Mechanistinė įžvalga apie diosmino sukeltą neuroprotekciją ir atminties gerinimą intracerebroventrikulinės chinolino rūgšties žiurkės modelyje: mitochondrijų funkcijų ir antioksidantų atgaivinimas 3 dalis

2. Medžiaga ir metodai

2.1. Eksperimentiniai gyvūnai. .is tyrimą leido TAEC pagal protokolą Nr. ASCB/IAEC/14/20/145. AlbinoWistar žiurkės (bet kurios lyties, nuo 200 g iki 250 g, amžiaus nuo 8 iki 9 mėnesių) buvo laikomos tipiško dydžio polipropileno kubo formos aptvaruose dirbtinėje temperatūroje (23 ± 2 laipsniai), 12:12 valandų tamsos/šviesios sekos ir drėgmė (40 ± 10 %) institucinėje gyvūnų laikymo vietoje. Graužikai buvo šeriami standartiniu maitinančiu maistu (Ashirwad Manufacturers, Punjab) ir išvalytu vandeniu.

Vyrų ir moterų santykiai bei atmintis visada traukė daug dėmesio. Gerai žinoma, kad vyriški hormonai atlieka svarbų vaidmenį fiziniame vystymesi, palaikant sveikatą, skatinant lytinį vystymąsi ir lytinę funkciją. Be to, naujausi tyrimai parodė, kad vyriški hormonai yra glaudžiai susiję su atmintimi.

Tyrimai parodė, kad vyrai geriau nei moterys atlieka tam tikras atminties užduotis. Pavyzdžiui, vyrai dažniausiai geriau nei moterys atlieka erdvinę atmintį, o priežastis – vyriškų hormonų poveikis hipokampui. Hipokampas yra smegenų sritis, kuri apdoroja erdvinę atmintį. Vyriški hormonai gali skatinti hipokampo funkciją ir taip pagerinti vyrų erdvinės atminties gebėjimus.

Tačiau moteriški hormonai teigiamai veikia ir atmintį. Tyrimais nustatyta, kad moteriški hormonai gali skatinti su atmintimi susijusių genų raišką smegenyse ir padidinti neuronų skaičių bei funkciją hipokampe, taip pagerindami moterų atmintį. Be to, moteriški hormonai gali sumažinti stresą, slopinti neuronų ląstelių mirtį, apsaugoti smegenų neuronus ir toliau gerinti moterų atmintį.

Tai rodo, kad tiek vyriški, tiek moteriški hormonai teigiamai veikia atmintį. Vyrų ir moterų atmintis skiriasi, kiekvienas turi savo privalumų ir trūkumų, tačiau tai nereiškia, kad vyrų atmintis geresnė nei moterų arba kad moterų atmintis geresnė nei vyrų. Todėl neturėtume naudoti lyties kaip atminties matuoklio. Kiekvienas turėtų visapusiškai žaisti savo naudai ir nuolat gerinti atmintį.

Galiausiai, nesvarbu, ar vyrai, ar moterys, turėtume atkreipti dėmesį į savo fizinę ir psichinę būklę bei pasirinkti tinkamą atminties gerinimo būdą. Pavyzdžiui, nuolatinis naujų dalykų mokymasis, reguliarių gyvenimo įpročių ugdymas ir emocinio stabilumo palaikymas gali turėti teigiamos įtakos atminties gerinimui. Dirbkime kartu nuolat tyrinėdami ir praktikuodami metodus, kaip pagerinti atmintį ir kurti geresnę ateitį. Matyti, kad reikia pagerinti atmintį. Cistanche gali žymiai pagerinti atmintį, nes Cistanche yra tradicinė kinų medicina, turinti daug unikalių poveikių, iš kurių vienas yra pagerinti atmintį. Cistanche veiksmingumą lemia įvairios jame esančios veikliosios medžiagos, įskaitant tanino rūgštį, polisacharidus, flavonoidinius glikozidus ir kt. Šie ingredientai gali įvairiais būdais skatinti smegenų sveikatą.

Spustelėkite žinoti 10 būdų, kaip pagerinti atmintį

Visos procedūros su gyvūnais atliekamos tik pagal CPCSEA, GOI, Naujojo Delio gaires. Gyvūnų globėjai ir prižiūrėtojai buvo apakinti dėl skirtingų terapinių režimų, palengvintų gyvūnų grupėms. Buvo atlikti tiriamieji bandymai su gyvūnais, kurie truko bent dvi savaites.

