Xinjiang Cistanche Deserticola polisacharidai turi antioksidacinį poveikį

abstrakčiai

Tirtas Cistanche deserticola polisacharido antioksidacinis aktyvumas in vitro. Naudojant askorbo rūgštį kaip kontrolę, naudojant Fentono tipo reakciją hidroksilo radikalams gaminti, dopamino autoksidacijos reakciją, kad susidarytų superoksido anijonų radikalai, natrio hipochlorito reakciją su vandenilio peroksidu, kad susidarytų vienetinis deguonis, difenilo kartaus hidrazino radikalai kaip eksperimentinis modelis. , Cistanche deserticola polisacharidų poveikis superoksido anijonų radikalams, hidroksilo radikalams DPPH · laisvasis radikalas (difenilo kartaus hidrazino radikalas), singletinio deguonies sugeriantis poveikis. Rezultatai parodė, kad Cistanche deserticola polisacharidai turėjo akivaizdų minėtų laisvųjų radikalų šalinimo poveikį, o šalinimo poveikis teigiamai koreliavo su polisacharidų koncentracija.

Raktažodžiai :Cistancjis tubulasosa Polysaccharidas; Laisvųjų radikalų

1. Įvadas

Oksidacinio gyvybinės veiklos metabolizmo procese organizmas nuolat gamina įvairius reaktyvius deguonies laisvuosius radikalus (ROS), kurie yra tarpinis aerobinio metabolizmo oksidacijos-redukcijos reakcijos produktas.Moksliniais tyrimais nustatyta, kad laisvųjų radikalų perteklius atakuoja gyvybines makromolekules ir įvairias organeles, sukeldamas įvairius pažeidimus molekuliniu, ląstelių, audinių ir organų lygmeniu, pagreitins organizmo senėjimo procesą ir sukels tokias ligas kaip trombozė, diabetas, aterosklerozė. navikai ir kt. [1]. Dėl chemiškai susintetintų antioksidantų toksiškumo žmogaus organizmui, didelio efektyvumo ir mažo toksiškumo natūralių antioksidantų, galinčių pašalinti laisvuosius deguonies radikalus, paieška tapo karšta tyrimų tema medicinos, maisto, chemijos inžinerijos ir kitose srityse. Pastaraisiais metais.

Cistanche deserticola(YCMa.)yra reta tradicinė kinų medicina ir žinoma kaip "dykumos ženšenis" [2]. Cistanche deserticola mapolisacharidas yra vienas iš pagrindinių biologiškai aktyvių Cistanche deserticola komponentų, tačiau nėra pranešimo apie tai, ar Cistanche deserticola polisacharidas turi laisvųjų radikalų šalinimo poveikį. Šiame darbe Cistanche deserticola polisacharido naikinantis poveikis superoksido anijonų radikalui, hidroksilo radikalui, DPPH · laisvajam radikalui ir singletiniam deguoniui buvo nustatytas spektrine analize, siekiant įvertinti jo antioksidacinį aktyvumą ir suteikti mokslinį pagrindą visapusiškam jo kūrimui ir panaudojimui. šis gamtos išteklius.

Kinijos žolelių cistanche

2. Eksperimentinė dalis

2.1 Prietaisai ir reagentai

UV-2401 UV matomas spektrofotometras (Shimadzu, Japonija); LumatLB9507 itin jautrus vamzdinis luminometras (Vokietija

BertholdTechnologies); RE-52CS rotacinis garintuvas (Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory); HW-SY elektroninė termostatinė vandens vonia (Jintan Xinhang instrumentų gamykla); PHS-3C pH matuoklis (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); DZF-6020 vakuuminio džiovinimo krosnelė (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.). Cistanche deserticola: įsigyta iš Kuitun Pharmaceutical Corporation. Luminol (Sigma, JAV), dopaminas (Kinijos farmacijos ir biologinių produktų kontrolės institutas), FeSO4, EDTA, vitaminas C, H2O2, NaClO, Na2CO3, NaHCO3 ir kt. yra buitiniai analitiniai reagentai. Eksperimentinis vanduo yra jonų mainais distiliuotas vanduo.

