Difuzinės didelių B ląstelių limfomos klasifikavimo tyrimų pažanga

Kontaktas:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Difuzinė didelių B ląstelių limfoma (DLBCL) sudaro 25–35 procentus visų ne Hodžkino limfomų ir yra nevienalytė ir agresyvi grupė, turinti skirtingus klinikinius, patologinius ir biologinius požymius. limfoma. Ankstesni klinikiniai tyrimai parodė, kad rituksimabas, ciklofosfamidas, doksorubicinas, vinkristinas ir prednizonas (R-CHOP) yra pirmosios eilės standartinis gydymas DLBCL sergantiems pacientams, iš kurių 50–70 procentų pacientų gali, tačiau daugelis pacientų atspari arba visiška remisija ir po to atkrytis, tuo tarpu tik 10 procentų atsparių ir recidyvuojančių pacientų gali būti išgydyti taikant tradicinę gelbėjimo imunochemoterapiją kartu su autologine kraujodaros kamieninių ląstelių transplantacija, o likusiems 90 procentų pacientų gydymo rezultatai yra prasti. Todėl didžiuliu iššūkiu tapo, kaip pagerinti šių pacientų prognozes. Šiuo metu taip pat atliekami klinikiniai tyrimai, kuriuose aptariamas kitų vaistų (tokių kaip lenalidomido, ibrutinibo ir kt.) derinimas remiantis R-CHOP, siekiant dar labiau pagerinti veiksmingumą, tačiau reikšmingos pažangos nepadaryta. DLBCL turi didelį nevienalytiškumą, todėl kaip nustatyti tikslias stratifikuotas diagnozes ir vadovautis individualiu gydymu, taip pat yra vienas iš dabartinių tyrimų taškų. Šiame straipsnyje apibendrinta DLBCL klasifikavimo eiga.

cistamchePadidinti ląstelių proliferaciją

1. DLBCL COO tipavimas naudojant genų ekspresijos profiliavimo lustą

DLBCL turi akivaizdų ląstelių morfologijos ir prognozės nevienalytiškumą. 2000 m. ALIZADEH ir kiti pritaikė genų lustų technologiją, kad patikrintų ir aptiktų 3 186 genus, kurie atlieka svarbų vaidmenį limfocitų vystymuisi, diferenciacijai ir kancerogenezei, ir nustatė DLBCL genų ekspresiją. Genų ekspresijos profilis (GEP) parodė, kad DLBCL kilo iš B limfocitų skirtinguose diferenciacijos etapuose. Pagal GEP, DLBCL galima suskirstyti į du potipius: gemalo centro B ląsteles panašų (GCB) tipą ir aktyvuotą B ląstelių tipo (ABC) tipą. Vėlesni ROSENWALD ir kt. tyrimai. taip pat patvirtino šį rezultatą. Vėlesni tyrimai apėmė daugiau atvejų ir daugiau genetinės patikros tipų ir nustatė, kad kai kurie pacientai negalėjo nustatyti ląstelių šaltinio, kuris buvo apibūdintas tarp dviejų potipių, pavadintų 3 tipu, taip pat žinomas kaip neklasifikuotas. Skirtingos kilmės DLBCL atveju tyrimas parodė, kad jis parodė skirtingas prognozes, tarp kurių DLBCL, gautas iš GCB, gali gauti ilgesnį išgyvenimo laiką. Ląstelių kilmės (COO) tipavimas atskleidė DLBCL nevienalytiškumą, o gydant R-CHOP potipių išgyvenamumas labai skyrėsi, o tai yra teorinis pagrindas prognozėms ir režimo pasirinkimui įvertinti. GEP testo rezultatai, pagrįsti genų lustų technologija, šiuo metu yra pripažinti auksiniu standartu sprendžiant DLBCL ląstelių kilmę. Tyrimo rezultatai yra patikimiausi, tačiau jie yra brangūs ir reikalauja aukštų mėginių, dažniausiai šviežių šaldytų gyvų audinių mėginių, todėl veikimas nėra stiprus. Klinikinėje praktikoje jis nėra plačiai naudojamas.