Visi tyrimai su gyvūnais buvo atliekami nuo 0900- iki 1600-valandų per dieną.2.2. Narkotikai ir chemikalai. Diosminas (DSM: 520-27-4), chinolino rūgštis (QA: 89-00-9) ir standartinės analitės buvo įsigyti iš Merck (Indija).

Natrio divandenilio fosfatas (NaH2PO4), natrio hidroksidas (NaOH), dvibazis kalio fosfatas (K2HPO4), nitrobliutetrazolis (NBT), fenazino metosulfatas (5-metilfenazinio metilsulfatas), etilendiamino tetraacto rūgštis (EDTA) 5}}[4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il]etansulfonrūgštis (HEPES), 1,2-bis[2-[bis(karboksimetilas) amino]etoksi]etanas (EGTA), riboflavinas, natrio cianidas (NaCN), natrioazidas (NaN3), tetranatrio pirofosfatas, vandenilio peroksidas (H2O2), NADH dinatris (DPNH), NADPH tetranatris (kofermentu II redukuota tetranatrio rūgštis), fosforo druska Folinas ir Ciocalteu fenolis (FCR) ir sulfosalicilo rūgšties (5-SSA) reagentas (HiMedia Laboratories, Maharaštra, Indija); diglicinas, ledinė acto rūgštis (CH3COOH), Elmano reagentas (3-karboksi-4-nitrofenildisulfidas, DTNB), azabenzenas (C5H5N) ir natrio laurilsulfatas (SLS) (LobaChemie, Mumbajus, Indija); 4,6-dihidroksi-2-merkaptopirimidinas (2-TBA), dinatrio karbonatas (Na2CO3) ir (2-merkaptoetil)trimetilamonio jodido acetatas (TCI cheminės medžiagos, Indija); cinko sulfatas (ZnSO4), Rochelle druska (kalio natrio L(+)-tartratas), 2-(1-naftilamino)etilamino dihidrochloridas, natrio azoto rūgštis (NaNO2) ir p-aminobenzensulfonamidas (SiscoResearch Laboratories, Indija ); buvo naudojamas butilo alkoholis (Fisher Scientific, Indija).2.3. Intracerebroventrikulinė chinolino rūgšties injekcija.

Gyvūnams buvo atlikta anestezija, naudojant sterilų injekcinį vandenį, intraperitoniniu būdu (ip) ketamino (90 mg / kg) ir ksilazino (10 mg / kg) kokteilį. .kūnas gulimoje padėtyje buvo paguldytas ant šiltos šildomos pagalvėlės, o stereotaksinės chirurgijos instrumento laikiklyje – galva. Galvos oda buvo įpjauta vidurinėje sagitalinėje vietoje, o kaukolė buvo atidengta atitraukiant odą.

Bet kuris iš dviejų šoninių skilvelių buvo pasirinktas savavališkai, o kaukolėje parietalinis kaulas buvo nugrimzdęs (stereotaksinės koordinatės -0,8 mm anteroposterior nuo bregmos, ±1,5 mm vidurio šoninis nuo vidurinės sagitalinės siūlės ir ±3,6 mm dorsoventralinis nuo parietalinio kaulo paviršiaus). ) padaryti skylutę [21].

Pirmą dieną chinolino rūgšties (QA) tirpalas buvo šviežiai paruoštas (240 nmol) PBS (Na+-K+ [PO4]2- buferinis fiziologinis tirpalas, pH 7,4) ir palaipsniui įšvirkščiamas naudojant Hamiltono mikrošvirkštą srauto greičiu 1 µl/min. kairiajame arba dešiniajame žiurkių smegenų skilvelyje per 5–6 minutes, kai injekcijos tūris yra 5 µl ICV nešiklio [22].

Po viso vaisto inokuliacijos mikroadata nebuvo išstumta 4–5 minutes, kad būtų užtikrintas vaisto difuziškumas smegenų skystyje ir užkirstas kelias jo regurgitacijai. .e lygiavertis tūris (10 µl) PBS nešiklio buvo suleistas ICV identiškai operuotiems šaratams, tačiau QA nebuvo švirkščiama.

Po vaistų injekcijų skylės buvo atstatytos lipniąja medžiaga (cinko fosfatu, PYRAX®), atliktas odos susiuvimas. Siekiant išvengti užteršimo (bakterijų augimo), Neosporin® buvo naudojamas pro re nata.

