuose, ir žinoma, kad jis turi antimalarinį poveikį. Todėl būtina atlikti tolesnį antimalarinio poveikio ir poveikio maliarijai būdingo imuniteto vystymuisi tyrimą. Naudodami graužikų maliarijos modelius, anksčiau parodėme, kad pakartotinis Plasmodium poveikis TMP-SMX arba chemoprofilaktinės vakcinacijos (CVac) metu sukelia nuo CD8 T ląstelių priklausomą prieš eritrocitinį imunitetą.

Tačiau humoralinis imuninis atsakas yra svarbus priešeritrocitinio imuniteto modeliuose. Čia parodome, kad antikūnų sukeltas atsakas prisideda prie apsauginio imuniteto, kurį sukelia CVac imuniniai serumai, naudojant TMPSMX homologinių, bet ne heterologinių parazitų rūšių modeliuose. Klinikiniuose tyrimuose turi būti atsižvelgiama į galimus anti-Plasmodium antikūnus, sukeltus TMP-SMX profilaktikos metu.

Humoralinis imuninis atsakas yra glaudžiai susijęs su žmogaus imunitetu. Humoralinis imuninis mechanizmas daugiausia naudoja kūno skysčiuose esančius antikūnus, kad apsisaugotų nuo infekcijų, įskaitant tarpląstelinius patogenus, tokius kaip bakterijos, virusai ir grybeliai. Žmogaus imuninė sistema apima du humoralinio imuniteto ir ląstelinio imuniteto mechanizmus, kurie gali atpažinti ir pašalinti svetimus patogenus. Nors humoralinis imunitetas ir ląstelinis imunitetas skiriasi, jie kartu sudaro visą žmogaus imuninę sistemą. Tik veikiant pilnai žmogaus imuninei sistemai, mūsų organizmas gali geriau reaguoti į įvairių ligų sukėlėjų invaziją. Šiuo požiūriu turime atkreipti dėmesį į savo imunitetą. Atlikdami tyrimą nustatėme, kad yra augalas Cistanche deserticola, kuris gali pagerinti imunitetą. Gebėjimas stresuoti, sustiprinti imuninių ląstelių baktericidinį poveikį.

Spustelėkite cistanche deserticola papildą

ĮVADAS

ŽIV ir maliarija kartu yra labai paplitę daugelyje pasaulio regionų, o daug ŽIV užsikrėtusių ar užsikrėtusių vaikų gyvena maliarija endeminėse vietovėse. Trimetoprimas-sulfametoksazolas (TMPSMX) yra vaistas, plačiai naudojamas siekiant sumažinti oportunistinių infekcijų dažnį ŽIV užsikrėtusiems ir infekuotiems vaikams, be to, šis vaistas turi antimalarinį poveikį kaip antifolatas.1

Tačiau, nepaisant plačiai paplitusio naudojimo ir antimalarinio poveikio, jo poveikį maliarijos infekcijai ir maliarijai būdingo imuniteto vystymuisi plačiai paplitusio antifolatinio atsparumo bei ŽIV paveiktiems neinfekuotiems ir užsikrėtusiems vaikams reikia toliau tirti. Iš tiesų, klinikiniuose tyrimuose tik neseniai pradėta nagrinėti TMP-SMX profilaktikos trukmės įtaką maliarijai kaip imuniteto atspindį.2,3.

Maliarijos užsikrėtimas Plasmodium žinduolių šeimininke prasideda nuo patelių anofelino uodų, kurie pasėja sporozoidus (SPZ) kraujo valgio metu. Tada sporozoitai keliauja į kepenis ir užkrečia hepatocitus, kur išsivysto į kepenų stadijos arba egzoeritrocitines formas (EEF). Egzoeritrocitinės formos gamina dešimtis tūkstančių merozoitų, kurie vėliau įsiveržia į eritrocitus, kad inicijuotų kraujo stadiją.

Natūraliai įgytas imunitetas maliarijai susidaro tik po pasikartojančių maliarijos epizodų ir neužkerta kelio pakartotinai užsikrėsti. Tačiau sterilizuojantis priešinfekcinis imunitetas gali būti sukeltas susilpnėjusiomis SAZ, kurios sustoja vystantis kepenų stadijai.4 Antiinfekcinis imunitetas taip pat stebimas pelėms ir žmonėms, kurie buvo užsikrėtę SAZ ir tuo pačiu metu buvo vartojami vaistai, naikinantys kepenis arba kraują. stadijos parazitų,5,6, ir šis procesas vadinamas chemoprofilaktika vakcinacija (CVac). Visi šie duomenys rodo, kad priešeritrocitinių parazitų poveikis gali sukelti labai veiksmingą apsauginį imunitetą.