2. NanoString technologijos naudojimas DLBCL COO įvedimui

NanoString (fluorescuojančiu brūkšniniu kodu pažymėtas vienos molekulės aptikimas) yra nauja didelio našumo aptikimo genų ekspresijos profiliavimo technologija, pagrįsta tiesioginiu fluorescencinių molekulinių brūkšninių kodų matavimu zonduose po to, kai nukleorūgščių molekulės hibridizuojasi su zondais. Kiekviena brūkšninio kodo žyma atitinka konkrečią mRNR seką, tame pačiame mėginyje galima išmatuoti iki 800 brūkšninių kodų, o reikalingas mėginio tūris gali siekti net 100 ng RNR. „NanoString“ skaitmeninio kiekybinio nustatymo technologija pašalina transkripcijos, stiprinimo ar bibliotekos kūrimo poreikį, pašalina ilgas eksperimentines procedūras ir žmogiškuosius išteklius bei sumažina galimą paklaidą, atsirandančią dėl fermentinių reakcijų. Klinikiniams mėginiams su retais mėginiais NanoString technologija gali tiesiogiai naudoti į parafiną įterptus mėginius, kad būtų galima nustatyti RNR kiekį be RNR ekstrahavimo. Šis techninis pranašumas daro jį praktiškesnį klinikinėje praktikoje. SCOTT ir kt. patikrino 20 genų pagal GEP tipavimo duomenis ir naudojo NanoString technologiją, kad atliktų COO tipavimą 119 DLBCL mėginių. Tyrimo rezultatų ir „auksinio standarto“ nuoseklumas siekė 95 procentus, o pacientus taip pat galima skirstyti į GCB tipą, ABC tipą ir neklasifikuotą tipą, pastarieji du bendrai vadinami ne GCB tipu, o tai taip pat rodo, kad GCB tipo prognozė yra geresnė nei ne GCB tipo. Kiti tyrimai, pagrįsti „NanoString“ technologija, dar labiau patvirtino šios technologijos vertę atliekant DLBCL COO tipą.

Tradicinės kinų medicinos žolėcistamche, taip pat žinomas kaip "dykumos ženšenis"

3. DLBCL COO tipavimas naudojant kiekybinę PGR technologiją

Tiek genų lusto tipavimui, tiek NanoString tipavimui reikalinga brangi speciali įranga, kurią sunku plačiai pritaikyti klinikinėje praktikoje. Kiekybinė PGR yra dažniausiai naudojamas metodas genų ekspresijai patikrinti. Jis pasižymi paprasto veikimo, didelio jautrumo ir tikslumo savybėmis ir gali būti gaunamas iš mėginių, įterptų į parafiną. Li Xiaoqiu komanda naudojo kiekybinę PGR, kad pirmą kartą atliktų didelio masto klinikinį patvirtinimą Kinijos pacientų populiacijose ir sukūrė produktą, tinkamą klinikiniams genetiniams tyrimams, būtent DLBCL-COO tyrimą. Šiame tyrime viešoje duomenų bazėje buvo patikrinti 32 genai, reikšmingai susiję su DLBCL-COO tipizavimu, įtraukta 160 pacientų, o tada imunohistochemijos, kiekybinės PGR ir genų lusto metodais aptikti jų parafinu įterpti mėginiai ir atitinkami švieži mėginiai. Audinių mėginiai, rezultatai parodė, kad DLBCL-COO tyrimo tipavimo rezultatai 92 procentais atitiko „auksinį standartą“; išgyvenamumo analizė parodė, kad DLBCL-COO tyrimo tipavimo rezultatai reikšmingai koreliavo su bendru išgyvenamumu, o GCB tipo prognozė buvo žymiai geresnė nei ABC tipo (P =0.023), o tai labai atitinka vietinius duomenis. ir užsienio tyrimų rezultatai. Santykinai kalbant, metodų platforma tipavimui naudojant kiekybinę PGR technologiją yra atviresnė, paprastesnė operacija ir tinkama įprastiniam vystymuisi daugumoje molekulinės patologijos laboratorijų.