Siekiant išvengti pooperacinio sepsio, buvo skiriamas Orizolinas (Zydus Cadila), 30 mg/kg (ip) dozė. Kiekvienai žiurkei buvo suteikta šilta aplinka (37 ± 0,5 laipsnio), kad būtų išvengta pooperacinės hipotermijos. Kiekvienai žiurkei po operacijos septynias dienas buvo leistas pusiau kietas maistas (narvo viduje) ir vanduo, ir ji buvo laikoma atskirai atskirame narve (30 × 23 × 14 cm3).

2.4. Eksperimentinis protokolas. DSM buvo švirkščiamas 5 0 ir 100 mg/kg kūno svorio (kw) dozėmis žiurkėms intraperitoniniu būdu (ip), naudojant 0,5 % dimetilsulfoksido nešiklį normaliame fiziologiniame tirpale (dozė – 5 ml/kg) [17].

Gyvūnai buvo atsitiktinai suskirstyti į 5 grupes vieno aklumo režimu (n � 5): (i) netikras (S), (ii) QA, (iii) QA + DSM50, (iv) QA + DSM100 ir (v) QA + DNP. Pirmą dieną žiurkėms buvo atlikta intracerebroventrikulinė QA (QA-ICV) arba fiktyvi operacija.

DSM buvo skiriamas 21 dieną iš eilės kasdien 120 minučių po QA-ICV nuo pirmos dienos. Donepezilas (DNP) šiame tyrime buvo naudojamas kaip standartinis vaistas ir buvo švirkščiamas (dozė 3 mg / kg, ip) QAICV sušvirkštoms žiurkėms 21 dieną iš eilės.

Nuo 1 iki 21 dienos gyvūnams, priklausantiems sham ir QA kontrolinėms grupėms, buvo duodama nešiklio (sterilaus 0.5% dimetilsulfoksido normaliame fiziologiniame tirpale, kurio dozė – tūris 5 ml/kg). Visas tyrimas buvo atliktas pagal schemą, pavaizduotą 1.2.5 pav. Lokomotorinė veikla.

Visose žiurkių grupėse vidutinis lokomotorinis aktyvumas buvo užfiksuotas naudojant aktofotometro prietaisą 5 minutes. Atskiras gyvūnas buvo patalpintas aktofotometre 3 minutėms aklimatizuotis. Tada žiurkėms buvo duota 5 minutės, o rezultatai buvo pateikti kaip skaičiai per 5 minutes [11].2.6. Rotarod testas.

In rodents, the rotarod test typically evaluates the equilibrium and muscle synchronization facets of sensorimotor functions. .e rats were presented to acquisition trials until their ability to run reached >60 sekundžių, kai strypas sukasi devyniais apsisukimais per minutę (rpm).

Po gavimo bandymų atskira žiurkė buvo pastatyta ant cilindrinio veleno, o sukimosi greitis buvo padidintas pastovia 10 sekundžių pertrauka nuo 6 aps./min (preliminarus greitis) iki 30 aps./min (baigiamasis greitis), apimantis 50 sekundžių. .e vidutinis kritimo delsimas (sekundėmis) nuo besisukančio cilindrinio veleno buvo nurodytas rezultatuose.2.7.

Pėdsakų analizė. Žiurkių pėdsakų analizės principas yra eisenos sutrikimų įvertinimas.

Norėdami nustatyti pėdsakus, žiurkių pėdos buvo panardintos į keturių skirtingų spalvų netoksiškus maisto dažus ir joms leista bėgti nuožulniu taku (70 cm × 10 cm × 8 cm). Kilimo ir tūpimo tako pagrindas buvo uždengtas baltos spalvos celiuliozės lakštu. .e žiurkės buvo motyvuotos į neryškią įkalnę kilimo ir tūpimo tako gale, kad gautų aiškius pėdsakus. .e dažai po bandymų buvo švelniai pašalinami iš kiekvieno gyvūno drungnu vandeniu. .e pėdsakai buvo nuskaityti, o „žingsnio ilgis“ išmatuotas naudojant standartinę liniuotę. Žingsnio ilgis buvo kiekybiškai įvertintas apskaičiuojant atstumą tarp nuoseklių identiškos žiurkės letenos padėties [11].

2.8. Naujų objektų atpažinimo užduotis (NORT). Buvo laikomasi standartinio protokolo, kurį pateikė Kumar ir Bansal [23].

ORT yra nepelningas ir nepriešingas eksterocepcinis archetipas, naudojamas įvertinti darbinio tipo atmintį, naudojamą impulsyviai tiriant graužikus. .e tyrimas atliekamas ant stogo atviros faneros kubo formos inde (80 cm × 42 cm × 62 cm), pastatytame ramioje vietoje, apšviestame 60 W šviesos diodu, kad būtų valdomas pastovus indo ryškumas.