Iš tiesų, pelėms parodėme, kad TMP-SMX profilaktinėmis dozėmis gali sustabdyti Plasmodium vystymąsi kepenų stadijoje ir kad šie režimai kartotinio maliarijos poveikio metu, vadinami CVac/TMP-SMX, sukelia apsauginį imunitetą, nukreiptą prieš eritrocitų stadijos parazitus. 7 Tokiam imunitetui reikalingos CD8 T ląstelės, o antikūnų indėlis lieka neišsamiai ištirtas.7 Čia mes siekėme nustatyti antikūnų indėlį į CVac/TMP-SMX sukeltą apsauginį imunitetą, naudojant pelių serumą mūsų nustatytame CVac modelyje su. Plasmodium yoelii užkrėstos pelės, gaunančios TMP-SMX tokiais kiekiais, kurie yra maždaug tokie, kokie pasiekiami vaikams taikant standartines TMP-SMX profilaktines dozes.7,8.

METODAI

Pelės.

4–6 savaičių amžiaus ir 20–25 g sveriančių BALB/c pelių patelės (Taconic arba NIH) buvo naudojamos eksperimentuose, patvirtinus NIAID / NIH institucinio gyvūnų priežiūros ir naudojimo komiteto. Visiems eksperimentams pelių amžius ir lytis atitiko.

Parazitai ir uodai.

Anopheles stephensi uodai buvo šeriami pelėmis, užkrėstomis P. yoelii (17XNL) arba Plasmodium berghei (ANKA), o SPZ buvo paimti iš seilių liaukų 14–18 dienomis (P. yoelii) arba 21–26 dienomis po to (P. berghei). uodų skrodimas. Visi eksperimentai buvo atlikti su P. yoelii 17XNL ir P. berghei ANKA, išskyrus imunofluorescencinius tyrimus (IFA), kuriuose transgeninės parazitų linijos, ekspresuojančios žalią fluorescencinį baltymą (GFP) (P. yoelii GFP [17XNL] ir P. berghei GFP [ANKA]). buvo naudojami.9,10 Visi uodai buvo šeriami užkrėstomis pelėmis, o parazitams nebuvo atliktas nuoseklus kraujo perėjimas, nes buvo įrodyta, kad tai moduliuoja infekcijos virulentiškumą.11.

Trimetoprimo – sulfametoksazolo režimas, SPZ inokuliacija ir veiksmingumo įvertinimas.

Trimetoprimas – sulfametoksazolas buvo naudojamas komerciškai prieinamoje generinėje suspensijos formoje ir tokiu režimu, kuris slopina kepenų stadijos parazitų vystymąsi in vitro ir apsaugo nuo atviros parazitemijos pelėms imunizacijos CVac / TMP-SMX metu. 7 Mūsų CVac modelis, aprašytas toliau pateiktame tekste, buvo plačiai ištirtas imunologiškai ir farmakokinetiškai naudojant P. yoelii ir taikytą imunizacijos režimą.7,8 Pažymėtina, kad P. berghei nebuvo naudojamas pakartotinės infekcijos režimams, kuriuose naudojamas TMP-SMX kaip kai kurios P. berghei padermės pasižymi antifolatiniu atsparumu.1.