2.2 Eksperimentinis metodas

2.2.1 Ištraukimo būdasCistanche deserticolapolisacharidas

Paimkite 30 g Cistanche deserticola miltelių ir sudėkite į 500 ml kūginę kolbą. Panardinkite į petrolio eterį (60-90 laipsnis), eterį ir 80% etanolio karštą tirpalą (30 laipsnių) atitinkamai 6 valandoms, o likutis išgaruos, kad išdžiūtų tirpiklis. Filtro likučius pamirkykite vandenyje santykiu 1 ∶ 10 24 val., pašildykite iki 30 laipsnių ir ištraukite 100 min. Po ekstrahavimo centrifuguokite, kad gautumėte supernatantą. Sukoncentravus supernatantą sumažintame slėgyje, jis nusodinamas 95% etanoliu, kurio tūris yra 3 kartus didesnis. Leidžiama stovėti 24 valandas 4 laipsnių temperatūroje. Po centrifugavimo jis surenkamas ir nusodinamas. Po vakuuminio džiovinimo galima gauti neapdorotą Cistanche deserticola polisacharidą. Pasverkite 1,00 g neapdoroto polisacharido, ištirpinkite jį vandenyje ir įdėkite į 50 ml matavimo kolbą budėjimo režimui.

Dykumos ženšenis – antioksidantas

Spustelėkite čia norėdami pamatyti Cistanche miltelių gaminius

【Klauskite daugiau】 El. paštas:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.2.2 Išsiurbimo gebėjimo bandymasCistanche deserticolapolisacharidas iki O-2 · laisvasis radikalas

Cistanche deserticola polisacharido gebėjimas sunaikinti O{0}} · buvo išbandytas gaminant superoksido laisvuosius radikalus (O-2 ·) iš dopamino autoksidacijos [3]. Įpilkite 3.0mL {{10},1 mmol/LpH=10},12 karbonato buferinio tirpalo, 30mL vandens ir {{18} }}.5mL skirtingų koncentracijų polisacharido mėginio tirpalo džiovinimo mėgintuvėlyje su apnašomis. Pakaitinę 30 laipsnių vandens vonioje 5 minutes, įpilkite 1.0mL 2,0 mmol/L dopamino, pašildyto 30 laipsnių vandens vonelėje, iš karto sumaišykite ir laiką, laikykite reakciją 30 laipsnių temperatūroje. 5 min., ir nedelsdami sustabdykite reakciją su 2 lašais 10mol/L HCl. Naudokite buferinį tirpalą kaip etaloninį tirpalą, išmatuokite absorbciją (mėginys A) esant 221 nm, mėginį (tuščiąjį A) pakeiskite 0,5 ml vandens tuščiojo tyrimo grupėje ir kontrolinėje grupėje pakeiskite mėginį 0,5 ml askorbo rūgšties. , išmatuokite kiekvieną mėginį tris kartus lygiagrečiai ir paimkite vidutinę vertę. O-2 · klirenso rodiklis (%)=(tuščias – mėginys)/tuščias mėginys × 100

2.2.3 Išsiurbimo gebėjimo bandymasCistanche deserticolapolisacharidas į · OH laisvąjį radikalą

DEsert gyva cistanche žolė -Antioksidantas

EDTA-Fe (Ⅱ) – metileno mėlynojo – H2O2 sistema buvo naudojama tiriant Cistanche deserticola polisacharido gebėjimą sugerti hidroksilo radikalą. Principas yra tas, kad EDTA-Fe (Ⅱ) reaguoja su vandenilio peroksidu, kad susidarytų · OH laisvieji radikalai, kurie sumažina būdingą metileno mėlynojo tirpalo absorbcijos smailę esant 660 nm.