Cilindro (baltos), piramidės (raudonos) ir kubo (juodos) formos (12 cm aukščio) mediniai dirbiniai (identiškais trynukais) buvo tvirti ir pakankamai svorio, kad graužikai nejudėtų. NORT buvo atlikta 16 dieną 3 etapais (S): aklimatizacijos (S1), gavimo (S2) ir naujo objekto atpažinimo tyrimo (sulaikymas) stadija (S3).

Per S1, tris dienas iš eilės prieš bandymus buvo paskelbta, kad žiurkės aptiktų laisvą indo dugną (5 minutes). Užbaigus S1, atskiras gyvūnas buvo pripratęs prie bet kurio vieno kietų daiktų rinkinio mokymosi etape (S2).

Dvynius primenantys daiktai buvo išdėstyti 2 savavališkai pasirinktuose priešinguose laivo kampuose (nuo 9 cm iki 11 cm tarpas nuo šoninių pylimų). Atskirai, graužikas buvo pastatytas indo centre priešais du kietus daiktus ir jam buvo leista 5 minutes aptikti du panašius elementus. Snukio nukreipimas šalia objekto 2–3 cm ar mažesniu atstumu arba fizinis kontaktas su daiktu snukučiu buvo laikomas tyrimo veiksmu.

Po S2 graužikas buvo apgyvendintas namuose su 60 minučių tarpiniu įdubimu (ITR).

Bet kuris S2 pasiūlytas atskiras kietas daiktas buvo pakeistas kitu kietu elementu, o graužikai vėl buvo pateikti dvyniams, ty pažįstamo elemento kopija ir skirtingos prekės kopija. sumažinti tikėtiną išankstinį nusistatymą, kurį sukelia polinkis į tam tikrus nustatymus ar elementus. .e indas ir kieti daiktai buvo kruopščiai nuvalyti (etilo alkoholis 15% ir sausa šluostė) po kiekvieno tyrimo, kad būtų išvengta nemalonaus kvapo. Laikas, praleistas atrasti kiekvieną S2 ir S3 elementą, buvo užfiksuotas naudojant chronometrą. .e trukmė, praleista tiriant du sutampančius elementus S2 (I1 � Ii1 + Ii2) ir trukmę, praleistą tiriant du skirtingus elementus, ty pažįstamus ir skirtingus, S3 (I2 � Ii3 + Ib) buvo įrašyta. Skirtingo elemento tyrimo trukmės ir supažindinto elemento tyrimo trukmės dispersija (Ib–Ii3 � DI) atskleidžia atmintinės atminties išsaugojimą.

DI (diskriminacijos indeksas) / S3 trukmė (-os), kai tiriamas tiek susipažinęs, tiek naujas daiktas (pakeistas DI), pagerina šališkumą dėl viso tyrimo dispersijų ir rodo polinkį į skirtingus elementus, priešingai nei pažįstami {DI � (Ib–Ii3). )/(Ii3 + Ib)}. Atmintinė atmintis buvo įvertinta kiekybiškai įvertinus graužikų įgūdžius išskirti pažįstamus / naujoves S3 ir buvo nurodyta kaip DI (pataisyta bendram S3 tyrimo laikotarpiui) [24].

2.9. Moriso vandens labirintas (MWM). Buvo laikomasi standartinio protokolo, kurį pateikė Kumar ir Bansal [25]. MWM vertina erdvinę atmintį plaukimo bandymais, kurių metu graužikas randa pabėgimo kelią į paslėptą podiumą.

Juodos spalvos apskritas bakas (2 m skersmens, 0,6 m aukščio) buvo pripildytas vandens (25 ± 1 laipsnis) iki 0,3 m gylio. Vandens rezervuaras pagal laikrodžio rodyklę buvo padalintas į 4 panašius regionus (R1, R2, R3 ir R4), naudojant du nailono pluoštus, pritvirtintus statmenai viršutiniame rezervuaro perimetro.

Pakyla (10, 5 cm × 10, 5 cm) buvo pastatyta po vandeniu (1 cm po vandeniu) rezervuaro srityje R4. .e pakylos vieta išliko nepažeista per visą įsigijimo laikotarpį.