Trumpai tariant, pelėms tris kartus buvo sušvirkšta 10,000 P. yoelii 17XNL SPZ 14-–21- dienų intervalais. Nuo tos pačios dienos, kai buvo skiepijama SPZ, imunizuotiems ir kontroliniams gyvūnams buvo duota 60 μl TMP-SMX per burną, praėjus 18, 24 ir 36 valandoms po SPZ inokuliacijos. Imunizacijos režimo metu imunizuotų pelių parazitemijos nebuvimas buvo patvirtintas tiriant Giemsa dažytus plonus kraujo tepinėlius iš uodegos kraujo kas antrą dieną (iki 15 dienos). Pelės, gavusios CVac/TMP-SMX, buvo pailsėjusios mažiausiai 4–6 savaites po paskutinio SPZ ir vaisto vartojimo prieš serumo paėmimą.7 Imuniniai serumai, gauti iš P. yoelii CVac/TMP-SMX imunizuotų pelių, čia bus nurodyti kaip CVac serumas. Kontroliniai serumai buvo paimti iš pelių, nesergančių maliarija, kurioms nebuvo atlikta jokios kitos intervencijos („naivios“) arba kurios gavo tik vaistus, bet nebuvo skiepytos SPZ („vaistų kontrolė [DC]“). Atskirai, maliarijos nesergančios užkrečiamumo kontrolės pelės kiekvieno tyrimo metu gavo SPZ (tik fosfatiniu buferiniu tirpalu [PBS]), kad patvirtintų parazitų užkrečiamumą.

In vitro ir in vivo SPZ neutralizavimo tyrimai su CVac serumais.

In vitro sporozoitų neutralizavimo tyrimai (SNA), kuriuose naudojamas serumas serumo antikūnų poveikiui parazitų užkrečiamumui įvertinti, buvo atlikti, kaip aprašyta anksčiau.12 Trumpai tariant, 20, 000 P. berghei arba P. yoelii SPZ buvo iš anksto inkubuojami ant ledo (P. berghei) arba kambario temperatūroje (P. yoelii) 40–45 minutes serumuose, surinktuose iš 5–10 CVac/TMP-SMX imunizuotų pelių 7 arba iš DC arba naivių pelių. Tada sporozoitai buvo pridėti prie susiliejančių HepG2:CD81 ląstelių (dr. Erico Rubinstein dovana, Inserm U935, Villejuif, Prancūzija). Po to sporozoitai, paruošti 10–15 μl išpjaustymo terpėje su 6 μL serumo, buvo inkubuojami 30 μL (1:5 praskiedimo) kiekvienoje šulinėlyje 8-šulinėlių kameros stiklelyje (Lab-Tek, Thermofisher). Scientific, Waltham, MA)) su kultivuotomis ląstelėmis, o po to buvo inkubuojami 37 °C temperatūroje 60–72 valandas keičiant auginimo terpę (Dulbecco modifikuota erelio terpė [DMEM] ir 10 procentų galvijų vaisiaus serumo [FBS] ir 100 V/mL penicilino. – streptomicinas) kas 24 valandas. Tyrimai buvo atlikti keturiuose šulinėliuose kiekvienai sąlygai.

Po 60–72 valandų ląstelės buvo tripsinizuotos (tripsino-etilendiaminotetraacto rūgštis [EDTA]) ir du kartus plaunamos RNR neturinčiu PBS, o bendra RNR buvo ekstrahuota, o parazitų našta buvo įvertinta qPCR. Visa RNR buvo išskirta naudojant TRI reagentą (Molecular Research Center, Cincinnati, OH), pagal gamintojo instrukcijas. Atvirkštinė transkripcija buvo atlikta naudojant 1 ug bendros RNR ir atsitiktinius heksamerus. Realaus laiko PGR buvo atlikta naudojant pradmenis, kurie atpažįsta P. yoelii – arba P. berghei specifines sekas 18S rRNR, o amplifikuotas produktas buvo kiekybiškai įvertintas naudojant QuantiTect SYBR Green PCR rinkinį (Qiagen, Hilden, Vokietija).13 Skiedimai { Standartinei kreivei sukurti buvo panaudota plazmidės konstrukcijos, turinčios P. yoelii ir P. berghei 18S rRNR genų, {7}} kartus. PGR eksperimentai buvo atlikti trimis egzemplioriais ir buvo atlikti nuo trijų iki keturių nepriklausomų eksperimentų.

Atliekant eksperimentus in vivo, SNA buvo atliekamos naudojant inkubavimo etapus, kaip ir anksčiau, išskyrus tai, kad 40,000 SPZ 100-μl PBS tūryje buvo iš anksto inkubuojami bandomajame serume, galutiniu praskiedimu 1:5 45 minučių kambario temperatūroje.14 Tada jis buvo dar skiedžiamas PBS, kad galutinė koncentracija būtų 40,000 SPZ/mL. Naivios pelės buvo paveiktos 100 μL šio tirpalo, atitinkančio 4,000 SPZ.14 Kraujo stadijos praeinamumas buvo stebimas iki 15 dienų po užkrėtimo. Kiekvienai parazitų rūšiai buvo atlikti du eksperimentai su 5–10 pelių kiekvienai sąlygai.