Įpilkite 1.0mL 5 mmol/L LFeSO4 tirpalo, 1,2 ml 5 mmol/L LEDTA tirpalo, 2.0mL 0.03 mol/L NaH2PO{ {12}}Na2HPO4 (pH=7.4) buferinis tirpalas ir 1,3 ml 20mmol/L vandenilio peroksido tirpalo į 10mL mėgintuvėlių su kamščiais seriją, gerai suplakite, įpilkite 0,7 ml 0,2 mmol/L metileno mėlynojo tirpalo, tada įpilkite 1,0 ml tiriamo tirpalo ir atitinkamai skirtingų koncentracijų vitamino C1,0, praskieskite iki 10.{30}} ml su vandeniu, gerai išmaišyti, palaikyti 37 laipsnių temperatūroje 30 min. ir išmatuoti kiekvieno tirpalo absorbcijos vertę esant 660 nm. Tuščioji grupė mėginio tirpalą pakeitė vandeniu. Kiekvienas mėginys matuojamas tris kartus lygiagrečiai ir imama vidutinė vertė. · OH mėginio radikalų pašalinimo greitis (%)=[(A2-A1)/(A0-A1) × 100 % formulėje: A0 -- absorbcija nepažeisto vamzdžio vertė; A1 - pažeisto vamzdžio absorbcijos vertė; A2 -- Fotometrinė vertė pridėjus pavyzdį.

2.2.4 DPPH bandymas · valymo gebėjimasCistanche deserticolapolisacharidas

Paimkite {{0}},1 mL Cistanche deserticola polisacharido tirpalo ir supilkite į 5,0 mLDPPH · tirpalą, greitai sumaišykite ir palikite 10 min kambario temperatūroje,

Nustatykite jo absorbcijos pokytį esant 517 nm bangos ilgiui [4]. Kiekvienas mėginys matuojamas tris kartus lygiagrečiai ir imama vidutinė vertė. Mėginio klirenso greitis DPPH · (%)=1 - [(AB)/A0] × Pagal formulę 100 %: A0 -- absorbcijos vertė DPPH · (1,9mLDPPH ·+0.1mL50% etanolio) be mėginio; A - mėginio absorbcijos vertė po reakcijos su DPPH ·; B -- tuščiojo mėginio absorbcijos vertė (mėginys 0,1 ml+1, 9 ml 50 % etanolio).

2.2.5Cistanche deserticolapolisacharidų šalinimo pavienio deguonies 1O2 bandymas

Vienos linijos deguonis (1O2) susidaro vykstant NaClO ir H2O2 cheminei reakcijai 37 laipsnių temperatūroje [5]. 1O2 nustatymui naudojamas tirpalas: 100 μL2,8mmol/L NaClO tirpalas, 400 μL5mmol/LNaOH tirpalas, 300μL10mmol/LH2O2 tirpalas, 50 μL1mmol/Luminol tirpalas. Reakcijos metu reakcijos tirpalas įpilamas į mėginio tirpalą, o chemiliuminescencinis prietaisas tuo pačiu metu automatiškai registruoja reakcijos procesą. Paimkite NaClO-H2O2-NaOH-Luminolį kaip tuščią kontrolę. Pradėkite reakciją ir į mėginio mėgintuvėlį įpilkite reakcijos tirpalo iš chemiliuminescencinio prietaiso laikymo buteliuko pagal procedūros nustatytą kiekį. Tada kas 5s fiksuojamas reakcijos mišinio chemiliuminescencijos intensyvumas, kiekvienas mėginys matuojamas tris kartus lygiagrečiai ir imama vidutinė vertė.