4. DLBCL COO tipavimas imunohistocheminiu metodu

Kai kuriose srityse, kuriose trūksta lėšų ir technologijų, GEP pagrįstą tipavimo technologiją sunku plačiai naudoti, todėl kliniškai plačiausiai naudojamas tipavimo metodas, pagrįstas imunohistochemija (IHC). 2005 m. HANS ir kiti pritaikė audinių mikrogardelių technologiją tipavimui ir sukūrė IHC tipavimo modelį aptikdami CD10, BCL6 ir MUM-1. DLBCL galima suskirstyti į GCB tipą ir ne GCB tipą. Pirmojo prognozė yra daug geresnė nei antrosios. (P<0.001), the="" agreement="" of="" this="" typing="" method="" with="" the="" gold="" standard="" was="" 84%.="" in="" order="" to="" further="" improve="" the="" accuracy="" of="" prognostic="" judgment,="" new="" typing="" systems,="" such="" as="" choi="" and="" tally,="" have="" been="" proposed="">

Choi tipavimas pagrįstas penkiais biologiniais žymenimis, įskaitant CD10, BCL6, MUM-1, FOXP1 ir GCET1, o du žymekliai FOXP1 ir GCET1 pridedami prie Hanso tipavimo metodo, kuris 93 procentais atitinka "auksinį". standartas“. Ankstesni tyrimai parodė, kad FOXP1 yra labai išreikštas ABC tipo, o didelė ekspresija yra susijusi su prasta prognoze. Kai FOXP1 kritinė vertė yra 80 procentų, galima išskirti ABC tipo DLBCL. Tačiau GCET1 yra labai išreikštas gemalo centro gautose B ląstelėse, todėl GCET1 pridėjimas prie Hanso tipavimo yra naudingas norint atskirti GCB tipo ir ABC tipo DLBCL. Kalbant apie prognozės prognozę, Choi klasifikacija buvo naudojama siekiant numatyti pacientų išgyvenamumą 3-metus, iš kurių 88 proc. GCB tipo, 44 ​​proc. ABC tipo, ir „auksinio standarto“ GEP klasifikacijos prognozavimo rezultatus. (GCB tipas buvo 92 proc., ABC tipas buvo 44 proc.) 44 proc.) yra gana artimas. Li Min ir kt. palygino Choi klasifikacijos ir Hanso klasifikacijos nuspėjamumą ir taip pat parodė, kad pirmoji buvo tikslesnė. Bendras GCB grupės ir ne GCB grupės išgyvenamumas pagal Hanso klasifikaciją reikšmingo skirtumo neparodė (P=0.102), o Choi klasifikacija neparodė reikšmingo bendro išgyvenamumo skirtumo (P=0 .102). GCB grupės prognozė buvo žymiai geresnė nei ne GCB grupės (3-metų išgyvenamumo rodikliai buvo atitinkamai 61,8 proc. ir 42,5 proc., P<0.05). however,="" it="" is="" worth="" noting="" that="" in="" recent="" years,="" with="" the="" high="" inconsistency="" of="" bcl6="" found="" by="" different="" research="" centers,="" the="" inclusion="" of="" bcl6="" in="" the="" improved="" classification="" of="" choi="" and="" hans="" has="" been="" canceled.="" operation="" and="" result="">

Kaip minėta aukščiau, IHC pagrįstas Hanso tipavimas ir Choi tipavimas atlieka panašias funkcijas, o kelių antikūnų rezultatai vertinami tam tikra tvarka, todėl kai kurie antikūnai turi didesnį prioritetą nei kiti. Tipo metodas leidžia neįtraukti vėlesnių antikūnų rezultatų, jei tenkinamos ankstesnės sąlygos. Tačiau įvedant GEP nevykdoma tam tikra tvarka arba neįtraukiami tam tikri rezultatai. Siekiant sumažinti tokius skirtumus, MEYER ir kt. sukūrė tipavimo metodą, kuris nevertina antikūnų rezultatų tam tikra tvarka, būtent Tally tipavimo metodą. Didžiausias atitikimas „aukso standartui“ buvo 93 procentai, o Hanso ir Choi spausdinimas – 87 procentai. Sutapimo tipo metodas apima vienodus GCB (GCET1 ir CD10) ir ABC (FOXP1 ir MUM-1) antikūnų kiekius, o klasifikacija nustatoma pagal imunofenotipinę porą, kuri yra labiau antigenas. Kiekvienam tipui naudojami du antikūnai, todėl, jei kiekvienam tipui gaunamas toks pats teigiamas rezultatas, imunofenotipui nustatyti reikalingas LMO2 (LMO2, didesnis arba lygus 30 procentų, yra ribinė vertė). Tyrimai patvirtino, kad LMO2 yra specifiškai ekspresuojamas iš GCB gautuose B limfocituose arba limfomose, o didelė jo ekspresija yra reikšmingai susijusi su gera DLBCL prognoze.