SAZ ir EEF imunofluorescencija.

Imunofluorescenciniai tyrimai buvo atlikti su seilių liaukų SPZ, kaip aprašyta kitur.15 Transgeninės parazitų linijos, ekspresuojančios GFP (P. yoelii GFP [17XNL] ir P. berghei GFP [ANKA]), buvo naudojamos IFA eksperimentams. Trumpai tariant, 5 × 104 SPZ 200 μl, gauti iš uodų seilių liaukų skrodimo terpėje, buvo iš anksto inkubuojami 45 minutes polilizinu padengtame aštuonių šulinėlių stiklelyje (Lab-Tek), padengtame susiliejančia HepG2:CD81. ląstelės. Tada sporozoitai 10 minučių kambario temperatūroje buvo fiksuojami PBS{11}} procentais PFA. Tada šie SPZ buvo naudojami imuniniam dažymui su pralaidumu arba be jo 0,1 procento Triton X100 PBS 5 minutes kambario temperatūroje, du kartus plaunami PBS, o po to blokuojami PBS 3 procentų galvijų serumo albuminu (BSA) 30 minučių kambaryje. temperatūros.

Tada šie SPZ buvo inkubuojami su serumais (1:400 PBS-3 proc. BSA) per naktį 8 °C temperatūroje. Po keturių kartų plovimo PBS, SPZ buvo inkubuojami RT su AlexaFluor 594-konjuguotu anti-peliu. IgG (Thermofisher Scientific) 2 valandas, praskiedus 1:1, 000 PBS3 procentais BSA. Tada stikleliai tris kartus plaunami PBS, kad būtų pašalinti neprisirišę antikūnai, ir galiausiai PBS su DAPI (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) 300 nM. Fluorescenciniai vaizdai buvo gauti naudojant konfokalinį mikroskopą (Leica SP5, Buffalo Grove, IL).

EEF imunofluorescenciniai vaizdai buvo gauti, kaip buvo pranešta anksčiau.14 Trumpai tariant, 50,000 P. yoelii/P. berghei GFP SPZ / šulinėlis buvo dedamas į susiliejusias HepG2: CD81 / HepG2 ląsteles aštuonių šulinėlių kamerose (Lab-Tek). Po 5 minučių centrifugavimo 310 g 20 ° C temperatūroje stikleliai buvo inkubuojami 37 ° C temperatūroje su auginimo terpe, kaip aprašyta anksčiau, ir po užsikrėtimo keičiami du kartus per dieną. Besivystantys EEF buvo fiksuoti po 48 valandų, užblokuoti 3 procentų BSA PBS (su arba be pralaidumo 0,1 procento Triton X-100 PBS 10 minučių) ir nudažyti pelių serumais, kaip aprašyta anksčiau SPZ IFA. Egzoeritrocitinės formos buvo paženklintos vištienos anti-EXP1 antikūnais, siekiant nustatyti užkrėstus hepatocitus. Vaizdai buvo gauti naudojant konfokalinį mikroskopą (Leica SP5).

Statistinė analizė.

Mann-Whitney testai buvo atlikti kombinuotais eksperimentais in vitro tyrimams. Buvo sukurtos išgyvenamumo kreivės, o grupių palyginimui buvo naudojamas log-rank (Mantel-Cox) testas. Eksperimentų duomenys buvo normalizuoti iki naivios kontrolės ir palyginti su DC visoms statistinėms analizėms. Statistinė analizė buvo atlikta naudojant GraphPad Prism programinę įrangą (7 versija, San Diegas, CA).

REZULTATAI

Chemoprofilaktinė vakcinacija/trimetoprimo ir sulfametoksazolo serumo išankstinis inkubavimas su P. yoelii SPZ, bet ne su P. berghei SAZ, sumažina kepenų stadijos parazitų naštą in vitro.

SNA P. yoeliiSPZ, inkubuotos ir padengtos HepG2: CD81 ląstelėse su CVac serumais, žymiai sumažino kepenų stadijos parazitų naštą in vitro (1A pav., P < 0.03). Tačiau panašus P. berghei SPZ inkubavimas su CVac serumais nesumažino kepenų stadijos parazitų naštos (duomenys nerodomi).