Klirensas apskaičiuojamas pagal šią formulę: prošvaisa (%) =(kontrolinis šviesos intensyvumas – pavyzdinis šviesos intensyvumas) / kontrolinis šviesos intensyvumas × 100 %

3 Rezultatai ir diskusija

3.1 Valymo poveikisCistanche deserticolapolisacharidas ant O-2 ·

Cistanche tubulosa privalumai – Antioxidantas

Cheminė O-2 · savybė yra aktyvi, todėl bioplėvelėje esančios riebalų rūgštys gali gaminti peroksidą, o vėliau sunaikinti ląsteles [6]. Šiame darbe dopamino metodas buvo naudojamas O-2 · valymo gebėjimui nustatyti. Cistanche deserticola gebėjimas sunaikinti O-2 · parodytas 1 paveiksle. Rezultatai parodė, kad Cistanche deserticola polisacharidas gali slopinti O-2 ·, susidarantį dėl dopamino autoksidacijos, ir padidėti didėjant koncentracija buvo išmatuotame koncentracijos diapazone (0-8 mg/mL), tačiau sugeriamumas buvo mažesnis nei askorbo rūgšties.

3.2 Valymo poveikisCistanche deserticolapolisacharidas · OH

·OH yra vienas iš aktyviausių deguonies laisvųjų radikalų aktyviosiose deguonies rūšyse. Jis gali reaguoti su beveik bet kuria biologine makromolekule gyvose ląstelėse ir gali sukelti biocheminius procesus, tokius kaip lipidų peroksidacija, baltymų polimerizacija ir depolimerizacija, nukleorūgščių skilimas ir kt. kūno audiniuose, sukeldami audinių ir ląstelių ligas, dėl kurių gali atsirasti įvairių ligų ir greitėjančio organizmo senėjimo [7]. Cistanche deserticola polisacharido sugeriamumas į · OH parodytas 2 paveiksle. Rezultatai parodė, kad Cistanche deserticola polisacharidas turėjo gerą · OH sugeriamąjį poveikį ir didėjo didėjant koncentracijai.

3.3 Cistanche deserticola polisacharido gebėjimas pašalinti DPPH ·

DPPH · (difenilo kartaus hidrazino radikalas) yra stabilus laisvasis radikalas, kuris organiniame tirpiklyje yra purpurinės spalvos ir pasižymi stipria absorbcija netoli 517 nm. Pridėjus antioksidantų, pasišalina dalis laisvųjų radikalų, dėl kurių susilpnėja absorbcija, pagal kurią galima įvertinti šios medžiagos antioksidacinį aktyvumą [8]. Žr. 3 paveikslą apie DPPH · Cistanche deserticola polisacharido pašalinimo pajėgumą. Eksperimentiniai rezultatai parodė, kad Cistanche deserticola polisacharido sugeriamumas nuo DPPH · teigiamai koreliavo su jo koncentracija, o šalinimo pajėgumas buvo didesnis nei askorbo rūgšties.

3.4 Cistanche deserticola polisacharido pašalinimas iki 1O2

Vienos linijos deguonis yra sužadintas molekulinis deguonis, turintis aktyvių cheminių savybių. Kadangi nesuporuoti elektronai turi polinkį poruotis, laisvieji radikalai pasižymi aktyvesnėmis cheminėmis savybėmis [9]. Cistanche deserticola polisacharido gebėjimas sugerti 1O2 parodytas 4 paveiksle. Eksperimentiniai rezultatai parodė, kad Cistanche deserticola polisacharido sugeriamoji geba buvo mažesnė nei askorbo rūgšties ir yra 0-4.0mg diapazone. /mL, o Cistanche deserticola polisacharido sugeriamumas buvo didesnis nei askorbo rūgšties, kai koncentracija buvo didesnė nei 4.{8}}mg/mL.

4. Išvada

Cistanche deserticola polisacharidų antioksidacinis aktyvumas in vitro buvo išsamiai ištirtas naudojant skirtingas reaktyvias deguonies neturinčias radikalų sistemas.Iš eksperimentinių rezultatų matyti, kad eksperimentinės koncentracijos diapazone Cistanche deserticola polisacharidų ekstraktas turi sugeriantį poveikį O-2 ·, · OH, DPPH · ir 1O2, o šalinimo poveikis skirtingiems. sistemos.Rezultatai tai parodėCistanche deserticola polisacharidas yra veiksmingas egzogeninis natūralus antioksidantas, kurį verta toliau tirti, tobulinti ir visapusiškai naudoti.

Cistanche tubulosa 200 mg—Antioxidantas