Apibendrinant galima pasakyti, kad nors DLBCL COO tipavimo metodas, pagrįstas IHC, nėra toks geras kaip NanoString tipavimas ir kiekybinis PGR tipavimas, nuoseklumas su „auksiniu standartu“ taip pat yra 74 procentai -93 procentai. Jis turi žemų reikalavimų pranašumus ir kitus privalumus, kurie yra patogūs įprastinei įvairių ligoninių plėtrai. Tarp jų Choi ir Tally tipavimo metodai labiau atitinka „auksinį standartą“, tačiau GCET1, FOXP1 ir LMO2 nėra pastovūs antikūnai, o tai tam tikru mastu riboja platų jų taikymą.

cistamche griežinėliai kasdieniniam vartojimui, siekiant pagerinti ląstelių proliferaciją ir sumažinti ląstelių apoptozę

5. DLBCL tipavimo, pagrįsto genų mutacija, tyrimas

Beveik visi DLBCL pacientai turi genų mutacijas, o pacientai, turintys tam tikrų mutacijų, gali turėti įtakos specifinių tikslinių vaistų veiksmingumui ir taip turėti įtakos prognozei. Todėl DLBCL potipių nustatymas, pagrįstas mutacijų parašais, turi klinikinę naudą. SCHMITZ ir kt. atrinko šviežius šaldytus mėginius iš 574 DLBCL pacientų ir naudojo egzomo ir transkripto seką, kad ištirtų genų lusto DNR kopijos numerį. Tarp jų buvo atrinkti 372 genai, skirti tikslinei amplifikacijai ir sekvenavimui, siekiant nustatyti tuos, kurių genai yra atkuriami. Seksualiai mutuoti genai. Tyrimo rezultatai suskirstė DLBCL į 4 genotipus: MCD tipo (daugiausia MYD88L265P ir CD79B komutacija), BN2 tipo (daugiausia BCL6 sintezė ir NOTCH2 mutacija), N1 tipo (daugiausia NOTCH1 mutacija) ir EZB tipo (daugiausia EZH2 mutacija), mutacija ir BCL2. translokacija), tarp kurių MCD ir N1 tipai daugiausia gaunami iš ABC, EZB tipas daugiausia gaunamas iš GCB, o BN2 tipas sudaro atitinkamai tam tikrą ABC, GCB ir neklasifikuotų pacientų dalį ( GCB tipas sudarė 19 proc., ABC tipas sudarė 41 proc., o neklasifikuotas tipas – 40 proc.). Tyrimas taip pat parodė, kad nauji genotipai gali geriau nustatyti prognozę, tarp kurių BN2 ir EZB tipai turi geresnę prognozę nei MCD ir N1 tipai. MCD, N1, BN2 ir EZB tipai prognozuoja 5-metų išgyvenamumą 26 proc., 36 proc., 65 proc., 68 proc., daugiamatė analizė taip pat parodė, kad naujasis genotipas buvo nepriklausomas veiksnys, darantis įtaką prognozei ir nebuvo paveiktas. pagal IPI balą. Tyrimo grupė sukūrė LymphGen algoritmą, kad suskirstytų DLBCL į 7 genotipus, remdamasi ankstesniais tyrimais, pridėdama A53 (su TP53 inaktyvacija), ST2 (su SGK1 ir TET2 mutacijomis) ir kitus neklasifikuojamus. Šiuo genotipų nustatymo metodu buvo galima nustatyti 63,1 proc. . Tarp jų BN2 potipis turi geriausią ABC tipo prognozę, o ST2 potipis GCB tipą turi geresnę prognozę nei EZB potipis. Todėl manoma, kad naujasis genotipų nustatymas dar labiau atskleidžia DLBCL patogenezę, kai potipių patogenezė skiriasi, o skirtingi genotipai skirtingai reaguoja į imunochemoterapiją, o tai gali turėti įtakos tikslinės terapijos pasirinkimui, tačiau didžiausias šio klasifikavimo metodo apribojimas yra tas, kad kai kurie pacientų negalima priskirti jokiam potipiui, o tai nusipelno tolesnio tyrimo.