Chemoprofilaktinės vakcinacijos serumo išankstinis inkubavimas su P. yoelii, bet ne su P. berghei SPZ padidina praeinamumo laiką in vivo.

Išankstinis P. yoelii SPZ inkubavimas su CVac serumais žymiai pavėlavo P. yoelii praeinamumą (parazitų aptikimo kraujyje dieną), palyginti su DC serumo išankstiniu inkubavimu (1B pav., P=0.03). Priešingai, heterologinių P. berghei parazitų praeinamumas nebuvo reikšmingai atidėtas (duomenys nerodomi). Išankstinis inkubavimas su serumu iš naivių arba DC pelių, turinčių bet kurią parazitų rūšį, neturėjo įtakos vidutinėms dienoms iki praeinamumo, palyginti su užkrečiamumo kontrole (P. yoelii 1B pav., P. berghei duomenys nepateikti).

Chemoprofilaktinės vakcinacijos serumai sureagavo su. yoelii SAZ ir EEF, bet tik IFA P. berghei EEF.

Norėdami ištirti, ar CVac serumai atpažino homologinių ir heterologinių rūšių antigenus, atlikome IFA eksperimentus. Imunofluorescencinis tyrimas parodė, kad CVac imuniniai serumai atpažino antigenus iš P. yoelii SPZ ir EEF (2A ir B pav.). Atrodė, kad P. yoelii EEF (2B) dažymas antikūnais buvo smarkiai apribotas hepatocitų viduje, o kontrolinių (naivus arba DC) - ne. Chemoprofilaktinė vakcinacija / TMP-SMX imuniniai serumai neatpažino P. berghei SPZ, tačiau vėl buvo įrodymų, kad EEF buvo atpažintas, nors ir buvo difuzinis dažymas visoje EEF (2C ir D pav.).

IŠVADOS/DISKUSIJA

Gyvūnams ir žmonėms buvo įrodytas maliarijos parazitų susilpnėjimas vaistais ir dėl to atsirandantis apsauginis imunitetas, tačiau mechanizmai lieka neaiškūs. Naudodami P. yoelii CVac/TMP-SMX modelį, parodome, kad pelių imuniniai serumai turi dalinį SPZ neutralizavimo aktyvumą.

Nors CVac serumai nesuteikė sterilizuojančio imuniteto, jis iš dalies sumažino homologinių EEF susidarymą in vitro ir in vivo. Tačiau CVac serumai nesugebėjo suteikti apsauginio aktyvumo nuo heterologinių rūšių infekcijos in vitro ar in vivo. Šie duomenys gali reikšti, kad buvo nepakankamai antikūnų, kad būtų išvengta praeinamumo.

Heterologinės apsaugos trūkumas taip pat gali būti dėl didelio antigenų, į kuriuos buvo nukreiptas antikūnų atsakas, skirtingumo tarp rūšių.

Apšvitinto SPZ imunizacijos modelyje pelių imuniniai serumai atpažino tik homologinius SPZ ir neapsaugo nuo heterologinių užkrėtimų.16 Iš tiesų, mūsų IFA rodo, kad naudojant CVac serumą skirtingų rūšių reaktogeniškumas skiriasi, o tai rodo, kad buvo pakankamai skirtumų tarp rūšių. specifinių baltymų EEF ir SAZ. Tačiau kaip tai virsta funkciniais imuniniais atsakais, negalima tiesiogiai ekstrapoliuoti, ypač todėl, kad IFA buvo fiksuoti.

Tačiau ankstesnis darbas, įskaitant mūsų pačių, taip pat siūlo apsauginį heterologinį atsaką žmogaus Plasmodium falciparum CVac tyrimuose ir daugiausia dėl ląstelių, o ne humoralinių imuninių atsakų.17 Atsižvelgiant į tai, tiek šiame CVac/TMP-SMX modelyje, tiek apšvitintas SPZ modelis, CD8 T ląstelės labai prisideda prie sterilaus imuniteto.7 Įdomu tai, kad ankstesniuose mūsų publikacijose, kuriose naudojamas šis CVac modelis, nurodoma, kad ląstelių sukeliami atsakai yra apsaugoti nuo heterologinių ir homologinių iššūkių ir kad antikūnų atsako nepakako. sukelti apsauginę reakciją.7