Kiekvienai žiurkei kasdien buvo pateikiami keturi serijiniai gavimo etapai (5 minutės ITR). Graužikas buvo švelniai paleistas į vandens rezervuarą priešais rezervuaro sieną, o vieta keitėsi kiekvienu bandymu nuo R1-R4, R2-R1, R3-R2 ir R{{ 7}}R3 atitinkamai 1–4 dienomis ir buvo leista 120 sekundžių aptikti povandeninį podiumą. .e graužikai toliau ilsėjosi ant podiumo 20 sekundžių.

Nepavykus aptikti platformos per 120 sekundžių, žiurkės buvo pastatytos ant platformos rankiniu būdu, o tada jiems buvo leista 20 sekundžių ant platformos. Pabėgimo delsos laikas (ELT) – tai vandens rezervuaro paslėptos pakylos aptikimo trukmė.

Erdvinis mokymasis buvo pažymėtas pirma diena ir ketvirta diena ELT. Bandymo su zondu metu (5-oji diena) graužikai tyrė rezervuarą 120 sekundžių, tačiau jiems buvo atimtas podiumas. .e užfiksuota vidutinė viso rezervuaro (4 regionų) išnaudojimo trukmė. Vidutinė trukmė, praleista R4 (TSTQ: laikas, praleistas tiksliniame kvadrante), tiriant paslėptą podiumą, buvo laikoma atskaitos atminties indeksu. .palyginamas bako nustatymas, palyginti su laboratorijoje esančiais daiktais, kurie veikia kaip vaizdiniai ženklai, ir tyrėjo padėtis liko nepakitusi [26].

2.10. Biocheminių parametrų įvertinimas. Atlikus elgsenos tyrimus, visos gydytojų smegenys buvo sukauptos ir padėtos ant susmulkintų ledo kubelių, o po to maudytis užšaldomame sterilizuotame fiziologiniame tirpale (izotoninis 308 mOsmol/l NaCl), kad būtų pašalinti likučiai ir kraujas.

Visų smegenų homogenizavimas buvo atliktas akimirksniu užšaldomame atskyrimo buferyje (pH 7,4) su 215 mM D-manitolio, 20 mM 2-[4-(2-hidroksietilo) )piperazin-1-il]etansulfonrūgštis, 1 mM 1, 2-bis[2-[bis(karboksimetil)amino]etoksi]etanas, 75 mM sacharozės ir 0,1 % BSA. Homogenatas buvo centrifuguojamas 4 laipsniu, naudojant 13000 × g jėgą 5 minutes. .e granulės buvo atmestos, o supernatantas buvo padalintas į dvi dalis ir pakartotinai centrifuguojamas (4 laipsniai) 13000 × g jėga 5 minutes. Neapdorotos mitochondrijų nuosėdos buvo atskirtos ir vėl centrifuguojamos atskyrimo buferyje su 1,2-bis[2-[bis(karboksimetil)amino]etoksi]etanu 12 500 × g greičiu 11 minučių (4 laipsniai). Taip gautos pusiau kietos nuosėdos, kuriose yra neužterštos mitochondrijos, buvo pakartotinai suspenduotos atskyrimo buferyje (pH 7,4), kuriame yra 75 mM sacharozės, 20 mM 2-[4-(2-hidroksietil)piperazino-1- il]etansulfonrūgštis ir 215 mM D-manitolis [27].

Vėliau biocheminiams žymenims nustatyti standartiniais metodais naudota viso smegenų homogenato mitochondrijų frakcija.2.11. Mitochondrijų komplekso įvertinimas.

2.11.1. NADH: Ubichinono oksidoreduktazės aktyvumas. I komplekso (NADH dehidrogenazės) aktyvumas buvo kiekybiškai įvertintas (nmol NADH oksiduotas/min./mg baltymo) taikant Kingo ir Howardo metodą [28]. .eoksidacinis NAD+ susidarymas iš NADH lydimas citochromo c redukcijos. .e tyrimo mišinį sudarė citochromo c (10,5 mM), 6 mM -nikotinamido adeninnukleotido (DPNH), ištirpinto naudojant 2 mM diglicino buferį, ir diglicino buferio (0,2 M, pH 8,5).

Tirpsta mitochondrijų frakcija buvo įtraukta į tyrimo mišinį, kad sukeltų reakciją. .e optinio tankio (OD) kitimas esant λmax � 550 nm buvo stebimas 120 sekundžių.