Atlikę 3{{30}4 DLBCL pacientų egzomų seką, CHAPUY ir kt. gavo duomenis apie žemo dažnio mutacijas, pasikartojančias mutacijas, somatinių kopijų skaičiaus pokyčius ir struktūrinius variantus ir apibrėžė pacientus kaip penkis genotipus: C1 tipą (daugiausia BCL10, TNFAIP3, UBE2A, CD70 mutacija ir BCL6 translokacija, dažniausiai ABC kilmės), C2 tipas (vyksta dvialelinė TP53 inaktyvacija, kuri turi įtakos chromosomų stabilumui ir ląstelių ciklui ir neturi nieko bendra su ABC/GCB kilme), C3 tipas (daugiausia BCL2, CREBBP2, EZH2, KMT2D, TNFRSF14 mutacijos, daugiausia GCB kilmės), C4 tipo (daugiausia SGK1, HIST1H1E, NFKBIE, BRAF ir CD83 mutacijos, dažniausiai GCB kilmės), C5 tipo (daugiausia CD79B, MYD88L265P, ETV6), PIM1 ir TBL1XR1 mutacijos, dažniausiai ABC kilmės, paplitusios pirminėje centrinėje nervų sistemoje ir sėklidžių DLBCL) ir C0 tipo (aiškių genetinių vairuotojų trūkumas). Tyrimas taip pat toliau analizavo ryšį tarp naujų genotipų ir prognozės. Rezultatai parodė, kad C0, C1 ir C4 prognozės buvo geresnės, o C3 ir C5 – prastos. Tarp ABC gautų pacientų C1 tipo prognozė buvo žymiai geresnė nei C5 tipo. , o C4 tipas buvo žymiai geresnis nei C3 tipas pacientams, kuriems buvo suteiktas GCB. Naujasis genotipas taip pat apibrėžia mažos rizikos ABC tipo DLBCL (tipas C1), kurių ląstelės gali kilti iš ekstrafolikulinės kraštinės zonos; ir didelės rizikos GCB tipo DLBCL su BCL2 struktūriniais variantais ir PETN bei epigenetiniais fermentais. Pakitimai (C3 tipas), o mažos rizikos GCB tipo DLBCL yra susijęs su kinazių ir kelių rekombinantinių baltymų pakitimais (BCR/PI3K, JAK/STAT, BRAF) (C4 tipas); tipavimas nesusijęs su ABC/GCB kilme Su bialeliu TP53 inaktyvacija, 9p21.3/CDKN2A ir susijusių genų nestabilumu (C2 tipas). Pagrindinės šių DLBCL genetinės savybės apima mutacijas, somatinių kopijų skaičiaus pokyčius ir struktūrinius pokyčius bei šių trijų genetinės informacijos klasių pokyčius, kurie gali būti naudojami paaiškinant ligos ir gydymo rezultatų skirtumus.

Remiantis tiksline 293 genų seka, LACY ir kt. išanalizavo 928 DLBCL pacientų genų mutacijų charakteristikas ir suskirstė pacientes į 5 potipius: MYD88 tipą (daugiausia MYD88L265P, PIM1, CD79B mutacijos, daugiausia ABC kilmės, šiam potipiui priklauso dauguma originalių DLBCL pacientų su centrine nervų sistema, sėklidėmis ir krūtimis ); BCL2 tipas (su EZH2, BCL2, CREBBP, T