Pažymėtina, kad tiek mūsų CVac modelis, tiek apšvitintas SPZ modelis skiriasi nuo kitų CVac sistemų modelių, kuriuose naudojamas kraujo stadijos antimaliarinis chlorokvinas. Tokiu atveju antikūnas tarpininkauja parazitų neutralizavimui in vivo ir apsaugai nuo heterologinių iššūkių.18 Tačiau pastarajame CVac modelyje kraujo stadijos sukelta apsauga greičiausiai vaidina didesnį vaidmenį, nes šiame modelyje stebimas kryžminis imunitetas, priešingai nei mūsų. CVac/TMP-SMX modelis.7,18 Taigi apskritai galimas CD8 T- arba CD4 T-ląstelių tiesioginio lizinio aktyvumo arba CD4 T-ląstelių tarpininkaujamos pagalbos indėlis į antikūnų gamybą, kaip parodyta graužikų modeliuose19. negalima atmesti ir greičiausiai priklauso nuo naudojamo modelio.

Lauke TMP-SMX profilaktika suteikia įvairaus laipsnio apsaugą nuo maliarijos skirtingo perdavimo intensyvumo srityse, net ir ten, kur yra didelis atsparumo folatams mutacijų paplitimas.2,3 Tačiau besivystančio imuninio atsako indėlis į apsaugą nuo maliarijos lieka neaiškus. . Imuninio atsako išskaidymas pelėms, kurios pakartotinai inokuliuoja SPZ TMP-SMX profilaktikos metu, turi savo vertę; tokie gyvūnų modelių tyrimai yra geriau pasirengę nustatyti apsaugines reakcijas.20 Tačiau klinikiniai tyrimai yra būtini norint nustatyti TMP-SMX poveikio poveikį ir mastą imuniteto nuo maliarijos vystymuisi. Iš tiesų, reikia atlikti būsimus klinikinius tyrimus, kad būtų galima suprasti, ar ir kaip TMP-SMX profilaktika keičia antimalarinio imuninio atsako vystymąsi maliarijos endeminėse srityse.

Gauta 2020 m. birželio 26 d. Priimta spausdinti 2020 m. spalio 9 d.

Paskelbta internete 2020 m. gruodžio 21 d.

Finansinė parama:

Šis tyrimas buvo finansuojamas Nacionalinio alergijos ir infekcinių ligų instituto, Nacionalinių sveikatos institutų, Intramuralinių tyrimų programos. JL yra Wellcome Trust vyresnysis tyrėjas (104777/Z/14/Z), jį remia Francis Crick institutas, kuris gauna pagrindinį finansavimą iš Wellcome Trust (FC001101), JK medicinos tyrimų tarybos (FC001101) ir vėžio tyrimų. , Jungtinė Karalystė (FC001101). Šį darbą finansavo NIH, NIAID, Intramuralinių tyrimų skyrius.

Atskleidimas:

Tyrimą parėmė Maliarijos imunologijos ir vakcinologijos laboratorijos gyvūnų grupė (Yvette Robbins ir Lynn Lambert), vabzdžių valdymo komanda Maliarijos ir vektorių tyrimų laboratorijoje (Kevin Spinno ir Andre Laughinghouse) ir Gyvūnų auginimo skyrius ( Jade Basil, Christopher Brown, April Cory, Melissa Krefski, Andrew Popadich, Megan Snyder ir Lisa Torzewsku, Marsha Loll) NIH.

NUORODOS

1. Gregson A, Plowe CV, 2005. Maliarijos parazitų atsparumo antifolatams mechanizmai. Pharmacol Rev 57: 117–145.

2. Church JA, Fitzgerald F, Walker AS, Gibb DM, Prendergast AJ, 2015. Besiplečiantis kotrimoksazolo vaidmuo besivystančiose šalyse. Lancet Infect Dis 15: 327-339.

3. Homsy J, Dorsey G, Arinaitwe E, Wanzira H, Kakuru A, Bigira V, Muhindo M, Kamya MR, Sandison TG, Tappero JW, 2014. Apsauginis ilgalaikės ko-trimoksazolo profilaktikos efektyvumas ŽIV užsikrėtusiems vaikams iki amžiaus 4 metai maliarijos prevencijai Ugandoje: atsitiktinių imčių kontroliuojamas atviras tyrimas. Lancet Glob Health 2: e727–e736.