2.11.2. Sukcinatas: Ubichinono oksidoreduktazės aktyvumas..e sukcinato dehidrogenazės (II komplekso) aktyvumo greitis buvo kiekybiškai įvertintas (nmol sukcinato oksiduotas/min./mg baltymo) taikant Kingo metodą [29].

Gintaro rūgšties oksidaciją sukelia netikras elektronų imtuvas, kalio cianoferatas (K3Fe(CN)6). .e tyrimo mišinys, sudarytas iš gintaro rūgšties (0,63 M), 1 % BSA, K3Fe(CN)6 (0.036 M) ir Na+-K+ [PO4]2- buferis (0,23 M, pH 7,6). Tirpsta mitochondrijų frakcija buvo įtraukta į tyrimo mišinį, kad sukeltų reakciją. .e OD kitimas esant λmax � 420 nm buvo stebimas 120 sekundžių.2.12. Oksidacinio streso biomarkerių nustatymas2.12.1. iobarbitūro rūgštimi reaguojančios medžiagos (TBARS).

Norint įvertinti TBARS (nmol vienam mg baltymo) [30], analizuojama kombinacija (baigiamasis kiekis ~4 ml), susidedantis iš 0.10 ml homogenizuotų smegenų, 1,51 ml 4,{{ 7}}dihidroksi-2-merkaptopirimidinas (0,8%), 200 µl SLS (8,18%), 1,49 ml ledinės acto rūgšties (21%, pH 3,51) ir 0,71 ml dejonizuoto vandens buvo kaitinami vandens vonioje iki 96 laipsnių. 60 minučių.

15:1 butilo alkoholio/azabenzeno (5,1 ml) santykis buvo papildytas analizės mišiniu, kuris buvo centrifuguojamas esant 4, 000 × gpower (10 minučių), o supernatantas buvo atskirtas.

Dviejų spindulių UV1700 spektrofotometru (Shimadzu, Japonija) chromoforo malondialdehido -4, 6-dihidroksi-2-merkaptopirimidino OD buvo įvertintas esant bangos ilgiui (λmax � 532 nm) ir ε1. 4,6-dihidroksi-2-merkaptopirimidino aduktams apskaičiuoti buvo pritaikytas 105/M/cm (molinis ekstinkcijos koeficientas).

2.12.2. Sumažintas glutationo (Lc-glutamil-L-cisteinil-glicino) kiekis. Ellmano [31] procedūra buvo įgyvendinta L-glutationo (GSH) kiekiui įvertinti. .e bandomasis mišinys, apimantis homogenatą (1,1 ml) ir 1 ml 4% 2-hidroksi-5-sulfobenzenkarboksirūgšties (5-SSA), centrifuguojamas (4 laipsniai) 11 minučių 2500 × g galia .

Vėliau 2,8 ml Na+-K+[PO4]2- buferio (51,2 mM, pH 7,77) ir {{10}},21 ml 3-karboksi{{13 }}nitrofenildisulfidas (0,12 mM, pH 7,89) buvo sumaišytas su aukščiau atskirtu supernatantu (0,12 ml).

Tripeptidas (µmolGSH vienam mg baltymo) buvo kiekybiškai įvertintas dvigubo spindulio UV1700 spektrofotometru (λmax � 412 nm). taikantε � 1,36 × 104/M/cm.2.12.3.

Glutationo peroksidazės aktyvumas. Gliutationo peroksidazės (GPx) aktyvumas (EC 1.11.1.9) buvo įvertintas taikant Mohandas ir kt. metodą. [32]. .eanalyze mišinys, sudarytas iš 100 µl 10% homogenato, 100 µl natrio azido (1,11 mM), 100 µl EDTA (1,13 mM), 40 µl glutationo disulfido redukto (GSR, 1 IU/ml) (EC1.8.1.7), 10 µl H2O2 (0,28 mM), 40 µl Lc-glutamil-L-cisteinil-glicino (1,2 mM), 100 µl kofermentu II redukuotos tetranatrio druskos (0,22 mM) ) ir 0,12 M 1,49 ml Na+-K+ [PO4]2-buferio (pH 7,4) visam 2000 µl kiekiui. .e kofermentu II sumažinto tetranatrio praradimas esant λmax � 340 nm buvo dokumentuotas esant 25 laipsnių temperatūrai. GPx greitis buvo apskaičiuotas kaip nmol oksiduoto NADPH/min./mg baltymo, naudojant ε � 6,22 × 103/M/cm.

For more information:1950477648nn@gmail.com