NFRSF14, KMT2D ir MEF2B mutacijos daugiausia, daugiausia dėl GCB, šiam tipui priklauso kai kurie didelio laipsnio limfoma ir DLBCL pacientai, transformuoti iš folikulinės limfomos); SOCS1 / SGK1 tipas (daugiausia įskaitant SOCS1, CD83, SGK1, NFKBIA, HIST1H1E ir STAT3 mutacijas daugiausia gaunamos iš GCB, o dauguma pirminių tarpuplaučio DLBCL priklauso šiam tipui); TET2/SGK1 tipas (daugiausia apima TET2, SGK1, KLHL6, ZFP36L1, BRAF, MAP2K1 ir KRAS mutacijas, daugiausia GCB kilmės); NOTCH2 tipas (daugiausia įskaitant NOTCH2, BCL10, TNFAIP3, CCND3, SPEN, TMEM30A FAS ir CD70 mutacijas, sudarytas iš ABC, GCB ir neklasifikuotos kilmės, panašių į ribinės zonos limfomą); neklasifikuojamas potipis (neklasifikuojamas kitur, NEC). Tyrimo metu buvo analizuojamas ryšys tarp skirtingų genotipų ir prognozių, o rezultatai parodė, kad MYD88 prognozė buvo blogiausia – 5-metų išgyvenamumas buvo 42 proc.; BCL2, SOCS1/SGK1 ir TET2/SGK1 prognozė buvo gera – 5-metų išgyvenamumas atitinkamai buvo 64,9 proc., 62,5 proc. ir 60,1 proc. NOTCH2 ir NEC tipų prognozė buvo tarp šių dviejų, o 5-metų išgyvenamumas buvo atitinkamai 48,1 ir 53,6 proc.

Apibendrinant galima pastebėti, kad trys klasifikavimo sistemos yra ne tik skirtingos, bet ir jų turinys sutampa. Tarp jų MYD88, C5 ir MCD tipai yra susiję su ABC šaltiniu. Pirminės centrinės nervų sistemos ir sėklidžių limfomos dažniausiai būna šių trijų tipų, o prognozė yra prasta. C2 tipui būdinga TP53 mutacija / ištrynimas, dauguma jų turi prastą prognozę, o A53 atitinka C2. BCL2, C3 ir EZB tipai yra susiję su GCB šaltiniu, turi tą patį mutacijos požymį kaip ir folikulinė limfoma, ir nors dvigubo smūgio ir didelio laipsnio limfomos yra dažnesnės šio tipo atveju, bendra prognozė yra gera. SOCS1 / SGK1 ir C4 tipai daugiausia yra iš GCB gauti DLBCL, kurių genetinės savybės yra panašios į pirminę tarpuplaučio didelių B ląstelių limfomą ir turi geriausią prognozę. Tačiau dabartinis mutacijų tipavimas yra sudėtingas, o skirtingų tyrimų metodai ir rezultatai skiriasi. Todėl ateityje analizės procesą dar reikia supaprastinti, kad būtų dar labiau išaiškintas pagrindinių mutacijų genų poveikis prognozei ir gydymui.

cistamchesudėtyje yra daug echinakozido ir akteozido, kurie gali maitinti ir apsaugoti organizmą nuo virusų ir ligų

Santrauka

GEP pagrįstas COO tipavimas yra „auksinis standartas“, tačiau tam reikalingi dideli mėginiai, jis yra brangus ir nėra lengvas įprastai klinikinėje praktikoje. Kaip alternatyva, COO tipavimas, pagrįstas NanoString, kiekybine PGR ir imunohistocheminiais metodais, buvo toliau optimizuotas, atsižvelgiant į mėginio reikalavimus, techninius sunkumus ir eksperimentines išlaidas, tačiau prognozės tikslumas ir gydymo pagrindo vaidmuo vis dar yra didesnis nei Auksinis standartas. Yra tam tikras atotrūkis. Dabartiniai tyrimai taip pat parodė, kad beveik visi DLBCL pacientai turi genetinių mutacijų, o nepalankios genetinės mutacijos gali reikšmingai paveikti prognozę. Tikslinė kai kurių specifinių mutacijų terapija taip pat gali pagerinti prognozę, todėl nauja klasifikacija, pagrįsta genų mutacijomis, turi svarbią klinikinę reikšmę. Genų mutacijų tipavimas papildo COO tipavimą, paaiškindamas, kad tame pačiame COO potipyje taip pat yra didelis nevienalytiškumas. Tačiau genų mutacijų tipavimas negali apimti visų pacientų, todėl reikia atlikti tolesnius tyrimus, kad būtų patvirtinta pagrindinė klinikinės prognozės reikšmė ir tai, ar šiuo metu naudojami tradiciniai ir nauji tiksliniai vaistai gali padėti gydyti pagal šį tipavimą.