4. Nussenzweig RS, Vanderberg JP, Most H, Orton C, 1969. Apsauginio imuniteto specifiškumas, kurį sukelia x-apšvitinti Plasmodium berghei sporozoites. Nature 222: 488–489.

5. Putrianti ED, Silvie O, Kordes M, Borrmann S, Matuschewski K, 2009. Vakciną primenantis imunitetas nuo maliarijos, pakartotinai gydant priežastinį ir profilaktinį kepenų stadijos Plasmodium parazitų gydymą. J Infect Dis 199: 899–903.

6. Roestenberg M ir kt., 2009. Apsauga nuo maliarijos užkrėtimo sporozoitais. N Engl J Med 361: 468–477.

7. Hobbs CV, Anderson C, Neal J, Sahu T, Conteh S, Voza T, Langhorne J, Borkowsky W, Duffy PE, 2017. Trimetoprimo-sulfametoksazolo profilaktika imunizacijos nuo gyvos maliarijos sporozoitų metu sukelia ilgalaikį, homologinį ir heterologinį apsauginį poveikį imunitetas prieš sporozoitų užkrėtimą. J Infect Dis 215: 122–130.

8. Hobbs CV ir kt., 2012. ŽIV nenukleozidas atšaukia transkriptazės inhibitorius, o trimetoprimas-sulfametoksazolas slopina plazmodžio kepenų stadijas. J Infect Dis 206: 1706–1714.

9. Ono T, Tadakuma T, Rodriguez A, 2007. Plasmodium yoelii yoelii 17XNL, konstitutyviai išreiškiantis GFP per visą gyvavimo ciklą. Exp Parasitol 115: 310–313.

10. Voza T ir kt., 2005. Specifinis smegenų maliarijos slopinimas pelėms, užsikrėtusioms Plasmodium spp. Infect Immun 73: 4777–4786.

11. Spence PJ, Brugat T, Langhorne J, 2015. Mosquitoes reset malaria parazits. PLoS Patog 11: e1004987.

12. Kumar KA, Oliveira GA, Edelman R, Nardin E, Nussenzweig V, 2004. Kiekybinis Plasmodium sporozoit neutralization assay (TSNA). J Immunol Methods 292: 157-164.

13. Pichugin A, Krzych U, 2015. Plasmodium berghei ir Plasmodium yoelii kepenų stadijos parazitų naštos nustatymas kiekybine realaus laiko PGR. Methods Mol Biol 1325: 81-89.

14. Belnoue E, Costa FT, Frankenberg T, Vig ´ario AM, Voza T, Leroy N, Rodrigues MM, Landau I, Snounou G, R'enia L, 2004. Apsauginis T ląstelių imunitetas nuo maliarijos kepenų stadijos po vakcinacijos gyvu sporozoitai, gydomi chlorokvinu. J Immunol 172: 2487-2495.

15. Giovannini D ir kt., 2011. Nepriklausomi viršūninės membranos antigeno 1 ir roptry kaklo baltymų vaidmenys apikompleksano invazijos metu į šeimininko ląsteles. Cell Host Microbe 10: 591–602.

16. Sedegah M, Weiss WW, Hoffman SL, 2007. Kryžminė apsauga tarp susilpninto Plasmodium berghei ir P. yoelii sporozoitų. Parasite Immunol 29: 559–565.

17. Lyke KE ir kt., 2017. Susilpninta PfSPZ vakcina skatina padermę peržengiančias T ląsteles ir ilgalaikę apsaugą nuo heterologinės kontroliuojamos žmogaus maliarijos infekcijos. Proc Natl Acad Sci U SA 114: 2711–2716.

18. Belnoue E ir kt., 2008. Vakcinacija gyvais Plasmodium yoelii kraujo stadijos parazitais po chlorokvino danga sukelia kryžminį imunitetą nuo maliarijos kepenų stadijos. J Immunol 181: 8552-8558.

19. Oliveira GA, Kumar KA, Calvo-Calle JM, Othoro C, Altszuler D, Nussenzweig V, Nardin EH, 2008. II klasės ribotas apsauginis imunitetas, kurį sukelia maliarijos sporozoitai. Infect Immun 76: 1200–1206.

20. Wykes MN, Good MF, 2009. Ko išmokome iš pelių modelių maliarijos tyrimams? Eur J Immunol 39: 2004–2007.

For more information:1950477648nn@gmail.com